大蒜根尖微核试验

大蒜根尖微核试验

摘要

微核简称(MCN)，是真核生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。本实验我们用生活中和实验室里的多种诱变剂来处理大蒜根尖细胞，通过压片镜检来观察统计大蒜分生区细胞内微核的数目，检测不同诱变剂的诱变强度。

前言

微核简称(MCN)，是真核生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。在细胞间期微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外、大小应在主核1／3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的，但有些实验也证明整条的染色体或多条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥便形成了第三个核块。已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点和染色体畸变的情况一样。所以可用简易的间期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。由于大量新的化合物的合成，原子能应用，各种各样工业废物的排出，使人们很需要有一套高度灵敏，技术简单的测试系统来监视环境的变化。只有真核的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。且有研究显示以植物进行微核测试与以动物进行的一致率可达99%以上。目前微核测试已经广泛应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。

材料与方法

材料

1实验器具：显微镜、解剖针、盖玻片、载玻片、培养皿

2实验试剂：改良苯酚品红染液、浓盐酸、叠氮化钠、清水、2%迪彩防干枯洗发液、2%驱蚊剂、0.2%NaNO2、1%氧氟沙星

3实验材料：大蒜根尖

方法

1将大蒜浸水催根

将剥皮的大蒜放入培养皿中，倒入清水使大蒜根部没入水中，置于25℃下培养24小时，待初生根长出1-2cm左右，根毛发育良好，即可用来检测。

2处理

将培养皿中的清水倒出，将事先准备好的4种诱变剂及阴性（清水）、阳性（叠氮化钠）对照倒入培养皿中，注意标记准确，使各种诱变剂完全浸泡根尖。大蒜根尖处理24h后，将诱变剂及阴性、阳性对照换成清水后恢复培养24h。

3固定根尖细胞

将恢复后的大蒜从根尖顶端切下1cm长的幼根放入离心管中，以卡纳氏固定液进行固定2-24h后，保存于70%乙醇溶液中。

4压片

将离心管中的液体倒出，加入足够的浓盐酸解离3-5min，再用蒸馏水洗涤3次（每次1-2min）。从根尖处切下约0.5mm置于载玻片上，滴加苯酚品红染色15min后，盖上盖玻片，包两层滤纸，用镊子钝部按压至根尖散成云雾状。

5镜检

将装片放于显微镜下观察，记录经每种诱变剂处理的细胞中含有微核的细胞率及每个细胞微核的平均数目。（至少观察100个细胞）

结果

讨论

由上表可知，阳性对照微核数最多，诱变能力最强。另外选用的0.2%NaNO2微核数也较多，诱变力较高。所以叠氮化钠和亚硝酸钠都是强的诱变剂。其他实验材料与阴性对照清水一致，均未发现微核，表示这些材料没有诱变能力，较安全。所以在以后的生活中要尽量避免接触叠氮化物和亚硝酸盐。

参考文献

植物微核实验

植物微核实验Ⅱ