菊苣根化学成分研究_何轶

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菊苣菊粉提取与纯化研究

第34卷　第6期西北农林科技大学学报(自然科学版)V ol.34N o.62006年6月Jo ur.of N or thw est Sci-T ech U niv.o f A gr i.and Fo r.(N at.Sci.Ed.)Jun.2006菊苣菊粉提取与纯化研究吴洪新,呼天明,张存莉,贾红勋,鲁友均(西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100) [摘　要]　以普那菊苣为原料,对菊苣菊粉提取、纯化工艺进行了优化研究。

结果表明,菊粉提取的最佳工艺条件为:原料为粉状,温度85℃,固液比为1∶30,提取时间为60min,菊粉的提取率达58.58%。

纯化时石灰乳脱蛋白的最佳处理温度为70～80℃。

提取液最佳脱色工艺条件为:脱色温度70℃,脱色时间50min,活性碳用量为20g /L ,脱色率为69.13%,菊粉损失率为7.93%。

[关键词]　菊苣;菊粉;提取工艺;纯化工艺[中图分类号]　Q 949.9;T Q 06 [文献标识码]　A[文章编号]　1671-9387(2006)06-0091-05 菊苣(Cichorium inty bus L .)为菊科菊苣属多年生草本植物,原产于欧洲、西亚、中亚和北美洲,在我国西北、华北及东北等地也有分布。

菊苣地上部分具有生长速度快,产草量高,叶片柔嫩,茎杆较细弱,营养价值高,适口性好等特点,是畜禽的优质饲料。

干燥菊苣根内的菊粉含量高达700g /kg [1],可作为菊粉、低聚果糖及高果糖的生产原料。

菊粉(inulin )又称菊糖,由两种成分组成,一种是由果糖残基(F)以 (2-1)糖苷键连接而成的直链多糖,末端连有葡萄糖残基(G),结构式简写为GFn [2];另一种是含量很少的菊粉(Inulono se),末端无葡萄糖残基,其结构式简写为Fm [3]。

菊粉的生理学功能主要有:改善肠道内的微生物菌群;减少和抑制肠内腐败物的产生,抑制有害菌的生长,恢复肠内菌群的平衡;降低血脂,改善脂质代谢,降低血液中胆固醇和甘油三脂含量;减少肝脏毒素,在肠中生成抗癌的有机酸,有显著的防癌功能,对乳腺癌、结肠癌有预防和治疗作用;促进钙的吸收和利用;防止便秘,增加B 类维生素的合成量,提高人体的免疫功能[4]。

菊苣根中黄酮的提取工艺-答辩稿

在单因素试验的基础上，选取四个主要影响因素：乙醇浓度、料液比比、提取时间、提取温度，进行 L9(34)正交试验
表3—1正交因素表
表3—2正交结果表
实验结论
1.通过实验得出，用乙醇回流提取法得到的黄酮含量较高，对黄酮含量影响最大的是提取温度和乙醇浓度，其次是提取时间、料液比。
2.乙醇回流提取总黄酮的最佳提取工艺为：乙醇浓度70％，提取温度80℃，提取时间2.5h，料液比为1：20，提取次数3 次。对选定的最佳工艺条件进行重复实验，获得的黄酮含量最高为7.74mg/g。
四：致谢
本论文是在邱芳萍老师的悉心指导下完成的，特此向邱老师致以由衷的谢意。
感谢王志兵老师对我试验及论文的教导和帮助，在此表示衷心的感谢。
感谢师姐，师兄和我的同学们对我实验的帮助，谢谢你们。
各位评委老师们辛苦了。
谢谢各位老师！
三：结果与讨论
结果：（1）超声波乙醇提取法
图3—1 温度对黄酮含量的影响
在50℃时提取会使黄酮含量最高，黄酮在乙醇中的溶解度随着温度的升高而增大，温度升高，浸提液黏度减少，扩散系数增加，促进浸提速度，但温度过高会使黄酮氧化，使黄酮含量降低。
图3—2 乙醇浓度对黄酮含量的影响
70%乙醇浓度是黄酮含量最高，低于会使黄酮得不到充分的溶解，高于会把叶绿素的其它物质浸提出来，这些物质会对分光光度法测黄酮含量有影响。
图1—1 菊苣图1—2 菊苣根
二：研究内容
1总黄酮提取工艺流程图
样品（根部）预处理
清洗
切片
烘干（105℃）
称重
取样品
装瓶
磨粉
加入乙醇溶液
浸泡
提取黄酮（超声波乙醇、乙醇回流提取）

人工栽培菊苣根的化学成分的研究

人工栽培菊苣根的化学成分的研究【摘要】目的研究人工栽培菊苣根中的化学成分，并作化学结构鉴定。

方法用硅胶柱色谱法对菊苣根提取物进行分离纯化，利用光谱法鉴定其化学结构。

结果从人工栽培菊苣根提取物中分离出2种化合物，另外1种基本母核结构待定。

【Abstract】Objective To study chemical composition in Cichorium intybus L root of artificial plant，and analysis the constituents.Methods The constituents were isolated with silica gel column chromatography indent ified by physicochemical properties and sepectroscopic analysis.Results 2 compoundswere islolated from artifical Cichorium intybus L root.【Key words】Cichorium intybus L root;Chemical composition; pharmacological actions菊苣学名Cichorium intybus L．通过对菊苣所含化学成分及菊苣在临床药理研究中已有文献记载。

国家药材标准《维吾尔药志》上有记载：“菊苣可人药，味微苦、咸，性凉，它的醇提物具有改善高血糖、高血脂、高尿酸等作用。

本文旨在对人工栽培的菊苣根萃取得到的石油醚部分，乙酸乙酯部分进行分离，并鉴定其化学结构。

1 材料X-5显微熔点测定仪；brukerA V-300核磁共振仪；RE-52C旋转蒸发仪；真空干燥箱；硅胶200~300目，60目（青岛海洋化工厂产品）；硫酸显色剂（硫酸：甲醇=1∶9）。

药品由和龙东盛乡提供，经延边医学院吕惠子教授鉴定为菊苣Cichorium intybus L.的根。

药用菊花的化学成分研究及转基因进展

分得新三萜棕榈酸酯。经过对我国八大主流菊花挥发油含量
进行测定，发现挥发油含量由高到低依次为：济菊、祁菊、滁
菊、黄菊、杭菊、怀菊、毫菊、贡菊Ｈ．６】。
１．３氨基酸菊花均含有１７种氨基酸，其中８种为人体必需的氨基酸，即组氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、缬氨酸。各种氨基酸在不同菊花中的含量有一定差异，其中天门冬氨酸、谷氨酸含量较高ＨＪ。１．４微量元素一般的菊花均含有人体必需的７种微量元
・３７５・
对照组；不给予铅染毒，也不给予菊花茶灌胃；染毒组：１５
ｍｓ／
类和倍半萜的含氧衍生物为主。专家利用毛细管气相色谱一质谱一计算机联用技术研究怀菊挥发油的化学成分，鉴定了
４５个化合物，占其总量的８６．３％，并用气相色谱归一化法确
ｋｇ醋酸铅腹腔注射染毒，隔天１次，共１１次，２２ｄ；实验组：铅染毒（方法同染毒组）的当天开始每天１次１１２ｍｌ菊花茶灌胃，共２２次。结果：阴性对照组血铅和骨铅平均为０１０５０２
【作者单位１安徽省蚌埠市食品药品检验所抗生素室，２３３０００
【作者介绍】姚莉（１９６６一），女，安徽蚌埠市人，主管药师，双专科。
３体会为了有效地控制医院感染，就不能忽视每个细微环节，从细微处人手，最大限度地减少医院感染的发生。护士长是医院感染监控的中层管理者，是落实细节管理的关键，在日常管理中要时刻关注细节”Ｊ，不断提高管理质量和管理效果。【
甘肽过氧化降低，菊花提取物可提高小凰Ｄ脑耐缺氧能力，延
长生存时，杭白菊还有清除超氧阴离子自由基的能力。研究发现菊花提取物可以进入细胞膜的甘油酸后而起保护作用，这一发现表明菊花有希望在新兴的功能食品中特别是抗衰老食品中发挥作用¨０。。２．１０抗肿瘤作用从菊花中分离出来的蒲公英赛跑型３．羟基三萜类对由１２一Ｏ．十四酰大蓟二萜醇－１３．酯（ＴＰＡ）引起的小鼠皮肤肿瘤有较显著的抑制作用ＨＪ。２．１ｌ抗诱变作用菊花对环磷酰胺诱变的小鼠骨髓ＰＣＥ微

菊花化学成分及药理作用的

药物剂型与质量控制
剂型选择
01
根据疾病类型和患者需求，选择合适的药物剂型，如片剂、胶
囊剂、口服液等。
质量控制标准
02
制定严格的药物质量控制标准，包括原料药的质量控制、生产
工艺的规范、药物稳定性试验等。
临床试验
03
在进行新药研发时，需要进行严谨的临床试验，以验证药物的
疗效和安全性。
04
菊花化学成分及药理作用的现代研究技术
细胞模型与分子生物学技术
细胞模型
细胞模型是研究菊花化学成分及药理作用的重要工具，通过培养细胞系或组织切片，可以观察不同成分对细胞生长、凋亡、迁移等过程的影响。
分子生物学技术
分子生物学技术可以帮助科学家深入探究菊花成分的作用机制，通过检测关键基因和蛋白质的表达水平，了解其对细胞信号转导、代谢途径等方面的影响。
山奈酚
具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等多种药理作用。
萜类化合物
01
02
03
熊果酸
菊花中含有一定量的熊果酸，这是一种具有抗炎、抗菌、抗肿瘤等药理作用的化合物。
齐墩果酸
齐墩果酸具有抗炎、抗菌、抗肿瘤等药理作用。
β-谷甾醇
这是一种植物甾醇，具有抗炎、抗氧化等药理作用。
其他类化合物
有机酸类
菊花中含有绿原酸、咖啡酸等有机酸类化合物，具有抗氧化、抗炎等药理作用。
详细描述
菊花中的黄酮类化合物和挥发油具有明显的抗炎作用，能够抑制炎症介质如前列腺素、白三烯等的合成和释放，同时能够调控免疫反应，抑制炎症细胞的活化和聚集，从而减轻炎症反应。
案例二：从挥发油角度解析菊花的抗肿瘤作用
总结词
详细描述
菊花挥发油中的主要成分具有良好的抗肿瘤活性，能够抑制肿瘤细胞的增殖和转移。

菊花的化学成分及药理功能研究进展

OCCUPATION2011 8140菊花的化学成分及药理功能研究进展文／段崇霞菊花（Chrysanthemum）是我国传统常用中药材，为菊科植物菊的干燥头状花序。

菊花为常用中药，自古以来，就受到人们的喜爱。

经过长期的栽培选育，至清朝《广群芳谱》已记载300～400个品种。

1983年出版的《中国植物志》76卷1分册，称菊花品种已逾千。

谈及它的药用价值，早在春秋战国，屈原的离骚就有“夕餐秋菊之落英”之句。

一、菊花化学成分的研究进展１．菊花中挥发油成分的研究菊花中含有大量的芳香物质，主要有菊油环酮、菊醇、龙脑、单龙脑肽酸酯、乙酸龙脑酯。

中外学者对不同菊花的挥发油的化学成分进行研究，发现不同品种间差别极大。

刘伟曾对杭菊、怀菊、滁菊、亳菊四种菊花挥发油，用毛细管柱气相色谱-质谱技术进行分析，初步鉴定出二十余种萜烯类化合成分：α-侧柏烯、α-菲兰烯、γ-松油烯、1,8-桉叶烯、β-菲兰烯、叔丁基苯、α-萜品烯、蒲勒烯、优葛缕酮、樟脑、龙脑、异龙脑、醋酸冰片酯、芳樟醇、β- 石竹烯、β- 榄香烯,假紫罗酮、α- 松油醇、Dihgdro-khusilol 等。

他发现怀菊、亳菊挥发油中含单萜类成分较多，滁菊挥发油中含单萜少，怀菊中含有α-萜品烯、β-石竹烯、β-榄香烯等。

周维书等对祁菊挥发油分析，发现其成分以萜类和倍半萜的含氧衍生物为主。

２．菊花中黄酮类化合物的研究菊花中的黄酮类物质主要包括：芹菜素、金合欢素-7-O-β-D-吡喃半乳糖苷、芹菜素-7-O-β-D-吡喃半乳糖苷、木犀草素、槲皮素、金合欢素-7-O-（6'-鼠李糖基）-β-D-吡喃葡萄糖苷、藤黄菌素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，4-'甲氧基藤黄菌素-7-O-β-D-吡喃半乳糖苷、黄芩苷、芹菜素-7-葡萄糖苷、大波斯菊苷、木犀草素-7-葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-（6-O-丙二酰）-β-D-吡喃葡萄糖苷。

３．菊花中氨基酸的研究菊花含有17种氨基酸，其中8种为人体必需的氨基酸，即组氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、缬氨酸。

菊苣根软化研究

菊苣根软化研究菊苣，别名欧洲菊苣、比利时苣荬菜、法国苣荬菜、苞菜、苦白菜，学名CichoriumintybusL.，为菊科菊苣属中的多年生草本植物，原产地中海、亚洲中部和北非[1-2]，早在古罗马和希腊时代已有栽培，近代在欧洲栽培较多，荷兰等国家以软化后的芽球上市，极受欢迎[3]。

菊苣品种众多，大致上可分成两大类：一类是结球型，其中又分为绿色结球和红色结球2种；另一类是供软化用的散叶型，即软化型菊苣，其又分奶白色和红色2种。

结球型菊苣如生菜一样，1次栽培就可以生产出产品，并且栽培季节广，栽培方式多样，可以实现周年供应，容易栽培[4]；而软化型菊苣需要经过两次栽培才能形成产品，第一阶段为肉质根的形成期，第二阶段为软化期(北京地区秋季栽培，冬季软化，供应期为冬春季)[5]，菊苣软化培育过程中不使用化肥、农药及激素类物质，全封闭遮光栽培，无污染，是纯正的无公害绿色食品[6]。

菊苣引入我国，以其营养丰富，品味高雅和烹制方便而深得青睐，但是由于成本高、价格昂贵，一直仅用于大都市的高级酒店。

软化菊苣有多种食用方法：生食，可拌、蘸、泡，清新、脆嫩、爽口；熟食，可汆、扒、烧、溜，口感润滑柔和。

菊苣芽球营养丰富、脆嫩多汁、清香爽口、风味奇特。

由于菊苣具有丰富的营养价值和医疗保健价值，再加上其口感好、色泽美观而受到我国人们的青睐，在我国的种植面积已呈现了上升的趋势。

但是菊苣根采收以后贮藏期较短，贮藏期间容易长霉腐烂；软化后芽球的质量较差，芽球的产率、体积、质量以及结球度较小。

为了能够使菊苣周年的供应市场，人们普遍采用在贮藏阶段分批进行软化的方法，以提高其经济效益，这样就需要延长菊苣根的贮藏期，并采用合适的软化方法。

但是，当前菊苣的贮藏保鲜和软化技术方面还存在许多的问题，主要表现在菊苣根的贮藏时间较短，贮藏期间菊苣根的腐烂比较严重，菊苣根软化后芽球的产量较低，质量较差。

本试验以北京市农林科学院蔬菜研究中心提供的菊苣为试材，研究了一些处理条件对菊苣根软化的影响，以期为今后菊苣根的软化技术研究提供一些参考。

菊苣根中多糖的提取工艺

菊苣根中多糖的提取常用方法 1热水浸提法 2酸浸提法 3超声波提取法 4超临界提取法
热水浸提法
本文采用的是热水浸提法提取菊苣根中的多糖。热水浸提法是多糖提取的传统方法，用水作为溶剂浸取多糖，温度一般控制在50— 90℃，在恒温水浴上回流浸提5—9h过滤后的滤液和滤渣。再用水在相同条件下将滤渣反复提取3—5次，最后合并滤液。此法操作简便，但由于水做溶剂难以完全溶出其中的多糖物质，所以一般需要多次浸提，操作时间长。
菊苣根多糖作为菊苣根中主要的活性成份之一，因其显著的抗肿瘤，抗癌作用一直被国内外所关注，并在不断的研究当中。本论文主要研究菊苣根多糖的提取工艺，采用了热水浸提法提取菊苣根中的多糖。考察了温度，时间，料液比对多糖提取率的影响，并用苯酚硫酸法测定了其多糖含量。结果显示本法简便，准确。
二、研究内容
（2）多糖提取率的计算
多糖提取率（ %） M1 100 % M2
式中：M1—多糖的含量（g）； M2—样品的总重量（g）；
3、菊苣根多糖的提取工艺流程图
菊苣根
粉碎
二次提取
滤渣
水浴提取
离心
测定吸光度
合并滤液
稀释
过滤
滤液
4、单因素试验
• 提取条件设定在提取时间为8h，料液比1:20的条件下，不同提取温度的实验结果如图4所示。
• 其次感谢实验室的学姐和学长，对论文的指点，感谢实验室的同学们的帮助
• 最后，我要向在百忙之中抽时间对本文进行审阅、评议和参加本人论文答辩的各位老师表示感谢。
17.28
2.21
水浴时间h 7 8 9 9 8 7 8 9 7
16.38
19.02
19.01
2.64

菊苣生态适应性分析及密度与产量关系的研究

菊苣生态适应性分析及密度与产量关系的研究摘要：菊苣作为生物能源，是一种高效、洁净能源，将成为未来能源的重要组成部分，菊苣的开发利用前景广阔。

在新疆农六师的适应性、生长特性、最适栽培密度以及可达到的机械化程度，向精准农业的方向发展研究，为今后在全六师范围内大面积种植菊苣提供科学依据。

关键词：菊苣生育期；生长特性；最适密度中图分类号：s512.3 文献标识码：a1 材料与方法1.1 试验地点101团7连3斗1号地、军户农场3连3斗6号地、芳草湖农场2分场3斗2号地，各试验点土质为壤土或沙壤土，试验面积各1hm。

均采用膜下滴灌，机力精量点种。

1.2 试验设计各试验点按照顺序排列，设3个处理，3次重复，处理1为6000株/667m2、处理2为8000株/667m2、处理3为10000株/667m2，株距分别是23.5cm、17.5cm、14.0cm。

播种量2粒/穴，采用幅宽1.5m的地膜，两膜8行，行距配置（35+50+35+65）cm，平均行距46cm，播种深度0.5～1.0cm（实际3.0cm），播种不覆土，每个处理面积0.33hm2，各点试验面积1hm2。

2 结果与分析2.1 田间管理播种时间4月17～24日，播前结合整地化学除草，每667m2用33%二甲戊灵乳油170ml兑水45kg土壤喷雾。

人工补种5月2～10日。

全生育期共滴水13次，滴水量620m/667m2。

除草3次，从6月初～7月底肥料随水滴施，一水一肥，全生育期共施自然肥74kg/667m2，折纯n为23.02㎏/667m2；纯p为10.04㎏/667m2；纯k为5.78kg/667m2，n︰p︰k=1︰0.45︰0.25。

9月25日陆续收获。

2.2 各试验点生育期测定（见表1）由表1看出：播种到出苗是6～7d，出苗到莲座前期是38～52d，莲座前期到中期是33～72d，莲座中期到后期47～51d，全生育期在129～132d。

2.3 菊苣生育进程指标调查（见表2）由表2看出：苗期（4.29～6.9）叶片数为3～12片，出叶速率为5.5～6d长1片叶。

苯酚-硫酸法测定菊苣根中总糖的含量

苯酚－硫酸法测定菊苣根中总糖的含量目的：研究菊苣根总糖的测定方法。

方法：采用苯酚-硫酸法，在488nm处测菊苣根中总糖的含量。

结果：回归方程为Y=10.908X-0.13264，r=0.9999，线性范围为30-80μg/ml。

平均回收率为103.27%，RSD=2.20%。

菊苣根中平均总糖含量为平均含量为34.613mg/g。

结论：方法简便，结果准确，为菊苣根总糖的进一步研究奠定良好的基础。

标签：菊苣根总糖苯酚-硫酸法菊苣根为菊科植物毛菊苣(CichoriumglandulosumBoiss.etIIout )及菊苣(CichoriumintybusL.)干燥的根。

菊苣系维吾尔族习用药材，维吾尔语名为卡申纳，有清肝利胆、健胃消食、利尿消肿之功效[1]。

《中国药典》2000年版一部只收载其地上部分。

菊苣根主要含有三萜、倍半萜、有机酸等类成分[2-4]。

现代药理研究表明，菊苣根具有改善消化器官活动机能、改善心脏功能、保肝降脂、降血糖和抗菌等作用[5]。

为了确定菊苣根总糖的含量，本文利用苯酚-硫酸法制得醛糖衍生物，采用分光光度法对菊苣根总糖含量进行测定。

1 仪器与试药SpectrumLab 54分光光度计(上海棱光技术有限公司)，RE52CS-2旋转薄膜蒸发仪(上海亚荣仪器厂)，KQ-400DBC超声清洗仪(昆山市超生仪器有限公司)，BS110S分析天平(北京，赛多利斯)，DZF-6021型真空干燥箱(上海精宏实验设备厂);其它所用试剂均为分析纯。

菊苣根采自新疆乌鲁木齐市南山，经新疆自治区中医医院李永和主任药师鉴定为菊科植物菊苣(CichoriumintybusL.)的干燥根。

2 方法与结果2.菊苣根总糖的提取：菊苣根干燥，粉碎过20目筛，精密称取药材粉末10g，用石油醚索氏回流提取4h，药渣在50℃减压干燥至干。

然后精密称取脱脂后的药渣3g，加蒸馏水100mL，回流提取3次。

每次20min，过滤，合并滤液并定容至200 ml，得0.015g/ml的总糖提取液，备用。

菊苣主要挥发性香气成分分析

基金项目：云南省高层次人才项目（编号：ＹＮＷＲＱＮＢＪ２０２０１２３）；云南中烟科技计划资助重点项目（编号：２０２１ＪＣ０３）；云南中烟青年科技托举人才项目（编号：滇烟工人〔２０２１〕２９３号）作者简介：张凤梅，女，云南中烟工业有限责任公司副研究员，博士。

通信作者：唐石云（１９８４—），男，云南中烟工业有限责任公司助理研究员，博士。

Ｅｍａｉｌ：ｔｓｈｉｙｕｎ＠１２６．ｃｏｍ收稿日期：２０２２０６２３改回日期：２０２３０１１３犇犗犐：１０．１３６５２／犼．狊狆犼狓．１００３．５７８８．２０２２．８０４６３［文章编号］１００３５７８８（２０２３）０４０１５１０５菊苣主要挥发性香气成分分析Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｍａｉｎｖｏｌａｔｉｌｅａｒｏｍａｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆｃｈｉｃｏｒｙ张凤梅１，２犣犎犃犖犌犉犲狀犵犿犲犻１，２　普　阮２犘犝犚狌犪狀２　吴丽君２犠犝犔犻犼狌狀２　蒋　薇１，２犑犐犃犖犌犠犲犻１，２　唐石云１，２犜犃犖犌犛犺犻狔狌狀１，２（１．云南省烟草化学重点实验室，云南昆明　６５０２３１；２．云南中烟工业有限责任公司技术中心，云南昆明　６５０２３１）（１．犢狌狀狀犪狀犓犲狔犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犜狅犫犪犮犮狅犆犺犲犿犻狊狋狉狔，犓狌狀犿犻狀犵，犢狌狀狀犪狀６５０２３１，犆犺犻狀犪；２．犚牔犇犆犲狀狋犲狉狅犳犆犺犻狀犪犜狅犫犪犮犮狅犢狌狀狀犪狀犐狀犱狌狊狋狉犻犪犾犆狅．，犔狋犱．，犓狌狀犿犻狀犵，犢狌狀狀犪狀６５０２３１，犆犺犻狀犪）摘要：目的：开发利用菊苣提取物。

方法：采用顶空—固相微萃取—气相色谱质谱联用（ＨＳＳＰＭＥＧＣ／ＭＳ）分析菊苣提取物中的挥发性化学成分，通过挥发性成分含量／感官阈值即香气活力值分析其中的主要挥发性香气成分。

结果：样品中共检测到７８个挥发性成分，相对含量＞１％的挥发性成分顺序为丙二醇＞５羟甲基糠醛＞乙酸＞１，２丙二醇二甲酸酯＞甲酸＞１，２丙烷二醇２乙酸酯；分析了２４种香气成分的香气活力值，香气活力值＞１的主要挥发性香气成分顺序为乙酸＞异丁酸甲酯＞肉桂酸乙酯＞甲酸＞甲基环戊烯醇酮＞２，４二叔丁基苯酚＞５甲基糠醛＞丙二醇。

紫锥菊根中菊苣酸提取工艺及对氧化应激肠道细胞的保护作用研究

中国畜牧兽医 2022,49(7):2497-2505C h i n aA n i m a lH u s b a n d r y &V e t e r i n a r y Me d i c i ne 紫锥菊根中菊苣酸提取工艺及对氧化应激肠道细胞的保护作用研究李一鹏,张虎,任娟,任欣,刘聚祥,王庚南(河北农业大学动物医学院,保定071000)摘要:ʌ目的ɔ优化紫锥菊根中菊苣酸提取工艺,并测定菊苣酸在肠道细胞中的抗氧化效果㊂ʌ方法ɔ试验选用有机溶剂乙醇作为紫锥菊根粉末(80目)提取溶剂,对提取溶剂浓度㊁提取温度㊁提取时间㊁提取次数以及原料与溶剂的比例等因素进行分析,得到每个因素下菊苣酸得率和该因素的对应曲线,再在单因素基础上,选择溶剂浓度(30%㊁40%㊁50%)㊁提取温度(60㊁70㊁80ħ)㊁提取时间(1㊁2㊁3h )和料液比(1ʒ12㊁1ʒ15㊁1ʒ18)4个因素3个水平设计正交试验㊂用不同浓度H 2O 2(100㊁200㊁400㊁600㊁800㊁1000μm o l /L )处理人结肠腺癌细胞(C a c o -2)与猪小肠上皮细胞(I P E C -J 2)建立氧化应激模型㊂分别使用不同浓度菊苣酸(0㊁100㊁200㊁400㊁600㊁800㊁1000μm o l /L )处理氧化应激前后的细胞24h ,应用M T T 法,分别测定菊苣酸对两种肠道细胞氧化应激的保护和缓解效果㊂ʌ结果ɔ菊苣酸最佳提取条件为:50%浓度的乙醇在70ħ下采用1ʒ18的料液比,超声辅助提取2h ,得率为1.89m g /g ㊂细胞抗氧化试验结果显示,菊苣酸对C a c o -2和I P E C -J 2两种肠道细胞氧化应激均具有保护和缓解效果,对C a c o -2细胞的保护作用和缓解作用的半数抑制浓度(I C 50)值分别为172.6和207.5μm o l /L ,对I P E C -J 2细胞的保护作用和缓解作用的I C 50值分别为133.1和196.5μm o l /L ㊂ʌ结论ɔ试验得到了紫锥菊根粉中菊苣酸的最佳提取方案,为工业化高效提取菊苣酸提供了参考;同时菊苣酸对氧化应激的肠道细胞具有很好的保护作用,经计算其保护作用的I C 50值较缓解效果更小,进一步证明了菊苣酸具有成为肠道抗氧化剂的潜力㊂关键词:紫锥菊;菊苣酸;提取;肠道细胞;抗氧化作用中图分类号:S 859.7文献标识码:AD o i :10.16431/j.c n k i .1671-7236.2022.07.007 开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):收稿日期:2022-02-07基金项目:国家自然科学基金项目(32002343);河北省教育厅在读研究生创新能力培养资助项目(C X Z Z B S 2021038)联系方式:李一鹏,E -m a i l :1072599721@q q .c o m ㊂通信作者王庚南,E -m a i l :y i yu o n e @s i n a .c o m S t u d y o n t h eE x t r a c t i o nP r o c e s s o fC h i c o r i cA c i d f r o m E c h i n a c e a R o o t a n d I t s P r o t e c t i v eE f f e c t s o nO x i d a t i v e S t r e s sD a m a ge d I n t e s t i n a l C e l l s L IY i p e n g ,Z H A N G H u ,R E NJ u a n ,R E N X i n ,L I UJ u x i a n g ,WA N G G e n gn a n (C o l l e g e o f V e t e r i n a r y M e d i c i n e ,H e b e i A g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y ,B a o d i n g 071000,C h i n a )A b s t r a c t :ʌO b j e c t i v e ɔT h e e x t r a c t i o n p r o c e s s o f c i c h o r i c a c i d f r o m E c h i n a c e a r o o tw a s o pt i m i z e d ,a n d t h ea n t i o x i d a n te f f e c to fc i c h o r i ca c i di ni n t e s t i n a lc e l l s w a sd e t e r m i n e d .ʌM e t h o d ɔI nt h e e x p e r i m e n t ,t h ee c o n o m i c a lo r ga n i cs o l v e n te t h a n o l w a ss e l e c t e da st h ee x t r a c t i o ns o l v e n to f E c h i n a c e a r o o t p o w d e r (80m e s h ),a n ds e v e r a l f a c t o r s s u c ha se x t r a c t i o ns o l v e n t c o n c e n t r a t i o n ,e x t r a c t i o n t e m pe r a t u r e ,e x t r a c t i o n t i m e ,e x t r a c t i o n t i m e s ,a n d t h e r a t i o of r a w m a t e r i a l s t o s o l v e n t w e r e s e t f o r a n a l y s i s ,a n d t h e r e s u l t s o f e a c h f a c t o rw e r e o b t a i n e d .T h e c o r r e s p o n d i ng c u r v e o f a c i d y i e l d a n d thi s f a c t o r ,a n dt h e no nt h eb a s i so f s i n gl e f a c t o r ,s e l e c t s o l v e n t c o n c e n t r a t i o n (30%,40%,50%),e x t r a c t i o n t e m p e r a t u r e (60,70,80ħ),e x t r a c t i o nt i m e (1,2,3h ),s o l i d -l i qu i dr a t i o (1ʒ12,1ʒ15,1ʒ18),f o u r f a c t o r sa n dt h r e e l e v e l so fo r t h o g o n a l e x p e r i m e n t sw e r ed e s i gn e d .W i t hd i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o n so f H 2O 2(100,200,400,600,800,1000μm o l /L )t ot r e a th u m a n c o l o na d e n o c a r c i n o m a c e l l s (C a c o -2)a n d p o r c i n e s m a l l i n t e s t i n a l e pi t h e l i a l c e l l s (I P E C -J 2).T h e中国畜牧兽医49卷c e l l s b e f o r e a n d a f t e ro x i d a t i v es t r e s sw e r e t r e a t e dw i t hc h i c o r y a c i d(0,100,200,400,600,800, 1000μm o l/L)f o r24hr e s p e c t i v e l y.T h e p r o t e c t i v ea n da l l e v i a t i n g e f f e c t so fc h i c o r y a c i do n o x i d a t i v e s t r e s s o f t w o i n t e s t i n a l c e l l sw e r em e a s u r e db y MT T m e t h o d.ʌR e s u l tɔT h e r e s u l t so f e x t r a c t i o n p r o c e s s s h o w e d t h e o p t i m a l e x t r a c t i o n c o n d i t i o n s o f c h i c o r i c a c i dw e r e50%e t h a n o l a t 70ħw i t ha s o l i d-l i q u i d r a t i oo f1ʒ18,u l t r a s o n i c-a s s i s t e d e x t r a c t i o n f o r2h.F i n a l l y,t h e y i e l do f t h i s p r o c e s sw a s1.89m g/g.T h er e s u l t so f c e l l u l a ra n t i o x i d a n t a s s a y s h o w e dt h a t c h i c o r i ca c i d h a d p r e v e n t i v e a n da l l e v i a t i n g e f f e c t so nb o t hC a c o-2a n dI P E C-J2c e l l l i n e sw h i c hd a m a g e db y o x i d a t i v es t r e s s.T h e I C50v a l u e s o fi t s p r o t e c t i v e a n d a l l e v i a t i n g e f f e c t s w e r e172.6a n d 207.5μm o l/Lf o rC a c o-2,133.1a n d196.5μm o l/Lf o r I P E C-J2,r e s p e c t i v e l y.ʌC o n c l u s i o nɔT h e b e s t e x t r a c t i o n p r o c e s s o f c h i c o r i c a c i d f r o m E c h i n a c e a r o o t p o w d e rw a s o b t a i n e d,w h i c h p r o v i d e d ar e f e r e n c ef o ri n d u s t r i a la n d e f f i c i e n te x t r a c t i o n o fc h i c o r i c a c i d,a n d t h e c e l la n t i o x i d a n t e x p e r i m e n t s h o w e d t h e i n t e s t i n a l a n t i o x i d a n t a b i l i t y o f c h i c o r i ca c i d.T h ec a l c u l a t e dI C50v a l u eo f i t s p r o t e c t i v ee f f e c tw a ss m a l l e rt h a nt h a to f t h e m i t i g a t i o ne f f e c t.I tw a sf u r t h e r p r o v e dt h a t c h i c o r i c a c i dh a d t h e p o t e n t i a l a s a f u t u r e i n t e s t i n a l a n t i o x i d a n t d r u g.K e y w o r d s:E c h i n a c e a;c h i c o r i c a c i d;e x t r a c t i o n;i n t e s t i n a l c e l l s;a n t i o x i d a n t e f f e c t目前,中药免疫增强剂成为畜牧养殖业研究热点,其不但能够提高机体的免疫水平,还能够避免长期使用化学药物对动物机体产生的毒副作用以及药物残留等问题[1]㊂菊苣酸是一种可以从紫锥菊㊁菊苣等菊科植物中广泛提取出来的咖啡酸衍生物,又名二咖啡酰酒石酸㊂研究显示,菊苣酸作为一种中药提取物具有抗炎㊁抗肿瘤㊁抗氧化㊁提高机体免疫力等药理功效[2]㊂紫锥菊的地上部分及根中均含菊苣酸[3],而根中菊苣酸含量最高㊂伏健[4]曾用乙醇回流法对紫锥菊头状花序进行提取试验,优化提取工艺得到了菊苣酸含量为0.45%㊂孟创鸽[5]用超声波提取法提取了紫锥菊茎部的菊苣酸,菊苣酸得率为1.51m g/g㊂也有学者利用加热回流[6]及超声波协同方法[7]对紫锥菊根部进行了研究,但提取率相对较低㊂用更安全的提取溶剂更简便的提取方法,更能迎合工业化生产的需求,所以本研究以紫锥菊根为原料,乙醇为溶剂,超声提取为手段,优化菊苣酸的提取工艺㊂氧化应激是指动物机体在代谢过程中产生大量的氧化自由基和活性氧,可能会造成机体抗氧化系统的失衡,造成一定程度的氧化损伤㊂在动物的集约化养殖过程中,氧化应激的危害已经十分明显,如心脏病㊁乳房炎㊁肾病㊁消化道炎症等疾病都可能通过氧化应激导致,很大程度上影响了畜牧养殖业的发展[8]㊂而造成动物氧化应激的原因多种多样,如环境因素㊁自身状态的改变㊁外源致病菌或病毒等[9]㊂在蛋鸡的养殖中,氧化应激会对蛋鸡产蛋后期繁殖性能造成影响[10],T a r i n[11]首次提出蛋鸡卵巢老化是由于胞内活性氧的积聚和与衰老相关的细胞损伤造成的;仔猪的氧化应激会造成采食量和平均日增重的下降[12];更有研究显示,母牛在高产期由于体内大量的代谢活动,造成活性氧的聚积,从而产生氧化应激,对奶牛的产奶量和乳制品的质量有一定影响[13]㊂故抗氧化剂的研究和发展对畜牧养殖业的发展以及对提高畜牧养殖产品的质量有着重大意义㊂研究表明,菊苣酸可以通过降低细胞内活性氧和脂质过氧化物丙二醛的积累㊁清除自由基㊁抑制氧化低密度脂蛋白等方式,发挥抗氧化损伤的药理作用[14]㊂L i u等[15]通过体外抗氧化试验证明菊苣酸清除D P P H㊃㊁㊃O H和A B T S㊃+自由基的能力很强,高于咖啡酸和酒石酸的抗氧化能力㊂常小文[16]以人肝癌细胞(H e p G2)细胞为研究对象,证明了菊苣酸体内甲基化代谢产物对该细胞氧化应激损伤有较强的抗氧化活性,且菊苣酸甲基化的程度越高,其抗氧化活性就越强㊂口服是最常用且是适应性最佳的给药方式,但目前菊苣酸对肠道细胞的抗氧化应激损伤作用鲜有报道㊂本研究针对人结肠腺癌细胞(C a c o-2)及猪小肠上皮细胞(I P E C-J2)两种肠道细胞,构建氧化应激模型,进一步证明菊苣酸在肠道细胞中的抗氧化作用㊂1材料与方法1.1材料1.1.1 细胞和主要试剂人结肠腺癌细胞(C a c o-2细胞)购自协和细胞库;猪小肠上皮细胞(I P E C-J2细胞)购自北纳生物科技有限公司㊂紫锥菊根粉末(80目)由上海源叶生物科技有限公司提供;菊苣酸标准品由中国食品药品检定研究院提供;无水乙醇由天津北辰方正试剂厂生产;乙腈(色谱89427期李一鹏等:紫锥菊根中菊苣酸提取工艺及对氧化应激肠道细胞的保护作用研究级)和甲醇(色谱级)均购自德国默克股份两合公司;D ME M高糖培养基和H B S S溶液均购自北京索莱宝科技有限公司㊂1.1.2主要仪器液相色谱仪(H P L C1525)产自W a t e r s公司;K Q-500D E型数控超声波清洗仪产自昆山市超声仪器有限公司;离心机产自上海安亭科学仪器厂;细胞培养箱购自赛默飞世尔科技有限公司;酶标仪购自伯乐公司㊂1.2方法1.2.1 色谱条件二元溶剂泵(W a t e r s1525),自动进样器(W a t e r s2487),二极管阵列检测器(P D A,W a t e r s2998),W a t e r s S u n f i r e反相C18色谱柱(250m mˑ4.6m m,5μm),流动相为0.1%磷酸水溶液(A)和乙腈(B),等度洗脱流动相比例AʒB 为7ʒ3,流速1m L/m i n,柱温35ħ,检测波长327n m,进样量20μL㊂1.2.2溶液的配制及标准曲线的制作标准品溶液:精密称量1.0m g菊苣酸标准品溶于流动相中,配制成1m g/m L,再稀释成500㊁200㊁100㊁50㊁20μg/m L 浓度的标准品溶液,按照1.2.1项下色谱条件进行检测,记录峰面积,以菊苣酸浓度(μg/m L)为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线㊂1.2.3检测限及定量限配制一系列浓度的标准溶液进行色谱检测,当信号和噪音的比值(S/N)为3时即为方法的检测限,当S/N=10,且将此时的浓度带入标准曲线中,实测浓度和规定浓度偏差在ʃ20%以内时,所得浓度即为定量限㊂1.2.4超声辅助提取单因素试验称取10.0g 紫锥菊根粉末,放入250m L圆底烧瓶中,以不同浓度(30%㊁40%㊁50%㊁60%㊁70%㊁80%)的乙醇作为提取剂,按照不同料液比(1ʒ12㊁1ʒ15㊁1ʒ18㊁1ʒ21)进行混匀后,在不同温度(40㊁50㊁60㊁70㊁80ħ)下进行最大功率的超声提取(1㊁2㊁3次),提取不同时间(1㊁2㊁3h),进行单因素试验,每个因素所得提取液进行冷冻干燥,称重,取一定量样品溶解进行高效液相色谱(H P L C)检测,每个因素进行3次平行试验计算菊苣酸得率㊂1.2.5超声辅助提取正交试验选取各个单因素最优条件以及最优条件相邻的两个条件,进行正交试验设计,采用L9(34)正交试验设计表,设置时间㊁温度㊁料液比和乙醇浓度为影响因素,选取能够提取出最高含量菊苣酸的提取工艺,各项参数如表1所示,进行3次平行试验㊂表1因素水平表T a b l e1F a c t o r l e v e l t a b l e水平L e v e l s时间T i m e/h温度T e m p e r a t u r e/ħ料液比F e e d l i q u i dr a t i o乙醇浓度E t h a n o lc o n c e n t r a t i o n/% 11601ʒ1230 22701ʒ1540 33801ʒ1850 1.2.6菊苣酸细胞毒性试验取对数生长期的细胞,以5ˑ104/孔接种到96孔板中,在细胞培养箱中培养24h,将每孔中的培养基取出弃去,用P B S 溶液冲洗3次,分别加入不同浓度的菊苣酸(100㊁200㊁400㊁600㊁1000μm o l/L),在细胞培养箱孵育24h后,每孔中加入20μL的M T T溶液,孵育4h后弃去培养基,每孔中加入100μL D M S O,避光震荡10m i n,用酶标仪测定570n m波长下各孔的吸光度值(D570n m)㊂并计算细胞存活率:细胞存活率(%)= (试验组D570n m/对照组D570n m)ˑ100%㊂1.2.7细胞氧化应激损伤模型的构建将细胞接种到96孔板中,以H2O2为造模剂,加入不同浓度的H2O2(100㊁200㊁400㊁600㊁800㊁1000μm o l/L),培养4h,用MT T法检测各个孔的吸光度并计算各个浓度下细胞的存活率㊂当细胞存活率处在50%~70%[17]时,即构建氧化应激模型成功㊂1.2.8菊苣酸对细胞氧化损伤保护效果试验将细胞接种到96孔板中,加入不同浓度菊苣酸(100㊁200㊁400㊁600㊁800㊁1000μm o l/L),以抗坏血酸(200μm o l/L)为阳性对照,以等体积H B S S溶液为阴性对照,孵育24h后除对照组外,其余组分别加入一定量的H2O2溶液(浓度通过1.2.7的结果确定),孵育4h后用MT T法检测各个孔的吸光度并计算细胞存活率㊂以细胞存活率为纵坐标㊁药物浓度的对数值为横坐标,用G r a p h P a dP r i s m6.0软件对数据进行拟合,求得半数抑制浓度(I C50)㊂1.2.9菊苣酸对氧化损伤应激细胞的缓解效果试验在构建的氧化损伤细胞中加入不同浓度的菊苣酸(浓度同1.2.8),以抗坏血酸(200μm o l/L)为阳性对照,以等体积H B S S溶液为阴性对照,孵育24h后,用MT T法检测各个孔的吸光度(D570n m)并计算细胞存活率㊂2结果2.1标准曲线的建立根据H P L C的结果建立标准品的线性回归方9942中国畜牧兽医49卷程为:Y=105.4X-47225,R2>0.999㊂2.2检测限和最低定量限以信噪比(S/N)=3为检测限,S/N=10为定量限,经测定检测限为50n g/m L,最低定量限为100n g/m L㊂2.3超声辅助提取菊苣酸单因素试验2.3.1提取时间对菊苣酸得率的影响取紫锥菊根粉末按照1ʒ18料液比加入80%浓度乙醇,在60ħ下分别超声1㊁2㊁3h,经H P L C检测后结果见图1A㊂由图1A可知超声2h之内菊苣酸得率随时间延长而逐渐增高,但在2h之后,菊苣酸得率无明显变化,提取时间选用2h为佳㊂2.3.2乙醇浓度对菊苣酸得率的影响取紫锥菊根粉末按照1ʒ18料液比加入30%㊁40%㊁50%㊁60%㊁70%㊁80%的乙醇,在60ħ下超声2h,经H P L C检测所得结果见图1B㊂由图1B可知,当乙醇浓度的小于40%时,随着浓度的升高菊苣酸得率增大,到40%达到最大,但是继续增大乙醇浓度其得率呈现逐渐减少的趋势,因此选用40%浓度的乙醇溶液为正交试验的中间浓度㊂2.3.3温度对菊苣酸得率的影响取紫锥菊根粉末按照1ʒ18料液比加入80%浓度乙醇,分别在50㊁60㊁70㊁80ħ下超声2h,经H P L C检测所得结果见图1C㊂由图1C可知,在60ħ以下,随着温度的升高,菊苣酸得率逐渐升高,而60ħ之后菊苣酸得率随温度的升高而呈现降低的趋势,因此在60ħ左右对紫锥菊根粉末提取能够得到较多的菊苣酸㊂2.3.4料液比对菊苣酸得率的影响取紫锥菊根粉末按照1ʒ12㊁1ʒ15㊁1ʒ18㊁1ʒ21料液比加入80%浓度乙醇,在60ħ下超声2h,经H P L C检测所得结果见图1D㊂由图1D可知,在15倍体积提取溶剂之前随着料液比的增加提取率有所提高,但继续增大溶剂量,菊苣酸的提取率逐渐变小,故选用料液比为1ʒ15为宜㊂2.3.5提取次数对菊苣酸得率的影响取紫锥菊根粉末按照1ʒ18的料液比在60ħ下进行超声辅助提取2h,取样后进行抽滤,将残渣收集再按照1ʒ18的料液比进行提取,总共提取3次,测得结果如图1E㊂由图1E可知,提取1次时紫锥菊根粉末中菊苣酸绝大部分被提出,只是剩余一小部分残存,出于经济㊁时间方面考虑,提取次数为1次㊂图1超声辅助提取菊苣酸单因素试验结果F i g.1T h e s i n g l e-f a c t o r e x p e r i m e n t a l r e s u l t s o f u l t r a s o n i c-a s s i s t e d e x t r a c t i o no f c h i c o r i c a c i d 00527期李一鹏等:紫锥菊根中菊苣酸提取工艺及对氧化应激肠道细胞的保护作用研究2.4超声辅助提取菊苣酸正交试验由表2可知,在所选择的4个因素中温度对菊苣酸提取率影响最大,溶剂浓度次之,料液比和时间对得率影响相对较小,主次顺序为:温度>溶剂浓度>料液比=时间,选择最优水平温度为70ħ,料液比为1ʒ18,超声时间为2h,溶剂浓度选择50%,按照最优组合,即50%乙醇浓度按照1ʒ18的料液比,在70ħ下超声2h提取,菊苣酸提取得率为1.89m g/g㊂表2正交试验结果T a b l e2O r t h o g o n a l t e s t r e s u l t s项目I t e m s温度T e m p e r a t u r e/ħ料液比F e e d l i q u i d r a t i o时间T i m e/h乙醇浓度E t h a n o l c o n c e n t r a t i o n/%菊苣酸得率C i c h o r i c a c i d y i e l d/(m g/g)1601ʒ121301.57 2601ʒ182501.77 3601ʒ153401.71 4701ʒ151501.84 5701ʒ122401.85 6701ʒ183301.81 7801ʒ181401.84 8801ʒ152301.79 9801ʒ123501.84 K15.045.255.255.17K25.505.355.415.39K35.475.415.355.45K11.681.751.751.72K21.831.781.801.80K31.821.801.781.82R0.150.050.050.092.5菊苣酸的细胞毒性试验用不同浓度的菊苣酸孵育细胞24h后,细胞存活率如图2所示,菊苣酸浓度在100~1000μm o l/L 的范围下,C a c o-2和I P E C-J2细胞的存活率均在90%以上,故菊苣酸在100~1000μm o l/L的浓度范围内对C a c o-2和I P E C-J2细胞均没有毒性㊂图2不同浓度的菊苣酸处理24h对细胞存活率的影响F i g.2E f f e c t o f d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f c h i c o r i c a c i d t r e a t m e n t f o r24ho n c e l l v i a b i l i t y1052中国畜牧兽医49卷2.6 细胞氧化损伤应激模型建立最佳浓度由图3可知,当H 2O 2浓度为200μm o l /L 时,C a c o -2细胞存活率为62.43%,处在50%~70%之间,可以作为C a c o -2细胞氧化损伤应激模型建立的最优浓度㊂当H 2O 2浓度为400μm o l /L 时,I P E C -J 2细胞存活率为62.06%,处在50%~70%之间,可以作为I P E C -J 2细胞氧化损伤应激模型建立的最优浓度㊂图3 不同浓度H 2O 2处理4h 对细胞存活率的影响F i g .3 E f f e c t s o f d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o fH 2O 2t r e a t m e n t f o r 4ho n c e l l v i a b i l i t y2.7 菊苣酸对细胞氧化损伤的保护效果如图4所示,在用不同浓度菊苣酸处理细胞后,再用H 2O 2诱导细胞的氧化损伤,当菊苣酸浓度为800μm o l /L 时,C a c o -2细胞存活率最高,为74%,与阳性对照组相当;当菊苣酸浓度为100μm o l /L 时,C a c o -2细胞存活率为54.5%,与阴性对照组相当;经过计算,C a c o -2细胞的I C 50值为172.6μm o l /L ㊂当菊苣酸浓度为600μm o l /L 时,I P E C -J 2细胞的存活率最高,为67.53%;当菊苣酸浓度为100μm o l /L 时,I P E C -J 2细胞的存活率为51.8%,与阴性对照组相当㊂经过计算,I P E C -J 2细胞的I C 50值为133.1μm o l /L ㊂2.8 菊苣酸对细胞氧化损伤的缓解效果由图5可知,当菊苣酸浓度为400μm o l /L 时,C a c o -2细胞的存活率最高,为70.2%;当菊苣酸浓度为100μm o l /L 时,C a c o -2细胞的存活率最低,为52.8%㊂经过计算,其I C 50值为207.5μm o l /L ㊂图4 不同浓度的菊苣酸对细胞氧化损伤的保护效果F i g .4 P r o t e c t i v e e f f e c t o f d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f c h i c o r i c a c i do n c e l l u l a r o x i d a t i v e d a m a ge 20527期李一鹏等:紫锥菊根中菊苣酸提取工艺及对氧化应激肠道细胞的保护作用研究图5 不同浓度的菊苣酸对细胞氧化损伤的缓解效果F i g .5 R e l i e f e f f e c t o f d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f c h i c o r i c a c i do n c e l l u l a r o x i d a t i v e d a m a ge 当菊苣酸浓度为100μm o l /L 时,I P E C -J 2细胞的存活率最高,为75.92%;当菊苣酸浓度为1000μm o l /L时,I P E C -J 2细胞的存活率为57.33%,与阴性对照组相当㊂经过计算,I P E C -J 2细胞的I C 50值为196.5μm o l /L ㊂3 讨论菊苣酸的获取途径包括用化学方法合成[18]以及从植物体内提取纯化㊂但由于用化学合成法容易产生较多的副产物,造成一定程度的环境污染,且长期服用容易产生耐药性或造成肝肾损伤㊂所以天然植物中的菊苣酸提取工艺的优化是重中之重㊂在有关菊苣酸提取的相关文献中,多以紫锥菊全草或是地上部分为原料,而在相关研究中菊苣酸在紫锥菊的花和根中含量丰富,分别为1.2%~3.1%和0.6%~2.1%[19],且根部含量最高,所以本研究选用紫锥菊根粉作为原材料㊂而较短的提取时间,较少的提取次数,简单的提取方法,安全的提取溶剂更能适应工业化生产,对比相关文献的回流提取[20]及超声辅助提取法[5],本提取工艺更加便捷,省时,且得率较高㊂对于氧化应激损伤细胞模型的建立,应激源的选择多种多样,前人通过很多试验证明了很多应激源均可以成功构建氧化应激细胞模型㊂除H 2O 2[21]㊁M P P +[22]㊁6-O H D A [23]等化学类应激源外,还包括一些物理类应激源与生物类应激源[24]㊂本试验选用H 2O 2为应激源进行细胞氧化损伤应激模型的建立,其优点在于H 2O 2性质稳定,易于获得㊁成本较低且效果明显㊂此外在建立细胞氧化损伤应激模型的过程中发现,I P E C -J 2与C a c o -2细胞所需的H 2O 2溶液的浓度并不一致,说明不同的细胞系对H 2O 2溶液的氧化应激效果有所差异㊂天然酚酸及多糖类药物均有良好的抗氧化效果,而菊苣酸是从紫锥菊等菊科植物中提取出来的天然酚酸类化合物㊂在本研究中菊苣酸作用于两种肠道细胞的氧化应激保护和缓解作用的I C 50值在133.1~207.5μm o l /L 之间,均远小于文献中用D P P H 法测定的茶多酚的抗氧化I C 50值(0.143m g /m L ),与三七多糖的抗氧化I C 50值(0.055m g /m L )相接近[25],同时在选定浓度下最强的抗氧化效果与所选定的阳性药物抗坏血酸相当,且保护效果的I C 50值小于缓解效果的I C 50值,显示菊苣酸在这两种肠道细胞中具有很好的氧化损伤保护和缓解效果,且对氧化损伤的保护效果明显优于其缓解效果,在一定程度上证明了菊苣酸具有成为肠道细胞的天然抗氧剂的潜力㊂4 结论本研究设计了4个因素3个水平正交试验,对提取方案进行优化,最终得到了菊苣酸提取率最高的优化方案为:50%乙醇浓度按照1ʒ18的料液比,在70ħ下超声2h 提取,最终菊苣酸提取得率为1.89m g /g㊂并发现菊苣酸对C a c o -2和I P E C -J 2两种肠道细胞均有很强的保护和缓解氧化损伤的效果,其保护作用的I C 50值分别为172.6和133.1μm o l /L ,缓解作用的I C 50值分别为207.5和196.5μm o l /L ㊂参考文献(R e f e r e n c e s):[1] 韩若婵,闫永平.菊苣酸在养鸡生产中的应用与发展3052中国畜牧兽医49卷方向[J].北方牧业,2016,15:27.HA N R C,Y A N Y P.A p p l i c a t i o na n dd e v e l o p m e n td i re c t i o no fc h i c o r y a c i di n c h i c k e n p r o d u c t i o n[J].N o r t h e r n A n i m a l H u s b a n d r y,2016,15:27.(i nC h i n e s e)[2]王玉真,高爽,李凌军,等.菊苣酸生物活性及其药理作用研究进展[J].中国新药杂志,2020,29(15):1729-1733.WA N G YZ,G A OS,L ILJ,e t a l.R e s e a r c ha d v a n c e so nb i o a c t i v i t y a n d p h a r m a c o l o g i c a l e f f e c t so f c h i c o r i 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[23] S I L V A J,A L V E S C,P I N T E U S S,e t a l.N e u r o p r o t e c t i v e e f f e c t s o f s e a w e e d s a g a i n s t6-h y d r o x i d o p a m i n e-i n d u c e d c e l ld e a t ho na n<i nv i t r o>h u m a nn e u r o b l a s t o m a m o d e l[J].B M C C o m p l e m e n t a r ya n dA l t e r n a t i v eM e d i c i n e,2018,18:58.[24]何方婷,陈嘉熠,徐佳伊,等.氧化应激细胞模型建立的研究进展[J].食品工业科技,2019,40(7):341-345.H EFT,C H E NJY,X UJY,e t a l.R e s e a r c h p r o g r e s so fe s t a b l i s h i n g c e l l u l a r o x i d a t i v e s t r e s s m o d e l[J].F o o d I n d u s t r y T e c h n o l o g y,2019,40(7):341-345.(i nC h i n e s e)[25]黄上峰,陆飞燕,黄元河,等.三七多糖抗氧化活性研究[J].微量元素与健康研究,2018,35(1):30-32.HU A N GSF,L UFY,HU A N G Y H,e t a l.S t u d y o nt h e a n t i o x i d a n t a c t i v i t y o f p o l y s a c c h a r i d e s o fP a n a x n o t o g i n s e n g(B u r k.)[J].T r a c eE l e m e n t sa n dH e a l t hR e s e a r c h,2018,35(1):30-32.(i nC h i n e s e)(责任编辑戴晔)5052。

不同采收期对菊苣根系营养成分和芽球产量的影响

doi：10.11838/sfsc.1673-6257.22123不同采收期对菊苣根系营养成分和芽球产量的影响冯秀娟1，任冰如2，牛冠婷2，黄晓杰2，朱超伟1，孟秀花2，丁晓琴2，盖亚男2，刘　艳2，陈　剑1，2*（1．南京林业大学轻工与食品学院，江苏　南京　210037；2．江苏省中国科学院植物研究所，江苏省抗糖尿病药物筛选技术服务中心，江苏　南京　210014）摘　要：以自选的菊苣株系为研究对象，于2020年9月9日播种，播种后76～181 d每隔1周左右采收1次，测定根的糖分、可溶性蛋白质、游离氨基酸含量以及软化后芽球的形态指标，探讨不同采收期对根系营养成分及芽球产量的影响。

结果表明：根和叶含水量均随气温下降而降低并在大寒节气前后达到最低点；在播种后76～153 d，根的总糖含量持续增加，而还原糖含量则为当最低气温低于0℃且持续时间较长时增加，153 d以后根的总糖含量逐渐下降而还原糖含量的变化规律也发生了改变；根的可溶性蛋白质含量在104～146 d明显下降，游离氨基酸含量在90～160 d上升，以后下降。

相关性分析表明，播种后76～153 d采收的植株，其芽球直径和重量分别与根的干重、总糖、还原糖、游离氨基酸含量呈显著相关，芽球转化率仅与单位重量根中的还原糖含量呈显著相关，软化天数分别与根干重、总糖、还原糖、游离氨基酸含量呈显著负相关。

综合分析表明，所选菊苣株系在越冬期间未发生冻害，适当延期采收可使包括糖分和氨基酸在内的干物质充分积累，在南京地区1月初至2月上旬采收植株有利于保证芽球产量和品质。

关键词：菊苣；采收期；根系；营养成分；芽球产量菊苣（Cichorium intybus L.）为菊科（Composi-tae）菊苣属（Cichorium L.）一年生或多年生草本植物，软化型菊苣是将大田栽培的肉质根在黑暗处再次培养形成黄化芽球的一种类型，菊苣芽球是一种绿色无公害的高档保健型蔬菜，具有广阔的市场前景［1-4］。

菊苣根复合型袋泡茶的研制

收稿日期：2020-01-10作者简介：毛金蓉（1998—），本科。

E-mail ：****************通讯作者：李昀（1980—），副教授，工学硕士，研究方向为农产品贮藏与加工。

E-mail ：*****************摘要：以菊苣根、凤梨、薄荷、荷叶、滇橄榄为原料，研制复合型袋泡茶。

通过单因素实验、正交试验、感官评价、固形物含量的测定及QAD 图的绘制，确定原料的最佳配比及冲泡工艺。

结果以每袋袋泡茶总重计，其最佳配比为：菊苣根：73.38%，凤梨：6.29%，滇橄榄：15.72%，荷叶：4.19%，薄荷：0.42%。

当袋泡茶的总质量为9.54g 时，冲泡温度为80℃，用水量为250mL ，冲泡时间为5min 时饮用最佳，冲泡次数建议两次为宜。

冲泡后茶汤清澈，口感醇厚，清甜回甘，果香悠长。

关键词：菊苣根；袋泡茶；正交试验；单因素实验；感官评价The Development of Chicory Root Compound Bag TeaMAO Jin-rong ，WANG Juan-juan ，LI Yun *（College of Food and Bioengineering ，Tianjin Agricultural University ，Tianjin 300392，China ）Abstract:Compound bag tea was prepared with chicory root ，pineapple ，mint ，lotus leaf and fructus phyllanthi as raw materials.The optimum ratio of raw materials and foaming process are determined by single factor test ，orthogonal test ，sensory evaluation ，determination of solid content and drawing of QAD diagram.Calculating by the total weight of teabag per bag ，the results show that the optimal proportion is:Chicory root ：73.38%，pineapple 6.29%，fructus phyllanthi ：15.72%，lotus leaf ：4.19%，mint ：0.42%.When the total mass of tea in bag is 9.54g ，the brewing temperature is 80℃with 250mL water in 5mins ，it is the best to drink.After brewing ，the tea is clear ，with a nice taste ，sweet and sweet ，with long fruit aromas.It is suggested that the brewing time should be twice.Key words:chicory root ；tea bag ；orthogonal test ；single factor test ；sensory evaluation菊苣，又名苦苣，是维吾尔族习用药材，含有马栗树皮素、山莴苣素等物质，具有极高的药用价值。

不同菌种菊苣根发酵提取物的挥发性成分分析及应用

不同菌种菊苣根发酵提取物的挥发性成分分析及应用常健;李源栋;杨培香;徐世涛;黄静;刘劲云;王夸平;徐重军;陈媛;王乃定;段焰青【摘要】采用同时蒸馏萃取/气相色谱-质谱联用(SDE/GC-MS)法对菊苣根长孢诺德酵母菌(Lodderomyces elongisporus)发酵提取物(A)和菊苣根短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)发酵提取物(B)的挥发性成分进行分析,并使用峰面积归一化法计算各成分相对百分含量.结果表明,A和B中共分析鉴定出44种挥发性成分,其中A 中40种,B中31种,二者相同成分27种.成分分析结果表明,A和B中主要挥发性成分为棕榈酸、糠醛、3-甲基戊酸、2.乙酰基呋喃等.B中的挥发性成分种类较少,但主要致香成分含量高,且对烟草吸味起副作用的成分含量更小.卷烟加香试验结果表明,菊苣根发酵提取物添加到卷烟中,具有掩盖杂气,纯净余味的作用,并使卷烟香气丰富饱满,烤甜香明显,烟气柔和透发,总体表现B优于A,添加比例以0.05％最佳.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2019(038)005【总页数】5页(P199-203)【关键词】菊苣根;长孢诺德酵母菌;短小芽孢杆菌;发酵;挥发性成分;卷烟加香【作者】常健;李源栋;杨培香;徐世涛;黄静;刘劲云;王夸平;徐重军;陈媛;王乃定;段焰青【作者单位】云南中烟新材料科技有限公司,云南昆明650106;云南中烟工业有限责任公司技术中心,云南昆明650202;云南中烟新材料科技有限公司,云南昆明650106;云南中烟新材料科技有限公司,云南昆明650106;云南中烟新材料科技有限公司,云南昆明650106;云南中烟新材料科技有限公司,云南昆明650106;云南中烟新材料科技有限公司,云南昆明650106;云南中烟新材料科技有限公司,云南昆明650106;云南中烟新材料科技有限公司,云南昆明650106;云南中烟新材料科技有限公司,云南昆明650106;云南中烟工业有限责任公司技术中心,云南昆明650202【正文语种】中文【中图分类】TS264.3菊苣（Cichorium intybus L.）是一种灌木丛生的多年生草本植物，根肉质、短粗[1]，产于东北、西北、华北、山东、山西等地[2]。