菜花DNA的提取及二苯胺检测

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四. 实验步骤
（一）DNA提取
• 1，称取 菜花5g,用水清洗后，加入一勺石英砂粘
磨,再加入10ml 0.14M/LNACL-0.15MEDTA该溶液，
继续研磨至浆状，
• 2，上述研磨液加入２５％ＳＤＳ1毫升，６０℃
保温，１０分钟（不停搅拌）．至溶液变粘稠。
• 3，上述溶液加入 ５Ｍ／Ｌ的NaCL溶液5毫升 ，
实验 菜花DNA的提取及二苯 胺检测
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一. 实验目的 • 学习DNA提取的原理及方法。 • 掌握二苯胺方法检测DNA 。
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二 .实验原理
在浓NaCl（1－2M）溶液中，DNA溶解度大， RNA溶解度小；
在稀NaCl（0.14M）中，DNA溶解度小， RNA溶解度大，
因此可利用不同浓度的NaCl溶液将DNA和 RNA从样品中分开。
SDS可将核蛋白分离出来
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[二苯胺鉴定DNA的化学原理]
• DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成
ω-羟基-γ酮基戊醛，它再和二苯胺作用 而呈现蓝色(溶液呈浅蓝色)。鉴定时溶液 蓝色的深浅，与溶液中DNA含量的多少有关。
2.按照以下表格添加
DNA提取液 二苯胺试剂
试管1 2ml 4ml
试管2 0ml 4ml
沸水浴加热10分钟，冷却后观察颜色变化。
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提取完好的DNA琼脂糖凝胶电泳图谱
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未除去RNA的DNA琼脂糖凝胶电泳图谱
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提取注意事项
减少物理因素对DNA的降解。动作轻柔缓慢， 尽可能不要剧烈振荡或搅拌.
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三.实验试剂
1，5mol/L NaCl溶液; 2， 0.14mol/L NaCl-0.15mol/L EDTA-Na溶液; 3，25% SDS 溶液； 4，24:1 氯仿－异戊醇混合液； 5，3mol/L 乙酸钠－0.001mol/L EDTA-Na溶液； 6，95%乙醇； 7，二苯胺试剂：A液：1.5克二苯胺溶解于100ml冰乙酸中,在加 入1.5ml浓硫酸 ； B液：0.2%的乙醛
搅拌2分钟 ，再加入氯仿－异戊醇 １5毫升，
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振摇2分钟(轻微），分装2-4管，平衡后5０００
转离心 3 分钟，取上清液。
• 4，上清液加入 2倍 体积的９５％冰冻乙醇，
用玻棒慢慢转动，可看见ＤＮＡ缠绕在玻棒上．
• 5.待DNA略干燥后，溶于2ml水。
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（二） 二苯胺法检测DNA
1.在鉴定DNA时，可用二苯胺试剂直接滴在玻棒 上的丝状物上，呈现蓝绿色，即证明DNA的存在.