刚地弓形虫_遗传筛选与DHFR_TS相连的融合蛋白

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刚地弓形虫苹果酸脱氢酶基因编码蛋白主要特性与抗原表位的生物信息学分析

Ｃ．ＨＮ２（）Ｓ。，分子质量单位为３３７７７．５，等电点为６．０１，波长２８０ｎｍ时的吸光度（Ａ）值为０．３６４，半衰期为３０ｈ，有９个表面可及性参数≥ １．９的区域、４个亲水性参数得分≥ １．９的区域、７个柔韧性参数得分 ≥ ２的区域、１４个翻译后修饰位点和１４个潜在抗原表位，为可溶性表达蛋白。结论为弓形虫病疫苗候选抗原。ＴｇＭＤＨ基因编码蛋白为可溶性蛋白，有多个抗原表位，具有免疫原性，可作
刚地弓形虫苹果酸脱氢酶基因编码蛋白主要特性与抗原表位的生物信息学分析
刘转转，杨燕萍，郑葵阳，刘宜升
摘要：目的用生物信息学方法分析刚地弓形虫苹果酸脱氢酶（ＴｇＭＤＨ）基因编码蛋白的结构与抗原表位，预测该蛋
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ｔｈｅｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆｔｈｅｍａｌａｔｅｄｅｈｙｄｒ。ｇｅｎａｓｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍＴｏａ＇ｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉ（ＴｇＭＤＨ）ｗａｓｐｒｅｄｉｃｔｅｄａｎｄｉｔｓｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｅｐｉｔｏｐｅｓｗｅｒｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄｂｙｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓａｐｐｒｏａｃｈｅｓ．Ｔｈｅｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ｐｈｙｓｉｃｏ

刚地弓形虫肌动蛋白profilin的原核表达和纯化

刚地弓形虫肌动蛋白profilin的原核表达和纯化李会敏;伊焕发【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2017(043)006【摘要】目的:探讨刚地弓形虫肌动蛋白profilin(TgPRF)的原核表达体系和纯化条件,为后续的抗肿瘤免疫佐剂研究提供依据.方法:以弓形虫RH株速殖子的cDNA为模板,采用一对特定的引物扩增TgPRF基因的编码区.PCR产物双酶切后克隆入pET28a(+)载体中.重组的pET28a(+)-TgPRF质粒转化E.coli DH5α感受态细胞.双酶切鉴定阳性克隆,并选取测序正确的质粒转化E.coli BL21(DE3)表达菌,经IPTG 诱导表达4 h,SDS-PAGE法检测TgPRF蛋白的表达,Western blotting法检测重组蛋白His-prolilin的表达.结果:PCR扩增产物长度为492 bp.经双酶切和测序,重组质粒pET28a-TgPRF连接产物构建成功.SDS-PAGE检测,目的蛋白在超声菌液的上清中表达.经Ni-NTA琼脂糖凝胶柱纯化,获得纯化的TgPRF蛋白(纯度>90%).Western blotting检测,重组TgPRF蛋白能被Anti-His抗体识别.结论:成功构建重组质粒pET28a-TgPRF,并实现可溶性原核表达.%Objective:To discuss the prokaryotic expression system and purification conditions of Toxoplasma gondii profilin-like protein (TgPRF), and to provide basis for the study on anti-tumor immuno-adjuvant. Methods:The coding region of TgPRF gene was amplified with a pair of specific primers which were designed according to the cDNA of tachyzoites of Toxoplasma gondii RH strain.The PCR products were cloned into the pET-28a (+ ) vector after double enzyme digestion. The recombinant pET28a (+ )-TgPRF plasmidwas transformed into E.coli DH5αcells.The positive clones were selected by the double restrictive enzyme digestion and sequencing.The correctpET28a (+)-TgPRF plasmid was transformed into E.coli BL21 (DE3)and induced for 4 h by IPTG.The expression of recombinant TgPRF protein was analyzed by SDS-PAGE method;the expression of recombinant protein His-profilin was detected by Western blotting method.Results:The length of product of PCR was 492 bp.The recombinant plasmid pET28a-TgPRF was confirmed by double restriction enzyme digestion and sequencing.The SDS-PAGE results showed that the target protein was expressed in E.coli BL21 (DE3)in bacteria supernatant.The purified TgPRF protein was obtained by Ni-NTA agarose gel column chromatography with the purity>90%.The Western blotting results revealed that the recombinant TgPRF protein could be recognized by Anti-His antibody.Conclusion: The recombinant plasmid pET28a-TgPRF is successfully constructed,and the TgPRF protein is obtained with the soluble prokaryotic expression.【总页数】6页(P1109-1114)【作者】李会敏;伊焕发【作者单位】吉林大学第一医院转化医学研究院移植免疫实验室,吉林长春130021;吉林大学第二医院检验科,吉林长春 130041;吉林大学第一医院转化医学研究院移植免疫实验室,吉林长春 130021【正文语种】中文【中图分类】R382.5【相关文献】1.刚地弓形虫肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白家族的研究进展 [J], 李润花;李雅清;殷国荣2.牛骨骼肌G-肌动蛋白的分离纯化及超高压处理对G-肌动蛋白的影响 [J], 王志峰;王媛;李金柱;包·格日勒图3.人β肌动蛋白基因原核表达载体的构建及其表达和纯化 [J], 宋烨琼;郭靖;徐小洁;李玲;梁迎春;洪甜;纪贝贝;叶棋浓;吕朝晖4.橡胶树肌动蛋白解聚因子原核表达及纯化 [J], 邓治;杜磊;李德军5.刚地弓形虫肌动蛋白基因的克隆与表达 [J], 李润花;郝海霞;王海龙;孟晓丽;申金雁;殷国荣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

《刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗的构建及SRS29C与SAG1联合免疫保护性比较研究》

《刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗的构建及SRS29C与SAG1联合免疫保护性比较研究》一、引言刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种重要的胞内寄生虫，其感染范围广泛，对人类和动物健康构成严重威胁。

随着生物技术的进步，核酸疫苗作为一种新型的疫苗形式，因其高效、安全、易于制备等优点，逐渐成为抗寄生虫病研究的热点。

本研究旨在构建刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗，并对其与SAG1蛋白的联合免疫保护性进行比较分析，为进一步研发更有效的刚地弓形虫病防治方法提供理论依据。

二、材料与方法1. 材料刚地弓形虫SRS29C基因序列、SAG1基因序列、相关酶、载体等。

2. 方法（1）SRS29C核酸疫苗的构建：根据SRS29C基因序列设计引物，通过PCR扩增目的基因，将目的基因克隆至真核表达载体，构建SRS29C核酸疫苗。

（2）SAG1蛋白的制备：通过基因工程方法表达SAG1蛋白，并进行纯化。

（3）免疫保护性比较研究：将动物分为不同组别，分别接种SRS29C核酸疫苗、SAG1蛋白疫苗以及联合接种，观察各组动物的免疫反应及对刚地弓形虫感染的抵抗力，比较SRS29C与SAG1的联合免疫保护性。

三、实验结果1. SRS29C核酸疫苗的构建成功通过PCR扩增、克隆至真核表达载体等步骤，成功构建了SRS29C核酸疫苗。

2. SRS29C与SAG1的免疫保护性比较（1）单独接种SRS29C核酸疫苗组：动物对刚地弓形虫感染的抵抗力有所提高，但效果有限。

（2）单独接种SAG1蛋白疫苗组：动物对刚地弓形虫感染的抵抗力明显提高，但免疫反应较强，可能出现一定程度的副作用。

（3）联合接种SRS29C核酸疫苗与SAG1蛋白疫苗组：动物对刚地弓形虫感染的抵抗力显著提高，且免疫反应较为温和。

四、讨论本研究成功构建了刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗，并通过比较其与SAG1蛋白的免疫保护性发现，联合接种SRS29C核酸疫苗与SAG1蛋白疫苗可显著提高动物对刚地弓形虫感染的抵抗力，且免疫反应较为温和。

刚地弓形虫蛋白质分拣定位与功能研究概述

白还可以和棒状体蛋白Ｒ２和Ｒ４相互结０Ｐ０Ｐ合［。所以，某种意义上讲．４弓形虫在入侵宿４一从冈地主细胞时只是暂时将自身蛋白释放到宿主细胞浆，
地弓形虫具备精密而复杂的细胞入侵、胞内分裂细
和逸出机制。在这３个过程中，地弓形虫的各种刚蛋白质起着举足轻重的作用。因此，刚地弓形虫的蛋白质合成、分拣和分泌机制逐渐成为寄生虫学研
文献标识码：Ａ
文章编号：５９６０（００ｌ一０８００２～０５２１）ｌ４２０
刚地弓形虫（：ｐｌｓｏｄｉ是一种专性Ｔｏｃａｍａｇｎｉ）ｏ
的研究就证明，ＯＰＲ１的蛋白前体片段对它向棒状
状体和致密颗粒３种细胞器中的蛋白质经核糖体合
成后都要通过信号肽识别进入内质网，在高尔基并体完成加工修饰，终定位到虫体的不同部位。研最
究发现，Ｉ定的蛋白（ＳＧｓ通过组成型分ＧＰ一锚如Ａ）
主细胞浆中，时形成一个不含虫体的空泡结构同（ｖｃｏｅ）ｅａｕｌｓ。与带虫空泡相似，种泡状结构同样这
对弓形虫体内蛋白早期分泌路径进行分析后发现，弓形虫对组成型及调节蛋白分泌的分拣机制与高等真核细胞具有多重类似点［。定位到微线、１棒

刚地弓形虫：遗传筛选与DHFR—TS相连的融合蛋白

维普资讯
２００２年５月
第２９卷
第３期
正在发生的混合型Ｔｈ／２反应可能被 “ ｌＴｈ重设定 ” 完全的细胞介导的１ｈ反应。为、ｌ
（杨彬摘官亚宜校）
台受体是树脂中的肝素成份。
于ＤＲ内包含２个氨基酸突变的ＨＦＤＨＦＲｍ２一Ｓ，有高水平的乙胺嘧啶抗ｍ３＂具Ｉ性，此已作为多种转染载体的阳性选择标因记。ＤＨＦＴＳ的活性功能区在不同虫种之Ｒ．间具有高度保守性，是，同虫种的｛Ｒ但不Ｆ和ＴＳ的衔接区域之间的同源性很低，测推此衔接区主要起连接ＤＨＦＲ和ＴＳ的作用。据此，者通过将编码ＦＡＧ多肽的ＤＮＡ作Ｌ片段定向克隆到ＤＲ和＂Ｓ的衔接区域，ＨＦＩ构建了一个新的转染载体ＤＲｒ２ａ．ＨＦｎｎ３
基酸的ＤＮＡ片段（ＲＡＩ．１）（ＲＡ２．Ｓ７１０和Ｓ２７
不同的各种未标记聚糖进行竞争性实验，表
明该结合也具有特异性。当速殖子与肝素于３ ℃ 共同孵育后，７荧
光很快集中为较大的光点，随着时间延长，并
该结合具有可饱和性。用结构和硫酸化程度
为验证此载体能否快速、定表达对寄稳生虫本身有毒性的外源基因的预测，者选作择恶性疟原虫丝氨酸重复抗原（ＥＳＲＡ）为作外源基因。ＳＲＡ氨基末端的Ｓ４ＥＥ７区域能诱导产生抗体从而抑制寄生虫的发育，有现刚地弓形虫表达系统均未能成功短暂或稳定表达ＳＲＡ功能区。作者首先将编码ＳＲＡＥＥ氨基末端１７—１０和羧基末端２７—３２氨ｌ２５

刚地弓形虫自噬相关蛋白8(TgAtg8)多克隆抗体制备及初步应用

刚地弓形虫自噬相关蛋白8(TgAtg8)多克隆抗体制备及初步应用谭峰;华倩倩;李星潘;李相志;梁韶晖【期刊名称】《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》【年(卷),期】2014(32)2【摘要】目的制备、评价特异性抗刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)自噬相关蛋白8(autophagy protein 8,TgAtg8)多克隆抗体。

方法生物信息学方法分析弓形虫基因组中自噬相关蛋白的基因序列和氨基酸序列。

以刚地弓形虫RH株速殖子cDNA为模板,PCR扩增TgAtg8编码基因,克隆入pGEX-6p-1载体,构建pGEX-6p-1-TgAtg8重组质粒,转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21。

异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况。

谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签亲和层析法纯化表达产物。

以纯化的TgAtg8蛋白为抗原免疫日本大耳白兔,获得特异性抗TgAtg8多克隆抗体。

以制备的多克隆抗体作为一抗,进行Western blotting分析和间接免疫荧光(IFA)检测。

结果双酶切和测序结果证实,原核表达质粒pGEX-6p-1-TgAtg8构建成功。

SDS-PAGE和Western blotting结果表明,TgAtg8蛋白在E.coli BL21中获得高效表达,其融合蛋白相对分子质量(Mr)约40 000,与理论值相近。

Western blotting结果证实,所制备的多克隆抗体能特异性识别融合蛋白TgAtg8和虫株体内天然的TgAtg8蛋白。

IFA实验表明,TgAtg8均匀分布于虫体胞浆中,但在自噬诱导培养后,TgAtg8逐渐聚集成颗粒状。

结论制备的特异性抗TgAtg8多克隆抗体可用于检测虫体内TgAtg8蛋白在弓形虫自噬形成过程中的变化情况。

刚地弓形虫ppt课件

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（一）致病阶段：
速殖子（急性期），包囊（慢性期）
（二）致病机制：
1、虫体毒力： 1）弓形虫毒素：是一种免疫原形不强的抗原，接种到健康小鼠可引起惊厥和后肢麻痹，几分钟后死亡。 2）弓形虫素：由弓形虫体提取。对鸡胚有明显致畸作用，可能与胚胎发育异常有关。 3）弓形虫因子：由弓形虫培养液中提取，将其注入健康小鼠体内，小鼠出现懒动内、耸毛，体重减轻，肝脾肿大，胸腺委缩。注入小鼠，可阻止母鼠受孕，或引起流产，中枢神经系统受损等。
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五、流行与防治
（Epidemic & prevention)
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1、分布：
本病呈世界性分布，血清学调查人群抗体阳性率为 25%～50%，全球约有10亿人受感染，多属隐性感染。且为为人兽共患寄生虫病，家畜感染率亦高。
我国血清调查人群感染率为5±％，家畜10－50％，我省11％±（均为人群抗体阳性率）。
刚地弓形虫
（Toxoplasma gondii)
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1
引言（introduction)
1908 年法国学者 Nicolle 在突尼斯的一种啮齿动物刚地梳趾鼠的肝脾单核细胞内发现，其滋养体呈弓形，故名弓形虫。
弓形虫寄生在人及其他多种哺乳动物除红细胞外的几乎所有有核细胞内，引起人兽共患的弓形虫病（toxoplasmosis）。孕妇在孕期感染可致流产、早产、死胎、畸胎；后天感染常损害脑、眼等多种脏器，引起脑炎、癫痫、精神异常等。我国首例弓形虫感染是钟惠澜1957年从猫和兔中发现，续后
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在中间宿主体内
卵囊
吞食

一种快速检测弓形虫的重组蛋白及其制备方法和应用[发明专利]

专利名称：一种快速检测弓形虫的重组蛋白及其制备方法和应用
专利类型：发明专利
发明人：华海涌,余铭恩,吴琼杉,胡祥叶,陈伟,卢萍
申请号：CN201711414639.4
申请日：20171225
公开号：CN108165569A
公开日：
20180615
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于生物工程技术领域，涉及弓形虫重组抗原的制备和诊断应用。

本发明分析选择弓形虫P24、P30、GRA2、GRA6抗原优势表位，通过基因工程技术构建原核表达载体并实现融合表达；将该原核表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)并筛选得到重组表达菌株；利用该表达菌株表达并纯化融合蛋白G267；利用该融合蛋白建立弓形虫胶体金诊断方法。

申请人：江苏省血吸虫病防治研究所
地址：214064 江苏省无锡市滨湖区梅园杨巷117号
国籍：CN
代理机构：无锡华源专利商标事务所(普通合伙)
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一种融合蛋白及一种犬弓形虫亚单位疫苗及其疫苗组合物[发明专利]

专利名称：一种融合蛋白及一种犬弓形虫亚单位疫苗及其疫苗组合物
专利类型：发明专利
发明人：侯峰,才学鹏,曹利利,刘业兵,陈星远,印春生,赵耘,李思明,宫鹏涛,丁鹤,陈丽萍,王典
申请号：CN202011188495.7
申请日：20201030
公开号：CN112279925A
公开日：
20210129
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种融合蛋白及其核苷酸序列，包括弓形虫亲环素蛋白亚单位和T细胞抗原表位。

以及一种使用该融合蛋白的用于犬预防弓形虫病的疫苗及其疫苗组合物。

本发明的有益效果在于，所述融合蛋白具有高表达量、高免疫原性的特点。

所述疫苗及疫苗组合物，可有效预防犬弓形虫病并且疫苗稳定性高。

申请人：北京海木集团有限公司,中国兽医药品监察所
地址：100085 北京市海淀区上地信息路26号07层0705室
国籍：CN
代理机构：天津市尚文知识产权代理有限公司
代理人：徐杨阳
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弓形虫P30基因MBP融合蛋白的表达

弓形虫P30基因MBP融合蛋白的表达丛华;古钦民;黄勇;李瑛;禹卉【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2000(016)001【摘要】目的构建弓形虫主要表面抗原P30基因的原核表达载体并在E.coli中表达。

方法根据已发表的弓形虫P30基因序列，自行设计合成一对引物并在引物5'端分别引入限制性内切酶EcoRI、SalI酶切位点，用PCR技术从弓形虫RH株基因组DNA中扩增P30基因片段，插入pMALP2质粒转化大肠杆菌DH5a α感受态细胞，于氨苄LB培养平板上筛选阳性克隆，经过酶切及PCR扩增签定重组子。

将阳性重组子经IPTG诱导表达，SDS-PAGE及免疫印迹分析。

结果从弓形虫RH 株DNA中扩增出976bp的P30基因，构建成功pMALP2～P30重组质粒；SDS-PAGE电泳及Western-blot显示MBP/P30融合蛋白条带的分子量约为77.5kD，减去MBP的分子量43kD，得出P30蛋白分子量为34.5kD，且能被弓形虫高免鼠血清识别。

结论从弓形虫基因组DNA中获取P30基因，并成功构建pMALP2-P30重组质粒，诱导表达了P30的融合蛋白。

为进一步P30蛋白的分离纯化及其对动物的免疫原性研究作好准备。

【总页数】3页(P29-31)【作者】丛华;古钦民;黄勇;李瑛;禹卉【作者单位】山东医科大学寄生虫教研室济南，250012;山东医科大学寄生虫教研室济南，250012;山东医科大学寄生虫教研室济南，250012;山东医科大学寄生虫教研室济南，250012;山东医科大学寄生虫教研室济南，250012【正文语种】中文【中图分类】R382.5【相关文献】1.刚地弓形虫NT株P30基因的克隆与表达 [J], 张理航;刘茂军;吕芳;李贺侠;吴叙苏;冯志新;邵国青2.弓形虫P30基因的克隆及其在E.coli中的融合表达 [J], 王素华;曲道峰;蔡渭明;杜爱芳3.弓形虫主要表面抗原基因（P30）大肠杆菌中以融合蛋白形… [J], 古钦民;陈慧红4.RH株弓形虫表面抗原p22基因与p30基因联合表达后的免疫活性 [J], 王伟;古钦民;刘师莲;何深一;卞继峰;李瑛;周怀瑜;赵群力5.弓形虫P30基因非融合蛋白表达的研究 [J], 丛华;古钦民;周怀瑜;赵群利;何深一;李瑛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

刚地弓形虫主要抗原B细胞表位的筛选及鉴定

刚地弓形虫主要抗原B细胞表位的筛选及鉴定曹利民;潘宇红;卢志贤;陈江;陈蓉芳;程华莉;姜东林;司进;章辉;朱荫昌【期刊名称】《中国血吸虫病防治杂志》【年(卷),期】2007(19)1【摘要】目的筛选刚地弓形虫主要抗原B细胞表位并在原核表达载体中表达,对纯化的表位重组蛋白进行免疫反应性鉴定。

方法用计算机软件BioSun、DNAstar综合分析6个弓形虫主要抗原的亲水性、可及性、柔韧性、二级结构、极性参数等,每一抗原分子预测2个最佳表位,设计合成24条共12对寡核苷酸,两端分别引入NocI、XhoI酶切位点,退火形成的双链定向克隆至原核表达载体pET-32c中,EcoRI单酶切鉴定重组质粒Epitope/pET-32c。

将含有Epitope/pET-32c的BL21单菌落接种至LB肉汤培养基中培养,导入表达。

表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,免疫印迹试验(Westernblot)分析重组表位蛋白与弓形虫抗原免疫血清的免疫反应性。

结果成功构建了12个原核表达质粒Epitope/pET-32c,并经测序证实,在E.coliBL21有11个表位基因能有效表达重组融合蛋白;纯化的表位蛋白大小均在20.0kDa左右;Westernblot结果显示表位蛋白SAG2-A、SAG3-B能被弓形虫抗原免疫血清识别,且反应较强,SAG2-B为弱阳性,其余的则不能被识别。

结论成功筛选到3个弓形虫B细胞表位基因,为进一步构建弓形虫复合表位抗原诊断弓形虫病奠定了基础。

【总页数】4页(P24-27)【关键词】弓形虫;抗原;B细胞表位;鉴定【作者】曹利民;潘宇红;卢志贤;陈江;陈蓉芳;程华莉;姜东林;司进;章辉;朱荫昌【作者单位】江苏省无锡市第三人民医院;江苏省寄生虫病防治研究所【正文语种】中文【中图分类】R382.5【相关文献】1.HBeAg人类白细胞抗原-A0201限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的筛选与鉴定[J], 陈娟;吴金明;张欢;黄兰2.HPV16 E7抗原的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的筛选与鉴定 [J], 徐云升;郝飞;宋志强;钟白玉;郝进;叶庆佾3.抗人白细胞介素15中和抗体识别抗原表位的噬菌体肽库筛选与鉴定 [J], 高源;郝强;王舒宁;张伟;薛晓畅4.HIV蛋白质优势B细胞抗原表位的筛选、重组表达与抗原性鉴定 [J], 杜勇;徐静;李敬云;侯利华;王海涛5.HCV包膜蛋白E2的B细胞抗原模拟表位的筛选、重组表达与抗原性鉴定 [J], 史宣玲;曹凤;季阳;杜勇;侯利华;王海涛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

刚地弓形虫习题

刚地弓形虫习题一、单项选择题1、刚地弓形虫寄生在人体的（C）A. 红细胞B. 淋巴液C. 有核细胞D. 血清E. 脑脊液2、刚地弓形虫的侵入途径是（E）A. 仅经输血B. 仅经胎盘C. 经媒介昆虫叮咬D. 直接经皮肤侵入E. 主要经口3、关于刚地弓形虫的实验诊断以下说法错误的是（A）A. 以查血液中包囊为主B. 离心沉淀患者体液、涂片染色C. 动物接种法D. 细胞培养法E. 血清学检査4、弓形虫的生活史类型属于（E）A. 直接接触传播B. 间接接触传播C. 人际传播D. 虫媒传播型E. 循环传播型5、下列选项中哪个是急性弓形虫病的主要致病阶段（B）A. 缓殖子B. 速殖子C. 裂殖体D. 子抱子E. 配子体6、弓形虫成熟卵囊内含有（C）A. 1个孢子囊，每个孢子囊内含有2个子孢子B. 1个孢子囊，每个孢子囊内含有4个子孢子C. 2个孢子囊，每个孢子囊内含有4个子孢子D. 2个孢子囊，每个孢子囊内含有2个子孢子E . 2个孢子囊，每个孢子囊内含有1个子孢子（7-9题共用题干）【病例】病例1：某顺产婴儿，女，7月，脑积水，脑部X线检查显示一块脑钙化灶，弓形虫血清学试验阳性。

病例2：女，39岁，发热、嗜睡，X线检査显示左下叶及右中叶呈浸润性改变，此后出现尿失禁，突然半身瘫痪，语言迟钝，白细胞总数3.9x 109/L，血红蛋白105g/L，抽取脑脊液检査白细胞600个/μl，其中大多数为中性粒细胞，蛋白82mg/L。

细菌和霉菌培养阴性，住院12天进行骨髓穿刺检査，发现含有数十个新月形虫体的假包囊。

同天进行弓形虫血清学试验（阳性），于入院两周后死亡。

7、上述2个病例均诊断为（B）A. 阿米巴病B. 弓形虫病C. 原发性脑膜炎D. 结核性脑膜炎E. 黑热病8、在诊断该类疾病时你还需要询问什么病史（A）A. 是否有与猫或家畜接触史B. 是否有生食水生植物史C. 是否有被白蛉叮咬史D. 游泳史E. 是否有吃生鱼片习惯9、病例1中的患儿先天性感染是来自（D）A. 饮用污染的牛奶B. 白蛉媒介C. 饮用生水D. 母体胎盘E. 分娩时产道二、多项选择题1、刚地弓形虫寄生在人体的阶段有（BCE）A. 裂殖体B. 包囊C. 假包囊D. 配子体E. 滋养体2、刚地弓形虫的感染阶段有（ABCE）A. 包囊B. 假包囊C. 滋养体D. 子孢子E. 卵囊三、填空题1、刚地弓形虫假包囊内的滋养体称（速殖子），包囊内滋养体称（缓殖子）。

刚地弓形虫肌动蛋白基因的克隆与表达

刚地弓形虫肌动蛋白基因的克隆与表达李润花;郝海霞;王海龙;孟晓丽;申金雁;殷国荣【期刊名称】《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》【年(卷),期】2013(31)5【摘要】目的克隆和表达刚地弓形虫肌动蛋白(TgACT)基因,并分析其免疫反应性。

方法提取弓形虫RH株速殖子的总RNA。

根据TgACT基因编码序列(登录号为XM_002369622.1)设计合成引物,进行逆转录PCR(RT-PCR)扩增,扩增产物经双酶切后连接入pET-30a(+)载体。

将重组质粒pET30a-TgACT转化至大肠埃希菌(E.coli)DH5α,阳性菌落经PCR和双酶切鉴定,并测序。

pET30a-TgACT在E.coli BL21(DE3)中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经SDS-PAGE 鉴定。

分别用抗多聚组氨酸标签(Anti-His)抗体和兔抗弓形虫血清为一抗进行蛋白质印迹(Western blotting)分析。

结果 RT-PCR扩增产物约为1 100 bp。

菌落PCR、双酶切及测序结果显示,重组质粒pET30a-TgACT构建成功。

SDS-PAGE结果表明,目的蛋白在E.coli BL21(DE3)中以包涵体形式表达,相对分子质量(M r)约为49 000。

通过蛋白的变性和复性处理及纯化,获得可溶性纯化蛋白。

Western blotting结果显示,重组TgACT蛋白能被Anti-His抗体和兔抗弓形虫血清识别。

结论成功构建重组质粒pET30a-TgACT,获得刚地弓形虫重组肌动蛋白,且具有免疫反应性。

【总页数】4页(P352-355)【关键词】刚地弓形虫;肌动蛋白;基因克隆;原核表达;免疫反应性【作者】李润花;郝海霞;王海龙;孟晓丽;申金雁;殷国荣【作者单位】太原师范学院生物系;山西医科大学医学寄生虫学研究所【正文语种】中文【中图分类】R382.5【相关文献】1.刚地弓形虫DXR基因的克隆表达与生物学特性分析 [J], 章莹;宗红英;何立;蔡国斌2.刚地弓形虫SRS29C截短型基因的克隆及原核表达质粒的构建 [J], 袁娣;邵怡;张同瑶;姜阜杉;李秀荣;宋淇淇3.刚地弓形虫自噬相关蛋白3基因的克隆表达与多抗制备 [J], 华倩倩;李相志;万玉静;陈弟;赵徐寒晖;蒋凯;胡昕;潘长旺;谭峰4.白纹伊蚊β-肌动蛋白基因片段的克隆及其作为基因表达内参照的应用 [J], 焦健华;马磊;张东辉5.刚地弓形虫苹果酸脱氢酶基因的克隆表达及免疫原性分析 [J], 刘转转;杨燕萍;殷国荣;王海龙;李雅清;祝建疆;刘宜升因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

刚地弓形虫P30两个不同片段的克隆、表达及鉴定

刚地弓形虫P30两个不同片段的克隆、表达及鉴定褚宏亮;姚永伟;芦王英;刘剑南;陈玲;侯敏;章子豪;张耀娟【期刊名称】《南京医科大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2004(024)003【摘要】目的:构建刚地弓形虫(简称弓形虫)主要表面抗原P30基因的2个不同片段的克隆并进行表达、鉴定.方法:根据已发表的弓形虫P30基因序列,参考有关文献设计合成两对引物,用PCR从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出P30基因的两个不同片段,分别构建T-A克隆,经PCR扩增及酶切鉴定后,进行测序,再亚克隆入pMAL-p2质粒并转化DH5α感受态细胞,于氨苄青霉素LB平板上初步筛选阳性克隆,再经酶切及PCR扩增鉴定重组子.将重组子转入表达菌BL21,用IPTG进行诱导表达,并对所表达的蛋白以western blot鉴定.结果:成功构建相应的T-A克隆及pMAL-p2亚克隆,经诱导、表达和鉴定,证实2个表达产物均为目的蛋白,其分子量分别为70和73Ku.结论:成功获得弓形虫主要表面抗原P30的2个表达产物,为其进一步的纯化及应用奠定了基础.【总页数】5页(P275-279)【作者】褚宏亮;姚永伟;芦王英;刘剑南;陈玲;侯敏;章子豪;张耀娟【作者单位】南京医科大学病原生物学教研室,江苏,南京,210029;南京医科大学病原生物学教研室,江苏,南京,210029;南京医科大学病原生物学教研室,江苏,南京,210029;南京医科大学病原生物学教研室,江苏,南京,210029;南京医科大学病原生物学教研室,江苏,南京,210029;南京医科大学病原生物学教研室,江苏,南京,210029;南京医科大学病原生物学教研室,江苏,南京,210029;南京医科大学病原生物学教研室,江苏,南京,210029【正文语种】中文【中图分类】R382.5【相关文献】1.小反刍兽疫病毒N基因部分片段克隆表达及鉴定 [J], 祁光宇;刘斌;陈晓宇;王赛错;苟慧天;黄银君;穆克斌;刘学荣2.人Tamm-Horsfall片段蛋白的表达及单克隆抗体的制备和鉴定 [J], 马红雨;叶龙;祁术元;全首祯;朱美财3.弓形虫主要表面抗原P30两个不同片段的重组表达、纯化及应用 [J], 褚宏亮;姚永伟;芦王英;侯敏;章子豪;张耀娟4.刚地弓形虫磷酸甘油酸变位酶2基因片段克隆、表达及抗原性分析 [J], 殷丽天;王芬;孟晓丽;王海龙;刘红丽;申金雁;殷国荣5.弓形虫P30蛋白抗原表位的克隆表达及纯化鉴定 [J], 李越希;陶开华;张锦海;潘明洁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。