基因工程考试试题.doc
基因工程期末试题及答案
基因工程期末试题及答案一、选择题(每题2分,共20分)1. 基因工程是指利用现代生物技术手段对DNA进行操作和控制的一种技术。
2. 基因工程的主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。
3. DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。
4. 在基因工程中,限制性内切酶用于切割DNA分子,产生特定片段。
5. 基因工程可以产生转基因生物,通过对生物基因进行改造,使其具有特定的特性。
6. CRISPR/Cas9是一种常用的基因编辑工具,可以精确地修改基因组中的特定片段。
7. 基因工程在医学领域可以用于基因治疗,通过修复或替换异常基因,治疗遗传性疾病。
8. 在农业领域,基因工程可以用于改良作物,提高产量和抗病虫害能力。
9. PCR是一种常用的基因扩增技术,可以通过复制DNA片段来放大特定基因。
10. DNA梯度离心是基因工程中常用的分离DNA片段的方法。
二、问答题(每题10分,共30分)1. 请简要介绍基因工程的基本原理和主要方法。
基因工程的基本原理是通过对DNA进行操作和控制来改变生物的遗传性状。
其主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。
基因克隆是通过将特定DNA片段放入载体中,然后转化到宿主细胞中,使重组DNA在宿主细胞中大量复制。
PCR是一种基因扩增技术,通过在DNA复制过程中加入特定引物,使特定基因片段在体外大量扩增。
DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。
2. 什么是转基因生物?请举例说明。
转基因生物是指经过基因工程改造,将外源基因导入到目标生物体中,使其具有新的遗传性状的生物。
例如,将耐旱基因导入水稻,使其具有抗旱能力;将Bt毒素基因导入棉花,使其具有抗虫能力。
3. 基因工程在医学领域有哪些应用?举例说明。
基因工程在医学领域可以用于基因治疗、疫苗研发等。
例如,利用基因工程技术可以修复或替换患者体内异常基因,治疗遗传性疾病。
另外,基因工程也可以用于疫苗研发,通过基因工程技术将病原体的基因导入宿主细胞,产生病原体的抗原蛋白,从而刺激免疫系统产生抗体,用于预防传染病。
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基因工程试题一、名词解释(4 ‘*10)1.基因工程技术:按照人们的愿望,进行严密的设计,通过体外DNA 重组和转移等技术,有目的地改造生物种性,使现有物种在较短的时间内趋于完善,创造出新的生物类型。
2.感受态细胞:受体细胞经一些特殊方法(如CaC12、RbCl (KC1) 等化学试剂)处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性改变,成为能允许外源DNA 分子进入的细胞状态。
3.cDNA文库:从组织细胞中分离得到纯化的mRNA,然后以mRNA为模板,利用逆转录酶合成其互补DNA,再复制成双链cDNA片段,与适当载体连接后导入受体菌内,扩增,构建cDNA文库。
4.鸟枪法:指将某种生物体的全基因组或单一染色体切成大小适宜的 DNA 片段,分别连接到载体DNA上,转化受体细胞,形成一套重组兑隆,从中筛选出含有目的基因的期望重组子。
5.SD序列(Shine-Dalgarno):位于翻译起始密码了•上游的6-8个核苷酸序列(5’ UAAGGAGG 3’),它通过识别大肠杆菌核糖体小亚基中的16S rRNA 3’端区域3’ AUUCCUCC 5’并与之专一性结合,将mRNA定位于核糖体上,从而启动翻译。
6.包涵体:胞内高效表达时,工程菌因大景合成异源蛋白质所形成的水不溶性积聚物。
7.复合转座子:是由两个重复序列夹着一个或多个结构基因如某些抗药性基因和其它基因组成。
存在于R因子及其它质粒中。
复合转座子两端的组件由IS和类IS组成。
8.菌落原位杂交:是将菌落或噬菌斑转到固相膜上,原位裂解细胞后使核酸固定在膜上,然后与探针杂交。
用标记的核酸探针,经放射自显影或非放射检测体系,在组织细胞间期染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。
9.RACE:是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术,是以mRNA 为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到3, 或5,端之间未知序列的方法。
10.连续式发酵:即在连续发酵反应器中,细胞的总数和培养液总体积同时维持恒定,前提是由培养液流出所造成的细胞损失正好为细菌分裂所产生的新细胞弥补。
基因工程期末考试试题及答案
基因工程期末考试试题及答案一、选择题1. 基因工程是指:A. 基因的自然突变B. 基因的人工重组C. 基因的自然选择D. 基因的自然淘汰答案:B2. 下列哪项不是基因工程常用的工具酶?A. 限制性内切酶B. DNA连接酶C. 反转录酶D. 聚合酶链反应酶答案:C3. 基因枪技术主要用于:A. 植物基因转化B. 动物基因转化C. 微生物基因转化D. 病毒基因转化答案:A二、填空题1. 基因工程中,常用的载体有________、________和________。
答案:质粒、病毒、人工染色体2. 基因工程中,________是基因表达的调控元件。
答案:启动子三、简答题1. 请简述基因工程的基本步骤。
答案:基因工程的基本步骤包括:目标基因的获取、目标基因与载体的连接、转化宿主细胞、筛选含有重组DNA的宿主细胞、目的基因的表达和检测。
2. 基因工程在医学领域的应用有哪些?答案:基因工程在医学领域的应用包括:生产重组蛋白质药物、基因治疗、疾病诊断、疫苗开发等。
四、论述题1. 论述基因工程对农业生产的影响。
答案:基因工程对农业生产的影响主要体现在以下几个方面:提高作物的抗病虫能力、增强作物的抗逆性、改善作物的营养价值、提高作物的产量和质量、促进农业可持续发展。
2. 基因工程在环境保护中的应用。
答案:基因工程在环境保护中的应用主要包括:开发生物修复技术,用于污染土壤和水体的净化;利用基因工程改造微生物,用于处理工业废水和废气;通过基因工程改良植物,用于重金属污染土壤的修复等。
五、案例分析题1. 某公司利用基因工程技术成功开发了一种抗虫棉,该抗虫棉能够减少农药的使用,降低农业生产成本。
请分析该技术可能带来的社会、经济和环境效益。
答案:该技术可能带来的社会效益包括提高农民的生活质量,减少因农药使用带来的健康风险。
经济效益包括降低农药成本,提高作物产量,增加农民收入。
环境效益包括减少农药对环境的污染,保护生态平衡,促进农业的可持续发展。
基因工程试题(完整)
答案:基因操作。
将在细胞外产生的核酸(物质)分子插入到病毒,质粒或其它载体系统中,再整合到特定的宿主中,从而形成一种新的可连续繁殖的有机体。
名词解释问题: Interrupted genes参考答案:间断基因。
序列中间插入有与氨基酸编码无关的DNA 间隔区,使一个基因分隔成不连续的若干区段。
我们称这种编码序列不连续的基因为间断基因。
名词解释问题: Promotor参考答案:启动子。
DNA 分子可以与RNA 聚合酶特异结合的部位,也就是使转录开始的部位。
名词解释问题: Subcloning参考答案:亚克隆。
当初始克隆中的外源DNA 片段较长,含有许多目的基因以外的DNA 片段时,在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行,将目的基因所对应的一小段DNA 找出来,这个过程叫“亚克隆”。
填空题问题:基因操作(Gene manipulation)的核心部分是基因克隆(gene cloning),gene cloning 的基本要点有(),()和()。
参考答案:克隆基因的类型;受体的选择;载体的选择填空题问题:()是遗传物质的基本单位,也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。
它可以是连续的,也可以是();可以是(),也可以是RNA;可以存在于染色体上,也可以()参考答案:基因;连续;DNA;存在于染色体之外(如质粒,噬菌体等)填空题问题:基因操作并不是一个法律概念,除了包括基因克隆外,还包括基因的()、()、()和()等与基因研究相关的内容。
参考答案:表达;调控;检测;改造填空题问题:启动子(Promotor)是指()。
通常一个Gene 是否表达,()是关键的一步,是起决定作用的。
在转录过程中,Promoter还是()的结合位点。
参考答案:基因转录过程中控制起始的部位;转录起始;RNA 聚合酶填空题问题:原核生物的RNA polymerase 主要由两部分组成:()和(),其中σ-因子并不参与RNA 的合成,它的作用主要是()。
基因工程考试试题
基因工程一名词解释1、限制与修饰系统:限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染,可讲解外来DNA,从而阻止其复制和整合到细胞中。
一般来说,与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶,或者说是甲基化酶,能保护自身的DNA不被讲解。
限制酶和甲基转移酶组成限制与修饰系统。
简答1.何谓 Star activity?简述 Star activity 的影响因素及克服方法?答:在极端非标准条件下,限制酶能切割与识别序列相似的序列,这个改变的特征称为星星活性。
引起星星活性的的因素:①高甘油浓度〔>5%〕;②酶过量〔>100U/µl〕;③低离子强度〔<25mmol/L〕;④高 pH (>8.0);⑤有机溶剂如 DMSO 〔二甲基亚砜〕、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺等;⑥用其它二价阳离子 Mn2+、Cu2+、Co2+ 或 Zn2+ 代替 Mg2+ 。
星星活性的抑制措施:①减少酶的用量,防止过量酶切,减少甘油浓度;②保证反响体系中无有机溶剂或乙醇;③提高离子强度到 100~150mM 〔在不抑制酶活性的前提下〕;④降低反响 pH 至 7.0 ;⑤使用 Mg2+ 作为二价阳离子。
2. 试答复影响限制性内切核酸酶切割效率的因素?〔影响酶活性的因素?〕答:外因:反响条件、底物纯度〔是否有杂质、是否有盐离子和苯酚的污染〕、何时加酶、操作是否恰当,反响体系的选择、反响时间的长短内因:星星活性、底物甲基化、底物的构象3、DNA末端长度对酶切割的影响答:限制酶切割 DNA 时,对识别序列两端的非识别序列有长度要求,也就是说在识别序列两端必须要有一定数量的核苷酸,否那么限制酶将难以发挥切割活性。
在设计PCR引物时,如果要在末端引入一个酶切位点,为保证能够顺利切割扩增的PCR产物,应在设计的引物末端加上能够满足要求的碱基数目。
一般需加 3~4 个碱基对。
4、何为载体?一个理想的载体应具备那些特点?答:将外源 DNA 或目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。
基因工程试题及答案解析
基因工程试题及答案解析一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶是:A. 蛋白酶B. DNA聚合酶C. 核糖核酸酶D. 限制性核酸内切酶答案:D2. 基因工程中,用于将目的基因导入植物细胞的方法是:A. 电穿孔法B. 显微注射法C. 农杆菌转化法D. 脂质体介导法答案:C3. 下列哪项不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的获取B. 基因表达载体的构建C. 目的基因的扩增D. 目的基因的检测与鉴定答案:C二、填空题1. 基因工程中,常用的运载体有____、____和____。
答案:质粒、噬菌体、动植物病毒2. 基因工程中,常用的筛选标记基因有____、____和____。
答案:抗性基因、荧光蛋白基因、酶基因三、简答题1. 简述基因工程的应用领域。
答案:基因工程的应用领域包括农业、医学、工业、环境保护等。
在农业中,基因工程可以用于培育抗病、抗虫、抗旱等性状的作物;在医学领域,基因工程可以用于生产重组蛋白药物、基因治疗等;在工业上,基因工程可以用于生产酶、疫苗等;在环境保护方面,基因工程可以用于生物修复、污染物降解等。
2. 基因工程中,如何确保目的基因在宿主细胞中正确表达?答案:确保目的基因在宿主细胞中正确表达需要考虑以下几个方面:首先,目的基因需要有合适的启动子和终止子,以确保其在宿主细胞中得到正确转录和终止;其次,需要考虑目的基因的密码子偏好性,以确保其在宿主细胞中能被高效翻译;再次,需要考虑目的基因的稳定性,避免其在宿主细胞中被降解;最后,还需要考虑目的基因产物的后翻译修饰和定位。
四、论述题1. 论述基因工程在医学领域的应用及其可能带来的伦理问题。
答案:基因工程在医学领域的应用主要包括生产重组蛋白药物、基因治疗、疾病诊断和基因疫苗等。
重组蛋白药物可以用于治疗糖尿病、侏儒症等疾病;基因治疗可以用于治疗遗传性疾病;疾病诊断可以通过基因检测来实现;基因疫苗可以用于预防某些遗传性疾病。
然而,基因工程的应用也带来了伦理问题,如基因隐私权、基因歧视、基因治疗的安全性和有效性等。
基因工程试题
基因工程试题一、选择题(每题1分,共15分)1、下列有关基因的叙述,错误的是【A 】A 蛋白质是基因表达的唯一产物B 基因是DNA 链上具有编码功能的片段C 基因也可以是RNAD 基因突变不一定导致其表达产物改变结构2、基因工程的单元操作顺序是【B 】A 增,转,检,切,接 C 接,转,增,检,切 3、生物工程的上游技术是【A 】A 基因工程及分离工程 C 基因工程及酶工程 4、下列各组专业术语中,含义最为接近的是 【C 】6、T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA 片段连接在一起, 其底物的关键基团是【D 】A 2' -OH 和 5' -PB 2' -OH 和 3' -PC 3' -OH 和 2' -PD 5' -OH 和 3' -P7、下列有关连接反应的叙述,错误的是【A 】A 连接反应的最佳温度为37 ℃B 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10%C 连接反应缓冲体系的ATP 浓度不能高于1mMD 连接酶通常应过量2-5倍8、原生质体转化方法不大适用于【A 】A 大肠杆菌B 枯草杆菌C 酵母菌D 链霉菌9、下列各常用载体的装载量排列顺序,正确的是【A 】A Cosmid >X-DNA > PlasmidB 九-DNA > Cosmid > PlasmidC Plasmid >X -DNA > CosmidD Cosmid > Plasmid >X-DNA10、若某质粒带有lacZ 标记基因,那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培 养基中加入【D 】A 半乳糖B 异丙基巯基-B-半乳糖苷(IPTG )C 蔗糖D 5-溴-4-氯-3-吲哚基邛-D-半乳糖苷(X-gal ) 11、下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中,错误的 是【C 】 A 大肠杆菌一繁殖迅速 B 枯草杆菌一分泌机制健全 C 链霉菌一遗传稳定 D 酵母菌一表达产物具有真核性12、分子杂交的化学原理是形成【D 】A 共价键B 离子键C 疏水键D 氢键 B 切,接,转,增,检 D 切,接,增,转,检B 基因工程及发酵工程 D 基因工程及细胞工程A 终止子与终止密码子 C DNA 退火与DNA 复性5、根据酶切活性对盐浓度的要求,B 基因表达与基因转译D 重组子与转化子 限制性核酸内切酶可分成【B 】 C 4大类 D 5大类13、某一重组DNA (6.2 kb )的载体部分有两个SmaI酶切位点。
高中基因工程试题及答案
高中基因工程试题及答案一、选择题1. 基因工程是指:A. 基因的自然选择B. 基因的人工选择C. 基因的人工重组D. 基因的自然重组答案:C2. 基因工程中常用的载体是:A. 质粒B. 病毒C. 染色体D. 线粒体答案:A3. 基因枪法属于哪种基因转移技术?A. 化学法B. 物理法C. 生物法D. 机械法答案:B4. 以下哪个不是基因工程的步骤?A. 目的基因的获取B. 目的基因的克隆C. 目的基因的表达D. 目的基因的自然选择答案:D5. 基因工程在医学领域的应用不包括:A. 基因治疗B. 基因检测C. 基因编辑D. 基因克隆答案:D二、填空题6. 基因工程的核心技术是________。
答案:重组DNA技术7. 基因工程中常用的受体细胞有________和________。
答案:大肠杆菌、酵母菌8. 基因工程在农业上的应用包括________和________。
答案:转基因作物、基因改良9. 基因工程在环境保护中的应用包括________和________。
答案:生物修复、污染物降解10. 基因工程在工业生产中的应用包括________和________。
答案:生物催化剂、生物制药三、简答题11. 简述基因工程的基本原理。
答案:基因工程的基本原理是利用分子生物学技术,将目的基因从一种生物体中提取出来,然后通过重组DNA技术将其插入到另一种生物体的基因组中,使其在新的宿主细胞中表达,从而获得具有特定性状的生物体或生产特定的生物产品。
12. 基因工程在医学领域有哪些应用?答案:基因工程在医学领域的应用包括基因治疗,通过将正常基因导入患者体内以治疗遗传性疾病;基因检测,用于疾病诊断和风险评估;基因编辑,通过修改基因序列来治疗疾病;以及生产生物药物,如胰岛素、干扰素等。
四、论述题13. 论述基因工程的伦理问题及其解决途径。
答案:基因工程的伦理问题主要包括对人类基因组的修改可能带来的未知风险、基因歧视、生物多样性的减少等。
基因工程试题库
基因工程试题库《基因工程》试题库(一)一、选择题(单选或多选)(每题2分,共计20分)1.下面哪一种特性不是密码所具有的? ( )(a)偏爱性(b)简并性(c)重叠性(d)连续性2. 黏性末端连接法,不仅操作方便,而且( )(a)产生新切点(b)易于回收外源片段(c)载体不易环化(d)影响外源基因的表达3. 用菌落杂交法筛选重组体时,( )(a)需要外源基因的表达(b)不需要外源基因的表达(c)要根据克隆基因同探针的同源性(d)上述说法都正确4. DNA在染色体的常染色质区压缩多少倍?( )(a)6倍(b)10倍(c)40倍(d)240倍(c)1000倍10000倍5. 对于一个特定的起点,引发体的组成包括:( )(a)在起始位点与DnaG引发酶相互作用的一个寡聚酶(b)一个防止DNA降解的单链结合蛋白(c)DnaB解旋酶和附加的DnaC,DnaT,PriA等蛋白(d)DnaB,单链结合蛋白,DnaC,DnaT,PriA蛋白和DnaG引发酶(e)DnaB解旋酶,DnaG引发酶和DNA聚合酶Ⅲ6. 下面哪些是在反转录病毒中发现的基因?( )(a)gag(b)pol(c)env(d)OnC7. 下列哪些基因以典型的串联形式存在于真核生物基因组?( )(a)球蛋白基因(b)组蛋白基因(c)rRNA基因(d)肌动蛋白基因8. 以下关于抗体类型转变的叙述哪些是正确的?( )(a)每种重链具有不同的功能(b)类型转变的次序按染色体上重链排列顺序进行(c)一旦一种类型转换发生,其他的转换将不再进行(d)也可通过可变剪接改变重链9. 下列哪些转录因子含有TBP?( )(a)TFⅡB (b)TFⅢA (c)SLl (d)TFⅡD (e)TFⅢB (f)UBFl 10.剪接小体的组装( )(a)按有序的途径一步步完成(b)涉及snRNP与水溶性蛋白(即不是任何snRNP组分的蛋白)(c)不需要ATP(d)伴随着多次snRNP的重组合(e)以上都正确二、判断题(每题1分,共计10分)1.一个带有反向重复序列的双链DNA经变性后,复性时其单链可形成发夹环。
大学基因工程试题及答案
大学基因工程试题及答案一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶属于哪一类酶?A. 核酸酶B. 蛋白酶C. 脂肪酶D. 淀粉酶答案:A2. 以下哪个不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的克隆B. 目的基因的表达C. 目的基因的检测D. 目的基因的复制答案:D3. 基因工程中常用的运载体有哪些?A. 质粒B. 噬菌体C. 动植物病毒D. 所有以上答案:D二、填空题1. 基因工程中常用的_________技术可以用于目的基因的检测。
答案:PCR2. 基因工程中,_________是将目的基因导入受体细胞的关键步骤。
答案:转化3. 在基因工程中,_________是将目的基因插入到运载体中形成重组DNA分子的过程。
答案:克隆三、简答题1. 简述基因工程在医学领域的应用。
答案:基因工程在医学领域的应用包括生产重组药物、基因治疗、疾病诊断和疫苗开发等。
2. 描述基因工程中目的基因的克隆过程。
答案:目的基因的克隆过程包括提取目的基因、构建基因文库、筛选含有目的基因的克隆、目的基因的扩增和纯化等步骤。
四、论述题1. 论述基因工程技术在农业中的应用及其可能带来的问题。
答案:基因工程技术在农业中的应用包括改良作物品质、提高作物产量、增强作物抗病虫害能力等。
可能带来的问题包括生态平衡的破坏、基因污染、食品安全问题等。
2. 分析基因工程中目的基因表达调控的重要性及其策略。
答案:目的基因表达调控在基因工程中至关重要,它决定了基因工程产品的功能和产量。
调控策略包括启动子的选择、增强子的应用、转录后调控等。
基因工程试题库讲解
《基因工程》试题库(一)一、选择题(单选或多选)(每题2分,共计20分)1.下面哪一种特性不是密码所具有的? ( )(a)偏爱性(b)简并性(c)重叠性(d)连续性2. 黏性末端连接法,不仅操作方便,而且( )(a)产生新切点(b)易于回收外源片段(c)载体不易环化(d)影响外源基因的表达3. 用菌落杂交法筛选重组体时,( )(a)需要外源基因的表达(b)不需要外源基因的表达(c)要根据克隆基因同探针的同源性(d)上述说法都正确4. DNA在染色体的常染色质区压缩多少倍?( )(a)6倍(b)10倍(c)40倍(d)240倍(c)1000倍10000倍5. 对于一个特定的起点,引发体的组成包括:( )(a)在起始位点与DnaG引发酶相互作用的一个寡聚酶(b)一个防止DNA降解的单链结合蛋白(c)DnaB解旋酶和附加的DnaC,DnaT,PriA等蛋白(d)DnaB,单链结合蛋白,DnaC,DnaT,PriA蛋白和DnaG引发酶(e)DnaB解旋酶,DnaG引发酶和DNA聚合酶Ⅲ6. 下面哪些是在反转录病毒中发现的基因?( )(a)gag(b)pol(c)env(d)OnC7. 下列哪些基因以典型的串联形式存在于真核生物基因组?( )(a)球蛋白基因(b)组蛋白基因(c)rRNA基因(d)肌动蛋白基因8. 以下关于抗体类型转变的叙述哪些是正确的?( )(a)每种重链具有不同的功能(b)类型转变的次序按染色体上重链排列顺序进行(c)一旦一种类型转换发生,其他的转换将不再进行(d)也可通过可变剪接改变重链9. 下列哪些转录因子含有TBP?( )(a)TFⅡB (b)TFⅢA (c)SLl (d)TFⅡD (e)TFⅢB (f)UBFl 10.剪接小体的组装( )(a)按有序的途径一步步完成(b)涉及snRNP与水溶性蛋白(即不是任何snRNP组分的蛋白)(c)不需要ATP(d)伴随着多次snRNP的重组合(e)以上都正确二、判断题(每题1分,共计10分)1.一个带有反向重复序列的双链DNA经变性后,复性时其单链可形成发夹环。
基因工程测试题(附解析)
基因工程测试题(附解析)一、基础题点练1.(2019·徐州模拟)已知限制性内切酶Xma Ⅰ和Sma Ⅰ的识别序列分别为C CCGGG 和CCC GGG。
有关这两种酶及应用的叙述,错误的是()A.这两种酶作用的底物都是双链DNAB.DNA 中出现这两种酶识别序列的几率不同C.Xma Ⅰ切割DNA 形成的黏性末端是—GGCCD.使用这两种酶时需注意控制反应温度、时间等解析:选B 限制酶作用的底物是双链DNA 分子;这两种限制酶作用的核苷酸序列相同,所以这两种识别序列在DNA 中出现的的几率相同;根据碱基互补配对原则,CCCGGG 的互补链是GGGCCC,并根据Xma Ⅰ的切割位点可知,切割后的黏性末端是—CCGG;温度能影响酶的活性,所以使用酶时需要注意控制反应温度和时间等。
2.如图表示的是三种黏性末端,下列说法正确的是( ) ↓↓A.图中所示黏性末端是由同种限制酶切割形成B.若图甲中的G 碱基处发生突变,限制酶可能无法识别该切割位点C.图中所示黏性末端是限制酶断开氢键形成D.目前常用的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒等几类原核生物GAATTC 解析:选B 产生甲黏性末端的限制酶的识别序列为CTTAAG =====,产生乙黏性末端的限制酶CAATTG CTTAAG 的识别序列为GTTAAC =====,产生丙黏性末端的限制酶的识别序列为GAATTC =====,可见甲、乙、丙黏性末端是由3种限制酶作用产生的;限制酶具有专一性,能够识别双链DNA 分子的某种特定核苷酸序列,如果甲中的G 发生突变,限制酶可能无法识别该切割位点;图中所示黏性末端是限制酶断开磷酸二酯键形成的;质粒是环状DNA 分子,噬菌体和动植物病毒都没有细胞结构,它们都不属于原核生物。
3.下列关于蛋白质工程的叙述,错误的是()A.蛋白质工程的基础是基因工程B.蛋白质工程遵循的原理包括中心法则C.蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作,定向改变分子的结构D.蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子解析:选C 蛋白质工程是通过基因修饰或基因合成对现有蛋白质进行改造,或合成新的蛋白质,故蛋白质工程的基础是基因工程;蛋白质工程遵循的原理包括中心法则;蛋白质工程是通过改造基因来实现对蛋白质分子的改造的;蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子。
基因工程试题库
二、填空或选择填空题1.给以下质粒载体pUC18/19划线处填上其中文含义。
2.在进行琼脂糖凝胶电泳时,DNA分子从电场的(正极;负极)向极泳动,超螺环型的质粒分子比其开环构型泳动更(快;慢)。
3.观察琼脂糖凝胶中的DNA分子带,常常以染色后在光下观察其荧光。
4.碱性磷酸酶主要有和两种,作用于DNA分子将其5’磷酸基团水解除去。
5.反转录酶的酶学活性主要有;和三种。
6.琼脂糖凝胶常用的浓度范围在%—%之间,相应可以分离Kb— Kb的DNA分子。
7.Southern吸印(Southern blot)是指针对分子的杂交;Northern吸印是针对⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽分子的杂交。
8.通常质粒载体可以克隆Kb的DNA片断;λ插入型载体可以克隆Kb的DNA片段;λ替换型载体可以克隆Kb的DNA片段;Cosmid可以克隆Kb的DNA片断。
9.琼脂糖凝胶电泳分离DNA时,要观察到DNA条带,应加入染色,它可以在⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽光照射下发射荧光。
10.在采用超速密度梯度分离纯化质粒DNA时,在溶液中加入,使得质粒的浮力密度(大、小、等)于基因组DNA的浮力密度。
11.DNA自动测序将Sanger的双脱氧末端终止法与技术结合起来,使DNA测序摆脱了对大量单链模版的依赖。
12.DNA化学自动合成反应进行的方向与DNA酶催化合成的反应方向(一致;不同),是从(5’3’;3’5’)。
13.与T-DNA转移起重要作用的是其两端的各bp的重复序列及位于Ti质粒上编码与T-DNA转移有关蛋白的基因,而与T-DNA上携带的基因关系不大。
14.从细菌中经小量制备的质粒分子经电泳分离后,同一种分子由于构型不同而常产生两条带纹,其中一条为构型,另一条为构型,电泳迁移率前者(大、小、等)于后者。
15.λ载体在完成重组连接后,通过包装蛋白的离体包装形成噬菌体颗粒。
在包装蛋白进行有效的包装时,要求DNA大小在Kb之间,而且两端有两个位点。
基因工程测试题及答案
基因工程测试题及答案一、选择题(每题2分,共10分)1. 基因工程中常用的限制酶主要来源于:A. 病毒B. 细菌C. 真菌D. 植物答案:B2. 下列哪项不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的获取B. 目的基因的克隆C. 目的基因的表达D. 目的基因的降解答案:D3. 基因工程中常用的载体不包括:A. 质粒B. 噬菌体C. 人工染色体D. 病毒答案:D4. 基因工程中,用于连接目的基因和载体的酶是:A. 限制酶B. DNA连接酶C. DNA聚合酶D. 反转录酶答案:B5. 基因工程中,用于将重组DNA导入受体细胞的方法不包括:A. 转化B. 转染C. 转导D. 转录答案:D二、填空题(每题2分,共10分)1. 基因工程中,将外源基因导入植物细胞的方法主要有______和______。
答案:农杆菌介导法;基因枪法2. 在基因工程中,______是将目的基因插入到载体DNA分子中的关键步骤。
答案:克隆3. 基因工程中,______是将重组DNA导入受体细胞的常用方法。
答案:转化4. 基因工程中,______是将目的基因表达成蛋白质的步骤。
答案:表达5. 在基因工程中,______是检测目的基因是否成功表达的重要手段。
答案:分子杂交三、简答题(每题5分,共20分)1. 简述基因工程在医学领域的应用。
答案:基因工程在医学领域的应用包括生产重组蛋白药物、基因治疗、疾病诊断、疫苗开发等。
2. 描述基因工程中目的基因的获取方法。
答案:目的基因的获取方法包括从基因文库中筛选、利用PCR技术扩增、人工合成等。
3. 解释基因工程中载体的作用。
答案:载体在基因工程中的作用是携带目的基因进入受体细胞,并在其中复制和表达。
4. 阐述基因工程中转化过程的重要性。
答案:转化过程是将重组DNA导入受体细胞的关键步骤,它决定了目的基因能否在受体细胞中稳定存在和表达。
四、论述题(每题10分,共20分)1. 论述基因工程在农业领域的应用及其可能带来的问题。
基因工程考试试题
基因工程考试试题基因工程作为现代生物技术的核心领域,对于推动生命科学的发展和解决人类面临的诸多问题具有重要意义。
以下是一套涵盖基因工程多个方面的考试试题,旨在检验您对这一重要学科的理解和掌握程度。
一、选择题(每题 3 分,共 30 分)1、基因工程中常用的限制性内切酶作用于()A 氢键B 肽键C 磷酸二酯键D 高能磷酸键2、下列哪项不是基因工程中常用的载体()A 质粒B 噬菌体C 动植物病毒D 细菌核区的 DNA3、有关 PCR 技术的说法,不正确的是()A PCR 是一项在生物体外复制特定 DNA 片段的核酸合成技术B 延伸过程中需要 DNA 聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸C 利用 PCR 技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列D PCR 技术中以解开的双链作为模板,在热稳定 DNA 聚合酶的作用下合成新链4、基因工程的操作步骤:①使目的基因与运载体相结合;②将目的基因导入受体细胞;③检测目的基因的表达是否符合特定性状要求;④提取目的基因。
正确的操作顺序是()A ③②④①B ②④①③C ④①②③D ③④①②5、下列关于基因表达载体构建的相关叙述,不正确的是()A 需要限制酶和 DNA 连接酶B 启动子位于目的基因的首端,是启动翻译的一段 DNAC 标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因D 基因表达载体的构建是基因工程的核心6、为了培育抗虫棉,科研人员将苏云金芽孢杆菌的 Bt 毒蛋白基因导入棉花细胞中,该过程采用的生物技术是()A 杂交育种B 诱变育种C 基因工程D 单倍体育种7、下列不属于目的基因获取方法的是()A 从基因文库中获取B 利用 PCR 技术扩增C 人工合成目的基因D 直接从生物体细胞内获取8、基因工程中,将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是()A 农杆菌转化法B 花粉管通道法C 基因枪法D 显微注射法9、蛋白质工程的基本流程正确的是()①设计预期的蛋白质结构②推测应有的氨基酸序列③找到相对应的脱氧核苷酸序列A ①②③B ③②①C ②①③D ③①②10、下列关于基因工程应用的叙述,正确的是()A 基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因B 利用基因工程生产乙肝疫苗时,目的基因来自于乙肝病毒C 运用基因工程技术让牛合成并分泌人类抗体,该技术将导致定向变异D 基因诊断的基本原理是 DNA 分子杂交二、填空题(每题 4 分,共 20 分)1、基因工程的工具酶包括____________和____________。
基因工程考试试题题库
基因工程考试试题题库一、选择题1. 基因工程中常用的载体是:A. 质粒B. 噬菌体C. 人工染色体D. 所有以上选项2. 基因枪法是一种:A. 基因克隆技术B. 基因测序技术C. 基因转移技术D. 基因表达技术3. 以下哪个不是基因工程中常用的限制性内切酶?A. EcoRIB. BamHIC. Taq酶D. HindIII4. 基因工程中,目标基因的克隆通常需要以下哪个步骤?A. 基因测序B. 基因表达C. 基因扩增D. 基因编辑5. 转基因生物的安全性问题不包括:A. 环境安全B. 食品安全C. 经济安全D. 社会安全二、填空题1. 基因工程的核心技术是_________,它允许科学家将一个生物体的基因转移到另一个生物体中。
2. 基因工程中,常用的基因表达载体包括_________、_________等。
3. 基因工程在医学领域的应用包括_________、_________等。
4. 基因工程在农业领域的应用包括_________、_________等。
5. 基因工程中,_________是将目的基因导入受体细胞的关键步骤。
三、简答题1. 简述基因工程的基本操作步骤。
2. 解释什么是转基因生物,并举例说明其在日常生活中的应用。
3. 讨论基因工程在环境保护方面的潜在应用。
四、论述题1. 论述基因工程在提高作物产量和改良作物品质方面的应用及其可能带来的问题。
2. 分析基因工程对生物多样性的影响,并提出相应的管理策略。
五、案例分析题阅读以下关于基因编辑技术CRISPR-Cas9的案例,并回答问题:- 描述CRISPR-Cas9技术的工作原理。
- 讨论CRISPR-Cas9技术在医学研究和治疗中的应用前景。
- 分析CRISPR-Cas9技术可能引发的伦理和社会问题。
请注意,以上内容仅为示例,实际考试试题应根据具体的教学大纲和课程内容进行设计。
高中生物选修三《基因工程》单元测试题(含答案)
专题1 《基因工程》单元测试题一、单选题(每小题只有一个正确答案)1.在基因工程中用来修饰改造生物基因的工具是( )A.限制酶和DNA连接酶B.限制酶和水解酶C.限制酶和载体D. DNA连接酶和载体2.下列说法正确的是( )A.质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器B.用适当的化学物质处理受体细菌表面,将重组DNA导入受体细菌C.质粒是基因工程中惟一用作运载目的基因的载体D.利用载体在宿主细胞内对目的基因进行大量复制的过程不能称为“克隆”3.某研究小组为了研制预防禽流感病毒的疫苗,开展了前期研究工作。
其简要的操作流程如下图。
下列有关叙述错误的是( )A.步骤①所代表的过程是反转录B.步骤②需使用限制性核酸内切酶和DNA连接酶C.步骤③可用CaCl2处理大肠杆菌,使其从感受态恢复到常态D.检验Q蛋白的免疫反应特性,可用Q蛋白与患禽流感康复的鸡的血清进行抗原—抗体特异性反应试验4.与“限制性内切酶”作用部位完全相同的酶是( )A.反转录酶B. RNA聚合酶C. DNA连接酶D.解旋酶5.转基因抗虫棉的研制过程中,为了检测抗虫基因是否成功导入,最简捷有效的方法是( )A.用DNA探针检测受体细胞中的目的基因是否存在B.用DNA探针检测受体细胞中的目的基因是否转录出相应的mRNAC.直接将培育出的棉株叶片饲喂原本的棉花害虫D.检测标记基因是否正常地表达出来6.下列哪项不是表达载体所必需的组成( )A.目的基因B.启动子C.终止子D.抗青霉素基因7.下列说法正确的是( )A.限制性核酸内切酶的识别序列是GAATTC,只能在G和A之间切断DNAB. DNA连接酶能够将任意2个DNA片段连接在一起C.质粒是能够自主复制的小型双链环状DNA分子D.基因工程的载体只有质粒一种8.应用生物工程技术培育人们需要的生物新品种或新产品,提高了经济效益。
下图表示培育生物新品种的过程,请据图判断下列叙述中不正确的是( )A.图中①~⑤过程中都发生了碱基互补配对现象B.图中①过程需要的工具酶是限制酶和DNA连接酶C.将PrG导入细胞Ⅱ,则Ⅱ最可能是浆B细胞D.图中⑤过程需要的培养基中一定含有植物激素和无机养料9.在已知序列信息的情况下,获取目的基因的最方便方法是( )A.化学合成法B.基因组文库法C. cDNA文库法D.多聚酶链式反应10.中国新闻网报道,阿根廷科学家近日培育出了世界上第一头携带有两个人类基因的牛,因此有望生产出和人类母乳极其类似的奶制品。
基因工程考试完整版试题
填空4.基因工程的两个基本特点是:(1) ,(2) 。
4.(1)分子水平上的操作;(2)细胞水平上的表达5.基因克隆中三个基本要点是:;和。
5.克隆基因的类型;受体的选择;载体的选择2. 由于不同构型的DNA 插入EB 的量不同,它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同,SC DNA 的泳动速度,OC DNA 泳动速度,L DNA 居中,通过凝胶电泳和EB 染色的方法可将不同构型的DNA 分别开来。
2.最快;最慢4. 就克隆一个基因(DNA 片段) 来说,最简单的质粒载体也必需包括三个部分:、、。
另外,一个理想的质粒载体必须具有低分子量。
4.复制区:含有复制起点;选择标记:主要是抗性基因;克隆位点:便于外源DNA的插入6. 质粒拷贝数是指细胞中质粒的份数同染色体的比值,即质粒/染色体。
13. YAC 的最大容载能力是1000kb,BAC 载体的最大容载能力是300kb。
3.λ噬菌体的基因组DNA 为kb,有多个基因。
在体内,它有两种复制方式,扩增时(早期复制)按复制,成熟包装(晚期复制)则是按复制。
它有一个复制起点,进行向复制。
λ噬菌体的DNA 既可以以线性存在又可以环状形式存在,并且能够自然成环。
其原因主要是在λ噬菌体线性DNA 分子的两端各有一个个碱基组成的天然黏性末端。
这种黏性末端可以自然成环。
成环后的黏性末端部位就叫做位点。
48.5;60;凯恩斯模型;滚环;双;12;COS4.根据噬菌体的包装能力,将野生型λ噬菌体的基因组DNA 改造成插入型载体,该载体的最小分子大小约为kb,插入的外源片段最大不超过kb。
36;145.野生型的M13 不适合用作基因工程载体,主要原因是和。
没有合适的限制性内切核酸酶识别位点;选择标记6.黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体,它的复制子来自、COS 位点序列来自,最大的克隆片段达到kb。
质粒;丸噬菌体;457.有两类改造型的λ噬菌体载体,即插入型和取代型。
基因工程 试题库(一)
基因工程试题库(一)一、单项选择题(共计150题)1.贝尔奖的科学家是( C )因研究重组DNA技术而获得诺(a)A.Kornberg (b)W.Gilbert (c)P.Berg (d)B.McClintock2.第一个作为重组DNA载体的质粒是( C )(a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl83.关于宿主控制的限制修饰现象的本质,下列描述中只有( )不太恰当。
(a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成(b)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰(d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统4.Ⅱ型限制性内切核酸酶:( )(a)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列(b)仅有内切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供(c)限制性识别非甲基化的核苷酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性(e)仅有外切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供5.下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?( )(a)限制酶是外切酶而不是内切酶(b)限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割(c)同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的(d)一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA,产生黏末端(e)一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA,产生平末端6.第一个被分离的Ⅱ类酶是:( )(a)EcoK (b)HindⅢ(c)HindⅡ(d)EcoB7.在下列进行DNA部分酶切的条件中,控制哪一项最好:(a)反应时间(b)酶量(c)反应体积(d)酶反应的温度8.在下列试剂中,那一种可以螯合Ca2+离子?( A )(a)EDTA (b)柠檬酸钠(c)SDS (d)EGTA9.在下列工具酶中,那一种可以被EGTA抑制活性?( )(a)S1单链核酸酶(b)末端转移酶(c)碱性磷酸酶(d)Bal 31核酸酶10.限制性内切核酸酶可以特异性地识别:( )(a)双链DNA的特定碱基对(b)双链DNA的特定碱基序列(c)特定的三联密码(d)以上都正确11.限制性核酸内切酶切割DNA后产生:AA.5′磷酸基和3′羟基基团的末端B.5′磷酸基和3′磷酸基团的末端C.5′羟基和3′羟基基团的末端D.3′磷酸基和5′羟基基团的末端E.以上都不是12. cDNA是指:AA.经逆转录合成的与RNA互补的单链DNAB.经逆转录合成的与DNA互补的单链RNAC.经逆转录合成的与DNA互补的DNAD.经转录合成的与DNA互补的RNAE.经转录合成的与DNA互补的DNA13.有关质粒的描述错误的是:EA.小型环状双链DNAB.小的只有2-3 kb,大的可达数百kbC.能在宿主细胞能自主复制D.多数带有一些抗药性基因E.只有一个限制性核酸内切酶位点14.可识别并切割特异DNA序列的称:A.非限制性核酸外切酶B.限制性核酸内切酶C.限制性核酸外切酶D.非限制性核酸内切酶E.DNA酶(DNase)15.对基因载体的描述,下列哪个不正确:DA.都可以转入宿主细胞B.都有限制性核酸内切酶的识别位点C.都可以连接目的基因D.都是环状双链DNA分子E.都有筛选标志16.在已知某一序列信息的情况下,获取该目的基因最快捷的方法是:DA.基因组文库法B.化学合成法C.cDNA文库法D.PCR法E.序列测定17.在重组DNA技术领域所说的分子克隆是指:A.建立多克隆抗体B.建立单克隆抗体C.有性繁殖DNAD.无性繁殖DNAE.构建重组DNA分子18.下列哪种方法不能作为表达载体导入真核宿主的方法:DA.电穿孔B.磷酸钙转染C.脂质体转染D.氯化钙转染E.显微注射19.表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是:EA.酵母表达体系B.原核表达体系C.E.coli表达体系D.昆虫表达体系E.哺乳类细胞表达体系20.某一生物的基因组是指:AA.该生物整套遗传信息B.该生物可转录基因C.该生物非转录部分D.该生物特定的遗传信息E.该生物可表达的基因21.下列不是细菌基因转移与重组方式的是:EA.接合B.转化C.转导D.细胞融合E.转换22. Ti质粒:( A )(a)可从农杆菌转到植物细胞中(b)作为双链DNA被转移(c)在植物中导致肿瘤(d)介导冠瘿碱的合成,作为细菌的营养物和植物的生长激素(e)需要细菌的vir基因帮助转移(f)在植物细胞中作为染色体外质粒23.黏粒(cosmid)是一种人工建造的载体,( )(a)它具有COS位点,因而可进行体外包装(b)它具有质粒DNA的复制特性(c)进入受体细胞后,可引起裂解反应(d)进入受体细胞后,可引起溶源化反应24.有两种确定核酸中核苷酸序列的方法:化学序列分析法(Maxam-Glbert)和酶学序列分析法(Sanger)。
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基因工程一名词解释DNA,1、限制与修饰系统:限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染,可讲解外来从而阻止其复制和整合到细胞中。
一般来说,与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶,或者说是甲基化酶,能保护自身的 DNA不被讲解。
限制酶和甲基转移酶组成限制与修饰系统。
2、各种限制与修饰系统的比较Ⅱ型Ⅰ型Ⅲ型识别位点4~6bp,大多为回文序列二分非对称5~7bp 非对称切割位点在识别位点中或靠近识别位点无特异性,至少在识别位点外100bp 识别位点下游 24~26bp简答1. 何谓 Star activity?简述Star activity的影响因素及克服方法?答:在极端非标准条件下,限制酶能切割与识别序列相似的序列,这个改变的特征称为星星活性。
pH 引起星星活性的的因素:①高甘油浓度(>5%);②酶过量( >100U/μl );③低离子强度( <25mmol/L);④高(> ;⑤有机溶剂如DMSO (二甲基亚砜)、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺等;⑥用其它二价阳离子星星活性的抑制措施:①减少酶的用量,避免过量酶切,减少甘油浓度;②保证反应体系中无有机溶剂或乙醇;③提高离子强度到100 ~ 150mM(在不抑制酶活性的前提下);④降低反应pH至;⑤使用Mg2+作为二价阳离子。
2. 试回答影响限制性内切核酸酶切割效率的因素?(影响酶活性的因素?)答:外因:反应条件、底物纯度(是否有杂质、是否有盐离子和苯酚的污染)、何时加酶、操作是否恰当,反应体系的选择、反应时间的长短内因:星星活性、底物甲基化、底物的构象3、 DNA末端长度对酶切割的影响答:限制酶切割 DNA 时,对识别序列两端的非识别序列有长度要求,也就是说在识别序列两端必须要有一定数量的核苷酸,否则限制酶将难以发挥切割活性。
在设计PCR引物时,如果要在末端引入一个酶切位点,为保证能够顺利切割扩增的 PCR产物,应在设计的引物末端加上能够满足要求的碱基数目。
一般需加 3 ~4 个碱基对。
4、何为载体?一个理想的载体应具备那些特点?答:将外源 DNA 或目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。
载体应具备:①在宿主细胞内必须能够自主复制(具备复制原点);②必须具备合适的酶切位点,供外源DNA 片段插入,同时不影响其复制;③有一定的选择标记,用于筛选;④其它:有一定的拷贝数,便于制备。
5 抗性基因( Resistant gene)是目前使用的最广泛的选择标记,常用的抗生素抗性有哪几种?并举两例说明其原理?答:氨苄青霉素抗性基因( ampr)、四环素抗性基因(tetr )、氯霉素抗性基因( Cmr)、卡那霉素和新霉素抗性基因( kanr , neor )以及琥珀突变抑制基因supF 。
⑴青霉素抑制细胞壁肽聚糖的合成,与有关的酶结合,抑制转肽反应并抑制其活性。
氨苄青霉素抗性Ampr 编码一个酶,可分泌进入细胞的周质区,并催化β - 内酰胺环水解,从而解除氨苄青霉素的毒性。
⑵四环素与核糖体 30S 亚基的一种蛋白质结合,从而抑制核糖体的转位。
Tetr 编码一个由 399 个氨基酸组成的膜结合蛋白,可阻止四环素进入细胞。
6. 何为α - 互补?如何利用α - 互补来筛选插入了外源DNA 的重组质粒?答:α - 互补指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β - 半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现互补。
α - 互补是基于在两个不同的缺陷β-半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。
实现α- 互补主要有两部分组成:LacZ △ M15 ,放在 F 质粒或染色体上,随宿主传代;LacZ' ,放在载体上,作为筛选标记,当在 LacZ' 中插入一个片断后,将不可避免地导致产生无α- 互补能力的β-半乳糖苷酶片断。
在诱导物IPTG 和底物 X-gal (同时可作为生色剂)的作用下,含重组质粒的菌落不能产生有活性的β-半乳糖苷酶,不能分解 X-gal ,呈现白色,而含非重组质粒的菌落则呈现兰色。
以此达到筛选的目的。
7、试简述λ噬菌体的裂解生长状态Lytic growth 和溶原状态 Lysogenic state 两种循环的分化及其调节过程?答:裂解生长状态是λ噬菌体在宿主中大量复制并组装成子代λ噬菌体颗粒,导致宿主细胞裂解。
溶原状态为λ噬菌体基因组 DNA 通过位点专一性重组整合到宿主染色体DNA 中随宿主的繁殖传到子代细胞。
调节过程:由感染复数和细胞的营养状态决定的,感染复数越高,营养状态越差,则溶源化的频率就越高。
溶源现象的生化媒介可能是3'--5'cAMP,它在细胞内的浓度会随营养条件的变化而改变,当细胞在富营养培养基中生长时,cAMP 的浓度较低,有利于裂解生长;在缺乏cAMP的突变细胞中,更有利于裂解生长另外一个重要的调节因素是噬菌体的CⅡ蛋白,它是噬菌体基因转录的激活子,抑制裂解功能基因的表达,催化噬菌体DNA 整合到细菌的染色体中去。
高浓度的CⅡ蛋白促进溶源化,而低浓度的CⅡ蛋白促进裂解生长。
当CⅡ蛋白浓度足够时,激活CⅠ蛋白和基因int的表达,导致噬菌体 DNA与染色体整合,朝着溶源态生长。
9、 cDNA文库的构建:将来自真核生物的mRNA体外反转录成cDNA,与载体连接并转化大肠杆菌的过程。
⑴细胞总RNA的提取和mRNA的分离⑵第一链合成:由mRNA到 cDNA的过程为反转录,由反转录酶催化。
⑶第二链合成:①自身引物合成法②置换合成法③引导合成法④引物—衔接头合成法⑷双链 cDNA里连接到质粒或噬菌体载体并导入大肠杆菌中繁殖10、文库质量检测答:文库质量是由文库所含克隆的数目、平均插入片段的长度、插入效率、基因组覆盖度和覆盖倍数等因素决定。
克隆数越多、平均插入片段的长度越长、插入效率和基因组覆盖度越高,文库质量越好。
克隆数目可以通过多次转化累加,但并非越多越好,只要达到一定数目的基因组覆盖倍数和覆盖度就行,一般要求达到 4— 6 倍覆盖率。
11、基因覆盖倍数的估算方法答:有两种,一:用公式计算基因组覆盖倍数=平均插入片段的长度ⅹ克隆数/ 基因组 DNA长度二:结合基因覆盖度检测来估算。
基因组覆盖度是指问苦衷克隆覆盖基因组的范围。
即选择一定数目的单拷贝基因作探针来筛选文库。
每个探针筛选的克隆数目,即为该基因位点的覆盖倍数。
12、解释并计算N=ln(1-P)/ln(1-f)式中 N:代表一个基因组文库所包含重组克隆个数P :代表所期望的目的基因在文库中出现的概率f:表示重组克隆平均插入片段的长度和基因组DNA长度的比值计算:大肠杆菌基因组大小约mb,若 P=99%,平均插入片段大小为20kb,f=20kb/4600kb,则 N=1057. 即当期望从一个平均插入片段为 20kb 的大肠杆菌基因组文库中筛选到任意一个感兴趣的基因的概率达99%,该基因文库至少应包含1057 个重组克隆。
选择合适的载体系统和挑去一定的阳性克隆是构建基因组文库时首先考虑的问题。
论述题1、 cDNA文库的均一化处理两条途径:基因组DNA饱和杂交法和基因组DNA饱和杂交法⑴基因组DNA饱和杂交法原理:利用不同表达水平的基因对应的基因组拷贝数相对一致的特点,可以对cDNA文库进行均一化处理步骤①将基因组DNA用限制性内切酶消化固定,消化后的基因组DNA扁形为相对较短的单链且最大可能的覆盖基因组。
②分离纯化独立cDNA文库的混合质粒③文库 cDNA与固定的基因组DNA充分饱和杂交,固定住相应的cDNA,并将它洗脱重新转化受体菌。
优点:应用简单、没有一仪器上的限制缺点:由于基因组DNA相对很复杂,很难获得覆盖基因组的单链DNA片段,导致基因丢失;在基因组DNA与文库 DNA杂交的过程中,文库DNA自身杂交的速度会很快,导致基因丢失。
⑵基因组DNA饱和杂交法原理:双链 DNA在加热变后再复性形成双链DNA的速度遵循二次复性动力学原理。
即与组分中的单链DNA浓度有关,浓度越小,复性所需时间越长。
cDNA文库中高丰度的cDNA复性所需要的时间短,低丰度的cDNA复性所需的时间长。
通过对复性时间的控制,可以使高丰度的cDNA复性成双链状态,低丰度的cDNA保持单链状态。
利用羟基磷灰石柱很容易将单链和双链cDNA分开,再用得到的单链cDNA转化宿主细菌,即可得到均一化cDNA文库。
优点:几乎不会导致文库中cDNA的丢失;均一化效果明显缺点:基因组 DNA饱和杂交法成功率高,而基因组DNA饱和杂交法在参数控制上存在着比较多的因素。
2、扣除杂交cDNA文库原理:利用分子杂交原理,去除非差异表达基因的待测样本tester:待测样本的总cDNA。
对照样本cDNA,保留差异表达的基因的cDNA用于制备文库。
driver:表达谱背景一致但不含目的基因的总cDNA。
tester 与过量的driver 杂交,用特定方法将二者共同表达的cDNA去除。
如:抑制性扣除杂交(suppression subtractive hybridization, SSH)原理:含目的基因的cDNA称为供体 tester,不含目的基因的在体外独立反转录成的。
同时利用识别 4 个碱基的限制性内切酶为二,分别接上二种不同的接头。
第一轮杂交:过量的驱动cDNA分别与带有 2 中不同接头的供体cDNA会形成 4 种类型的cDNA片段:cDNA称为驱动driver。
它们是由对应的mDNA组分RsaΙ将这些 cDNA消化成平末端小片段。
将供体一分cDNA杂交,在 2 个独立的杂交体系中,供体与驱动a、供体中既没有与供体杂交,也没有与驱动杂交的cDNA分子。
b、供体中自身杂交的cDNA分子。
c、供体与驱动中共同表达的基因杂交形成的双链cDNA分子。
d、驱动中自身杂交和不能自身或与供体杂交的cDNA分子。
第二轮杂交:将第一轮杂交的两个体系混合,再加入过量的驱动cDNA,进入第二轮杂交。
杂交结果进一步形成了a、b、 c、 d。
也形成了e(带不同接头 a 形成的)。
将第二轮杂交的产物进行末端补齐,再进行两轮PCR扩增。
在扩增过程中,由于a、d 两端没有引物结合位点而不能再扩增。
b 两端带有相同的接头序列,形成蜗柄结构,不能进行指数扩增。
c 只有一个引物接头,只能被线性扩增。
只有 e 是均一化的,差异表达的基因。
用巢式引物进行第二轮PCR,降低 PCA产物的背景,富集差异的基因。
最后将PCR产物用 T/A 克隆载体进行克隆构建扣除杂交cDNA文库3、烟草酸性焦磷酸酶法构建全长cDNA文库原理:烟草酸性焦磷酸酶(TAP),能特异性地识别真核生物mRNA的 5’端帽子结构并将其去除。
暴露出切口5’端的磷酸基团,可在该切口处连接一段特异的接头来引导cDNA第二链的合成。