蛋白质分离纯化及鉴定综合实验需要仪器及试剂

蛋白质分离纯化及鉴定综合实验

一、实验内容：

1将昆虫（或鱼、鸡）总蛋白通过匀浆的方法溶解于磷酸氢二钠/磷酸二氢钠缓冲液中，离心取上清液作为蛋白质粗提液；

2用考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质浓度；

3将粗提液通过硫酸铵盐析进行分离（15%、30%、45%饱和度的硫酸铵分别沉淀），得到不同的组分，测定不同组分的蛋白质浓度；

4将蛋白粗提液和收集到的各组分进行SDS-PAGE分析，比较粗提液和各组分中蛋白质的成分，分析分离效果。

二、实验中需要主要仪器：

容量瓶：1000mL、250mL、100mL

玻璃棒、研钵、分析天平（食品509）、

量筒：500mL、50mL、5mL

离心机（食品310）、离心管（（记号笔、标签纸、称量纸、一次性手套）分光光度计（含比色皿）（食品510）

1mL、5mLEP管（每组至少25个*8=200个）

漏斗、棕色瓶

滤纸（或多层纱布）、半透膜（透析用）、大培养皿（脱色用）

移液枪：100-1000uL,0.5-20ul

大烧杯、小烧杯

搅拌器、电炉

电泳仪垂直板电泳槽、电泳板、微量进样器（50μL）、染色/脱色摇床（电泳在食品311B做）

三、实验中需要的主要试剂：

磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、蒸馏水、牛血清白蛋白（BSA）（生化有）、考马斯亮蓝G-250蛋白试剂（生化有）、90%的乙醇溶液、85%的磷酸、硫酸铵、Tris碱、甘氨酸、SDS、蒸馏水、甲醇、冰乙酸、考马斯亮蓝R250、ddH2O、AP(过硫酸铵)、TEMED（(四甲基乙二胺））