实验课教学(革兰氏染色)

革兰氏阳性菌细胞壁:肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低，网孔结构 可以滞留碘-结晶紫复合物，呈蓝紫色。 革兰氏阴性菌细胞壁:较薄，肽聚糖含量低，交联度低，脂质含量高。
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四、实验器材
1.菌种
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌（18h牛肉膏蛋白胨琼脂 斜面培养物）
2.溶液和试剂
草酸铵结晶紫染液，卢戈氏碘液，95%乙醇，番红复染 液等。
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混合涂片染色
七、注意事项
细菌因素：选择活跃生长期菌种（18-24h），老 龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。 操作因素：涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成 假阳性。 染色因素：脱色是革兰氏染色是否成功的关键， 脱色过度造成假阴性，脱色不够造成假阳性。 显微镜保养：正确使用，用毕，擦拭油镜，登记。
曾颖丹麦病理学家christaingram1884年德国病理学家carlweigert番红染色鉴别染色为革兰氏阳性菌g学习并掌握革兰氏染色法了解革兰氏染色原理巩固显微镜操作技术油镜细菌细胞壁结构和组成差异所决定
细菌的革兰氏染色 Gram stain
时间：10分钟 岗位代码：1217 考生：曾颖
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一、背景知识
3.仪器和其他用品
酒精灯，载玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二 甲苯），擦镜纸，接种环，试管架，镊子，载玻片支 架，滤纸，滴管等
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五、实验步骤
水 洗
初染 （1-2min）
媒染 （1min）
水 洗
脱色 （20-30s）
水 洗
复染 （2min）
水 洗
吸 去 残 水 晾 干
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六、实验预期结果
大 肠 杆 菌 （ G） 金 黄 色 葡 萄 球 菌 （ G+ ）
丹麦病理学家Christain Gram，1884年 德国病理学家Carl Weigert,番红染色
鉴别染色为 革兰氏阳性菌（G+） 革兰氏阴性菌（G-）
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二、目的要求
学习并掌握革兰氏染色法 了解革兰氏染色原理
巩固显微镜操作技术（油镜）
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三、实验原理
细菌细胞壁结构和组成差异
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八、总结与思考
实验报告
1.油镜下菌体图像（拍照或绘制） 2.结果记录表：
菌名 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 菌体颜色 细菌形态 结果（G+,G-）
思考题
1.革兰氏是否成功，有哪些问题需要注意，为什么？ 2.你认为革兰氏染色法中哪个步骤可以省略？在何种情况下 可以省略？ 3.为什么用老龄菌进行革兰氏染色会造成假阴性？