诱发蚕豆根尖细胞微核试验研究

洗衣粉诱发蚕豆根尖细胞微核试验研究

Experimental Study on Micronucleus in Root-Tip Cells of Vicia faba Induced by

（生物系 051班卫换琴学号：2005131136）

摘要：应用蚕豆根尖微核试验，对雕牌洗衣粉遗传毒性效应进行了研究。结果表明：一定浓度范围内（0.108-14.00mg/，蚕豆根尖微核细胞数与洗衣粉浓度间呈正相关，2.0%浓度的洗衣粉溶液处理48小时和用10.0%浓度的洗衣粉溶液处理24小时可使蚕豆根尖中具有微核的细胞数明显增加，结果表明，低浓度的洗衣粉溶液较长时间接触或高浓度短期接触均可引起蚕豆根尖细胞遗传物质的损伤

关键词:雕牌洗衣粉蚕豆根尖细胞微核诱导作用损伤

引言：人类在发展经济的同时、对自然资源的肆意开发和对环境的无偿利用、已经造成了全球生态破坏、、资源浪费和短缺、环境污染等重大问题，为了探明环境污染物对生物机体是否有蓄积毒作用，必须从环境的一致性着手所谓环境的一致性，即指环境中物理或化学污染物对生物的致畸、致癌、致突变性，这是目前环境污染中最主要的问题三致中致突变致畸、致癌的根本常常是致突变的结果。

微核是无着丝点的染色体断片，在有丝分裂后期由于不能向两极移动而游离于细胞质中，在分裂间期细胞核形成时，即可在它附近看到若干个很小的圆形结构，直径大约是细胞直径的这就是微核。

微核是常用的遗传毒理指标之一指示染色体或纺锤体的损伤。由于这种损伤会因细胞受到的外界诱变因子的作用而加剧，而微核产生的概率；又与诱变因子的剂量呈正比，因此可以用微核出现的频率来评价环境诱变子.蚕豆根尖细胞微核试验(Micronucleus test，M C—NT)技术是一种以染色体断裂及纺锤丝损伤为测试终点的植物微核监测方法．它是一

种灵敏度高、操作技术简单的用于监测环境致突变物的诱变活性对人体和其他生物体遗传物质产生危害的技术，并从细胞遗传学水平上探讨植物遗传物质的改变状况与环境污染程度的相互关系蚕豆是经典的遗传学材料.

1.实验材料和仪器

1.1实验材料：蚕豆种子

1.2 实验器材

(1)Motic光学显微镜

(2)试管(10ml)×2

(3)蚕豆发芽盒

(4)其它：镊子、手术刀、载玻片、盖玻片、滤纸等。

1.3试剂

雕牌洗衣粉醋酸洋红溶液

2. 实验方法与步骤

2.1 种子处理

将蚕豆种子洗涤干净，室温下用蒸馏水浸泡发芽24小时，然后移入铺有干净纱布的托盘内培养。当初生根长到2cm时，选取发育良好的，大小与根长近似的幼根。

将选好的蚕豆芽放入发芽盒中，使根尖完全浸入处理水样中，室温下培养48小时后，用蒸馏水洗涤根尖2次，再用蒸馏水恢复24小时，设蒸馏水处理为空白对照。

2.2 固定

借助于物理方法或化学药剂的作用，迅速透入组织和细胞将之杀死，并且使其结构和内含物如蛋白质，脂肪，糖类以及核物质与细胞器等，在形态结构上尽可能保持生活时的完整和真实状态，同时更易于染色，可以更清楚的显现细胞在生活时不易看清的结构。

分别用浓度为2.0%、5.0%、10.0%的雕牌洗衣粉溶液固定蚕豆根尖

2.3 水解分离

水解分离的作用是去除细胞内未固定的蛋白质, 同时使胞间层的果胶类物质解体，细胞分散而易于观察。用镊子取固定好的蚕豆根尖，放在试管内，加水解分离液2ml，室温下处理8-20min，倒去水解分离液，再加入固定液2ml，软化5min，软化对细胞壁起腐蚀作用。然后倒去固定液，用蒸馏水反复冲洗使材料呈白色微透明，以镊子柄轻压能压碎为佳。

2.4 染色和压片

切取蚕豆根尖分生组织放在载玻片上纵横切成几段，放在载玻片上，以十字压片法覆以载玻片，用镊子柄或铅笔头轻敲几下，再用拇指用力下压使细胞充分分散，注意不要移动玻片，然后分开两玻片，各滴上1-2滴醋酸洋红染液，染色20-30min后加上盖玻片，注意不要产生气泡，最后用吸水纸吸去多余染液。

2.5 镜检

低倍镜（×10）镜检后，选择细胞分散均匀，细胞无损，染色良好的区域（也可在高倍镜下观察），观察100个细胞，并记下微核数。

转到高倍镜(×40)，调节显微镜，寻找有丝分裂各个时期的细胞，并以描点法画出有丝分裂相草图。

2.6 实验记录

表一

2.7 实验结果及分析：

蚕豆微核技术评价水质污染程度的指标

2.7.1 微核率(MCN％或 MCN％o)

MCN％o=测试样点观察到的 MCN数／测试样点观察到的细胞数×1000％o

MCN‰在10‰以下，表示基本没有污染；

MCN‰在10‰－18‰区间，则表示有轻度污染；

MCN‰在18‰－30‰区间，则表示有中度污染；

MCN‰在30‰以上，则表示有重度污染；

2.7.2 污染指数 (PI)

水质污染指数 =样品实测 MCN％o平均值／对照组 MCN％o

污染指数在0－1.5区间为基本没有污染；

污染指数在1.5－2区间为轻度污染；

污染指数在2－3.5区间为中度污染；

污染指数在3.5以上为重度污染；

由表一分析得；

讨论

由实验数据可以看出洗衣粉溶液会诱导蚕豆根尖细胞产生微核，并微核数随着浓度和时间的增加而增多，这是由于的浓度增大的时候？

2.6.2 微核试验在环境评价中有何意义？

2.6.3 在一般良好的自然环境中，动物或植物的细胞是否会出现微核？你为什么这样认为？

参考文献

[1]王跃华马丹炜陈小军冯济武用蚕豆根尖细胞微核技术监测府南河水质的研究

` 四川师范大学学报(自然科学版)2005.7.28

[2]帅素容主编普通遗传学实验教程 --成都；四川科学技术出版社，2003.8