异甘草酸镁论文(仁济医院,陆伦根)

异甘草酸镁对肝细胞体外增殖影响的实验研究

陈尉华陆伦根曾民德刘梅茅益民曹爱平窦爱霞房静远

【摘要】目的：观察异甘草酸镁对肝细胞增殖的影响。方法：用含不同浓度异甘草酸镁

的培养基（0、0.001、0.01、0.1、1.0、10.0、100.0mg/ml）培养肝细胞，通过绘制细胞生长

曲线和四甲基偶氮唑盐法（MTT法）检测异甘草酸镁对肝细胞增殖的影响，并同时观察其

形态变化。结果：在所设加样量范围内，与空白对照组（0mg/ml）比较，培养基所含的异

甘草酸镁浓度为1.0mg/ml时，对张氏肝细胞具有明显的促进增殖作用，异甘草酸镁浓度为

10.0mg/ml时，其促增殖作用达到最高峰，在异甘草酸镁浓度为100.0mg/ml时，则出现明显

的抑制作用。结论：异甘草酸镁对肝细胞的增殖具有明显的影响，在一定剂量范围内对肝细

胞具有明显的促进增殖作用。

【关键词】异甘草酸镁；肝细胞；增殖

Effect of magnesium isoglycyrrhizinate on the proliferation of hepatocytes in virto

CHEN Wei-hua, LU Lun-gen, ZENG Min-de, LIU Mei, MAO Yi-min, CAO Ai-ping, DOU Ai-xia

Departmentment of Gastroenterology, Renji Hospital, Shanghai Institute of Digestive Disease,

Shanghai Second Medical University, Shanghai 200001,China.

【Abstract】Objective To investigate the effect of magnesium

isoglycyrrhizinate on the proliferation of hepatocytes. Methods Hepatocytes

were incubated with various concentrations of magnesium isoglycyrrhizinate

solution(0mg/ml, 0.001mg/ml, 0.01mg/ml, 0.1mg/ml, 1mg/ml, 10mg/ml,and 100gm/ml).By

making cell growth curve and 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphennylterazolium bromide(MTT) colorimetric

assay to observe the effect of maganesium isoglycyrrhizinate on the proliferation

of hepatocyte in virto, and morphological changes of the hepatocytes were also

observed. Results Compared with the control group(0mg/ml group),the proliferation

of hepatocytes obviously increased when the concentration of magnesium

isoglycyrrhizinate in medium reached 1.0mg/ml within the predefined different

dosages range. The proliferation of hepatocytes presented its peak when the

magnesium isoglycyrrhizinate’s concentration was 10.0mg/ml. But, the

proliferation of hepatocytes was significantly inhibited, when the concentration

of magnesium isoglycyrrhizinate in medium reached 100.0mg/ml. Conclusions Magnesium

isoglycyrrhizinate could significantly promote the proliferation of hepatocytes

within certain dosage range.

【Key words】 magnesium isoglycyrrhizinate; hepatocyte; proliferation

×:本课题受上海市重点学科建设项目资助（NO:Y0205）

作者单位：200001 上海第二医科大学附属仁济医院急诊科（陈尉华）；上海第二医科大学附

属仁济医院消化科，上海市消化疾病研究所（陆伦根、曾民德、刘梅、茅益民、曹爱平、窦

爱霞、房静远）

通讯作者：陆伦根Email: lungenlu1965@

甘草酸制剂具有明显的抗纤维化、抗氧化和抗细胞凋亡等功效在临床上被用于治疗肝脏疾病，并且取得了显著的效果。但是前三代甘草酸制剂具有的低钾血症、水钠潴留和高血压等副作用限制了它们在临床上的进一步使用。随着对甘草酸制剂研究的不断深入，目前已有第四代甘草酸制剂－异甘草酸镁面世。目前尚无其对肝细胞作用方面研究，为此我们从细胞机制研究和观察异甘草酸镁对肝细胞增殖的影响，为临床应用提供依据。

材料和方法

一、材料

细胞株：张氏肝（chang liver）细胞株购自中科院上海生命科学研究所细胞资源中心。

主要试剂：PRMI-1640培养基为奥地利PAA公司产品，MTT和二甲基亚砜（DMSO）为SIGMA 公司产品，胎牛血清为奥地利PAA公司产品。

仪器：二氧化碳培养箱（德国Heraeus生产），倒置生物相差显微镜(日本Olympus生产)，酶联免疫检测仪（芬兰Thermo Labsystems生产）。

药品：异甘草酸镁纯品由江苏正大天晴药业股份有限公司提供，存储在4°C冰箱中备用，加药时先用含0.2%胎牛血清的培养基溶解，母液浓度为100mg/ml,0.2μm微孔滤器过滤后，用前在培养基中稀释到所需浓度。

二、方法：

(一)异甘草酸镁对肝细胞生长曲线的影响

取指数生长期的张氏肝细胞，0.25%的胰酶消化后，用含10%胎牛血清的PRMI-1640制成细胞悬液，以5 x104/ml接种于24孔板，共接种六块板，每孔培养液为1ml。置于37°C，5％CO2培养箱培养24小时后更换培养液并加入不同浓度的异甘草酸镁，分为六组（每块板为一组），每组培养液含异甘草酸镁的浓度为0,0.001,0.01,0.1,1,10,100mg/ml。加药后逐日各剂量组取四孔细胞计数，取均值，连续计数六日。以每日细胞计数值为纵轴，时间为横轴，绘制生长曲线。

（二）MTT法增殖实验

1. 细胞培养及加药：取生长状态良好的张氏肝细胞接种于96孔板，密度为5x104/ml，

置于37°C，5％CO2培养箱培养过夜，第二日观察细胞形态，生长贴壁良好，并有60％-70％融合生长，则静息于含胎牛血清0.2％的PRMI-1640中，24小时后吸出上清，加入不同浓度的异甘草酸镁的培养基，使其终浓度分别为0,0.001,0.01,0.1,1,10,100mg/ml共六个梯度，每个梯度4复孔，继续培养24小时后MTT法测定。

2. MTT比色法检测：，每孔加入10μl MTT，置37°C，5％CO2培养箱培养4小时

后，弃培养上清液，每孔加入100μl DMSO，振荡器振荡十分钟后酶联免疫检测仪上550nm测OD值。

3.实验重复2次。

（三）细胞形态学观察

采用倒置生物相差显微镜观察各加药组的不同时间段细胞形态学变化。

三、统计学方法

实验数据用SPSS软件12.0进行ANOV A分析。