三种IL-15基因转染NCI-H446细胞模型的建立与鉴定

三种IL-15基因转染NCI-H446细胞模型的建立与鉴定张征峥;王润田;王丽;刘维华;杨丽娟;王平;丁军颖
【期刊名称】《免疫学杂志》
【年(卷),期】2005(21)4
【摘要】目的构建并鉴定三种IL-15基因转染的人小细胞肺癌(NCI-H446)细胞模型。

方法PCR法扩增得原型IL-15基因片段(FhIL-15)I、L-15成熟肽基因片段(FhIL-15mp)和IL-2信号肽基因片段(FhIL-2sp);利用重叠延伸基因拼接法将FhIL-15mp和FhIL-2sp拼接成改型IL-15基因片段(FhIL-2sp-hIL-15mp)。

将三种IL-15基因片段(FhIL-15、FhIL-15mp和FhIL-2sp-hIL-15mp)分别插入真核表达载体pEGFP-N1构建成相应的重组质粒(PhIL-15、PhIL-15mp和PhIL-2sp-hIL-15mp),用脂质体法分别转染NCI-H446、G418筛选得三种IL-15基因转染的NCI-H446细胞(C-hIL-15、C-hIL-15mp、C-hIL-2sp-hIL-15mp)。

对所得的各基因片段和重组质粒,用琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定;对所得的各转染细胞,用RT-PCR法检测hIL-15mRNA的表达,ELISA法检测hIL-15蛋白的分泌。

结果琼脂糖凝胶电泳和测序证明,FhIL-15、FhIL-15mp、FhIL-2sp-hIL-15mp电泳条带位置和基因序列正确。

三种转染细胞均有IL-15mRNA表达,但仅C-hIL-2sp-hIL-
15mp可测到22pg/mL的IL-15蛋白分泌。

初步应用表明,三种转染细胞确有不同的免疫生物学特性。

结论正确构建了三种IL-15基因转染的NCI-H446细胞模型,可在进一步研究IL-15基因与肿瘤细胞免疫生物学特性的关系及至机制中应用。

【总页数】4页(P331-333)
【关键词】人白细胞介素-15;基因克隆;重叠基因PCR;基因转染
【作者】张征峥;王润田;王丽;刘维华;杨丽娟;王平;丁军颖
【作者单位】河北医科大学基础所免疫室
【正文语种】中文
【中图分类】R392.11
【相关文献】
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