常用的组织固定液及配制

常用固定液及其配制

固定液分单纯固定液和混合固定液。

1甲醛（formaldehyde）

是无色气体，易溶于水成为甲醛溶液。易挥发，且有强烈刺激气味，常用得是37％～40％得甲醛溶液，商品名为福尔马林（formalin）。用作固定的浓度习惯为10％福尔马林（即1份甲醛溶液加9份水配制而成），实际含甲醛4％。

10％福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩少。对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好，是最常用的固定剂。

经福尔马林固定时间长的组织，易产生黑色的沉淀，称福尔马林色素。

2 乙醇

无色液体，易溶于水，它除可作为固定剂外，还可作为脱水剂，对组织有硬化作用。固定用一般是80%~95%浓度，乙醇渗透力校弱，它能溶解脂肪，核蛋白被沉淀后，仍能溶于水，因此核的着色不良。

3 中性甲醛液（混合固定液）

甲醛（浓）120ml，加蒸馏水880ml,磷酸二氢钠（NaH2PO4?H2O）4g，磷酸氢二纳（Na2HPO4）13g。此液固定效果比单纯10％福尔马林要好。

4 AF液（混合固定液）

95％乙醇90ml，甲醛(浓)10ml。也有配方是95％乙醇85ml，甲醛（浓）10ml，冰醋酸5ml。

此液除有固定作用外，兼有脱水作用，因此，固定后可直接入95％乙醇脱水。

以上4种固定液中，以中性甲醛为首选，其次为10％福尔马林，乙醇应尽量不用。

yzbai wrote:

（1）10%甲醛：对组织渗透性强，固定均匀。对组织膨胀约5%，经酒精脱水时有较大的收缩。能保存脂肪，不能沉淀核蛋白及白蛋白，长期用其固定的组织使组织变为酸性，不利于染色，特别是细胞核的着色。经自来水冲洗6~24小时后，可以使其酸碱中和，并减少结晶。

（2）4%多聚甲醛：对组织穿透性好，组织收缩小，对大多数抗原物质保存较好，特别是对脂肪和各种酶的固定效果更好。固定的时间不宜太长，以24小时以内为宜，适用于免疫组织化学染色。

几种细胞固定方法

选择最佳固定液标准是：

（1）最好地保持细胞和组织的形态结构；

（2）最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金属的固定液在免疫组化和细胞化学技术中是禁用的；

（3）不要用可能带有自发荧光的固定剂，如带有苦味酸的固定剂，还有甲醛升汞固定液，会使上皮细胞产生非特异性荧光；

（4）固定剂的选择、固定时间、温度和PH值都会影响实验结果。

单纯固定液

（1）4%中性甲醛固定液：最常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作（Job）。中性甲醛是以PH7.2-7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不超过一个月。

甲醛（40%）100ml

无水磷酸氢二钠6.5g

磷酸二氢钠4.0g

蒸馏水900ml

（2）乙醇固定液：使用时以80%-95%的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，假如用于证实尿酸结晶和保存糖原，可用于100%乙醇固定组织。

（3）4%多聚甲醛固定液：主要用于培养细胞的固定。

混合固定液

（1）乙醇-甲醛（乙醇-福尔马林，AF）固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。

甲醛（40%）100ml

95%乙醇900ml

（2）B5（醋酸钠-升汞-甲醛）固定液：多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱汞沉淀处理。无水醋酸钠1.25g

升汞6.0g

蒸馏水90ml

使用前加入甲醛10ml

（3）Bouin固定液：非凡适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。

饱和苦味酸水溶液（约1.22%）75ml

甲醛25ml

冰醋酸5ml

（4）Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，非凡适用于固定外膜致密的组织，也适用于糖原及尼氏小体的固定。

无水乙醇60ml

氯仿30ml

冰醋酸10ml

（5）Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清楚，但成本较高且需非凡处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效。

升汞 5.0g

重铬酸钾 2.5g 硫酸钠 1.0g

蒸馏水（加至）100ml