血红蛋白的提取和分离(试用版)
血红蛋白的检测
一血红蛋白的提取和分离实验的方法：1：实验材料，仪器，试剂及试剂的配制（1）实验材料：新鲜的鸡血（2）实验仪器：离心机，烧杯（100ml），胶头滴管，玻璃棒，离心管架，漏斗，纱布等。
（3）实验试剂：饱和（NH4）2SO4溶液（PH=6.0~7.0），柠檬酸钠溶液，生理盐水，蒸馏水。
（4）试剂的配制：1. 饱和（NH4）2SO4溶液的配制：100ml蒸馏水中溶解76g（NH4）2SO4，用氨水滴PH值至6.5左右；2.生理盐水的配制：取9gNaCl溶于1000ml蒸馏水中。
3.柠檬酸钠溶液的配制：6g柠檬酸钠溶于100ml生理盐水中（可收集100ml鸡血）。
2：实验步骤：（1）收集并清洗鸡血：用盛有柠檬酸钠溶液的烧杯装新鲜的鸡血（防止鸡血凝固），然后将鸡血用300ml生理盐水稀释，充分搅拌后转移到50ml离心管中，离心（V=5000rpm）5min（此步可除去血清蛋白）。
（2）破碎鸡血细胞：小心倒掉上清，下层细胞加入50ml的蒸馏水，剧烈震荡10min，离心（V=5000rpm）10min.。
取上清溶液，即血红蛋白的溶液，用多层纱布过滤。
（3）盐析分离血红蛋白：向滤液中逐渐加入（NH4）2SO4饱和溶液，边加边摇，约加入与血红蛋白溶液相同体积时，溶液出现浑浊。
静止20min，离心10min(v=5000rpm).。
红色沉淀就是分离出来的血红蛋白。
血红蛋白溶液通过盐析并离心后得到红色沉淀，此时上清溶液基本无色，表明该沉淀就是我们分离得到的血红蛋白，无需用其他方式进行验证。
下面就几点进行讨论;1我们购买鸡血时，为了防止鸡血凝固，把鸡血收集到事先准备好的盛有柠檬酸钠溶液的瓶子里，可以放置一白天，若要过夜，温度须控制在4摄氏度。
2我们用蒸馏水使细胞涨破而不用甲苯（有毒），既简单又安全，同时还可以将血红蛋白溶液进行稀释。
3用盐析法进行蛋白质分离试验，比通过色谱柱，减少了实验难度，降低了试验成本，缩短的试验时间。
课题3 血红蛋白的提取与和分离
(二）、凝胶色谱操作---血红蛋白的纯化
1.凝胶色谱柱的制作
①取长40厘米，内径1. 6 厘米的玻璃管，两端磨平
②底塞制作:打孔→挖凹 穴 +安装移液管头部→ 覆盖尼龙网，再用100目 尼龙纱包好。
③顶塞制作 ④组装
注意:底塞中插入的玻璃管的上部不得超出 橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网， 还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。
(2)固定化细胞可以用海藻酸钠，其作用是___包___埋__细__胞____， 加热溶化后的海藻酸钠需冷却到室温才可以加入菌体的原因 是 防止温度高导致微生物死亡 ； 该操作还需要使用氯化钙溶液，其作用是________________。
促进海藻酸钠和微生物混合液形成凝胶珠（或交联剂）
(3)整个操作过程需要在无杂菌的条件下进行，对使用到的玻璃
2.本实验中所用的缓冲液
磷酸缓冲液 目的：利用缓冲液模拟细胞内的pH环境， 保证血红蛋白的正常结构和功能。
(三)电泳 1.电泳的概念
指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。 2.原理：
①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解 离的基团，在一定的PH下，这些基团会带上正电或负电。
②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷 相反的电极移动。
若想尽快达到理想的透析效果可采取的措施是?
（练习）红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的功能主要是由血 红可（ 分蛋以3离）白选，同完用在学成猪电甲的、泳利，牛过用血 、程琼红 羊中脂蛋 或，糖白 其影凝的 他响胶主 脊蛋电要 椎白泳功动质技能物迁术是的移将携血速得带液率到O进的的2行因或蛋实素C白O验包2质，括，进来我行提们取 和蛋分白离质血带电红性蛋质白。、根分据子材本料身回大答小下以列及问分题子：的形状 不同等。
血红蛋白的提取和分离教案
血红蛋白的提取和分离教案教案一: 血红蛋白的提取和分离教学目标:- 理解血红蛋白的结构和功能。
- 学习血红蛋白的提取和分离方法。
- 掌握实验室中分离血红蛋白的步骤和操作技巧。
教学步骤:引入活动:在开始实验之前，首先向学生介绍血红蛋白的结构和功能，以及为什么需要提取和分离血红蛋白。
1. 血红蛋白的提取:a. 实验材料准备:- 鲜血样本- 磷酸缓冲溶液（pH 7.4）- 离心管- 离心机- 冷藏器b. 实验步骤:1) 将鲜血样本取出，用磷酸缓冲溶液稀释。
2) 将稀释后的样本置于离心管中，离心10分钟。
3) 将离心后的上清液转移至新的离心管中，置于冷藏器中。
2. 血红蛋白的分离:a. 实验材料准备:- 血红蛋白样本- 离心管- pH 4.7缓冲溶液- pH 5.2缓冲溶液- pH 6.0缓冲溶液- pH 7.0缓冲溶液b. 实验步骤:1) 将血红蛋白样本转移到离心管中。
2) 分别加入pH 4.7、pH 5.2、pH 6.0和pH 7.0缓冲溶液，使其达到不同的酸碱度。
3) 转动离心管，使其充分混合。
4) 将混合溶液置于冰箱中冷藏一段时间。
5) 通过离心，收集上层液体，然后分别加入酸、碱溶液，使其达到酸碱中和。
6) 重复以上步骤，直到获得纯净的血红蛋白。
实验注意事项:- 实验过程中要注意安全，佩戴实验室衣物和手套。
- 实验器材要严密封闭，避免反应物外泄。
- 实验后要彻底清理实验场地。
教学总结:通过本次实验，学生可以了解血红蛋白的结构和功能，并掌握了提取和分离血红蛋白的方法。
同时，学生也了解了实验室实验的注意事项和操作技巧。
血红蛋白的分离和提取
血红蛋白的分离和提取血红蛋白是人体内一种重要的蛋白质，负责运输氧气和二氧化碳。
对血红蛋白的分离和提取，不仅在生物学和医学研究中具有重要意义，也为相关疾病的诊断和治疗提供了有力的支持。
接下来，让我们一起深入了解血红蛋白的分离和提取过程。
要进行血红蛋白的分离和提取，首先需要准备适当的材料和试剂。
通常，我们会从新鲜的血液样本入手，比如人的静脉血或者动物的血液。
在采集血液时，要注意使用无菌的采血器具，并遵循正确的采血流程，以确保血液的质量和安全性。
采集到血液后，第一步是进行红细胞的分离。
这可以通过离心的方法来实现。
将血液放入离心机中，以适当的转速和时间进行离心。
由于红细胞的比重较大，在离心力的作用下会沉淀到离心管的底部，从而与血浆等其他成分分离开来。
得到红细胞后，接下来就是破坏红细胞，释放出血红蛋白。
常用的方法是低渗裂解法。
将红细胞置于低渗溶液中，由于细胞内外的渗透压差异，红细胞会吸水膨胀并最终破裂，释放出其中的血红蛋白。
血红蛋白释放出来后，还需要进一步的分离和纯化。
这时候可以运用层析技术。
常见的层析方法有凝胶过滤层析、离子交换层析和亲和层析等。
凝胶过滤层析是根据蛋白质分子的大小进行分离的。
将含有血红蛋白的溶液通过填充有特定孔径凝胶的层析柱，大分子的蛋白质不能进入凝胶颗粒的孔隙，会先被洗脱出来；小分子的蛋白质则会进入孔隙，后被洗脱出来，从而实现血红蛋白与其他大小不同的蛋白质的分离。
离子交换层析则是基于蛋白质的电荷性质进行分离。
层析柱中的填充材料带有一定的电荷，血红蛋白在一定的 pH 条件下会带上电荷，与填充材料产生静电相互作用。
通过改变洗脱液的离子强度或 pH 值，可以使血红蛋白与其他带电性质不同的蛋白质分离开来。
亲和层析是一种特异性很高的层析方法。
利用血红蛋白与某些特定配体之间的特异性结合作用，将配体固定在层析柱的填充材料上，当含有血红蛋白的溶液通过层析柱时，血红蛋白会与配体结合而被留在柱子上，其他杂质则被洗脱出去，然后再通过改变条件将血红蛋白洗脱下来，从而达到纯化的目的。
血红蛋白的提取和分离
1. 凝胶色谱柱的制作 2．凝胶色谱柱的装填 3. 样品的加入和洗脱
注意事项：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的 凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋 白质分离不彻底。
装 配 好 的 凝 胶 柱
收集得到的纯 化后的蛋白
开 始 进 行 层 析
实验操作
问：蛋白质提取和分离步骤？ 样品处理——粗分离——纯化——纯度鉴定 样品的处理：通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等 操作收集到血红蛋白溶液 样品的粗分离：再经过透析去除分子量较小的杂质； 样品的纯化：通过凝胶色谱法将相对分子质量较大杂质 蛋白除去，
②化学本质：多糖类化合物： ③实例：葡聚糖、琼脂糖：
基础知识
（一） 凝胶色谱法
原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相 对（相对分子质量较小 ）的蛋白质容易进入 凝胶内部的通道，路程（ 较长 ），移动速 度（ 较慢 ），而（ 相对分子质量较大） 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能 凝胶外部 ）移动，路程（较短 ）， 在（ 移动速度（ 较快 ），相对分子质量不同 的蛋白质因此得以分离。
①许多生物大分子具有可解离的基团，在一定的PH下， 会带上正电或负电。
②在电场的作用下，带电分子会向着与其所带电荷相反 的电极移动。 ③电泳利用各种分子带电性质、分子的大小、形状的不 同，使带电分子产生不同的迁移速度，实现分离。 3、电泳的类型 琼脂糖凝胶电泳、 聚丙烯酰胺凝胶电泳。
基础知识
（三）电泳
纯度鉴定：经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行。
• 用蒸馏水代替生理盐水可以吗？
不可以，红细胞会吸水涨破。
实验操作
（一）样品处理
2.血红蛋白的释放 将洗涤好的红细胞倒入烧杯中，加蒸馏水到原血液的 体积，再加40％体积的甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌 10 min。在蒸馏水和甲苯的作用下，红细胞破裂，释放出 血红蛋白。
血红蛋白的提取和分离
⾎红蛋⽩的提取和分离⼀、实验原理蛋⽩质的物化理性质：形状、⼤⼩、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和⼒等千差万别，由此提取和分离各种蛋⽩质。
1．凝胶⾊谱法（分配⾊谱法）：（1）原理：分⼦量⼤的分⼦通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分⼦量⼩的分⼦穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。
（2）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。
（3）分离过程：混合物上柱→洗脱→⼤分⼦流动快、⼩分⼦流动慢→收集⼤分⼦→收集⼩分⼦注意：①洗脱：从⾊谱柱上端不断注⼊缓冲液，促使蛋⽩质分⼦的差速流动。
②相对分⼦质量较⼩的蛋⽩质通过扩散作⽤进⼊凝胶内部。
（4）作⽤：分离蛋⽩质，测定⽣物⼤分⼦分⼦量等。
2．缓冲溶液（1）原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3/NaHCO3， NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的⽤量，可配制不同pH的缓冲液。
（2）缓冲液作⽤：抵制外界酸、碱对溶液pH的⼲扰⽽保持pH稳定。
3．凝胶电泳法：电泳：指带电粒⼦在电场的作⽤下发⽣迁移的过程。
（1）原理：不同蛋⽩质的带电性质、电量、形状和⼤⼩不同，在电场中受到的作⽤⼒⼤⼩、⽅向、阻⼒不同，导致不同蛋⽩质在电场中的运动⽅向和运动速度不同。
决定运动⽅向电场作⽤⼒形成阻⼒决定运动速率电荷性质√电荷量√√分⼦形状√√分⼦⼤⼩√√（2）分离⽅法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。
常⽤⽅法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙稀酰胺凝胶电泳。
聚丙烯酰胺凝胶电泳： （1）在测定蛋⽩质分⼦量时常⽤⼗⼆烷基硫酸钠（SDS）—聚丙烯酰胺凝胶电泳。
聚丙烯酰胺凝胶：由单体丙烯酰胺和交联剂N，N′-亚甲基双丙烯酰胺在引发剂和催化剂的作⽤下聚合交联成的具有三维⽹状结构的凝胶。
（2）原理： 蛋⽩质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少及分⼦的⼤⼩等因素。
加⼊SDS可消除净电荷对迁移率的影响，使蛋⽩质迁移速率仅取决于分⼦⼤⼩。
（3）SDS作⽤机理： SDS能使蛋⽩质发⽣完全变性。
血红蛋白的提取与分离
②血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶
色谱分离时可以通过观察颜色来判断
什么时候应该收集洗脱液。这使血红
蛋白的分离过程非常直观，大大简化
了实验操作。
•1.洗涤目的：去 红细胞的洗涤 杂蛋白 除 ，利于后 或血浆蛋白 2.洗涤方法 续步骤的分离纯化。
采用低速短时间离心，如 500 用 胶头吸管 r／min,离心 2 min，然后
离 心 管 中 ， 以 2000 r ／
min的速度离心10min后，
可以明显看到试管中的溶
液分为4层：
高速长时间离心
第4层：红细胞破碎物沉淀 层（暗红色）
用 滤纸 过滤除去脂溶性 沉淀层，于 分液 漏斗中
静置片刻后，分出下层 的 红色 透明液体。
粗分离
--透析（去除分子质量较
小
的杂质）
取1mL的血红蛋白溶液装入 透 （pH为7.0 ）透析12 h。
A. 它们都是分离蛋白质的重要方法 B. 它们的原理相同不同
)
C. 使用凝胶色谱法需要使用缓冲溶液而电泳不需要 都需要使用缓冲溶液维持PH D. 以上说法都正确
实验步骤
蛋白质的提取和分离一般分为四步：
样品处理
红细胞的洗涤 血红蛋白的释放 分离血红蛋白溶液
透析—去除样品中分子量较小的杂质
粗分离
纯化 用凝胶色谱法除去相对分子质量较大的杂质
合物，SDS所带负电荷的量大大超过蛋白质分子原有的
电荷量，因而掩盖了不同蛋白质间的电荷差异，使电泳
迁移率完全由蛋白质分子的大小决定。
例题5.下列各项中不属于电泳使样品中各分子分离的
原因的是( D )
A.分子带电性质的差异
B.分子的大小 C.分子的形状 D.分子的变性温度
血红蛋白的分离和提取
教材图5－ 教材图 －19
材料：交联葡聚糖凝胶G 20mmol/L磷酸缓冲液 材料：交联葡聚糖凝胶G-75 20mmol/L磷酸缓冲液 表示什么？75代表什么 代表什么？ “G”表示什么？75代表什么？ 步骤 ① 固定色谱柱 ② 计算称量凝胶 ③ ④ ⑤ 配制悬浮液 装填悬浮液 洗涤平衡 操作要求 色谱柱垂直固定在支架上 根据色谱柱体积计算凝胶用量 凝胶颗粒＋蒸馏水→ 凝胶颗粒＋蒸馏水→充分溶胀 一次性缓慢倒入； 一次性缓慢倒入；轻轻敲打 立刻用磷酸缓冲液洗涤平衡12h 立刻用磷酸缓冲液洗涤平衡12h
注意： 色谱柱不能内不能有气泡 气泡； 注意 色谱柱不能内不能有气泡； 装完后，立即用缓冲液洗涤， 装完后，立即用缓冲液洗涤，平衡凝 胶是凝胶装填紧密 胶是凝胶装填紧密
3.样品的加入和洗脱 样品的加入和洗脱
1.调液面 调液面 2.加样 加样 3.再调液面 再调液面 4.洗脱 洗脱 5.收集 收集
缓冲液 凝胶
注意事项
1. 红细胞的洗涤： 红细胞的洗涤： 洗涤次数不能过少；低速、短时离心。 洗涤次数不能过少；低速、短时离心。 2.色谱柱的装填： 2.色谱柱的装填： 色谱柱的装填 装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。 装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。 3. 凝胶的预处理： 凝胶的预处理： 沸水浴法时间短， 沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡 4. 色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。 色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。
混合物 上 柱
洗 脱
大分子流动快 小分子流动慢
收 集 大分子
收 集 小分子
洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液， 洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液， 促使蛋白质分子的差速流动。 促使蛋白质分子的差速流动。
血红蛋白的提取和分离
专题5 DNA和蛋白质技术课题3 血红蛋白的提取和分离一、教学目标（一）知识与技能1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理（二）过程与方法体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，注意按照操作提示进行相关步骤（三）情感、态度与价值观初步形成科学的思维方式，发展科学素养和人文精神二、课题重点与难点课题重点：凝胶色谱法的原理和方法。
课题难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。
三、课题背景分析课题背景通过当今生物科学在蛋白质研究领域的进展，说明提取、分离高纯度的蛋白质的重要性和必要性，进而明确地提出课题目的：以血红蛋白为实验材料，学习蛋白质提取和分离的一些基本技术。
可以发挥学生的主动性，让学生介绍当前有关蛋白质研究的新进展，激发学生的学习兴趣，然后指出本课题的学习意义，让学生初步体会分离纯化蛋白质的过程和方法。
四、基础知识分析与教学（一）教学方法：启发式教学（二）教学工具：多媒体课件（三）教学过程引入新课蛋白质是生命活动的主要承担者，是细胞内含量最高的有机化和物。
对蛋白质的研究有助于人们对生命过程的认识和理解。
所以需要从细胞中提取蛋白质进行研究。
怎样提取蛋白质呢？1、进行新课蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。
1．1凝胶色谱法（分配色谱法）：学习内容：1.凝胶色谱法的用途；2.凝胶色谱法分离蛋白质的原理。
凝胶色谱法也称作分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。
凝胶：所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体，这些小球体大多数是由多糖类化合物构成的，如葡聚糖或琼脂糖。
教学：在介绍凝胶色谱法的基本原理时，可以结合教科书提供的插图，让学生对凝胶色谱法分离蛋白质的过程有一个直观的认识。
可以通过发动学生查阅资料，让学生了解有关凝胶色谱法的知识，如凝胶的种类、理化性质及凝胶的选择和保存，并结合实验操作，让学生分析实验中的注意事项。
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③分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通
道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速
度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此
得以分离
血红蛋白的提取和分离(试用版)
（4）依据的特性 蛋白质分子量的大小
（5）具体过程
血红蛋白的提取和分离(试用版)
3.类型:
琼脂糖凝胶电泳、聚丙稀酰胺凝胶电泳。
血红蛋白的提取和分离(试用版)
聚丙烯酰胺凝胶电泳
1、在测定蛋白质分子量时常用十二烷基硫酸钠 （SDS）—聚丙烯酰胺凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝 胶是由单体丙烯酰胺和交联剂N,N’-亚甲基双丙 烯酰胺在引发剂和催化剂的作用下聚合交联成的 具有三维网状结构的凝胶。
3、缓冲溶液的配制
通常由1－2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调 节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范围 内使用的缓冲液
4、缓冲溶液的组分分类
①弱酸和弱酸盐组合
H2CO3 CH3COOH
NaHCO3 CH COONa 血红蛋白的提取和分离3(试用版)
②弱碱和弱碱盐 NH4OH
NH4CL
③多元弱酸的酸式盐和其他所对应的次级盐
NaH2PO4
Na2HPO4
KH2PO4
K2HPO4
如何证明色谱法获得的蛋白质是目的蛋白？
血红蛋白的提取和分离(试用版)
（五） 电泳：
1.概念：带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。
2.原理①：许多重要的生物大分子，如多肽、
核酸等都具有可解离的基团，在一定的PH下， 这些基团会带上正电或负电。 ②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所 带电荷相反的电极移动。 ③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的 差异以及分子本身的大小，形状的不同，使带电 分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种 分子的分离。
9、蛋白质结构的多样性 氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺 序变化多端；多肽链的空间结构千差万别
10、生理功能
细胞和生物体的结构物质，是人体发育和组 织更新的主要原料，具有运输、调节、免疫、 催化等作用，是一切生命活动的主要承担者
血红蛋白的提取和分离(试用版)
(二）蛋白质的提取
1、分离生物大分子的基本思路
2003年4月14日宣布人类基因组序列图完成 这标志着进入了和蛋白质组
人类基因组：指DNA分子所携带的全部遗传信息
蛋白质组：生物个体表达的蛋白质分子的总和。 主要是对蛋白质功能的研究
血红蛋白的提取和分离(试用版)
血红蛋白的提取和分离(试用版)
一、基础知识 (一）蛋白质 1、含量
占细胞干重的50％以上，细胞中含量最多的 有机物 2、组成元素
4、 SDS作用机理
SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组 成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单 条肽链，因此测定的结果只是单条肽链的分子 量。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS 复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白 质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种电荷间 的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的 大小
（1）概念：根据被分离物质的蛋白质相对分 子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分 子筛作用，来进行分离
（2）凝胶
①性质：一些微小多孔的球体，内含许多贯穿 的通道
②实例：葡聚糖、琼脂糖
血红蛋白的提取和分离(试用版)
（3）凝胶色谱法的原理—分子筛效应
①大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或 琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿 的通道
血红蛋白的提取和分离(试用版)
血红蛋白的提取和分离(试用版)
（四）缓冲溶液 1、概念
在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或 稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做 缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液
2、作用
能够抵制外界的酸或碱的对溶液的PH值的影响， 维持PH基本不变
血红蛋白的提取和分离(试用版)
选用一定的物理或化学的方法分离具有不同 物理或化学性质的生物大分子
2、 蛋白质分离和提取的原理
根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状 和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和 吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可 以用来分离不同蛋白质 血红蛋白的提取和分离(试用版)
（三） 分离蛋白质的方法1源自凝胶色谱法（别名分配色谱法）血红蛋白的提取和分离(试用版)
讨论：如何测定蛋白质的分子量？
使用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的 分子量时，可选用一组已知分子量的标准蛋白 同时进行电泳，根据已知分子量的标准蛋白的 电泳区带位置，用电泳迁移率和分子量的对数 作标准曲线，可以测定未知蛋白质的分子量。 市场上有高分子量、次高分子量及低分子量的 标准蛋白试剂出售.
两个β一肽链
血红蛋白的提取和分离(试用版)
四个亚铁红 素基团
血红蛋白的特点：
每个肽链环绕一个亚铁血红素 基团，此基团可携带一分子氧 或一分子二氧化碳，血红蛋白 因含有血红素而呈红色。
两个α－肽链 血红蛋白 两个β一肽链 血红蛋白的提取和分离(试用版)四个亚铁血红素基团
用鸡的红细胞提取DNA，用猪、牛、羊的红细胞提 取血红蛋白的原因是什么？
丙烯酰胺和交联剂
N,N’-亚甲基双丙烯酰胺（形成交血联红）蛋白的N提,N取’和-亚分甲离基(试双用丙版烯) 酰胺的交联共聚反应
2、原理 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它 所带静电荷的多少以及分子的大小等因素 3、SDS作用
为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶 中加入SDS
血红蛋白的提取和分离(试用版)
血红蛋白的提取和分离(试用版)
二、实验操作 （一）蛋白质提取和分离步骤
样品处理——粗分离——纯化——纯度鉴定 （二）操作过程 1、样品处理
(1)血液组成
血红蛋白的提取和分离(试用版)
①成分
血浆 血
水分 固体物质
血浆蛋白 无机盐
磷脂
液
白细胞
葡萄糖等
血细胞
血小板
两个a－肽链
血红蛋白
红细胞 （最多）
（90％）
C、H、O、N 3、相对分子质量
高分子化合物 血红蛋白的提取和分离(试用版)
4、基本组成单位 氨基酸
5、氨基酸通式 H
R C COOH
NH2 6、氨基酸连接方式
脱水缩合
血红蛋白的提取和分离(试用版)
7、肽键 CO NH
8、分子结构
脱水缩合
盘曲折叠
氨基酸
肽链
蛋白质
（一条或者多条）
血红蛋白的提取和分离(试用版)