探针的标记物放射性同位素
核酸分子杂交名词解释
核酸分子杂交名词解释核酸分子杂交是一种重要的分子生物学技术，用于研究核酸的结构、功能和相互作用，并在基因克隆、基因表达调控等领域具有广泛的应用。
以下是与核酸分子杂交相关的重要名词的解释：1. 核酸分子杂交（Nucleic Acid Hybridization）：指将两个不同的核酸分子（DNA或RNA）通过互补的碱基配对形成双链结构的过程。
核酸分子杂交可用于分析DNA或RNA的序列、测定基因表达水平以及检测特定的核酸序列。
2. 探针（Probe）：一条含有特定序列的标记化核酸分子，用于与目标序列进行杂交。
探针通常由放射性核素、荧光染料或酶等标记物标记，以便于在实验中检测其位置和数量。
3. 靶标（Target）：指待被杂交的目标核酸分子，它可以是DNA或RNA，含有待检测或待分析的特定序列。
靶标可以来自于生物样品，如组织、细胞或血清等。
4. 互补序列（Complementary Sequence）：两条核酸分子间相互配对的碱基序列。
在DNA分子中，腺嘌呤（A）与鸟嘌呤（G）通过双氢键相互配对，胸腺嘧啶（T）与胞嘧啶（C）相互配对；在RNA分子中，腺嘌呤（A）与尿嘧啶（U）相互配对，胸腺嘧啶（T）与胞嘧啶（C）相互配对。
5. 杂交化（Hybridization）：指探针与靶标间通过互补序列形成双链结构的过程。
杂交化通常需要一定的时间和温度条件，以保证探针和靶标的互补碱基序列能够正确配对。
6. 杂交化条件（Hybridization Conditions）：影响探针和靶标杂交的因素，包括温度、盐浓度、引物浓度、溶液pH值等。
不同的杂交化条件可选择性地控制互补序列的结合和分离，从而改变杂交的特异性和灵敏度。
7. 杂交化信号（Hybridization Signal）：当探针与靶标杂交时，由于探针上的标记物，如放射性同位素或荧光染料的发光、发射或放射活性，而产生的信号。
通过检测杂交化信号的强度和位置，可以确定探针与靶标的结合情况，以及目标序列的存在与数量。
探针标记
核酸探针已被广泛用于筛选重组克隆、基因多样性的种性检测和真菌种群内及种群之间的系统发育关系评价。
最早使用的放射性同位素标记核酸探针具有敏感性高、特异性好、分辨力强的特点，但放射性同位素标记也存在着一系列令人困扰的问题,如成本高、探针半衰期短、放射性物质危害人体健康等。
而且在进行放射性同位素标记实验时,需要有专门的实验室及相应的实验保护设施，还需要由经过培训的专业人员来操作,因而限制了在普通实验室进行分子生物学实验。
近几年发展起来的非放射性核酸探针大多通过酶促、光化学和化学手段掺入一种报道基团,这种报道基团可通过高灵敏度的冷光、荧光或金属沉淀等检测系统检测。
另外,应用pH电极或感应器技术的电化学检测系统也有报道。
在这些检测系统中,灵敏度最高的是生物素- 亲合素检测系统和半抗原-抗半抗原地高辛检测系统。
由于生物样品中常含有内源性生物素及生物结合蛋白，生物素标记的核酸探针会发生一些非特异性结合，从而影响实验效果。
与生物素-亲合素系统同样具有高灵敏度，却减少了非特异性结合的地高辛检测系统，已为人们所接受,并得到广泛的应用。
地高辛(Digoxigenin ,DIG) 又称异羟基洋地黄毒甙元，是一种类固醇半抗原分子。
第四节非放射性标记的核酸探针放射性标记核酸探针在使用中的限制，促使非放射性标记核酸探针的研制迅速发展，在许多方面已代替放射性标记，推动分子杂交技术的广泛应用。
目前已形成两大类非放射标记核酸技术，即酶促反应标记法和化学修饰标记法。
酶促反应标记探针是用缺口平移法，随机引物法或末端加尾法等把修饰的核苷酸如生物素-11-dUTP掺入到探针DNA中，制成标记探针，敏感度高于化学修饰法，但操作程序复杂，产量低，成本高。
化学修饰法是将不同标记物用化学方法连接到DNA分子上，方法简单，成本低，适用于大量制备（>50μg）如光敏生物素标记核酸方法，不需昂贵的酶，只在光照10～20min，生物素就结合在DNA 或RNA分子上。
化学生物学中的分子探针设计与应用
化学生物学中的分子探针设计与应用化学生物学是化学与生物学交叉学科的一个领域，它主要关注生物信息传播、分子识别、生物作用机转等生化过程的规律与机制。
而分子探针的设计与应用在化学生物学领域中起着至关重要的作用。
一、分子探针的基本概念分子探针是一种特殊的生物分子，能通过识别特定分子或生物活性部位来研究生命现象，得到与之相关的信息。
根据不同的识别方式，分子探针可分为荧光探针、放射性探针、酶标识探针、亲和力柔性探针以及核酸探针等。
荧光探针是指分子中含有荧光染料，用于特定情况下摄取光而发出荧光信号的探针。
由于荧光探针与荧光成像技术相结合，不仅可以对细胞分子进行定位和标记，而且还可以对研究活体（或生物组织）中的分子成分和结构变化提供强大的工具。
放射性探针是一种分子标记物，通过将原子核与放射性标记相结合，使得分子在放射性同位素辐射下产生发光和发热。
这种探针可以用于放射性药物的制备、核医学永定，以及生物物理学、生物化学实验室的研究等。
酶标识探针是带有酶标记的分子，通过与特定的抗体或其他生物分子结合，可以用于生物分子的定量分析。
亲和力柔性探针是利用某种生物大分子或医药蛋白与亲和物质之间的生物学相互作用（比如生物大分子共alexin、酵素与底物之间的反应），进而探究其性质、功能及分子机制。
核酸探针是能够与DNA和RNA分子结合的特定DNA 或RNA 序列，一般用于检测DNA和RNA序列的验证和检测，也可用于研究感染病原体的诱导、基因表达及转录调控机制等。
二、分子探针设计方法与策略针对不同的探针功能要求，分子探针设计时，需要考虑很多物理、化学和生物学因素。
针对分子探针的设计方法与策略，其核心在于选择合适的分子结构、挑选标记物、实现功能分析以及提高选择性和检测灵敏度。
1.所有可用的化学分子作为探针的备选物质。
例如：激钙素（Fluo-3等）、翻译融合部位（TFP 标志基因等）、萤光酰胺（FITC等）、放射性同位素（125I，3H等）、荧光固定基（螺环锁体结构（aromatase）、废弃物与石引物质等。
核酸探针技术的原理和应用
核酸探针技术的原理和应用引言核酸探针技术是一种重要的分子生物学工具，通过利用特异性的核酸序列与待测样品中的目标序列进行特异性配对，从而实现对目标序列的检测和定量分析。
本文将介绍核酸探针技术的原理以及其在生物学研究、医学诊断和药物开发等领域的应用。
一、核酸探针技术的原理核酸探针技术利用两条互补的核酸分子之间的碱基配对原理，通过标记的核酸序列与待测样品中的特定目标序列进行靶向配对。
该技术的原理主要包括以下几个方面：1.互补配对：核酸分子由四种碱基（腺嘌呤，胸腺嘧啶，鸟嘌呤和胞嘧啶）组成，它们之间可以通过碱基配对形成双链结构。
腺嘌呤与胸腺嘧啶之间形成两个氢键，鸟嘌呤与胞嘧啶之间形成三个氢键。
根据这种碱基配对原理，核酸探针可以与目标序列中的特定碱基序列进行互补配对。
2.标记物：核酸探针常常需要进行标记以便于检测。
常用的标记物包括荧光染料、放射性同位素、酶和磁珠等。
标记物的选择取决于具体的实验需求和检测方法。
3.检测方法：核酸探针技术可以通过不同的检测方法进行信号的读取和分析。
常见的检测方法包括荧光检测、放射性测量、酶促反应和磁性检测等。
这些方法可以实现对标记物信号的定量分析和可视化显示。
二、核酸探针技术的应用核酸探针技术具有高灵敏度、高特异性和高选择性的优势，被广泛应用于各个领域。
以下是核酸探针技术在生物学研究、医学诊断和药物开发等领域的应用：1.基因表达分析：核酸探针技术可用于研究基因的表达模式、调控机制和功能。
通过对目标基因的探针设计和合成，可以检测该基因在不同组织、细胞或条件下的表达水平。
2.病毒检测：核酸探针技术在病毒检测中具有重要意义。
例如，针对新型冠状病毒（COVID-19）的核酸探针被广泛应用于病毒的快速检测和筛查。
3.癌症诊断：核酸探针技术可用于癌症诊断和预后评估。
通过检测肿瘤标志物的核酸序列，可以快速、准确地判断患者是否患有癌症，以及癌症的类型和分级。
4.药物研发：核酸探针技术在新药研发中发挥重要作用。
核酸探针的名词解释
核酸探针的名词解释核酸探针是一种生物技术工具，用于检测和定量分析某个特定的核酸序列。
核酸探针广泛应用于生命科学研究、临床诊断、药物研发等领域，发挥着重要的作用。
本文将对核酸探针进行全面的解释和概述。
首先，核酸探针是由特定的DNA或RNA序列构成的分子探针，可以与目标核酸序列发生亲和作用。
这种亲和作用是通过碱基之间的氢键和静电相互作用来实现的。
当核酸探针与目标序列结合时，可以通过不同的手段进行检测，如荧光、放射性同位素、酶等。
因此，核酸探针可以用于检测及定量分析目标核酸的存在和数量。
核酸探针通常分为两类：探针和探针靶标。
探针是指通过标记物标记的核酸序列，用于寻找、结合和识别特定的目标序列。
标记物可以是荧光染料、放射性同位素、酶等，通过这些标记物的特性，可以将目标序列的存在转化为可见的荧光信号或颜色变化等。
探针的设计需要根据目标序列的特点和要求进行选择，以确保能够高效地与目标序列结合。
而探针靶标是指与探针结合的目标核酸序列。
探针靶标可以是基因、RNA、病毒等，通过与探针的结合，可以准确地检测和定量目标核酸的存在和数量。
探针靶标的选择是基于研究的目的和所需的结果，不同的探针靶标可以提供不同的信息和数据。
核酸探针的优点是具有高度的特异性和灵敏性。
由于核酸探针是专门设计的，可以针对目标序列的独特特点进行选择和设计，使其具有非常高的特异性。
此外，核酸探针的灵敏性也很高，可以检测到非常低浓度的目标分子。
因此，核酸探针常被用于疾病的早期诊断、药物研发、基因工程和环境监测等领域。
然而，核酸探针也存在一些限制和挑战。
首先，核酸探针对目标序列的特异性要求非常高，如果目标序列发生了变异或突变，可能会导致探针无法与其结合，从而导致检测结果的错误。
此外，核酸探针的设计和合成成本相对较高，需要专业的实验室和设备支持。
因此，在使用核酸探针进行研究和应用时，需要充分考虑这些限制和挑战。
目前，核酸探针已经广泛应用于各个领域。
在生命科学研究中，核酸探针常用于基因表达分析、突变检测、病毒感染研究等。
分子生物学诊断技术的应用(一)
分子生物学诊断技术的应用(一)作者：杨峻来源：《湖北畜牧兽医》2010年第09期中图分类号:S854.4+3文献标识码:B文章编号:1007-273X(2010)09-0004-06编者按:随着分子生物学技术的飞速发展,尤其是分子遗传学的进步,大大提高了动物病原的诊断水平。
动物病原的实验室诊断技术已从常规的病原分离鉴定以及抗原和抗体的免疫学检测,进入到可对病原基因序列和结构直接进行测定的分子生物学水平,同时也促进了疫病快速诊断技术发展。
近几年随着国家对市县级动物疫病防控设备投资逐年加大,疫病防控诊断平台建设不断加强,兽医技术人员希望普及动物分子生物学诊断技术。
本刊特邀湖北省农业科学院畜牧兽医研究所杨峻研究员对分子生物学诊断技术在兽医学科领域的应用进行概述,为大家在实际应用时提供参考。
主要内容包括核酸探针技术、单克隆抗体技术、核酸扩增、核酸电泳、免疫印迹技术、图谱分析、核酸序列分析、DNA芯片技术等。
1核酸探针技术1.1核酸探针技术的原理化学及生物学意义上的探针(Probe),是指与特定的靶分子发生特异性相互作用,并可被特殊的方法探知的分子。
抗体—抗原、生物素—抗生物素蛋白、生长因子—受体的相互作用都可以看做是探针与靶分子的相互作用。
核酸探针技术的原理是碱基配对。
互补的两条核酸单链通过退火形成双链,这一过程称为核酸杂交。
核酸探针是指带有标记物的已知序列的核酸片段,它能和与其互补的核酸序列杂交,形成双链,所以可用于核酸样品中特定基因序列的检测。
每一种病原体都具有独特的核酸片段,通过分离和标记这些片段就可制备出探针,用于疾病的诊断等研究。
1.2核酸探针的种类与用途按来源及性质划分:可将核酸探针分为基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针和人工合成的寡核苷酸探针等几类。
作为诊断试剂,较常使用的是基因组DNA探针和cDNA探针。
其中,前者应用最为广泛,它的制备可通过酶切或聚合酶链反应(PCR)从基因组中获得特异的DNA后将其克隆到质粒或噬菌体载体中,随着质粒或噬菌体的增殖而获得大量高纯度的DNA探针。
核酸探针作用的原理及应用
核酸探针作用的原理及应用引言核酸探针是一种广泛应用于生物学研究中的工具，通过与目标DNA或RNA序列的特异性互补配对，能够检测并定位特定的核酸分子。
本文将介绍核酸探针的原理和其在生物学研究中的应用。
核酸探针的原理核酸探针的原理基于DNA或RNA的碱基互补配对。
核酸分子由四种碱基组成，分别是腺嘌呤（A）、胞嘧啶（C）、鸟嘌呤（G）和胸腺嘧啶（T）（DNA中的胸腺嘧啶被尿嘧啶（U）取代）。
两条相互互补的核酸链能够通过碱基配对（A与T/U，C与G）形成稳定的双链结构。
核酸探针通常由两个部分组成，一个是探针的序列，另一个是标记物。
探针的序列通常与目标DNA或RNA的互补序列相匹配，便于与目标核酸发生特异性配对。
标记物则是一种用于检测核酸探针位置的信号发出物质，如荧光染料或放射性同位素。
核酸探针的应用核酸探针在生物学研究中有着广泛的应用。
以下是核酸探针的几个重要应用。
1. 基因检测和表达分析核酸探针可以用于检测和鉴定目标基因的存在和表达情况。
通过将探针与目标DNA的互补序列配对，可以检测基因的存在与否。
此外，通过标记物的选择，可以定量检测基因的表达水平。
2. 突变检测核酸探针可以用于检测DNA序列的突变。
通过与目标DNA的互补配对，如果存在突变，则配对会受到影响，从而使标记物的信号发生改变。
这种方法可以准确、快速地检测DNA序列中的单核苷酸突变。
3. 细菌和病毒检测核酸探针还可以用于检测和鉴定细菌和病毒的存在。
利用特异性的核酸探针，可以识别和定位特定的细菌和病毒序列。
这种方法在临床诊断中有着重要的应用，可以迅速判定感染的细菌或病毒种类。
4. 基因组测序核酸探针被广泛应用于基因组测序技术中。
在测序过程中，核酸探针可以与待测序的DNA相互配对，帮助确定DNA的序列。
5. 药物研发核酸探针也常用于药物研发领域。
通过设计和合成特定的核酸探针，可以筛选潜在药物分子与目标基因或蛋白质的作用。
结论核酸探针作为一种重要的生物学工具，广泛应用于基因检测、突变检测、细菌和病毒检测、基因组测序以及药物研发等领域。
随机引物标记探针的原理
随机引物标记探针的原理
随机引物标记探针的原理是利用引物（通常是随机序列）与待标记的探针的序列进行杂交反应，将引物与探针序列互相结合，并用标记物（如荧光染料或放射性同位素）对引物进行标记。
标记后的引物可以用于检测和定量待标记探针的存在和数量。
具体步骤如下：
1. 设计引物：引物通常为短序列的寡聚核苷酸，可以是完全随机的或部分随机的，以提高杂交反应的特异性。
2. 合成引物：根据设计的引物序列，合成相应的引物。
3. 标记引物：将引物与标记物（如荧光染料）进行化学修饰，将标记物连接到引物上。
4. 杂交反应：在杂交反应体系中，将标记的引物与待标记的探针序列进行杂交，使引物与探针互相结合。
5. 检测：利用标记物的性质（如荧光）对标记的引物进行检测和定量，从而间接检测和定量待标记的探针序列的存在和数量。
随机引物标记探针的优点是简单、快速，适用于大规模的探针标记，并且具有较高的特异性和敏感性。
然而，随机引物的选择可能会引入一定的非特异性杂交信号，在实验设计和数据分析时需要注意控制和纠正这些影响。
dna印迹杂交名词解释
dna印迹杂交名词解释
DNA印迹杂交是一种用于分子生物学研究的技术，也被称为Southern杂交。
它用于检测DNA分子的特定序列在样本中的存在与否，并研究DNA序列之间的相似性和差异性。
下面是一些与DNA印迹杂交相关的名词解释：
1.DNA印迹（DNA Blotting）：将DNA样本分离并转移到固体
载体（如膜或纸张）上的过程。
这样可以保留DNA分子的特定序列，并便于后续的杂交检测。
2.DNA探针（DNA Probe）：DNA分子的一段具有特异性的序
列，用于寻找和结合目标DNA分子的特定序列。
探针通常与标记物（如放射性同位素或荧光分子）结合，以便于检测。
3.DNA杂交（DNA Hybridization）：将标记的DNA探针与待
测样本中的DNA序列进行结合的过程。
如果样本中存在与探针相匹配的目标序列，则会形成稳定的杂交复合物。
4.杂交探测（Hybridization Detection）：使用适当方法（如放
射性测量或荧光显微镜观察）检测和测量目标DNA与探针间杂交的程度。
5.北方杂交（Northern Blotting）：一种应用于检测RNA分子
的特定序列的方法，与DNA印迹杂交类似。
DNA印迹杂交技术的应用广泛，可以用于基因表达研究，DNA 检测和诊断，基因组比较分析等领域。
使用这一技术，研究人
员可以了解DNA序列的组成和变异，深入了解基因的功能和调控机制。
核酸探针的原理是什么
核酸探针的原理是什么核酸探针是一种用于检测、鉴定和定量核酸分子的工具。
它基于互补配对原理，将带有荧光标记或放射性标记的单链DNA或RNA引物与待测样品中的靶核酸特异性结合，通过检测标记物的荧光或放射性信号来确定靶核酸的存在、数量和序列等信息。
核酸探针的原理基于DNA和RNA双链分子的互补配对规则。
DNA由四种不同的碱基（腺嘌呤，鸟嘌呤，胸腺嘧啶和鳸嘧啶）组成，它们之间可以通过氢键形成配对，即腺嘌呤与鸟嘌呤之间形成两个氢键，胸腺嘧啶与鳸嘧啶之间形成三个氢键。
因此，DNA的两条链是互补的，即一个链上的碱基与另一个链上的碱基相互配对。
核酸探针通常由一条具有特定序列的单链DNA或RNA构成，并在末端或碱基上标记有荧光染料或放射性同位素等标记物。
当该核酸探针与待测样品中的靶核酸序列互相配对时，标记物会被激活并发出荧光或放射性信号。
这种信号可以通过荧光显微镜或放射性计数器等设备被检测、记录和分析。
核酸探针的选择是十分重要的，它们必须与待测样品的靶核酸序列具有高度的亲和力和特异性，以确保检测的准确性和灵敏度。
核酸探针的设计通常基于目标序列的已知信息，通过比对目标序列与其他相关序列的异同，确定具有高度亲和力和特异性的引物。
此外，核酸探针的长度、配对性及标记物的选择也会影响探针的灵敏度和特异性。
核酸探针技术在生物医学研究和临床应用中具有广泛的应用。
例如，在基因检测中，核酸探针可以用于检测特定基因变异或突变，从而确定个体是否患有遗传疾病；在病毒学研究中，核酸探针可以用来检测和定量病毒的存在和数量，帮助诊断和治疗病毒性感染；在环境监测中，核酸探针可以用于检测和鉴定水体、土壤和空气中的微生物和有害物质等。
总之，核酸探针是一种基于互补配对原理的检测工具，借助于标记物的信号可以检测、鉴定和定量待测样品中的靶核酸分子。
它在生物医学研究、临床诊断和环境监测等领域具有重要的应用价值。
RNA标记方法及详细说明
RNA标记方法及详细说明NA标记是将标记物（如放射性同位素、荧光素或酶）共价地连接到RNA，通过检测标记物，进而实现对RNA鉴别和检测的目的。
RNA 标记在分子探针领域应用广泛，在疾病诊断方面也很有前景。
理想的RNA标记方法应符合以下要求：1. 操作简单，灵敏度高2. 不影响碱基配对的特异性3. 不影响RNA活性4. 对酶促反应活性无影响或影响不大5. 检测方法具有高度灵敏性和高度特异性6. 标记物对人体无害RNA标记方法：按反应机制分如下四类：直接标记法，加尾标记法，基于逆转录反应的标记方法，基于RNA克隆扩增的标记方法。
常用于RNA标记的方法按标记物性质分为：放射性同位素标记：32P、35S、3H非放射性标记：半抗原荧光素化学发光物质地高辛地高辛标记RNA常用的方法是将DIG与UTP共价结合形成DIG-UTP，以DIG-UTP、ATP、CTP、GTP为底物通过RNA聚合酶T7、SP6经体外转录合成标记RNA。
此法多用于RNA探针的制备，一般每20~25个核苷酸可引入一个地高辛分子。
5'末端标记法5'末端标记法是通过化学方法将地高辛标记于寡核苷酸的5'末端。
首先在5'末端连接上一个氨基连接臂残基，将合成的寡核苷酸纯化后，再使DIG-NHS与5'末端的氨基残基发生共价结合，从而形成标记RNA。
DIG-RNA5'3'5'3'DIGAnti-DIG-APAP-DIG-RNA5'3'5'3'X光片曝光化学发光信号蓝紫色生物素用生物素标记RNA的方法常见的是用生物素与UTP结合形成Biotin-UTP，以Biotin-UTPATP、CTP、GTP为底物通过RNA聚合酶SP6、T7等经体外转录合成标记RNA。
荧光素目前常见的荧光染料包括：异硫氰酸荧光素（FITC）四甲基异硫氰酸罗丹明四乙基罗丹明得克萨斯红藻红蛋白（PE）花青类染料(Cy3、Cy5)新型荧光素如量子点（半导体纳米晶体）。
DNA探针的标记
DNA探针的标记一、目的学习DNA探针标记的方法，为核酸的分子杂交提供基础二、概述分子杂交是核酸链以碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。
利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一条用某种可以检测的进行标记，这条链就称为核酸探针。
因此，核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。
放射性同位素标记是最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法。
常用的放射性同位素有32P和35S。
32P因其能量高，信号强，所以最常用。
放射性同位素标记探针虽然敏感度高，但却存在辐射危害和半衰期限制（32P 半衰期为14.3天，35S半衰期为87.1天，125I半衰期为60天），3H的半衰期长达12.3年，但它所释放β射线的能量太低，只能用于组织原位杂交。
由于同位素标记的探针在使用过程中存在着上述缺点，近年来，人们在寻找非放射性标记物方面取得了很大进展。
国内已具备生物素类标记物的生产能力，并有相应试剂出售。
目前非放射性标记物有下述几类：金属如Hg、荧光物质如FITC、半抗原如地高辛、生物素、酶类如辣根过氧化物酶（HRP）、半乳糖苷酶或碱性磷酸酶（AKP）等，不同的标记物，所标记探针的方法及检测方法也各异。
核酸探针的常用酶促标记技术有：缺口平移；DNA快速末端标记；用T4多核苷酸酶标记DNa 5'末端，随引物延伸法；PCR法等。
本实验用随机引物延伸标记法以地高辛、生物素等标记EGFR基因片断。
随机引物延伸法制备标记DNA 探针概述示意图+三、材料1.eppendorf管及Tip头2.PCR仪3.标记笔、镊子、无粉手套4.EGFR-PCR产物5.地高辛标记试剂盒（DIG-Random Labeling Mix, Rabbit anti DIG,Biotinlated-Goat- Anti-Rabbit-IgG, SABC-POD, DAB Stocking buffer, Blocking reagent）6.washing buffer (0.1 M Maleic acid, 0.15 M NaCl; pH7.5 (20°C); 0.3% (v/v) Tween 20)7.Maleic acid buffer (0.1 M Maleic acid, 0.15 M NaCl; adjustwith NaOH (solid) to pH 7.5)8.Detection buffer (0.1 M Tris-HCl, 0.1 M NaCl, pH 9.5)9.TE buffer (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA pH 8.0)10.微量加样器等。
探针名词解释分子生物学
探针名词解释分子生物学
分子生物学是研究细胞器和分子级别的结构、功能和相互作用的学科。
在分子生物学中,探针是一种常用的工具,用于标记和测量分子的位置、大小和形状。
探针通常由一个光源、一个接收器和一个转换器组成。
光源用于发出光线,接收器用于接收反射的光线,转换器用于将光线转换为电信号。
在分子生物学中,探针通常用于标记特定的分子,例如荧光分子、放射性同位素或抗体。
探针的种类繁多,用于不同的标记分子和测量方法。
例如,荧光探针用于标记DNA、蛋白质和RNA,放射性同位素探针用于标记核糖体、蛋白质激酶和离子通道,抗体探针用于标记抗原和抗体。
探针在分子生物学中的应用非常广泛,例如用于研究细胞结构和功能、基因表达和调控、蛋白质相互作用和细胞信号传导。
通过使用探针,科学家可以更好地理解细胞器和分子级别的相互作用,从而更好地了解生命的本质和机制。
分子生物学中的探针不仅是一种工具,也是一种研究方法。
探针的应用使得科学家们可以更好地理解细胞器和分子级别的相互作用,从而更好地了解生命的本质和机制。
探针应用于生化的原理是
探针应用于生化的原理是1. 探针的定义探针是一种用于生物化学和生物物理研究中的重要工具，它可以在细胞或分子水平上定位、标记和监测生物分子的活动和相互作用。
探针在生物科学研究中的应用非常广泛，可以用于研究细胞信号传递、蛋白质结构和功能等领域。
2. 探针的分类探针可以分为化学探针和生物探针两类。
2.1 化学探针化学探针是一种通过与生物分子发生化学反应来探测和测量其存在和活性的工具。
化学探针通常具有较小的分子量和较强的选择性，可以通过与特定生物分子结合或嵌入其中来产生信号或反应，并进一步用于定量或定位的研究。
2.2 生物探针生物探针是一类以生物分子（如DNA、RNA、蛋白质等）为基础制备的探测工具。
生物探针通常以分子杂交、荧光标记或放射性同位素标记等方式与目标生物分子发生特异性的配对反应，以便于检测和分析。
3. 探针应用于生化的原理探针应用于生化的原理是基于特定的相互作用原理。
以下列举了几种常见的探针应用原理。
3.1 荧光探针原理荧光探针是一种通过特定的化学或生物反应发射荧光信号的工具。
荧光探针通常由一个荧光染料和一个与靶分子相互作用的结构域组成。
当探针与靶分子结合时，荧光染料的荧光强度和特性会发生变化，从而可以通过检测荧光信号来定量靶分子的存在或浓度。
3.2 放射性探针原理放射性探针是利用放射性同位素标记的探针。
同位素标记的探针可通过辐射测量来检测和定量目标生物分子的存在和活性。
放射性探针通常采用放射性同位素标记的药物或化合物，并利用放射性测量技术（如放射性计数）来测定目标分子的含量。
3.3 分子杂交探针原理分子杂交探针是一种利用核酸互补配对原理进行检测的探针。
分子杂交探针通常由一条与目标DNA或RNA特异性互补的探针序列和一个标记（如荧光染料或放射性同位素）组成。
当目标DNA或RNA与探针序列互补配对时，可以通过检测标记物的信号来定位或测量目标分子的存在。
4. 探针应用领域举例4.1 药物研发探针可以用于药物研发领域，帮助科学家了解药物与靶分子的相互作用机制，评估药物的有效性和安全性。
生物分析中的探针
生物分析中的探针生物分析中的探针是指一种特殊的标记物或探测物，用于检测生物分子或细胞中的靶分子，并帮助科学家了解其结构、功能和相互作用等信息。
探针在现代生物技术研究、分子诊断和药物研发等领域中起着重要的作用。
本文将介绍生物分析中常见的几种探针。
1.基于荧光的探针：基于荧光的探针是最常见和常用的探针之一、通过将荧光物质与靶分子或探测物相结合，科学家可以通过监测荧光信号的增强或减弱，来确定靶分子的存在和数量。
最常见的基于荧光的探针有荧光染料、荧光蛋白和量子点等。
例如，在免疫组织化学中，学者们通常使用荧光标记的抗体作为探针，用于检测一些特定的抗原在细胞或组织中的分布情况。
2.基于放射性同位素的探针：基于放射性同位素的探针常用于核医学诊断和药物研发。
放射性同位素有较短的半衰期，可以通过使用放射性同位素标记靶分子或探测物来追踪其在生物体内的分布和代谢。
例如，放射性碘（^125I）或放射性碳（^14C）标记的分子可用于研究药物的代谢途径和排泄速率，以及疾病的诊断和治疗。
3.基于酶反应的探针：基于酶反应的探针是通过结合酶和底物来检测靶分子的存在与否。
酶反应常常通过生化反应产生显色或荧光信号，从而用于监测靶分子的浓度或活性。
这类探针在病原体检测、基因表达分析和蛋白质功能研究等方面具有很大的应用潜力。
4.基于DNA或RNA的探针：基于DNA或RNA的探针通常用于检测和定量测定核酸分子（例如：基因、miRNA等）。
这些探针通常采用荧光标记的寡核苷酸探针，利用互补配对原理来特异性地结合目标核酸分子，从而产生荧光信号。
这类探针在PCR扩增、灵敏核酸杂交和基因组分析中具有广泛的应用。
除了上述常见的探针之外，生物分析中还有其他类型的探针，如金属离子探针、荷电分子探针等。
这些探针通常具有特异性和灵敏性，能够提供对复杂生物系统的详细了解，从而推动生物技术和医学研究的发展。
总之，生物分析中的探针是一种重要的工具，可用于检测和研究生物分子和细胞内的靶分子。
生物素标记探针合成
生物素标记探针合成引言：生物素标记探针是生物学和生物化学研究中常用的工具，用于检测、定位和追踪特定的分子或细胞结构。
本文将介绍生物素标记探针的合成方法及其在科学研究中的应用。
一、生物素标记探针的合成方法1. 选择合适的生物素分子：生物素是一种维生素B群成员，具有高亲和力与亲和素结合。
在合成生物素标记探针时，首先需要选择合适的生物素分子作为标记物。
常用的生物素分子有生物素和二硫代生物素等。
2. 引入标记物：将所选择的生物素分子与所需的标记物进行化学反应，引入标记物。
常用的标记物有荧光染料、放射性同位素和酶等。
这样，生物素标记探针就可以通过标记物的特性进行检测和追踪。
3. 优化合成条件：在合成过程中，需要优化反应条件，如温度、pH 值和反应时间等，以确保合成的生物素标记探针具有良好的稳定性和活性。
二、生物素标记探针在科学研究中的应用1. 免疫组织化学：生物素标记探针可以与特定的抗体结合，用于检测和定位特定的蛋白质、细胞表面分子或细胞器结构。
通过对标记物的检测，可以实现对生物样本中目标分子的定量和定位分析。
2. 荧光显微镜技术：生物素标记探针可以与荧光染料结合，用于荧光显微镜技术。
通过荧光显微镜观察标记物的荧光信号，可以实现对细胞内特定分子的实时观察和分析。
3. 生物传感器：生物素标记探针可以与生物传感器结合，用于检测和定量分析目标分子的存在和浓度。
生物传感器可以利用标记物的特性，如荧光强度或电化学信号的变化，实现对目标分子的灵敏和快速检测。
4. 蛋白质互作研究：生物素标记探针可以用于研究蛋白质的互作关系，如蛋白质-蛋白质相互作用和蛋白质-核酸相互作用等。
通过将不同的蛋白质用生物素标记探针标记，可以实现对蛋白质互作关系的鉴定和研究。
结论：生物素标记探针在生命科学研究中具有广泛的应用前景。
通过合成生物素标记探针，可以实现对生物样本中特定分子的定量、定位和追踪。
生物素标记探针的合成方法及其在科学研究中的应用，为科学家们提供了强大的工具和技术支持，推动了生命科学的发展和进步。
DNA探针名词解释
DNA探针名词解释DNA探针是一种用于检测DNA序列的分子工具。
它是一小段具有特定序列的DNA片段，可以与待测DNA中具有互补序列的区域发生特异性的杂交反应。
DNA探针广泛应用于分子生物学、遗传学和生物医学研究中，可以用于分析基因组结构和功能，检测基因突变、染色体异常和DNA复制等重要生物过程。
DNA探针可以通过标记方法来检测。
常见的标记方法包括放射性标记、荧光标记和酶标记。
放射性标记是将DNA探针与放射性同位素结合，通过测量放射线的放射来检测DNA探针与待测DNA的结合情况。
荧光标记是将DNA探针与荧光染料结合，通过激光或紫外线照射，在荧光显微镜下观察荧光信号的强度和位置来检测DNA探针与待测DNA的结合情况。
酶标记是将DNA探针与酶结合，通过检测酶的催化反应产生的信号来检测DNA探针与待测DNA的结合情况。
DNA探针的应用非常广泛。
其中，基因检测是最常见的应用之一。
通过设计特异性的DNA探针，可以检测某个特定基因的存在与否，从而确定是否存在某种疾病或遗传突变。
此外，DNA探针还可以用于基因组结构分析。
通过设计多个DNA探针，可以在待测DNA中标记出特定的区域，从而了解基因组的组织和结构。
此外，DNA探针还可以用于DNA杂交和比较基因组学研究。
通过将DNA探针与其他物种的DNA杂交，可以研究物种间的亲缘关系和演化过程。
DNA探针的设计非常关键。
设计DNA探针时，需要考虑选择一个具有独特序列的区域作为目标，以确保特异性结合。
此外，还需要考虑探针的长度、GC含量和碱基序列等因素，以确保最佳的结合和探测效果。
最近，随着基因芯片和高通量测序技术的发展，DNA探针的设计越来越多样化和灵活化。
通过大规模的并行设计和合成，可以快速获得大量的DNA探针用于全基因组分析和组学研究。
总之，DNA探针是一种用于检测DNA序列的分子工具，具有多种标记方法和广泛的应用。
它在基因检测、基因组结构分析和比较基因组学等领域发挥着重要作用，为生物学和医学研究提供了强有力的技术支持。
rna探针标记原理
rna探针标记原理
RNA探针标记原理是利用RNA分子的互补配对特性，通过对待检样品中的目标RNA序列进行特异性配对，然后利用荧光染料或放射性同位素等标记物标记探针，从而实现对目标RNA的检测和定量。
具体原理如下：
1. 设计探针：根据目标RNA序列，设计一段具有高亲和力的寡核苷酸或寡肽探针。
探针的序列应该与目标RNA序列互补配对，以保证特异性。
2. 标记探针：在探针序列的适当位置引入标记物，常用的标记物有荧光染料、酶、放射性同位素、生物素等。
标记物的选择应根据实验的需要进行合理设计。
3. 条件选择：根据实验要求选择合适的探针标记条件。
例如，如果选择荧光染料作为标记物，需要选择适当的荧光染料和相关荧光探针，以及适当的光源和探测器。
4. 条件优化：针对不同目标RNA序列的检测，根据实验要求对探针标记条件进行优化。
这包括标记物的浓度、反应时间、反应温度等参数的优化。
5. 实验操作：将标记后的探针与待检样品中的目标RNA进行反应。
通过互补配对，探针能够特异性地与目标RNA结合。
接着，利用适当的方法，如荧光显微镜或放射性测量，检测探针与目标RNA的结合情况。
6. 结果分析：根据标记探针的特异性，以及探针与目标RNA
的结合情况，可以判断目标RNA的存在与数量。
根据实验需要，可以使用定量方法如荧光强度测定、放射性计数等定量分析手段。
综上所述，RNA探针标记原理是通过设计和标记特异性探针，利用互补配对原理实现对目标RNA的检测与定量。
这种方法
在基因表达、疾病诊断、药物研发等领域具有广泛应用。
southern印迹技术名词解释(二)
southern印迹技术名词解释(二)南方印迹技术名词解释1. 南方印迹技术 (Southern Blotting)南方印迹技术是一种分子生物学技术，用于检测DNA分子在细胞或组织中的存在和定位。
它的原理是通过电泳将DNA分子分离开，然后利用DNA探针与目标DNA序列特异性结合，最后通过探针标记物的检测来确定目标DNA的存在及其大小。
2. DNA探针 (DNA Probe)DNA探针是一种用于检测目标DNA序列的标记物。
它通常是一段特异性的单链DNA或RNA片段，可以与目标DNA序列互补配对。
DNA探针可以通过标记化学物质（如放射性同位素、荧光染料等）标记，以便于检测和定位目标DNA序列。
举例： DNA探针可以用于检测某个特定基因在某个组织中的表达水平。
例如，通过标记了荧光染料的DNA探针，科学家可以观察到某个基因在组织切片中的表达情况，从而了解基因在该组织中的功能和调控机制。
3. DNA电泳 (DNA Electrophoresis)DNA电泳是一种通过电场力将DNA分子在凝胶或琼脂糖基质中进行分离和定性的技术。
它利用DNA分子在电场中的迁移速度与分子大小、形状和电荷有关的特性，实现DNA分子的分离和鉴定。
举例： DNA电泳可以用于分离和区分不同长度的DNA片段。
例如，在南方印迹技术中，经过电泳分离后的DNA片段可以被转移到膜上，并通过后续的探针结合和检测来确定目标DNA片段的存在与否。
4. DNA杂交 (DNA Hybridization)DNA杂交是指通过两个互补的DNA序列在一定条件下形成双链结构的过程。
在南方印迹技术中，DNA杂交是指DNA探针与目标DNA序列的特异性结合，以便于后续的检测和分析。
举例： DNA杂交可以用于检测基因突变或多态性。
例如，通过将荧光标记的DNA探针与目标DNA杂交，可以发现特定的基因突变或多态性，从而了解这些变异对个体的遗传特征或疾病易感性的影响。
5. 南方印迹仪 (Southern Blot Apparatus)南方印迹仪是用于实施南方印迹技术的专门仪器设备。
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发展简史
1969年，美国耶鲁大学Gall和Pardue首先创立，用 爪蟾核糖体基因探针与其卵母细胞杂交， 确定该基因定位于卵母细胞的核仁中。
1971年， Jacob 创立电镜原位杂交技术检测爪 蟾卵母细胞DNA
基本概念
核酸原位杂交技术：利用放射性或非放射性标记的已知核酸探针， 通过放射自显影或非放射检测系统检测组织、细胞及染色体上特 异DNA或RNA序列的一种技术，
一种直接、简便的研究基因定位和表达的方法
杂交双方：待测核酸序列、核酸探针
待测核酸序列：克隆的基因片段，未克隆化的基因组DNA和细胞 总RNA。
应用原位杂交技术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白 质的基因表达。
此方法有很高的敏感性和特异性，可进一步从分子水平来探 讨细胞的功能表达及其调节机制。
原位杂交的基本原理
在细胞或组织结构保持不变的条件下，用标记的已知的 RNA核苷酸片段，按核酸杂交中碱基配对原则，与待测 细胞或组织中相应的基因片段相结合（杂交），所形成 杂交体 (Hybrids）经显色反应后在光学显微镜或电子显 微镜下观察其细胞内相应的mRNA、rRNA和tRNA分子。
DNA/RN用于基因组DNA的定性定量分析、酶切图谱分析、基因 突变分析及限制性片段长度多态性分析（RFLP）等。
RNA印迹技术 (Northern blotting) 用于RNA的定性定量分析。靶核酸是RNA；电泳时，
凝胶中加入变性剂，防止RNA分子形成二级结构
核酸探针：用放射性同位素、非放射性荧光染料直接或间接标记 的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片 段。
分为cDNA探针、基因组DNA探针、寡核苷酸探针、RNA探针
分子杂交
分子杂交(简称杂交,hybridization) 就是应用核酸分子的变性和复性的性 质,使来源不同的DNA(或RNA)片段,按碱基互补关系形成杂交双链分子。
1. 定义、基本概念和发展简史 2. 原位杂交的基本原理 3. 探针 (probe)与探针的标记物 4. 探针标记法与探针的纯化 5. 探针制备技术 6. 核酸分子杂交信号的检测 7. 地高辛标记寡核苷酸探针的原位杂交方法
定义
原位杂交组织化学（ISHH）简称原位杂交 是将分子杂交与组织化学相结合的一项技术 在原位检测组织、细胞中的特定核酸序列
• 标记碱性磷酸酶—抗碱性磷酸酶显色 • 优点：完全、方便、省时，敏感性和质
量控制较好，可检测人基因组DNA的单拷 贝基因，背景反差好。
发展简史
• 1991年 Couton建立将非放射性标记技 术更新为亲和复合物标记技术 （ Affinity-complex Labelled Probes ， ACLP）。
80年代，原位杂交技术飞速发展 现已能检测只有数百碱基对的较小分子 DNA和含量很低的mRNA
当时的工作多采用冰冻组织切片或培养细胞，探 针均采用同位素标记。
同位素标记缺点：污染环境，有害人体，半衰期局 限性
发展简史
• 1981，Bauman等首先应用荧光素标记cRNA探 针做原位杂交，然后用荧光显微镜观察获得成 功——荧光杂交技术。
• 生物素标记探针技术目前已被广泛应 用——酶促生物素标记技术
发展简史
1987年 Pezzella用磺基化DNA探针，以单克隆 抗体识别磺基化探针，通过免疫组化显示结合 的单克隆抗体，对杂交结合探针定位。
• 优点：探针标记简便，不需作切片平移标记， 敏感度较高。
发展简史
• 1987年，将地高辛标记的有关试剂及药 盒投放市场。地高辛标记技术引起科技 工作者的极大兴趣。
• 发展趋势：实验室常规技术和临床日常 应用的诊断技术。
原位杂交的基本原理
以DNA分子复制原理为基础。
两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，通过氢键结合，形 成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 双键分子，应用带有 标记的（放射性同位素，如3H、35S、32P，荧光素生物素、 地高辛等非放射性物质）DNA或RNA片段作为核酸探针，与 组织切片或细胞内待测核酸（RNA或DNA）片段进行杂交， 然后可用放射自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察 目的 mRNA或DNA 的存在并定位；
原位杂交
将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交， 从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。
探针
是指带有某些标记物(如放射性同位素32P，异硫氰酸荧光素等)的特异性 核酸序列片段。设法使一个核酸序列带上32P，那么它与靶序列互补形成 的杂交双链，就会带有放射性。
核酸分子杂交：按照碱基互补配对原则，将不同来源的 序列互补单链的DNA/DNA，RNA/RNA，RNA/DNA，互补配 对成双链杂交分子，这一过程叫核酸分子杂交。
原位杂交：用核苷酸探针对特殊的核苷酸顺序在其原位进行 杂交,叫原位杂交。可用于DNA、RNA定位研究。
反义技术
主要是引入目的基因mRNA 的反义序列或与目的基因 互补配对的反义基因，通 过它们的杂交而阻遏或降 低目的基因表达的一种方 法。当引入的反义核酸与 相应序列互补配对后，用 于表达目的基因的mRNA量 大大减少，使细胞中靶基 因编码的蛋白合成量也大 为减少
背景
核酸mRNA、DNA
RT-PCR Realtime PCR
Northern blot （RNA） Southern blot（DNA） 原位杂交 指纹分析（Finger printing） 基因芯片（ DNA microarray）
蛋白质
ELISA Westhern blot 免疫组化
主要内容
• 1982，Shroyer报道用2，4二硝基苯甲醛（DNP） 标记DNA探针，使该DNA探针具有抗原性，然后用 兔抗DNP的抗体来识别杂交后的探针，最后经免疫 过氧化物酶的方法来定位杂交探针
• 上述两种方法敏感度不高，应用不够普遍。
发展简史
• 生物素标记探针技术是Brigat（1983） 首先建立的，它利用生物素标记的探针 在组织切片上检测了病毒DNA，通过生物 素与抗生物素结合，过氧化物酶-抗过氧 化物酶显示系统显示病毒DNA在细胞中的 定位。