各种显带技术
基因在染色体上定位的基本方法
基因在染色体上定位的基本方法1.遗传连锁分析：遗传连锁分析是通过对家族中的基因型和表型进行检测和分析，确定基因与染色体的位置关系。
这种方法通过比较不同的亲代和子代之间的遗传关系，可以推测基因位点在染色体上的相对位置。
2.染色体显带技术：染色体显带技术是将染色体进行染色处理后，通过显微镜观察染色体的特殊带状分布来确定基因或基因组的位置。
常用的染色体显带技术有吉姆萨染色法和Q-带染色法等。
3.倒位和缺失：倒位和缺失是指染色体片段的倒转和丢失，这种染色体异常通常说明被倒转或丢失的区域内含有对其中一基因的局部作用。
通过研究倒位和缺失的病人或动物模型，可以确定被破坏的基因在染色体上的位置。
4.分子标记和杂交技术：分子标记和杂交技术是基于DNA分子间的互补配对原理，通过标记和杂交技术可以在染色体上定位基因。
常用的分子标记技术包括PCR、限制性片段长度多态性(RFLP)、微卫星标记和单核苷酸多态性(SNP)等。
这些标记可以通过杂交技术与染色体上的特定区域发生互补配对，从而确定目标基因的位置。
5.整合遗传和物理图谱：整合遗传和物理图谱是一种将遗传信息与物理距离相连的方法。
遗传图谱是根据遗传连锁分析得到的基因距离关系，而物理图谱则是根据染色体的物理特性和DNA序列的物理位置建立的。
通过整合遗传和物理图谱，可以更准确地确定基因在染色体上的位置。
6.定位克隆技术：定位克隆技术主要利用染色体上已知的标记序列或已离体的基因进行探针筛选和杂交实验，进而确定目标基因的精确位置。
常见的定位克隆技术包括克隆定位、转录映射和比较基因组定位等。
7.基因组测序：基因组测序技术的发展为基因在染色体上的定位提供了新的工具和方法。
通过高通量测序技术，可以对染色体上的DNA序列进行全面的测定，从而获得准确的基因位置信息。
综上所述，基因在染色体上定位的基本方法包括遗传连锁分析、染色体显带技术、倒位和缺失、分子标记和杂交技术、整合遗传和物理图谱、定位克隆和基因组测序等。
常见带型的类型
常见带型的类型1、Q带（Q banding）：Q显带是用荧光染料对染色体标本进行染色，然后在荧光显微镜下进行观察。
Q显带技术是最早建立的显带技术，它在观察染色体多态方面有重要的用途。
但Q带保存时间短，而且需要在荧光显微镜下进行观察，因而，限制了Q显带技术的应用。
2、G显带（G banding）：染色体标本用热、碱、蛋白酶等预处理后，再用Giemsa染色，可以显示出与Q带相似的带纹。
在光学显微镜下，可见Q带亮带相应的部位，被Giemsa 染成深带，而Q带暗带相应的部位被Giemsa染成浅带。
这种显带技术称为G显带，所显示的带纹称为G带。
G显带克服了Q显带的缺点，G带标本可长期保存，而且可在光学显微镜下观察，因而得到了广泛的应用，是目前进行染色体分析的常规带型。
3、R显带（R banding）：所显示的带纹与G带的深、浅带带纹正好相反，故称为R带（reversed band）。
G带浅带如果发生异常，不易发现和识别，而R显带技术可以将G带浅带显示出易于识别的深带，所以R显带对分析染色体G带浅带部位的结构改变有重要作用。
4、C显带（C banding）：专门显示着丝粒的显带技术。
C显带也可使第1、9、16号和Y染色体长臂的异染色质区染色。
因而，C带可用来分析染色体这些部位的改变。
5、T显带（T banding）：专门显示染色体端粒的显带技术，用来分析染色体端粒。
6、N显带（N banding）：专门显示核仁组织区的显带技术。
7、高分辨显带（high-resolution banding）：分裂中期一套单倍染色体一般显示320条带。
70年代后期，采用细胞同步化方法和改进的显带技术，获得细胞分裂前中期、晚前期或早前期的分裂相，可以得到带纹更多的染色体，能显示550-850条带，甚至2000条带以上。
这种显带技术称为高分辨显带技术。
8、姊妹染色单体互换（SCE）：5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromodeoxy-uridine，BrdU）是脱氧胸腺嘧啶核苷的类似物，在DNA链的复制过程中，可替代胸腺嘧啶。
C显带技术
（一）C显带方法1 显带方法1
1、将标本放入已预温至60℃的5％Ba（OH）2 溶液中处理5分钟。 2、用预热到60 oC的自来水冲洗，以除去钡 垢。 3、将标本投入预温到60 oC的2×SSC溶液中 温育30-60分钟。 4、取出后用自来水冲洗干净。 5、用Giemsa染液染色10分钟，水洗，空气 干燥，镜检。
人类染色体C显带技术 实验四 人类染色体 显带技术
一、目的要求
1、学习C显带标本制作方法、了解C显带 技术原理。 2、掌握C显带染色体的基本特征。
二、实验原理
用强碱溶液加热处理染色体标本使其DNA变性后，再以温热的盐溶 液处理使其复性时，由高度重复DNA序列组成的染色体结构性异染色 质区域的DNA复性速度要明显快于其它区域，因而易被Giemsa染液深 染，在染色体上呈现出特有的着丝粒和次缢痕深染区，即所谓的C带， 也称为着丝粒异染色质带。而常染色质只能显示较淡的轮廓。由于人 类的第1号、9号、16号染色体长臂近着丝粒处为次缢痕区（结构异染 色质区），Y染色体长臂远端也为异染色质部分，因此这些区域均可 显示出非常明显C带，故此法可以准确鉴别第1号、9号、16号和Y染色 体，还用于确定着丝粒的位置和数目，配合其它显带技术可实验步骤以及 结果分析
染色体核型分析系列之三大技术介绍
染色体核型分析三大技术介绍·概念是细胞遗传学研究的基本方法，是研究物种演化、分类以及染色体结构、形态与功能之间关系所不可缺少的重要手段。
经行核型分析后，可以根据染色体结构和数目的变异来判断生物的病因。
染色体核型分析技术，传统上是观察染色体形态。
但随着新技术的发现与应用，染色体核型分析三大技术包括：GRQ带技术、荧光原位杂交技术、光谱核型分析技术。
·三大技术介绍一、GRQ带技术人类染色体用Giemsa染料染色呈均质状,但是如果染色体经过变性和(或)酶消化等不同处理后,再染色可呈现一系列深浅交替的带纹,这些带纹图形称为染色体带型。
显带技术就是通过特殊的染色方法使染色体的不同区域着色,使染色体在光镜下呈现出明暗相间的带纹。
每个染色体都有特定的带纹,甚至每个染色体的长臂和短臂都有特异性。
根据染色体的不同带型,可以更细致而可靠地识别染色体的个性。
染色体特定的带型发生变化,则表示该染色体的结构发生了改变。
一般染色体显带技术有G显带(最常用),Q显带和R显带等。
百奥赛图提供的小鼠染色体核型分析服务，就是利用Giemsa染色法，对染色体染色后进行显带分析，保证基因敲除小鼠在染色体水平阶段没有发生变异，从而确保基因敲除小鼠可以正常繁殖。
二、荧光原位杂交技术荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization,FISH)是在20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法,探针首先与某种介导分子结合,杂交后再通过免疫细胞化学过程连接上荧光染料。
FISH的基本原理是将DNA(或RNA)探针用特殊的核苷酸分子标记,然后将探针直接杂交到染色体或DNA 纤维切片上,再用与荧光素分子耦联的单克隆抗体与探针分子特异性结合,来检测DNA序列在染色体或DNA纤维切片上的定性、定位、相对定量分析，可判断单个碱基突变。
染色体带纹及命名
染色体带纹及命名人类染色体是以几届国际会议的结果予以命名的（1960的Denver会议，1963年的伦敦会议，1966年的芝加哥会议，1975年巴黎会议，1977年stockholm会议，1994年Memphis会议）。
1995年细胞遗传学标准委员会修改了自1985到1991年所发表的文件，把他们编撰成一个册子，名为《人类细胞遗传学国际命名体制》，常简称ISCN1995。
显带是一类分带技术，是一种方法学。
是把染色体标本经过特殊处理后染色，使染色体有深、浅或明、暗的区别带。
这里我们介绍几种常出现在文献中的带型。
1、G带：也叫G显带，这是临床上最常用的显带方法。
用胰酶，缓冲液处理中期染色体标本均可显带。
G带的特性是显带方法简单恒定，带型稳定，保存时间长。
染色体标本用热、碱、蛋白酶等预处理后，再用Giemsa染色，可以显示出与Q带相似的带纹。
在光学显微镜下，可见Q带亮带相应的部位，被Giemsa染成深带，而Q带暗带相应的部位被Giemsa 染成浅带。
这种显带技术称为G显带，所显示的带纹称为G带。
G显带克服了Q显带的缺点，G带标本可长期保存，而且可在光学显微镜下观察，因而得到了广泛的应用，是目前进行染色体分析的常规带型。
2、Q带：用喹吖因染料染中期染色体标本可出现一种特征性黄光亮暗带型，一般富含AT-DNA区段表现为亮带，富含GC-DNA区段黄光较暗，常用于人类Y染色体长臂的观察。
临床上较少用，不能长久保存。
3、C带：这种方法将结构异染色质和高度重复的DNA区域染色。
在人类染色体上这些区域位于着丝粒和Y染色体上。
常用于某一科题的研究。
专门显示着丝粒的显带技术。
C显带也可使第1、9、16号和Y染色体长臂的异染色质区染色。
因而，C带可用来分析染色体这些部位的改变。
4、R带：带型与G带相近，常用于染色体末端的研究。
所显示的带纹与G带的深、浅带带纹正好相反，故称为R带（reversed band）。
G带浅带如果发生异常，不易发现和识别，而R显带技术可以将G带浅带显示出易于识别的深带，所以R显带对分析染色体G带浅带部位的结构改变有重要作用。
R和C带技术及其临床意义
1.目的：R显带可补充G显带末端浅染的缺点，加强染色体末端微小变异的识别；R显带适用于大批量实验以及较难处理的标本如骨髓。
2．应用范围外周血、骨髓等各种标本的染色体分析技术。
3．实验原理3.1．R显带法产生的带纹在染色强度上与G带相反，故也称为逆转显带。
R 显带染色体的末端为阳性染色，为了观察染色体的末端缺失，应当用R带。
在这一点上G带和Q带不如R带。
虽然有许多荧光素不必预处理就能在染色体上产生R带。
但标准的R带技术是把染色体放在高温（通常为87℃）的离子溶液中，再以Giemsa或吖啶橙染色。
这时原来为G带阴性的带，经Giemsa 染色后为阳性带，经吖啶橙染色者为绿色荧光，而原来G带的阳性带则呈现红色的吖啶橙荧光。
3.2．R带按制备方法的不同可分为荧光R带和姬母萨R带两类，但以Dutrillaux首创的热处理姬母萨R显带法为最基本的方法。
其显带机制尚未完全明了。
Dutrillaux认为是由于DNA受热变性的缘故。
此时富含AT碱基对的区段单链化，故不易为姬母萨液所染色，乃呈浅带；而富含GC碱基对的区段仍保持正常的双链结构，故易于为姬母萨液染色，乃呈深带。
但目前了解的Giemsa着色机制并不十分支持次假说。
3.3．R带与G带、Q带技术产生的大多数条带在整个染色体臂上显示出一系列阳性和阴性的染色带，但没有“间带”。
这些带的带型在不同组织中是恒定的，且在发育期间不发生变化。
在分裂的前期是许多的细微带出现在细长的染色体上，到了前中期由于它们彼此融合而成为稍大一点的带，带的数目也随之减少；在高度浓缩的中期染色体上，这些带几乎合并成一个带而占据着整条染色体。
可见这些带在有丝分裂过程中不断地改变其大小，故称为变动带。
变动带相当于粗线期的染色粒，而且代表了有丝分裂中染色体上的浓缩过程，蛋白质的巯基被氧化成二硫化物。
最先浓缩的染色体带一般是在S 期的后期复制的DNA，它们富含A-T碱基对，几乎没有活性基因。
阴性的G 带和阳性的R带通常是早复制的，浓缩得晚些，含有大多数活性基因，很易遭受染色体损伤。
染色体显带的技术
染色体G-带技术 （原理）
G带染色技术也称改良的吉姆萨染色法。因 用吉姆萨染色，所以称为G带。是目前应用 最广泛的染色体分带技术之一。 关于G带的显带机制，有许多说法，目前尚 无定论，比较公认的一种看法是：染色体 上富含A-T碱基对的区段，与蛋白质结合比 较紧密，较耐受胰酶处理，从而被Giemsa 深染，而富含G-C碱基对的区段，与蛋白质 结合疏松，在经胰酶处理后，蛋白质受到 破坏，而不被Giemsa染色，显示为淡染的 明区。
染色体C带技术（原理）
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
本实验学习BSG（氢氧化钡/盐/吉姆萨）-显带方 法，BSG-显带是显示染色体的结构异染色质，即 着丝点和次缢痕区的较稳定的方法。 原理：经BSG程序处理后，然色染色体的臂区丧 失大量染色质（包括常染色质和异染色质），而 着丝点、部分次缢痕和异染色质区因含有大量的 重复DNA顺序及与之相结合的蛋白质却保留下来， 经由Giemsa染色形成深染的C带。 本方法可用于人类不同种族和个体之间染色体多 态性研究，鉴别染色体上不同的染色质类型；也 可以应用于基因定位、产前诊断，以及各种异常 细胞双着丝点染色体乃至多着丝点染色体之来源 等。
染色体C带技术（注意事项）
⑴5% Ba(OH2)配制后放至4℃保存，用时吸取上 清液。 ⑵2xSSC配制时须一种盐溶解后方可加入第二种， 即取NaCl1.75g溶于100ml双蒸水中，待完全溶解 后加入0.88g枸椽酸盐。 ⑶片龄1-5天为最适标本。 ⑷从Ba(OH) 2溶液中取出染色标本时，要求动作 迅速，切忌BaCO3薄膜形成 （Ba(OH2 ) + CO3→BaCO3↓+H2O)敷贴在染色体 标本上，否则影响显带效果。
作业
染色体显带技术、常见的显带技术和原理、---小雨啵啵
染色体显带技术的概念：染色体异染色质和常染色质区段存在差异，序列AT和GC含量存在差异。
使用特定的染色体显色技术，使差异个体之间的染色体或同一个体不同染色体之间显现不同的显色条纹，进而进行核型分析。
染色体显带技术是核型分析的重要技术。
适用于更微观水平上鉴定染色体,并获取遗传信息。
是更精确的核型分析,在应用时往往带型分析与核型分析合二为一。
常见的染色体显带（分带）技术及其原理
1.Q带：喹吖因荧光染色技术。
中期染色体经氮芥因喹吖染色后，在紫外线下呈现的明暗带，DNA富含AT碱基区为明带，富含GC碱基区呈暗带。
2.G带：Giemsa带，中期染色体制片经胰酶或碱、尿素、去污剂等处理后，用Giemsa染色，呈现的染色体区带，一般与Q带相符(AT 区深色，GC区为浅色)。
3.R带：中期染色体磷酸盐缓冲液保湿处理，经吖啶橙或Giemsa染色呈明暗相见的带型，与G带正好相反又称反带（AT区为浅带，GC 区为深带）。
4.C带：主要显示着丝粒结构区异染色质以及染色体其它区段的异染色质部分，异染色质区染色较深。
5.T带：也称末端带，染色体端粒经吖啶橙染色后所呈现的区带。
6.N带：又称Ag-As染色法，主要用于核仁组织区的酸性蛋白质染色。
G显带技术1
人类G显带染色体制备技术 实验四 人类 显带染色体制备技术
一、实验目的 1 、掌握 染色体常规片的制备技术 2、掌握镜下各号染色体 带带型。 带带型。 、掌握镜下各号染色体G带带型 3、了解人类染色体 显带技术方法 、了解人类染色体G显带技术方法
分析： 1、为什么没有染色体、染色体不分散？ 2、为什么染色体不显带、染色体发毛？
（二）、镜检 ）、镜检 先在低倍镜下选择分散良好、 先在低倍镜下选择分散良好、长度适 中的中期分裂相，然后转至油镜下观察G带 中的中期分裂相，然后转至油镜下观察 带 带型。选择带纹清晰的分裂相进行分析， 带型。选择带纹清晰的分裂相进行分析， 并在实验报告纸上绘出快速线条分裂相， 并在实验报告纸上绘出快速线条分裂相， 标明各条染色体序号。 标明各条染色规片制备技术 （二）G显带标本制备 显带标本制备 1、外周血培养按常规法制作染色体标本，自然老化 天左右。 、外周血培养按常规法制作染色体标本，自然老化3~7天左右。 天左右 2、将0.02％胰蛋白酶溶液倒入染色缸中，加入 ％酚红溶液 、 ％胰蛋白酶溶液倒入染色缸中，加入0.4％酚红溶液2 并以1NNaHCO3调节 调节PH 7.0 左右，使颜色为橙色。混匀 左右，使颜色为橙色。 滴，并以 调节 置于37℃水浴锅恒温。 后，置于 ℃水浴锅恒温。 3、将经过老化的标本片投入0.02％胰蛋白酶溶液中消化 ～ 、将经过老化的标本片投入 ％胰蛋白酶溶液中消化30～ 60秒。 秒 4、取出已消化的标本片，立即投入磷酸缓冲液中，冲洗残留 、取出已消化的标本片，立即投入磷酸缓冲液中， 的胰酶。 的胰酶。 5、用10%Giemsa染液染色 、 染液染色6-10分钟。 分钟。 染液染色 分钟 6、自来水冲洗，凉干或电吹风吹干后镜检。 、自来水冲洗，凉干或电吹风吹干后镜检。
染色体核型分析系列之三大技术介绍
染色体核型分析系列之三大技术介绍Hessen was revised in January 2021染色体核型分析三大技术介绍·概念是细胞遗传学研究的基本方法，是研究物种演化、分类以及染色体结构、形态与功能之间关系所不可缺少的重要手段。
经行核型分析后，可以根据染色体结构和数目的变异来判断生物的病因。
染色体核型分析技术，传统上是观察染色体形态。
但随着新技术的发现与应用，染色体核型分析三大技术包括：GRQ带技术、荧光原位杂交技术、光谱核型分析技术。
·三大技术介绍一、GRQ带技术人类染色体用Giemsa染料染色呈均质状,但是如果染色体经过变性和(或)酶消化等不同处理后,再染色可呈现一系列深浅交替的带纹,这些带纹图形称为染色体带型。
显带技术就是通过特殊的染色方法使染色体的不同区域着色,使染色体在光镜下呈现出明暗相间的带纹。
每个染色体都有特定的带纹,甚至每个染色体的长臂和短臂都有特异性。
根据染色体的不同带型,可以更细致而可靠地识别染色体的个性。
染色体特定的带型发生变化,则表示该染色体的结构发生了改变。
一般染色体显带技术有G显带(最常用),Q显带和R显带等。
百奥赛图提供的小鼠染色体核型分析服务，就是利用Giemsa染色法，对染色体染色后进行显带分析，保证基因敲除小鼠在染色体水平阶段没有发生变异，从而确保基因敲除小鼠可以正常繁殖。
二、荧光原位杂交技术荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization,FISH)是在20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法,探针首先与某种介导分子结合,杂交后再通过免疫细胞化学过程连接上荧光染料。
FISH的基本原理是将DNA(或RNA)探针用特殊的核苷酸分子标记,然后将探针直接杂交到染色体或DNA纤维切片上,再用与荧光素分子耦联的单克隆抗体与探针分子特异性结合,来检测DNA序列在染色体或DNA纤维切片上的定性、定位、相对定量分析，可判断单个碱基突变。
染色体显带原理与技术
不同染色体在显带中的位置和条 带数量都独特，这种特征可用于 鉴定异常染色体。
荧光显带
荧光显带可根据不同的染料使用 不同波长的激光来激发，显示出 不同颜色的条带。
染色体显带技术
染色体显带技术主要有两种类型，其中短臂染色体显带技术较为常见，它将染料质体停留在短臂上，形 成条带。
1
样本预处理
样本处理步骤包括细胞培养、细胞均质、制备染色体悬液等。
染色体显带在医学诊断中的应用
染色体显带技术在医学诊断中成为了一项重要的检测方式，可以帮助医生诊断疾病、确认确诊和 预测病程。
1 唐氏综合症
常规方法可以检测到95%的唐氏综合症，但应用染色体显带技术可以精确到99%。
2 染色体异常
染色体显带技术在识别染色体异常、染色体缺失等方面具有突出的优势。
3 遗传病
染色体显带可以应用于众多预测疾病和研究遗传变异的领域，例如，分析发育、遗传咨询、研究遗传性疾病等 等。
基因研究
染色体显带技术是基因研究中的 重要手段，可以对遗传突变或缺 陷进行深入探索。
产前检测
染色体显带技术可对孕妇进行产 前检测，判断胎儿是否存在染色 体病变。
肿瘤分析
在肿瘤分析中，染色体显带技术 可以帮助确定癌细胞与正常细胞 之间的差异。
染色体显带技术可以帮助识别常染色体显性遗传疾病，如遗传性失聪等。
染色体显带技术的发展和前景
染色体显带技术在不断发展，人们正在探索和发掘更加高效和准确的分析技术，以及更加广泛的应用领域。
技术创新
随着生物技术得到快速发展，新的染色体分析技术 得到不断研发，比如FISH（荧光原位杂交）技术等。
数据深度挖掘
未来前景
随着生物技术快速发展，染色体显带技术应用领域将越来越广泛。
《G显带技术》课件
G显带技术（Graphics Sync Technology）是一种显示技术，通过动态调整刷新 率来提升游戏和影视剧的画面流畅度和质量，同时也适用于VR/AR应用。
什么是G显带技术
G显带技术是一种通过调整显示器刷新率以匹配图形渲染速度的技术，旨在消除画面撕裂和延迟，提供更平滑 的图像和更好的游戏体验。
1 考虑什么因素
根据自身需求和预算，考虑刷新率、兼容性和画质等因素，选择适合自己的G显带技术设 备。
2 比较不同品牌和型号
仔细比较不同品牌和型号的G显带技术设备，了解它们的特点、性能和用户评价，做出明 智的选择。
总结
G显带技术的发展前景
G显带技术在游戏和影视行业有着广阔的应用前景， 未来将持续推动画面表现和用户体验的提升。
如何更好地利用G显带技术提升 游戏体验
通过选择适合自己的G显带技术设备、调整画质设 置和优化游戏环境等方式，玩家可最大程度地享受 优质的游戏体验。
Intel Adaptive-Sync是Intel开发的 G显带技术，它结合了硬件和软 件优化，提供出色的视觉效果。
G显带技术的优缺点
1
缺点
2
部分G显带技术需要特定的显卡和显示器 组合才能发挥最佳效果，有一定的兼容 性要求。
优点
提供更平滑的游戏画面和更低的输入延 迟，增强用户的游戏体验。
如何选择适合自己的G显带技术设备
G显带技术的应用
游戏
G显带技术可提供更快的响应时间和更平滑的动态画面，使玩家能够更好地享受游戏过程。
影视剧
通过使用G显带技术，观众可以流畅地欣赏高画质的电影和电视剧，享受更逼真的观影体验。
VR/AR应用
在虚拟现实和增强现实应用中，G显带技术能够提供更低的延迟和更流畅的动画效果，增强 用户的沉浸感。
染色体G显带技术及其原理
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►Giemsa存储液的配制
Giemsa粉末1g加少许甘油混合研碎→共计 加入甘油66ml，充分混匀→倒入烧杯中在 55~60℃水浴中加热2小时→冷却→加入甲醇 66ml，充分混合→在室温中静置2~3周，过 滤贮存于棕色瓶中，可长期使用。
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►1/15mol/L 磷酸缓冲液（Phosphate Buffer Solution，PBS）的配制
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DNA核苷酸的组成
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实验原理(6)
非显带的标本上虽然可以根据染色体的 形态识别1，2，3，16，17和18号，有时还 可以识别Y染色体，但却不能有把握地鉴别其 他大多数染色体。自1970年Caspersson等首 次报道用喹吖因对人体染色体进行染色可在 各号染色体上显现出宽窄和位置不同带纹以 来，细胞遗传学工作者以不同的染色方法为 基础，提出了各种显带方法的名称。
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实验用品(1)
1、材料： 常规方法制备的人外周血淋巴细胞染
色体玻片标本(75℃中烤片3小时，未经 染色 )
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实验用品(2)
2、器材： 显微镜、恒温培养箱、烤箱、恒温水浴 箱、冰箱、立式染色缸、镊子、香柏油、 擦镜剂、擦镜纸
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实验用品（3）
3、试剂： 1) 2.5％胰蛋白酶原液 2) 0.85％生理盐水 3) Giemsa储存液 4) 1／15M磷酸缓冲液（1/15NA2HPO4、 1/15KH2PO4） 5) 蒸馏水
各种显带技术
其中最简单而又准确的方法是银染法,即利用 硝酸银将具有转录活性的核仁形成区(rRNA 基因)特异性地染成黑色,人们将这种银染阳性 的核仁形成区称为Ag-NOR,它们是具有转录 活性的18SrRNA基因和28SrRNA基因所在的
部位。
由于具有转录活性的rRNA基因(rDNA)往往 伴有丰富的酸性蛋白质,该类蛋白质含有巯基 （-SH）和二硫键（-S-S-）,能使AgNO3中的 Ag+还原成Ag颗粒,因此有转录活性的核仁形 成区常被镀上银颗粒而呈现黑色,没有转录活 性的NOR则不着色。
4.在60℃恒温水浴箱中，置一培养皿于 水面上（皿内加1/3 2×SSC溶液，将 所制玻片浸泡在内）。距玻片10cm处 放置一20瓦紫外灯，照射玻片30-45分 钟。 5.待紫外处理时间结束后，用自来水冲 净。 6.Gimesa染色5分钟，自来水冲净，室 温干燥后于镜下观察。
注意： 1. Brdu的浓度和作用时间是实验成败的关键。
2、 滴AgNO3液时，不能让玻片干燥。注意 防止银染液溅至衣物和手上，以免留下难以 去 除的黑色污点。
3、滴片时染色体标本片一定要平置，以使染液 均匀分布在标本上，使标本着色均匀。 4、一定要让玻片擦镜纸变黑后再冲洗。 5、染色时间因材料而异，因吉姆萨染料批号不 同、质量上有差异，因此其染色液浓度和染 色时间需作适当调整。
故其着色程度与细胞中rRNA基因的转录活性 相一致。在同一物种，Ag-NOR的数目以及 它们在染色体上的位置是相对恒定的，如果 发生了改变就意味着rRNA基因的活性发生了 变化，故此项技术是目前探讨rRNA基因功能 的方法之一。
此外，人类近端着丝粒染色体的随体间 易发生联合，这种联合可能是造成近端着丝 粒染色体不分离、断裂和易位的原因。利用 银染技术可在发生联合的染色体间清楚地看 到有银染物质相连。因此，银染近端着丝染 色体联合（Ag-stained acrocentric association ,Ag-AA）可以作为准确地判断人 体细胞是否存在近端着丝粒染色体随体联合 的客观标准。
染色体显带技术的名词解释
染色体显带技术的名词解释染色体显带技术，是一种通过特定的实验方法将染色体分解和染色，然后通过显微镜观察和分析染色体的带状图案，来揭示染色体结构和组成的一种分析技术。
该技术是生物学和遗传学领域中非常重要的实验手段之一，广泛应用于生物体的遗传分析、基因定位和重组等研究方向。
染色体显带技术的原理是通过染色剂将染色体进行染色，然后通过显微镜观察和记录染色体的带状图案。
常用的染色剂有吉姆萨染剂、醋酸酯染剂等。
这些染剂能够与染色体特定的结构和组成发生特定的反应，从而在显微镜下呈现出不同的带状图案。
这些带状图案是染色体的一种特征，通过对带状图案的分析，可以确定染色体的个数、结构和组成等信息。
染色体显带技术在生物学和遗传学中有着广泛的应用。
首先，它可以用于确定染色体的数量和形态。
通过观察染色体的带状图案，可以准确地确定染色体的个数。
同时，不同的染色体在带状图案上呈现出不同的形态，通过对形态的观察和分类，可以对染色体进行鉴定和区分。
其次，染色体显带技术可以用于研究基因的定位和重组。
通过对染色体显带图案的分析，可以确定某个基因位于染色体的哪个区域，从而帮助研究人员进行基因的定位。
此外，如果两个染色体上的带状图案发生了重组，也可以通过染色体显带技术来检测和确认重组的事件。
此外，染色体显带技术还可以用于进行遗传变异的分析。
在染色体显带图案中，可以观察到染色体的缺失、重复、倒位等变异。
通过对变异的分析，可以了解染色体结构的稳定性和遗传变异的机制。
总之，染色体显带技术是一种重要的实验手段，通过对染色体的染色和观察，可以揭示染色体的结构和组成，帮助研究人员进行遗传分析和基因定位等研究。
在生物学和遗传学研究中，染色体显带技术起着重要的作用，对我们深入了解生命的本质和遗传机制提供了有力的支持。
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用氢氧化钠调pH至11。
2. 将染色体玻片放入其中染色5分钟左右。 3. 自来水冲洗，干燥。
4. 观察可见9号染色体次缢痕染成紫红色，其它染
色体长短臂均显示蓝色。
注意事项： 1、染色体玻片片龄一般不要超过一周，且在显 带之前最好再次75℃烤片5分钟。 2、pH值为11是显带成功的关键。
3、染色时间可先摸索，如整个背景为蓝色、次 缢痕未出现，可相应地延长染色时间；如整 个背景为紫红色、次缢痕不明显则可相应地 缩短染色时间。
实验方法
1、设一60℃水浴箱；另置Giemsa染液缸于37℃水浴 箱。 2、临时配制新鲜的AgNO3溶液：取一次性离心管 （15ml）一支，称取AgNO3 5g溶于10ml去离子 水中，加10ul甲酸，混匀。将一干燥培养皿漂于 60℃水浴箱水面上。 3、将玻片用4层干净擦镜纸（略小于玻片大小）盖好。
R显带
在细胞的培养过程中加入碱基的类似物， 然后用紫外线照射后再用 Giemsa 染料染色，
可以得到和 G—显带相反的带纹，称为 R— 带。
实验原理
R显带与G显带相反，染色体经过热盐处理， 使富含AT的DNA变性，用Giemsa染色，则 可显示与G显带正好相反的带纹，即G显带的 深带变为浅带，浅带染成深带。当G显带显 示的染色体两臂末端为浅带时，如果两臂末 端发生缺失等异常，一般难以发现和识别， 而R带正好能将此处显示出易于识别的深带。 所以，R显带技术有利于检测染色体的末端 缺失、重排等。
实验用品
光学显微镜、恒温水浴箱、紫外灯、培养皿、 常规制片材料、BrdU、秋水仙素、2×SSC溶
液（0.3mol/L NaCl+0.03mol/L柠檬酸钠）、 Gimesa染液等。
实验方法
1.常规培养细胞，终止前10小时在培养基中 加BrdU（使其终浓度为12µg/ml）。
2.继续培养6小时后加秋水仙素20µg/ml的3滴（7号 针头垂直竖滴，使终浓度为0.04-0.08µg/ml）。 3.常规收获、处理细胞，制片。
各种显带技术
中南大学医学遗传学国家重点实验室
C显带
将染色体用碱或者去垢剂处理后，再用 Giemsa 染色，可以得到只显示着丝粒区域的
带纹，称为 C—带。
实验原理
C显带技术由Arrighi和Hsu于1971年发明， 是显带技术中最简单的一种带型。其方法的本 身是起源于原位杂交。Arrighi和Hsu发现用碱 处理载玻片上的染色体使DNA变性之后，再在 SSC溶液中、65℃的条件下使其复性，在受控 制的条件下经Giemsa染色可显示出在染色体的 一定部位是深染的。
70年代用原位杂交的方法证明深染的区域（C 带区）是结构异染色质的区域，也就是一般而 言的DNA高度重复序列的区域。然而，现在更 为流行的看法认为氢氧化钡或其它碱性物质的 处理是优先提取了非C带区的DNA，SSC的处 理有助于带型的清晰。
实验用品
光学显微镜，恒温水浴箱，培养皿，小镊 子，未染色的染色体标本片（片龄一周内）， 5%氢氧化钡水溶液，2×SSC液，0.2mol/L HCl，PBS，吉姆萨染液。
目前，也将Ag-AA看作反映rRNA基因活性大 小的一个指标。所以银染技术已逐渐受到重 视，并已开始广泛应用于肿瘤细胞遗传学、 体细胞遗传学、进化遗传学、临床细胞遗传 学及药物、化学因素等的遗传效应的研究 上。
实验用品
光学显微镜、恒温水浴箱、移液枪、培养皿（ 干燥）、吸管、擦镜纸、小镊子、未染色的染 色体标本片（片龄一周以内）、硝酸银、甲 酸、Giemsa染液、一次性离心管（15ml）、 去离子水、锡箔纸等。
4、用吸管将AgNO3溶液慢慢滴于玻片纸上， 直至擦镜纸呈棕黄色（黑色）为止，一般 5ml能滴两张玻片。
5、擦镜纸变黑后，用镊子轻轻启开擦镜纸， （将玻片）用自来水冲干净。 6、Giemsa染色：吉姆萨母液用蒸馏水按一定 的比例稀释。例如，10份蒸馏水加1份吉姆 萨母液稀释即为10：1。一般染色5分钟。
7、染色后的玻片标本用自来水洗去多余染料， 染色过深可用磷酸缓冲液脱色。室温下风干 后即可镜检，必要时可用树胶封片。镜检时 先在低倍镜下选择分散好、长度适中的分裂 相，然后转换油镜观察其显带的情况，选择 显带好的标本进行核型分析。
注意事项：
1、AgNO3工作液应现用现配，并注意避光。 用锡箔纸包住离心管，放置时间不能超过 20分钟，如放置的时间较长，溶液出现混 浊即不宜再使用。
Caspersson等（1971）的方法： 取用空气干燥标本的玻片→浸入95%、70%、 50%的乙醇和蒸馏水使其吸水→浸入pH7的 柠檬酸/磷酸盐缓冲液中→用预温至20℃芥子 喹吖因（50ug/ml）染液染色20分钟 →在上 述缓冲液中漂洗三次，每次5分种→然后用缓 冲液盖片封存→在荧光显微镜下观察。
故其着色程度与细胞中rRNA基因的转录活性 相一致。在同一物种，Ag-NOR的数目以及 它们在染色体上的位置是相对恒定的，如果 发生了改变就意味着rRNA基因的活性发生了 变化，故此项技术是目前探讨rRNA基因功能 的方法之一。
此外，人类近端着丝粒染色体的随体间 易发生联合，这种联合可能是造成近端着丝 粒染色体不分离、断裂和易位的原因。利用 银染技术可在发生联合的染色体间清楚地看 到有银染物质相连。因此，银染近端着丝染 色体联合（Ag-stained acrocentric association ,Ag-AA）可以作为准确地判断人 体细胞是否存在近端着丝粒染色体随体联合 的客观标准。
次缢痕的显带方法，一般用于9号染色体次缢痕
多态分析、家系调查，亲子鉴定等研究以及9号 染色体倒位的细胞遗传学分析。
实验用品
光学显微镜、恒温水浴箱、染色缸、自 制新鲜染色体玻片、吸管、计时器、pH试纸、
蒸馏水、0.1N氢氧化钠、Gimesa染液等。
实验方法
1. 3 ml Gimesa原液中加入蒸馏水47 ml，混匀，
4、 2×SSC处理：在60-65℃的2×SSC液中 处理90分钟时，用自来水冲洗干净， 2×SSC温育可使DNA骨架断裂并使断片溶 解。 5、 染色：用蒸馏水配制5%Giemsa，染色510分钟，用自来水冲洗干净，室温下风干 后即可镜检。
6、 镜检：用显微镜高倍镜镜下检查显带标 本，如着丝粒区域或异染色质部位（1,9,16 号染色体次缢痕）及Y染色体长臂q12深染， 染色体其它部位染色浅，即为可取标本。若 观察到染色体均呈白色，那么，可能是碱处 理或2×SSC温育过度。
条染色体，称为 Q—带。
实验原理
染色体用一种易结合于富含AT的DNA的 荧光染料染色， 如quinacrine，DAPI或 Hoechst33258，通过UV荧光显微镜可以观察
染色体显示亮度不同的带纹，Q显带的带纹与G
显带的非常相似，亮带相当于G显带的深带， 暗带相当于G显带的浅带。
实验用品
光学显微镜、恒温水浴箱、立式染色缸、
显带观察：9号长臂次缢痕显紫色
Q显带
70 年代初期，瑞典的化学家 Caspersson 首先 用荧光染料喹丫因氮芥 ( Quinacrine Mustard) 处理 染色体标本，发现在荧光显微镜下每条染色体出现 了宽窄 和亮度不同的辉纹，即荧光带，而各条染色
体有其独特的带，由此可以清楚地鉴别人类的每一
人类外周血
植物血球凝集素 ( PHA） 肝素、培养基、小牛血清
体外培养
72 hrs 后 收集细胞
制作玻片标本
固定
预固定 紫外线照射
低渗处理 Giesma染色 R—带
Giesma染色 C—带
Giesma 染色 G—带
Ba(OH)2 处理
荧光染料染色 Q—带
染色体带的制作方法
Ｎ显带
此技术可以使13、14、15、21和22号
4.在60℃恒温水浴箱中，置一培养皿于 水面上（皿内加1/3 2×SSC溶液，将 所制玻片浸泡在内）。距玻片10cm处 放置一20瓦紫外灯，照射玻片30-45分 钟。 5.待紫外处理时间结束后，用自来水冲 净。 6.Gimesa染色5分钟，自来水冲净，室 温干燥后于镜下观察。
注意： 1. Brdu的浓度和作用时间是实验成败的关键。
人外周血淋巴细胞染色体玻片标本（75℃中烤片3小 时，未经染色）。pH6.0缓冲液，Soresens缓冲液 (pH6.0)、pH6.0的磷酸缓冲液。
实验方法
将标本置于pH6.0缓冲液中浸5～10分钟 后，再转浸入用Soresens缓冲液(pH6.0)配制 的0.2%的喹吖因、阿的平染液中染色5～10 分钟，用pH6.0的磷酸缓冲液漂洗2次，每次 5分钟，于玻片上滴加1～2滴新鲜缓冲液，加 盖片，在荧光显微镜下观察。
2、 滴AgNO3液时，不能让玻片干燥。注意 防止银染液溅至衣物和手上，以免留下难以 去 除的黑色污点。
3、滴片时Байду номын сангаас色体标本片一定要平置，以使染液 均匀分布在标本上，使标本着色均匀。 4、一定要让玻片擦镜纸变黑后再冲洗。 5、染色时间因材料而异，因吉姆萨染料批号不 同、质量上有差异，因此其染色液浓度和染 色时间需作适当调整。
其中最简单而又准确的方法是银染法,即利用 硝酸银将具有转录活性的核仁形成区(rRNA 基因)特异性地染成黑色,人们将这种银染阳性 的核仁形成区称为Ag-NOR,它们是具有转录 活性的18SrRNA基因和28SrRNA基因所在的
部位。
由于具有转录活性的rRNA基因(rDNA)往往 伴有丰富的酸性蛋白质,该类蛋白质含有巯基 （-SH）和二硫键（-S-S-）,能使AgNO3中的 Ag+还原成Ag颗粒,因此有转录活性的核仁形 成区常被镀上银颗粒而呈现黑色,没有转录活 性的NOR则不着色。
9号 大，从着丝粒扩展到q。
10号 中等。
11号 中等，但比10号或12号大些。
12号 中等。
13号 中等，有时分为二节。 14号-15号 中等。 16号大，从着丝粒向q扩展。