乙酰葛根素对于大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑组织与血清no和inos

•8•中药与临床Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica2019;l0(2)
•药理毒理・
乙酰葛根素对于大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑组织与血清NO和iNOS的影响研究
王明娟，何晓明
［摘要］目的：研究乙酰葛根素对于大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑组织与血清NO和iNOS的彩响。

方法：使用MCAO(大脑中动脉内拴线阻断法)测定大鼠局灶性缺血再灌注损伤模型，并观察脑组织与血清NO、血清iNOS的水平变化。

结果：在小鼠脑缺血lh.再灌注24h后，其血清NO以及iNOS水平上升显著；再灌注48h后，给予250、50、10mg-kg"的乙酰葛根素以及葛根素组的小鼠血清NO、iNOS含量呈现出明显下降飾趋势，P<0.05,差异具有统计学意义。

结论：将乙酰葛根素应用于治疗大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的过程中，能通过降低NO毒性起到保护脑组织的作用，从而减轻脑缺血再灌注损伤症状。

［关键词］乙酰葛根素;大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤;脑组织;血清NO;NOS
［中图分类号］R285.5［文献标识码］A［文章编号］1674-926X(2019)02-003-02
Effects of acetylpuerarin on NO and NOS in brain tissue and serum of rats with focal cerebral ischemia reperfusion injury/必NG Ming-juan,HE Xiao-ming//(Third Affiliated Hospital of Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou450008,Henan)
［Abstract］Objective:To study the effects of acetylpuerarin on NO and iNOS of brain tissue and serum in rats with focal cerebral ischemiainjury.Method:The model of focal ischemia-reperfusion injury in rats was established by MCAO (intra-arterial sacral line occlusion method).The changes of brain tissue,serum NO and serum NOS were observed.Result: Serum levels of NO and iNOS increased significantly after cerebral ischemia for1h and reperfusion for24h.After48h of reperfusion,250,50,10mg-kg'1of acetylpuerarin and puerarin were given.The serum levels of NO and iNOS in mice showed
a significant decrease(P<0.05).Conclusion:The application of acetylpuerarin in the treatment of focal cerebral ischemia­
reperfusion injury in rats can protect brain tissue by reducing NO toxicity,thus alleviating the symptoms of cerebral ischemia・reperfusion injury.
|Key words］Acetylpuerarin;focal cerebral ischemia-reperfusion injury in rats;brain tissue;serum NO;NOS
乙酚葛根素是一种由葛根素基础结构修饰之后
得岀的新型异黄酮类化合物。

葛根素能够有效促进机体免疫，且具备降血糖以及抗肿瘤等作用，现已被广泛应用心血管疾病的治疗当中⑴。

乙酚葛根素在基于葛根素的前提下加入了侧链，在强化药物脂溶性的同时，大大提高了血脑屏障的通过率。

但目前，有关乙酚葛根素治疗脑缺血再灌注损伤的研究资料相对较少。

基于此，为了进一步研究乙酰葛根素局灶性脑缺血再灌注损伤的脑组织与血清NO、iNOS的影响，本次研究使用MCAO测定大鼠局灶性缺血再灌注损伤模型，并观察脑组织与血清NO、iNOS的水平变化，现将详细结果报道如下。

［作者单位］河南中医药大学第三附属医院
［作者简介］王明娟，女，1983年出生，硕士学位，研究方向 中药学，洛阳伊川人，Email:346357276@ ［通讯作者］何晓明，硕士，主要从事中医临床研究
［收稿日期］2019-01-201实验材料与方法
1.1实验材料与仪器
葛根素、乙酰葛根素；Wistar小鼠，雄性，体重为（220.01±20.22）g,NO测试药盒（南京建成生物工程研究所）、NOS测试药盒（南京建成生物工程研究所）、蛋白定量测试药盒（南京建成生物工程研究所）、UV-2102PCS型紫外可见分光光度计（尤尼柯仪器有限公司）。

1.2实验方法
1.2.1分组选取180只Wistar小鼠（山东大学实验动物中心），并使用随机数字表法将其分作6组，即缺血再灌注组（30只），对其给予生理盐水，5mL・kg=葛根素组（30只），对其给予葛根素，50mg-kg'；N-2211高剂量组（30只），对其给予N-2211,250mg-kg1,N-2211中剂量组（30只）,对其给予N-2211, 50mg-kg1；N-2211低剂量组（30只），对其给予N-2211,lOmg-kg1；假手术组（30只），对其给予
中药与临床Pharmacy and Clinics of C hinese Materia Medica2019;l0⑵-9•
NS,5mL-kg'o在每组中选取15只小鼠分别于缺血再灌注之后24h与48h内进行观察，其中140只小鼠使用生化指标进行测定，其余40只小鼠使用病理学进行观察。

于每日上午对小鼠进行1次灌胃以及给药，持续进行10d,并在第10d上午给药结束半个小时后对其实施手术。

1.2.2尼龙线处理在解剖显微镜下，将内径为0-24mm的尼龙线顶端烫成光滑的圆球，并在距起点处17mm与起点处做标记，随后使用乙醇对其进行清洁，在清洁结束后放置与1:2500u肝素生理盐水中备用。

1.2.3制备小鼠局灶性脑血血再灌注模型取小鼠仰卧位并将其固定，随后使用水合氯醛(浓度：10%)3 mL-kg-1对其进行麻醉，在其颈部正中心做切口，随后将各层组织钝性分离，使左侧颈动脉充分暴露，分离至颈内，颈外动脉分叉后一段，并在颈外动脉发出约0.8cm左右的位置结扎。

结扎其左侧颈总动脉，并做一个锲形切口，随后将尼龙线自切口处缓慢插入左侧颈总动脉，并继续向前推，直至颈内分叉部阻断并流入大脑中动脉的血流。

1.3统计法分析
本研究所获的所有数据均通过统计学软件SPSS20.0统计处理，计数资料用“［例(%)］”表示，用"2”检验；计量资料用“(灵士S)”表示，用“t”检验，若P<0.05,提示差异有统计学意义。

2结果
在小鼠脑缺血lh,再灌注24h后，6组血清NO 以及iNOS水平上升显著；再灌注48h后，给予高、中、低剂量的乙駄葛根素以及葛根素组的小鼠血清NO与iNOS含量呈现出明显下降的趋势，P<0.05,差异具有统计学意义，见表1。

表1观察血清NO.NOS以及iNOS的水平指标变化［n=30,x±5］
NO(ug•mL1)NOS(^g•mL1)iNOS(yg•mL'*)
组另剂量(mg-kg'1)------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
24h48h24h48h24h48h
缺血再灌注组
-
1252.35±12.47a0#¥48.09±3.53ae#* N-2211高剂量组25027.68±6.49aP#*41.22±3.34聊N-2211中剂量组5033.38±7.98聊37.76±10.52apw N-2211低剂量组1025.35±&17*卿44.82±3.99aP0#葛根素组5028.39±40.89ape#*36.24±5.52阳假手术组23.33±3.19叭35.39±3.91叫26.56±2.88a9#*3O.25±3.78a0#* 5.71±0.551昨 4.46±0.18O a0#* 25.88±2.98^27.61±5.72邮 4.53±0.988^ 4.01±0.612ap* 22.01±6.49网27.02±1.88ap 4.51±0.986邮 4.03±0.618畛25.86±2.98ape#27.61±5.74ap 4.53±0.988aP 4.31±O.987apo# 24.75±3.98网26.58土&49邮 4.18±0.487aP#¥e 3.93±0.60严23.67±1.35网22.65±2.17bpe#* 3.04±0.47砂 3.73±0.625bpe#*
注：与假手术组比较，aP<0.05；与葛根素组比较，bP<0.05；与缺血再灌注组比较，卩PV0.05；与N-2211高剂量组比较，8PV0.05；与N-2211中剂量组比较，#P<0.05；与N-2211低剂量组比较，¥P<0.05o
3讨论
NO具备神经调质与介质的功能，同时也是生物机体内部最重要的效应分子与信使分子。

根据相关医学临床研究证明NO属于血管内皮细胞延伸的松弛因子，其在机体内部经过NOS的催化而生成，属于一种难溶于水的脂溶性气体，能够通过生物膜快速扩散，并在细胞之间发挥直接作用。

NOS主要分内皮结构型、神经结构型以及iNOS。

根据相关医学实验研究结果表明叫在脑缺血再灌注损伤与脑缺血的观察过程中，NOS是决定NO双重作用的关键。

本研究结果显示，在小鼠脑缺血lh,再灌注24b后，其血清NO以及iNOS水平上升显著；再灌注48h后，给予高、中、低剂量的乙駄葛根素以及葛根素组的小鼠血清NO与iNOS含量呈现出明显下降的趋势，P <0.05,差异具有统计学意义。

证实乙酰葛根素能够有效降低NO毒性，对缓解脑缺血再灌注损伤症状有着至关重要的作用。

综上所述，将乙酰葛根素应用于治疗大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的过程中，能通过降低NO毒性起到保护脑组织的作用，从而减轻脑缺血再灌注损伤症状。

［参考文献］
［1］白波,王春梅.自噬相关基因在大鼠脑缺血-再灌注损伤模型中的差异表达［J］.济宁医学院学报,2018,41(05):307.
［2］罗胜勇，贾德武,李小羿，等.抗血小板溶栓素对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用机制研究［J］.中国临床药理学与治疗学,201&23(10):1109.
［3］李莉，冯晶晶,李铁军，等.复元醒脑汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用研究［J］.药学实践杂志,201&36(01):34.
(责任编辑：陈思敏)。