佳木斯三江地区孕早期胚胎停育196例染色体核型分析

１ ． ２ 方法
１ ． ２ ． ３ 核 型 分析 ： 每 例标 本 荧 光 显 微 镜 下 观 察 ３ ０ 个分 裂相 ， 检 测染 色体 的结 构 和数 目是否 异 常 ， 若 出 现核型异常 ， 增加观察 ７ ０个分裂相 ， 按照人类 细胞 遗传学国际命名体制标准 ， 用捷 克生物信息科技有 限公 司提供的 ４ ０ ０ Ｇ染色体图像分析系统分析。 ２ 结 果 １ ９ ６ 例孕早期胚胎停 育患者绒毛细胞 中， 培养 失败 ９例 ， 检出 １ ２ ５例正常核型和 ６ ２例异常核型 ， 染色体核型异常率为 ３ １ ． ６ ％。异常核 型中， ｌ ３ 、 １ ６ 、 １ ８ 、 ２ １ 、 ２ ２三 体 型 ３ ２例 ， 占异 常 核 型 的 ５ １ ． ６ ％； ４ ５ ， Ｘ Ｏ为 ８ 例， 三倍体为 ７例 ， 四倍体为 ３例 ， 其他异常 核型为 １ ２例 。见表 １ 。 表１ ６ ２例胚 胎停 育异 常 染色体 核型
中图分类号 ： Ｒ ７ １ ４ ． ２ １ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ８— ０ １ ０ ４ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ４— ０ １ ２ ３— ０ １
胚 胎停 育是 指 在妊 娠早 期 由于各 种可 能 的原 因 所 致 的胚 胎或 胎儿 在孕 妇子 宫 内停止 发育 的 临床征 象。临床 Ｂ超检查显示妊娠囊 内胎芽或胎儿形态 欠规则 ， 无胎心搏动或表现为妊娠囊萎缩 。造成胚 胎停育发生的原因很多 ， 包括激素水平 的失调 、 染色 体 的异常 、 自身抗 体 的产 生 ， 子 宫 内环 境 的影 响 、 生 殖道病毒感染…等等 ， 而孕早期胚胎停育一个很重 要的因素就是染色体异常＿ ２ ｊ 。本研究收集 了 １ ９ ６例 孕早期胚胎停育患者 的绒毛组织 ， 进行 了细胞原位 培养 ， 染 色体 制备 和染 色体 异 常情况 的分析 。 １ 材料与方法 １ ． １ 材 料 材 料来 源 于佳 木斯 大学 附属各 医 院 ， 患者 大 多 来 自佳木斯市区及所属的三江平原地区。采集时间 为２ ０ １ ２—０ ５— ２ ０ １ ４—１ ２ ， 收集了 １ ９ ６例 临床 Ｂ超 报 告 提示 胚胎 停育 孕 妇 清 宫 所得 到 的新 鲜 、 无 菌 的绒 毛 组织 ， 患 者年 龄 ２ ０— ３ ６岁 。
１ ． ２ ． １ 细胞 的原位培养 ： （ １ ） 选取每例孕妇 的绒毛 组织 １ ５ ｍｇ ， 放置 在无 菌 的 培 养 皿 中 ， Ｐ Ｂ Ｓ冲洗 绒 毛 组 织凝 血 ， 移人 试管 中 ； （ ２ ） 加 酶解 液 １ ０滴混 匀 ， 放 入 二 氧 化碳 培养箱 消 化 １ ０ ｍ ｉ ｎ ， 离 心弃 上 清 ； （ ３ ） 加 培养 液（ 含小牛血清 １ ０ ％） ５ ｍＬ混 匀 ， 移 入 无 菌 培 养 瓶 中， 放人 ３ ７ ℃、 ５ ％Ｃ Ｏ ：培 养 箱 中培养 ７ ｄ ， 观 察 细 胞 贴壁情况 ， 贴壁后继续培养 ３ ｄ ； （ ４ ） 终止培养前 ２ ｈ ， 用 １ ｍ Ｌ注射器 ５号针尖 向培养 液 中加入 秋水 仙碱 ２滴 （ 使终 浓度 为 ０ ． ０ ７ ｍ Ｌ ） 。 １ ． ２ ． ２染 色体 制备 ： （ １ ） 收集 细胞 ： 用 消毒 的吸管 吸 取 培养 液将 贴壁 的细胞 吹起 、 吹匀 ， 连 同培 养液转 人 无 菌 的刻 度 离 心 管 中 ， 以８ ０ ０ ｒ ｐ ｍ 离心 ｌ Ｏ ｍ ｉ ｎ ， 去 上 清 液； （ ２ ） 低渗 ： 向刻 度 离 心管 中 加 入 ３ ７ ￣ １ ２的低 渗 氯 化 钾８ ｍ Ｌ， 混匀 ， 放置在 ３ ７ ℃水浴锅 中 ２ ７ ａ ｒ ｉ ｎ ； （ ３ ） 预 固 定： 向离 心管 中加 入 固定 液 １ ｍＬ混 匀 ， 离 心 去 上清 ； （ ４ ） 固定 ： 加 入 新 配置 的 固定 液 ５ ｍ Ｌ ， 混匀 ， 室 温 固定 ３ ０ ｍ ｉ ｎ ， 离 心去 上清 ， 再 固定 一 次 ； （ ５ ） 滴片： 离 心 去 上 清， 加入 １ ｍＬ固定 液 ， 轻轻混匀 ， 用 冰 水 玻 片滴 片 ， 然后 放人 ６ ０ ℃烤 箱 中烘烤 ２ ｈ ； （ ６ ） Ｇ显 带 ： 取 出干 燥 的 片子冷 却 后进行 消 化 、 染色 、 Ｇ显 带 。
ＨＥ Ｉ Ｌ ０ＮＣＪ Ｉ ＡＮＧ ＭＥ ＤＩ Ｃ Ｉ ＮＥ ＡＮ Ｄ Ｐ ＨＡＲ ＭＡＣ Ｙ Ａｕ ｇ ． ２ ０ １ ５， Ｖｏ １ ． ３ ８ Ｎｏ ． ４
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佳 木斯 三 江 地 区孕 早 期胚 胎 停 育 １ ９ ６例染 色体 核 型分 析①
张 玉萍 ， 杨欣 艳 ， 孙盛梅， 何春久， 张 淑红 ， 朱 金玲 ， 王 长 山
３ 讨 论
我们 收集 了 １ ９ ６例胚 胎停 育 患者 的绒 毛组 织 细 胞进 行染 色体 检测 ， 取 绒 毛组 织 进 行 细 胞 的 原位 培 养， 培养失败 ９ 例， 细胞培养成功率达到了 ９ ５ ． ４ ％， 优 于直接 法 制备 染 色体 ， 获取 的细 胞 分 裂 相 比较 多， 染色 体 形 态 完 整 ， 便 于 观 察 和 分析 』 。装 片 观 察采用捷克生物信息科技有限公司提供的 ４ ０ ０ Ｇ染 色体 图像 分 析系 统 ， 配 套 使 用 高分 辨 的荧 光 显微 镜 进行核型分析 ， 对 图像 的处理简便 、 快捷 ， 对染色体 分 裂相分 辨 和分 析更 加准 确和 科学 。我 国 目前孕 早 期 胚胎停 育 发病 率 有 上 升 的趋 势 ， 对 于染 色 体 的 细 胞遗传学分析和检测显得尤为重要和任务艰巨。染 色 体异 常是 引起 胚 胎停 育一 个 很 重 要 原 因 ， 本 实 验 研究中染色体异常核型检出率达 ３ １ ． ６ ％， 低于文献 报道 ５ ０ ％Ｅ ｓ ］ 。染 色 体 异 常 包 括 染 色体 结 构异 常 和 染 色体 数 目异 常 。本 实验 研究 中非 整倍 体核 型数 目 异常 ， 三体型共计 ３ ２例 ， 占异 常 核 型 ５ １ ． ６ ％， 常 染 色 体 三体 的形成 ， 是 由于染色体 不 分离所 致 ， 染色 体 不 分离 可能 由于两种 情况 造成 造 成形成 的配子染 色 （ 下 转第 １ ２ ５页 ）
（ 佳 木 斯 大 学 基 础 医学 院 ， 黑龙江 佳木斯 １ Байду номын сангаас ４ ０ ０ ７ ）
摘要 ： 目的 ： 研 究染 色体异常与孕早期胚胎停 育的关 系。方法 ： 对１ ９ ６例 孕早期 胚胎停 育患者 的绒 毛细胞进行 原位培 养 ， 染色体制备 与核 型分析 。结果 ： １ ９ ６例 胚胎停 育患者的胚胎绒毛 组织 ， 细胞培养 失败 ９例 ， 检 出异常核 型 ６ ２例 ， 染 色体异 常 比 率３ １ ． ６ ％ 。结论 ： 染 色体异 常是孕早期胚 胎停 育的重要 因素 。 关键 词 ： 孕早期 ； 胚胎停育 ； 染 色体 异常