黄芩组织培养技术

药用植物黄芩组织培养技术
药学系中草药栽培与鉴定2008级柴龙 108509022 1材料与方法
1.1培养材料
选取健壮，无病害的黄芩幼苗带节颈段，幼苗长有6—7个节段为宜，去掉两侧叶片，作为外植体。

黄芩种苗有甘肃中医学院组织培养室提供。

1.2培养条件
培养温度25℃左右，光照1500-2000lx，每日光照12h。

1.3培养方法
外植体消毒，先去掉其带节颈段，去掉两侧叶片，剪成3-4cm的节段，在自来水下冲洗1h，然后拿到无菌室先用75％的酒精对其消毒
3min，用无菌水冲洗4-5次。

将灭菌后的外植体首先用无菌滤纸吸干，然后放到放到无菌培养皿中切成1cm的小颈段，接种于诱导培养基中。

每种接一个外植体。

1.4养基
MS+3.0％蔗糖+0.75％琼脂，附加不同浓度的BA和NAA，PH为6.0。

增殖培养在上述培养基基础上附加不同浓度的BA和NAA。

无根苗生根培养基为1/2MS培养基，附加不同浓度的BA和NAA。

2实验步骤
2.1培养材料的诱导
外植体接种后20天左右，叶腋内开始萌动生长，并形成愈伤组织，呈现质地疏松，晶亮带点绿色的状况，培养基为MS+3.0％蔗糖
+0.75％琼脂+0.5mg/l BA+0.2mg/L NAA，PH为6.0。

2.2愈伤组织的诱导
愈伤组织长到一个月左右，表面开始出现许多绿色的亮点。

随后亮点逐渐长大，接种到MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.2mg/L的培养基中，过20天的继代培养。

一个带节颈段的幼苗可产生20个芽左右。

2.3生根培养
苗高长高达4-6cm从愈伤组织的茎部切断，转移到
1/2MS+NAA0.2mg/L生根培养基中，经过二十天左右出现根。

3移栽
3.1出瓶后的管理
移栽前把生根苗直接从瓶中取出，去秒是动作要轻，防止根苗受伤，取出后用清水冲洗除去根部的培养基。

在高为4cm育苗版中装入沙土：蛭
MS培养基配制培养液时的注意事项
5.8)。

培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装。

分装时，先将培养基倒入烧杯中，然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶(50 mL或100 mL)中。

注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。

锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/5～1/4。

每1 000 mL培养基，可分装25～30瓶。

培养基分装完毕后，应及时封盖瓶口。

用2块硫酸纸(每块大小约为9 cm×9 cm)中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口，并用线绳捆扎。

最后在锥形瓶外壁贴上标签。

高压灭菌 培养基的高压灭菌 步骤
高压灭菌 培养基的高压灭菌包括以下几个步骤。

第一，码放锥形瓶。

将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中，再放入高压蒸气灭菌锅内。

如果没有金属小筐，可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开。

第二，放置其他需要灭菌的物品。

将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内，如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶(以上物品都要用牛皮纸封口)，用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等。

第三，灭菌。

待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。

在98 kPa、121.3 ℃下，灭菌20 min。

灭菌后取出锥形瓶，让其中的培养基自然冷却凝固。

最好放置1 d后再使用。