土壤硝化作用强度讲义的测定
矿化、硝化与反硝化实验方法
土壤矿化、硝化与反硝化1.矿化培养矿化培养试验采用风干土淹水密闭培养法，预培2 周来消除干土效应。
称取过20 目筛风干土5g，每层土样称取3份，分别置于10×180 mm 的试管中。
将试管平放于桌面上小心滚动，使管中土面倾斜，用移液管缓缓加入5 ml去离子水。
加水后检查各试管中的土壤是否完全润湿，并尽量驱出土中的空气，然后用橡皮塞密封管口，置于25o C 的培养箱中恒温培养，约每周换气一次，并驱除土中气体（在培养后期换气的时间间隔可长一些）；分别于淹水后第0 周、1，3 周、5 周、7 周、10 周、14周时进行取样测定土壤中的铵态氮的含量，每层土样测定3 管，作为3 个重复。
测定时用20ml 2.5 mol/L KCl 将管中土壤全部洗入100ml 三角瓶中，振荡1 小时后静置半小时过滤，将滤液储存在塑料瓶中备测。
(1)每个培养管吸取培养溶液：5ml去离子水(2) 培养周期：预培2 周，分别于淹水后第0 周、2 周、4 周、6 周、8 周、10 周和12 周时进行取样测定土壤中的铵态氮的含量，每层土样测定3 管，作为3 个重复。
(3) 培养结束处理：测定时用20ml 2.5 mol/L KCl 将管中土壤全部洗入100ml三角瓶中，振荡1 小时后静置半小时过滤，将滤液储存在塑料瓶中备测。
2.土壤硝化试验方法如下：称取5g 过20 目筛的每层供试土样各2份，分别放入10×180 mm 的试管中，其中0天培养则不加铵，另外第7天、14 天、21 天和28 天分别取样的分别加入1.125 mgN (NH4)2SO4溶液，然后加水至田间持水量的80％，瓶口用塑料薄膜封口以减少水分损失，称重后置于25o C 的培养箱中恒温培养。
预培3 天后，对不加铵的分别加22.7ml 2.2mol/L KCL 溶液，振荡1 小时后，过滤到干净的塑料瓶中，测定铵态氮和硝态氮的含量作为初始量；而对加铵培养瓶称重，通气30 分钟并补充水分至原重，然后继续恒温培养，并开始计算时间，每隔3 天对加铵培养瓶通气一次并称重补充水分至原重，在正式培养后的第7天、14 天、21 天和28 天分别取样，每层土样各取3 瓶作为3 个重复，分别加25ml 2 mol/L KCL溶液，振荡1 小时后，过滤到干净的塑料瓶中，测定铵态氮和硝态氮的含量。
土壤中硝氮、氨氮测定方法
（七）沉积物磷形态测定方法-SMT方法概述：SMT (The Standards,Measurements and Testing Programme) 是欧洲标准测试委员会框架下发展的淡水沉积物磷形态分离方法，是一种标准测试程序。
对于在湖泊修复中水质的监测和水资源领域的管理，尤其是在至关重要的实验室分析过程的质量保证和数据可比性中是一种很有价值的工具。
研究表明，对沉积物中磷形态与其沉积物的理化性质(有机质、主要氧化物组成)之间的关系可用来推断沉积物中磷的特性。
前人利用SMT方法发现消落带土壤中活性磷组分与河流沉积物中活性磷组分与相比较高，在适宜的环境条件下会成为水体的二次污染源。
目前，已应用SMT法分析沉积物中磷分布特征、各形态磷之间的关系以及与沉积物的某些理化性质之间的相关关系等。
1、方法原理利用土壤、沉积物中各种形态的无机磷酸盐具有不同浸提能力的化学浸提浸提剂，将无机磷酸盐加以逐级分离。
图1淡水沉积物磷形态分离SMT法摘自：金相灿,庞燕,王圣瑞,周小宁. 长江中下游浅水湖沉积物磷形态及其分布特征研究[J].农业环境科学学报2008,27(1):279-285.2、需要的设备与实验条件紫外分光光度计、高压灭菌锅3、所需试剂及操作步骤（一）所需要的试剂（1）5N H2SO4：70mL浓硫酸-500mL水中，置于常温下保存；（2）酒石酸锑钾溶液：准确称取1.3715g酒石酸锑钾于500mL容量瓶中，溶解定容，充分摇匀后将该溶液贮存在棕色或其他试剂瓶（玻璃瓶）中，将其置于4℃下保存。
（3）钼酸铵溶液：准确称取40g钼酸铵于1000mL容量瓶中，加适量水待其完全溶解后加水稀释至刻度线，充分摇匀后将该溶液贮存在棕色或其他试剂瓶（玻璃瓶）中，将其置于冰箱中于4℃下保存。
（4）抗坏血酸溶液：准确称取17.6g抗坏血酸1000mL容量瓶中，加适量水待其完全溶解后加水稀释至刻度线，充分摇匀后将该溶液贮存在棕色或其他试剂瓶（玻璃瓶）中，将其置于冰箱中于4℃下保存。
土壤中硝化抑制剂DMPP含量的气相色谱测定法
收稿日期：2007-07-06； 修订日期：2007-09-09 基金项目：中 科 院 知 识 创 新 工 程 重 要 方 向 项 目 (KZCX3-SW-445)； 国 家 科 技 支 撑 计 划 项 目 (2006BAD10B00) 作者简介：房娜娜（1982－），女，河南新乡人，硕士研究生，主要从事土壤植物营养与土壤肥料方面的研究工作。 Tel：024-83970357； E-mail：fangnana0373@ * 通讯作者：E-mail: wuzj@
表 1 不同萃取剂的峰面积 Ｔａｂｌｅ １ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａｐｅｘ ａｒｅａ ｆｏｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔａｎｔｓ
序号 Ｓｅｒｉａｌ ｎｕｍｂｅｒ
溶剂 Ｅｘｔｒａｃｔａｎｔｓ
１
氯仿
２
甲苯
３
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
环己烷
４
正庚烷
５
石油醚
峰面积 Ａｐｅｘ ａｒｅａ （μＶ ｓ） ２３９４９．０００ ２８５７．６６７ １６０８６．６６７ １４２７１．０００ ２０２４２．３３３
第 39 卷第 6 期 2008 年 12 月
土壤通报 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｏｉｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ
Vol . 39 , No . 6 Dec . , 2008
土壤中硝化抑制剂 ＤＭＰＰ 含量的气相色谱测定法
房娜娜 １，２，武志杰 １*，陈利军 １，陈 光 ３，史云峰 １，２
（１．中国科学院 沈阳应用生态研究所，辽宁沈阳 １１００１６；２．中国科学院 研究生院，北京 １０００３９；３．沈阳化工研究院，辽宁 沈阳 １１００２１）
算其在不同温度下的日平均降解速率。
６．２６２ ６．８６３ １１．５６６
稳定性肥料中硝化抑制剂作用效果的检测方法
稳定性肥料中硝化抑制剂作用效果的检测方法徐英龙;张蕾;杨明;房娜娜;石元亮【摘要】以硝化抑制率作为评价指标,研究了影响硝化抑制剂抑制效果测定方法的主要因素,包括氮土比、培养时间以及土壤类型等.确立了测定稳定性肥料中硝化抑制剂抑制作用效果的最佳检测方法:称取风干后的棕壤200 g,以氮土比1.15:1 000准确称取样肥,并将其充分混匀,以25％的含水量,在30 ℃培养箱中培养.选择自培养开始的第9、12、15 d测定土壤中硝态氮(包括亚硝态氮)的质量分数.该检测方法提高了评价效率和准确度.%Based on the nitrification inhibitory rate as evaluating indicator,the factors that affect the inhibiting efficiency evaluation of nitrification inhibitor were studied,which including:soil nitrogen ratio,incubation time and soil types and etc.A rapid detection method was established for evaluating the efficiency of nitrification inhibitor in stabilized fertilizers:200 g of dried brown soil were weighed,and then the amount of fertilizer were weighed according to the nitrogen and soil ratio at 1.15: 1 000.The mixed soil and fertilizer were cultured in the incubator at 30 ℃with 25％the water content.Soilnitrate(including nitrite)content was measured at the 9,12,15 day.The detection method increased the evaluating efficiency and accuracy.【期刊名称】《中国土壤与肥料》【年(卷),期】2017(000)002【总页数】5页(P157-161)【关键词】检测方法;硝化抑制剂;硝化抑制率;稳定性肥料【作者】徐英龙;张蕾;杨明;房娜娜;石元亮【作者单位】中国科学院沈阳应用生态研究所,辽宁沈阳 110016;中国科学院沈阳应用生态研究所,辽宁沈阳 110016;中国科学院沈阳应用生态研究所,辽宁沈阳110016;中国科学院沈阳应用生态研究所,辽宁沈阳 110016;中国科学院沈阳应用生态研究所,辽宁沈阳 110016【正文语种】中文【中图分类】S143.1;S14-33稳定性肥料是通过一定工艺在肥料造粒过程中加入脲酶抑制剂和(或)硝化抑制剂，能延缓施入土壤的尿素水解和进一步抑制铵态氮向硝态氮转化，而减少氮的挥发和流失，使肥效期得到延长的一类含氮肥料[1]。
土壤硝化作用强度测定
土壤硝化作用强度测定
一、原理
将定量的土壤接种到硝化细菌培养基中，由于土壤中硝化细菌的作用，是亚硝酸氧化成硝酸，用培养基中亚硝酸的消失量占原始培养基中亚硝酸含量的百分比作为硝化作用强度的指标。
亚硝酸能与格利斯试剂反应产生一种紫红色的化合物，该显色反应不易受硝态氮的干扰。
二、药品器材
1.硝化细菌培养基：NaNO2 1g MgSO4·7H2O 0.03g MnSO4·4H2O 0.01g K2HPO40.75g
Na2CO3(无水)1g NaH2PO40.25g超纯水1000ML
2.格利斯试剂：溶液一，称取磺胺酸0.5g，溶于150ml醋酸溶液（30%）中，保存于棕色
瓶中。
溶液二，称取α-萘胺0.5g，加入50ml蒸馏水中，煮沸后，缓缓加入30%的醋酸溶液150ml，保存于棕色瓶中。
3.亚硝酸根标准溶液：称取 1.500g分析纯亚硝酸那于烧杯中，加蒸馏水溶解后定容至
1000ml，此溶液亚硝酸根离子浓度为1mg/ml。
用时以此液配成亚硝酸根标准溶液（亚硝酸根离子浓度为0.01mg/ml）。
三、步骤
1.在150ml三角瓶中装30ml硝化细菌培养基，灭菌。
2.冷却后的培养基中接种1/10土壤悬液1ml，于28℃恒温培养15d，取出三角瓶过滤。
3.用比色法测定滤液中的亚硝酸含量。
四、硝化作用强度
硝化作用强度=（原始培养基中亚硝酸根含量-培养后培养基中亚硝酸根含量）/原始培养基中亚硝酸根含量*100%。
凯氏定氮法 标准-概述说明以及解释
凯氏定氮法标准-概述说明以及解释1.引言1.1 概述凯氏定氮法是一种常用的分析方法，用于确定物质中的氮含量。
该方法基于凯氏反应，即将有机或无机物中的氮转化为氨，再通过氨测定确定氮的含量。
凯氏定氮法简单、灵敏度高，并能够适用于各种类型的样品。
文章的概述部分旨在介绍凯氏定氮法的基本背景和重要性。
首先，我们将对凯氏定氮法的原理和相关的基本步骤进行阐述。
接着，我们将探讨凯氏定氮法在不同领域中的广泛应用，并特别关注其在环境科学、农业和食品安全等领域的应用情况。
凯氏定氮法具有一些独特的优点，如操作简便、成本低廉、准确性高等。
然而，同时我们也必须认识到凯氏定氮法存在一定的局限性，如对某些有机物的测定存在困难等。
针对这些问题，本文还将展望凯氏定氮法未来的发展方向，并探讨可能的改进和创新。
总而言之，本文将全面介绍凯氏定氮法的原理、步骤和应用，并对其优点、局限性进行评估。
通过深入了解凯氏定氮法，我们可以更好地理解其在实际应用中的潜力和局限性，并为其未来的研究和应用提供参考。
文章结构部分的内容可以如下所示：1.2 文章结构本文将按照以下结构来展开对凯氏定氮法的介绍和分析：第一部分，引言，将对凯氏定氮法进行概述，简要介绍该方法的背景和相关概念。
同时，本部分还将描述文章的目的，即通过对凯氏定氮法的详细介绍和分析，帮助读者更好地理解和应用该方法。
第二部分，正文，将重点介绍凯氏定氮法的原理、步骤和应用。
2.1小节将详细阐述凯氏定氮法的原理，包括氛围压降法和热导法两种常见的方法。
2.2小节将详细描述凯氏定氮法的步骤，包括样品的预处理、试剂的选择和实验操作等。
2.3小节将探讨凯氏定氮法在不同领域的应用，例如土壤分析、环境监测等，以及其在实际应用中的优点和限制。
第三部分，结论，将对凯氏定氮法进行总结并展望其未来的发展。
3.1小节将概述凯氏定氮法的优点，如准确性高、灵敏度好等。
3.2小节将强调凯氏定氮法的局限性，如样品处理过程中的误差、仪器设备的限制等。
(新)土壤硝化作用强度的测定
实验程序3
(用比色法测定滤液中的亚硝酸根含量）
结果计算
NO2-(mg/30mL)=X(mg/mL) ×比色体积×稀 释倍数 ×10－3
式中X(mg/mL）——由标准曲线查知 10－3——换算为mg
土壤硝化作用强度
计算公式：
原始培养基中NO2- 量－培养基中NO2- 量 硝化作用强度＝ ×100％ 原始培养基中NO2- 量
思考题
什么叫硝化作用？硝化作用由哪
两类细菌参与？ 根据硝酸细菌培养基的组成成分， 硝酸细菌属何种营养类型？ 本实验的原理是什么？ 实验中要注意什么？
实验二十三
结
束
菌培养基中，每组接2只三角瓶过 滤立即用以测定原始培养液中亚硝 酸根含量，另一支三角瓶置于280C 温室中培养15d. 培养结束，取出三角瓶，培养液进 行过滤。
实验程序3
(用比色法测定滤液中的亚硝酸根含量） 取滤液1mL于50mL容量瓶中，稀释至约 40mL，加入1mL格利斯试剂Ⅰ，放置 10min。再加入1mL格利斯试剂Ⅱ和 1mL2%醋酸钠溶液，显色后稀释至刻度， 放置10min后，用分光光度计（波长 520nm)比色测定。 亚硝酸银标准曲线的绘制 吸取压硝酸银 标准液0、1、2、3、4、5mL，分别放 入50mL容量瓶中，定容。与待测样品同 样条件进行比色，以浓度为横坐标，以光 密度为纵坐标绘制标准曲线。
实验材料2
格利斯试剂： 1. 溶液Ⅰ 称取对氨基苯磺酸0.5g,溶于 150ml30%醋酸溶液中，保存于棕色瓶中。 2.溶液Ⅱ 称取α－萘胺0.5g,加入50mL 蒸馏水中，煮沸后，缓缓加入30％的醋酸 溶液150mL,保存于棕色瓶中。 亚硝酸银标准液 称取1.5000g分析纯亚 硝酸钠于烧杯中，加蒸馏水溶解后洗入 1000mL容量瓶中 ，再加蒸馏水至刻度， 摇匀。用时以此液稀释成标准液（每mL含 0.01mg的NO2-)
硝化作用强度的测定
6.亚硝酸根标准曲线的绘制，吸取亚硝酸根标准液0、1、2、3、4、5ml分别放入50ml容量瓶中，定容，与待测样品同样条件进行比色，以浓度为横坐标，以OD值为纵坐标绘制标准曲线。
三、实验步骤
培养基的配置及1/10土壤悬液的制备-----接种培养-----用比色法测定滤液中的亚硝酸根含量。
1.在150ml三角瓶中装30ml硝酸细菌培养基，灭菌每组2瓶。
2.在150ml三角瓶中装45ml蒸馏水，并放入少许玻璃珠，灭菌每组1瓶。
3.称5g土于45ml三角瓶中，震荡5分钟。
4.取1ml于硝酸细菌培养基中，每组接2瓶，其中一瓶立即过滤用以测定原始培养基中亚硝酸根含量，另一瓶置于28温箱培养15天，培养结束，取出三角瓶，培养液进行过滤。
硝化作用强度的测定
一、目的要求
掌握硝化强度的测定方法，了解土壤中氮素如何有效利பைடு நூலகம்及对环境污染的影响。
二、实验材料
样品：新鲜土样
培养基：硝化作用第二阶段培养基
亚硝酸钠1克；硫酸镁0.03克；硫酸锰0.01克
磷酸氢二钾0.75克；碳酸钙3.0克；水1000毫升
格里斯试剂：
1.溶液Ⅰ：称取对氨基苯磺酸0.5g(0.05g)溶于150ml(15ml) 30%醋酸溶液中，保存于棕色瓶中。
四、结果计算
NO2–(mg/30ml)=X(ug/ml)*比色体积*稀释倍数*10-3
X（由标准曲线查知）10-3（换算为ml）
土壤消化强度=原始培养基中NO2–量—培养基中NO2–量
包气带土层的反硝化强度测定方法研究
264
地 球
与
环
境
2011 年
构、 土层厚度等与反硝化作用量的变化关系。 ( 2) 较 难区分采集气体中的 N O 量 , 哪些产自硝化作用 ,
2
对不同深度土层微生物固持无机氮量的测定。将这 些补充测试量加入到反硝化作用过程的氮均衡计算 中即可。
哪些产自反硝化作用? 将使依据 N2 O 量变化进行 的反硝化强度测定, 产生较大偏差。( 3) 也较难区分 不同厚度土层和最大稳定埋深水 分运移零通量 面 上、 下土层以及地下含水层间的反硝化作用量差别。 不能真实评估地下水位之上土层的相关防护能力。 ( 4) 施入的 N 肥料与土壤原有的氮素间存在生物 交换作用及土壤气体的逸出不通畅等, 将使反硝化 强度值的测定偏低。 ( 5) 反硝化过程的分馏作用, 使 N2O、 N 2 气体 偏向贫 N, 而 底物硝 态氮 偏向富 集
施用氮肥是农业增产的重要手段, 广施氮肥易 引起包气带土层和地下水中的氮素污染。土壤反硝 化作用是农田氮素损失、 消散的重要途径, 也是包气 带土层中的氮污染净化和地下水污染防护的根本力 量所在。田间土层的反硝化强度测定, 即是利用一 定的分析技术和测试方法对田间土层的转化、 消散 氮素能力进行实测认知的一项活动。田间土层反硝 化强度的测定将在认识掌握农田氮素损失、 土壤氮 的污染治理、 地下水的污染防护、 农田施肥与种植结 构调整、 包气带土层的氮污染容量评价等方面 , 发挥 重要而无可替代的作用。 对于田间包气带土层防护地下水污染的反硝化 强度测定 , 目前还没 有较好的方法 满足应用需求。 现行的相关测定方法大多适用性狭窄, 它们在面对 这一领域的应用时, 还存在许多问题与不足 [ 1] 。当 下亟需有适宜的测试方法来满足应用。为此 , 本文 重点针对田间包气带土层防护地下水污染的反硝化 强度测定进行了探讨研究。
《土壤质量硝化潜势和硝化抑制的测定氨氧化快速检测》
《土壤质量硝化潜势和硝化抑制的测定氨氧化快速检测》Soil quality – Determination of potential nitrification and inhibition of nitrification – Rapid test byammonium oxidation(ISO 15685：2012)国家标准（征求意见稿）编制说明国家标准《土壤质量-硝化潜势和硝化抑制的测定-氨氧化快速检测》标准起草组二〇一九年一月项目名称：土壤质量-硝化潜势和硝化抑制的测定-氨氧化快速检测计划编号：20184361-T-326项目负责单位：江苏省农业科学院项目负责人：杨林章技术委员会：全国土壤质量标准化技术委员会（SAC/TC 404）目录1、编制的目的和意义 (1)2、任选来源 (1)3、编制过程 (1)3.1预研阶段 (1)3.2立项阶段 (2)3.3起草阶段 (2)4、标准编制原则和主要内容 (2)4.1基本原则 (2)4.2技术路线 (3)4.3技术内容 (3)5、与现行法律、法规、标准的协调性 (3)6、国内外有关标准现状 (3)7、对标准贯彻的建议 (4)1、编制的目的和意义硝化作用在氮转化过程中扮演着重要的作用，可作为污染物对土壤影响的评价指标。
硝化过程的进行常常通过“硝化势”的大小来衡量。
通常将NH4+作为基质加入土壤中，通过培养试验测定土壤硝氮或亚硝氮浓度来估算硝化势，培育期在几个小时到50天不等。
目前，我国尚没有土壤硝化潜势及硝化抑制相关的国家标准和行业标准。
因此，制定《土壤质量-硝化作用潜势的测定和硝化作用的抑制-氧化铵快速试验》具有重要的意义。
本标准规定了土壤硝化潜势和硝化抑制的快速测定方法，该方法适合各种土壤类型的测定，可应用于土壤和废弃物质量的快速鉴定，以及耕作方式、生物固体和土壤污染物等影响效果的评定。
2、任选来源2018年12月中国标准化管理委员会下达了《关于下达2018年第四批推荐性国家标准制计划的通知》（国标委发函[2018] 83号）其中《土壤质量硝化作用潜势的测定和硝化作用的抑制氧化铵快速试验》获得批准成为2018年第四批国家标准制订计划项目，计划编号20184361-T-326，主管部门为农业部，技术归口单位为全国土壤质量标准化技术委员会，由江苏省农业科学院承担起草工作。
硝化作用概述,硝化作用机理,硝化氧化影响因素
硝化作用概述，硝化作用机理，硝化氧化影响因素概述19世纪以前，人们认为土壤中的硝酸根（N03）主要是化学作用的产物，即空气中的氧和氨经土壤催化形成，没有意识到土壤微生物活动对N03形成的重要性。
1862年L.巴斯德首先指出N03的形成可能主要是微生物硝化作用的结果。
1877年，德国化学家T.施勒辛和A.明茨用消毒土壤的办法，证实了铵根（NH4）被氧化为硝酸根（N03）的确主要是生物学过程。
某些特殊的条件下，化学硝化作用也可以发生，只不过因其要求的条件苛刻与微生物的硝化作用相比生成的硝酸根量很少。
1891年，С.Н.维诺格拉茨基用无机盐培养基成功地获得了硝化细菌的纯培养，最终证实了硝化作用是由两群化能自养细菌进行的。
其作用过程如下：先是亚硝化细菌将铵根（NH4）氧化为亚硝酸根（N02）；然后硝化细菌再将亚硝酸根氧化为硝酸根（N03）。
这两群细菌统称硝化细菌。
硝化细菌从铵或亚硝酸的氧化过程中获得能量用以固定二氧化碳，但它们利用能量的效率很低，亚硝酸菌只利用自由能的5～14%；硝酸细菌也只利用自由能的5～10%。
因此,它们在同化二氧化碳时，需要氧化大量的无机氮化合物。
土壤中硝化细菌的数量首先受铵盐含量的影响，一般耕地里，每克土中只有几千至几万个。
添加铵盐即可使其数量增至几千万个。
土壤中性偏碱，通气良好，水分为田间持水量的50～70%，温度为10～30℃时，最适宜硝化细菌的生长繁殖，铵盐也能迅速被转化为硝酸盐。
自然界中,除自养硝化细菌外,还有些异养细菌、真菌和放线菌能将铵盐氧化成亚硝酸和硝酸，异养微生物对铵的氧化效率远不如自养细菌高，但其耐酸，并对不良环境的抵抗能力较强，所以在自然界的硝化作用过程中，也起着一定的作用。
硝化作用机理硝化作用由自养型细菌分阶段完成。
第一阶段第一阶段为亚硝化，即铵根（NH4+)氧化为亚硝酸根（NO2-）的阶段。
参与这个阶段活动的亚硝化作用过程硝酸细菌主要有5个属：亚硝化毛杆菌属(Nitrosomonas) ；亚硝化囊杆菌属(Nitrosocystis)；亚硝化球菌属(Nitrosococcus)；亚硝化螺菌属(Nitrosospira)和亚硝化肢杆菌属(Nitrosogloea)。
反硝化能力的测定
摘要：为深入研究一农田系统中的反硝化过程，本课题进行了农田土壤样本的反硝化细菌分离和16S rRNA基因鉴定，并分析了它们的反硝化能力与反硝化基因。
通过对土壤样本进行初筛和复筛，以限制氮源的方法分离出8株具有反硝化能力的微生物，对5株微生物的反硝化能力进行测定，硝酸盐降解率最高为100%，最低为66.76%。
对8株分离的反硝化菌株的DNA进行反硝化基因nirS和nosZ 进行PCR扩增，结果发现有三株菌株含有nosZ基因，均未检测到nirS基因。
对分离的反硝化菌株的16S rDNA进行PCR扩增，通过克隆建库和阳性克隆测序的方法对分离菌株进行了分类地位的分子鉴定。
结果表明分离的菌株属嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）、中间气单胞菌（Aeromonas media）、居泉沙雷氏菌（Serratia fonticola）。
而居泉沙雷氏菌没有有反硝化能力的报道，对我们增加对反硝化细菌的认识有很大帮助。
关键词：反硝化微生物，菌种鉴定，反硝化菌筛选, 反硝化基因1、绪论：反硝化作用（denitrification）也称脱氮作用。
反硝化细菌在缺氧条件下，还原硝酸盐，释放出分子态氮（N2）或一氧化二氮（N2O）的过程。
大部分反硝化细菌是异养菌，例如脱氮小球菌、反硝化假单胞菌等，它们以有机物为氮源和能源，进行无氧呼吸，其生化过程可用下式表示：C6H12O6+12NO3-→6H2O+6CO2+12NO2-+能量CH3COOH+8NO3-→6H2O+10CO2+4N2+8OH-+能量反硝化作用使硝酸盐还原成氮气，从而降低了土壤中氮素营养的含量，对农业生产不利。
农业上常进行中耕松土，使土壤与氧气充分接触以防止反硝化作用。
反硝化作用是氮素循环中不可缺少的环节，可使土壤中因淋溶而流入河流、海洋中的NO3-减少，消除因硝酸积累对生物的毒害作用。
所以我们应尽量发挥其有利的一面，为人类所利用。
反硝化微生物对于硝酸根离子的还原步骤如右图，若要从微生物代谢角度验证菌株是否为反硝化菌最简单有效的方法便是测定nirS和nosZ基因是否存在。
资料21硝化速度的测定方法中文.doc.docx
2010年11月硝化速度的测定方法JICA短期专家竹岛正【意义】所谓硝化反应是指污水中的氨氮在氨氧化细菌以及亚硝酸氧化细菌的作用下转化为硝酸盐氮的氧化反应，可以用下式表示2NH； +3（92-^2NO； +2H2O+2H2O+4H+（氨氧化细菌）2NO'0L N03（亚硝酸氧化细菌）在以脱氮为目的的高度处理设施，为了达到脱氮的目的，首先必须在好氧槽（硝化槽）要进行上述的硝化反应。
硝化反应主要受SRT, ASRT,水温，溶解氧浓度，碱度等影响。
好氧槽内混合液的硝化速度可以用单位时间内（时间）单位体积（L）的混合液所硝化的氮量（mg/L-小时），或者用单位时间内（时间）单位重量（g）的活性污泥所硝化的氣量（mg/g・小时）来表示。
【测定方法】序批式实验装置：序批式实验时，采用容积约为试样量的10倍左右的反应器进行曝气，为了促进搅拌和氧的溶解而设置搅拌机。
所要器具:•反应容器（烧杯：3升）•磁力搅拌器1台•空气泵及曝气头（气泡石）1套•溶解氧测定仪1台•P H计1台•水温计1支•活性污泥混合液试样的过滤用具1套-氨氮，亚硝酸盐氮，硝酸盐氮的分析系统•活性污泥混合液的MLSS, MLVSS的分析系统试验操作：从处理设施的好氧槽内采取活性污泥混合液，按所需量添加到实验装置。
在对污泥混合液进行搅拌的同时进行曝气，当溶解氧的浓度达到2mg/L以上，开始釆取活性污泥混合液。
所釆取的试样应在硝化速度达到不变的部分内按一定间隔采取数点，采取后立即过滤。
对滤液中的氨氮，亚硝酸盐氮，硝酸盐氮进行分析，然后根据亚硝酸盐氮和硝酸盐氮的总量的时间变化求出单位时间内的硝化速度。
硝化速度的计算应在亚硝酸盐氮和硝酸盐氮的总量的时间变化呈线性的范围内进行。
实验应在活性污泥混合液中的氨氮消耗之后，硝化速度出现下降时结束。
活性污泥混合液单位体积的硝化速度（mg/L・小时）=亚硝酸盐氮浓度的增加量（mg/L） +硝酸盐氮浓度的增加量（mg/L）经过时间（小时）另外，需要计算单位重量活性污泥的硝化速度时，在实验开始和结束时分别测定MLSS, MLVSS，根据平均值计算出活性污泥的单位MLSS或单位MLVSS （g）的硝化速度。
土壤硝态氮测定方法转氨酶、硝态氮、铵态氮等测定方法
土壤硝态氮测定方法转氨酶、硝态氮、铵态氮等测定方法六、氮含量（硝酸盐、亚硝酸盐、游离氨基酸、铵态氮等）的测定：（2g）样品提取液的提取: 称取新鲜植物组织2g，加入15ml无离子水研磨成匀浆，置于45℃振荡机中摇动浸提（或超声波）lh后用5ml无离子水冲洗干净，然后离心或过滤(如含色素需用活性炭脱色)，滤液备用。
备注（lg的经验）：可溶性糖、可溶性蛋白质、VC等需要研磨提取的简单指标也可以使用此提取液按比例测定。
1硝态氮的测定：标准氮试剂：精称KNO3 0.9021g，溶于少量重蒸无离子水中，并定容至250ml，含N 量为500µgNO3一N／ml。
5％水杨酸一硫酸溶液：称取水杨酸5g，溶于100ml浓H2SO4(比重1．84)中，搅拌溶解后贮于棕色瓶内，冰箱中至多保存l周，最好现用现配。
2mol／L NaOH溶液：称取NaOH 80g放入500ml硬质烧杯中，加入重蒸无离子水200ml，溶解后定容至l000ml。
操作方法标准曲线制作取：50ml容量瓶6只(编号)，依次加入标准氮试剂5、l0、l5、20、25、30ml，用无离子水定容，则成为50、100、l50、200、250、300 ug／ml的氮系列标准溶液；再取干沽50ml三角瓶7只，分别装入上述系列溶液0．2ml，剩下的1只三角瓶加入无离水0.2ml(作为O 点)；然后分别加入5％水杨酸一硫酸溶液0.8ml，混匀静置20--30min(显色)；最后加入2mol／L NaOH溶液l9ml，混匀。
冷却后利用751分光光度计，于410nm下比色，记录光密度(OD)值；并以OD 值为纵座标，以标准氮(0、50、l00、150、200、250、300 ug)为横座标，绘制一条标准曲线(通过原点的直线)。
0.1ml滤液＋0.4ml 5％水杨酸一硫酸溶液，混匀静置20--30min(显色)；最后加入2mol／L NaOH溶液9.5ml，混匀。
旱地土壤硝化_反硝化过程和呼吸作用测定方法研究进展
第19卷 第3期2007年9月 塔 里 木 大 学 学 报Journal of Tari m UniversityVol.19No.3Sep.2007 文章编号:1009-0568(2007)03-0071-04旱地土壤硝化-反硝化过程和呼吸作用测定方法研究进展卜东升1 张翠丽2 郑德明13(1 塔里木大学植物科技学院,新疆阿拉尔 843300)(2 西北农林科技大学资环学院,陕西杨凌 712100)摘要 硝化作用和反硝化作用是土壤中氮素转化的两个重要途径,它们的研究为当前农学与环境研究的热点之一。
同样土壤呼吸是当前全球碳循环研究的热点之一。
本文综述了国内外学者近年来对土壤硝化-反硝化作用及呼吸作用的研究方法,并对土壤碳氮转化的研究提出了一些建议。
关键词 硝化作用;反硝化作用;呼吸作用;研究方法中图分类号:S152 文献标识码:AResearch Advancem en t on the M ethod for N itr i f i ca ti on D en itr i f i ca ti onand Resp i ra ti on of D ry Land So ilBu Dongsheng1 Zhang Cuili2 Zheng De m ing13(1 College of Plant Science and Technol ogy,Tari m University,A lar,Xinjiang843300) (2 College of Res ources and Envir on ment,Northwest A&F University,Yangling,Shanxi712100)Abstract N itrificati on and Denitrificati on are i m portant app r oaches t o the transfor mati on f or carbon and nitr ogen of s oil,the research of which is one of the hot t op ic in the research of agriculture and envir on ment nowadays,as well as s oil res p irati on is another hot re2 search t op ic of carbon circulati on.The research of methods studying s oil nitrificati on,denitrificati on and s oil res p irati on are reviewed in this paper,and s ome advice is suggested.Key words nitrificati on;denitrificati on;res p irati on;research method 硝化作用和反硝化作用是土壤中氮素转化的两个重要过程。
土壤农化分析常用化指标测定方法
土壤农化分析常用指标测定方法土壤有机质测定一、 原理170~180℃条件下，用一定浓度的K 2Cr 2O 7-H 2SO 4溶液（过量）氧化土壤有机质，剩余的K 2Cr 2O 7用FeSO 4滴定，由消耗的K 2Cr 2O 7量计算出有机碳量，再乘以常数1.724，即为土壤有机质含量。
其反应式如下： K 2Cr 2O 7与有机碳反应K 2Cr 2O 7+8 H 2SO 4+3C →2Cr 2（SO 4）3+3CO 2+8H 2O 过量的K 2Cr 2O 7与FeSO 4的滴定反应K 2Cr 2O 7+4FeSO 4+7 H 2SO 4→K 2SO 4+Cr 2（SO 4）3+3Fe 2（SO 4）3+7H 2O 二、 试剂1、 0.4mol/L （61K 2Cr 2O 7-浓H 2SO 4）标准溶液：称取经130℃烘干的K 2Cr 2O 7（AR ）39.2245g 溶于水中，加热溶解后加入1000mL 浓H 2SO 4定容至2000mL 。
2、 0.2mol/L FeSO 4溶液：称取FeSO 4（AR ）56g 溶于水中，加浓硫酸5mL ，稀释至1L 。
3、 石英砂：粉末状。
三、 实验步骤称取<0.25mm 风干土0.5×××~1.0×××g 于干燥试管中。
加入少量水润湿样品，准确沿避缓慢加入10.0mL K 2Cr 2O 7-H 2SO 4混合液，摇分散土样，加入小漏斗，放入铁丝笼中。
将铁丝笼放入已开启185~190℃油浴锅中（使温度在170~180℃）沸腾准确5分钟；取出稍冷，擦净试管外壁油污（同时做空白实验）；冷却后把溶液全部转移到200~250mL 三角瓶中（最后体积控制在60~70mL ），加入指示剂3滴，用已知浓度的FeSO 4滴定。
四、 结果计算有机质()100724.11.1100.3%30⨯⨯⨯⨯⨯⨯-=-Wc V V式中：V 0——滴定空白所用的FeSO 4溶液的体积（mL ）； V ——滴定样品所用的FeSO 4溶液的体积（mL ）； c ——0.2mol/L FeSO 4溶液准确浓度； 3.0——1/4碳原子的摩尔质量（g/mol ）； 10-3——将mL 换算为L ； 1.1——氧化校正系数；1.724——土壤有机碳换算成土壤有机质的平均换算系数。