微生物与制药3 ppt课件

2020/10/13
3. 酚系数测定（石炭酸系数测定）
酚系数是以酚为标准，将待测的化学消毒剂与杀菌效力相比 较，所得的就是杀菌效力的比值。 苯酚系数=消毒剂的杀菌稀释度/苯酚的杀菌稀释度 （苯酚系数大于2或等于2才合格）
由于各种化学消毒剂杀菌原理各不相同，因而这种方法仅仅适用于酚类消毒剂杀菌效力的 测定。
具体的测定方法:是分别将酚及待测化学消毒剂按不同比例 稀释，各取5ml放到试管中，再加入经24小时培养后的菌悬 液各0.5ml，混匀后放入 20℃水浴中，5、10、15分钟分别 取一接种环混合液移种到另一支5 ml的肉汤培养基中， 37℃培养24小时记录生长情况。
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（三）、 联合抗菌试验
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干燥纸片的制备方法：选用吸水力强而且质地均匀的滤纸， 用打洞机制成6mm直径的圆纸片，120℃干燥灭菌2小时。 然后把配制好的各种适宜浓度的抗生素溶液，每100张纸 片加入0.5ml药液，使它均匀浸润，放在无菌平皿中， 37℃，使它干燥，分装小瓶中，封口，4℃保存.
一般药敏试验常采用滤纸片法，我们可以根据抑菌圈的 大小，来判断菌种对药物的敏感性，是敏感，中度敏感还 是耐药。
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药物的抑菌作用或杀菌作用是在一定条件下相对 而言的。在我们检测时，药物的作用受到用药时 培养基的组成、温度、PH值及所用的菌种、菌量 等各个因素有关。 虽然说体外抗菌试验有很多优点，但是由于体外 抗菌试验没有复杂的体内因素影响，因此药物体 外抗菌试验和体内抗菌试验可能会出现不一致的 结果。所以，一般我们在体外对药物进行测试后， 有效的药再要进行体内试验，如果体内试验再次 证实此药有效的话，才能推荐应用到临床。
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(二）、 体外杀菌试验
杀菌试验是用来评价药物对微生物的致死活性的。
1. 最低杀菌浓度（MBC）（最小致死浓度MLC）的测 定
按液体培养基稀释法的操作方法测了药物的MIC。 然后把未长出菌的各个试管培养液分别移种到无 菌平板上，培养后凡是平板上无菌生长的药物最 低浓度就是最小致死浓度（MLC）。如果是细菌 的话可以称为最小杀菌浓度（MBC）。
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世界卫生组织规定了抗菌药物的敏感性评定标准，在 标准实验条件下根据抑菌圈大小来判断，比如：
抗生素或化疗药物 耐药
抑菌圈直径（mm） 中敏 敏感
氯霉素 红霉素 四环素 卡那霉素
≤12 ≤13 ≤14 ≤13
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
13-17 14-17 15-18 14-17
≥18 ≥18 ≥19 ≥18
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2.琼脂扩散法
利用药物在琼脂培养基中扩散，并在一定浓度范围内抑制细
菌生长的原理进行的。一般用于细菌和酵母菌的药敏试验。
1. 滤纸片法（纸碟法）
滤纸片法是最常用的方法，适用于新药的初筛试验 （初步药物是否有抗菌作用）及临床的药敏试验（细 菌药物第三性试验、以便选择用药）。滤纸片分湿、 干两种，可以在试验时用无菌纸片沾取药物溶液放在 含菌的平板表面，也以预先做成一定浓度的干燥纸片。 一般来说预先做成的干燥纸片实用一些而且准确一些。
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[棋盘法的设计] 棋盘法的主要优点在于甲、乙两药的每个药物浓度都 有单独的和与另一个药物不同浓度的联合，因此能精 确测定两种抗菌药物在适当浓度的比例下所产生的相 互作用。 在进行棋盘法之前应先测定两种抗菌药物单独对受试 菌的MIC，然后以两药MIC的8倍、4倍、2倍、1倍以 及MIC的1/2、1/4、1/8浓度（或4倍、2倍、1倍、1/2、 1/4浓度）分别进行联合。可见举例，如表—1的青霉 素G与链霉素联合药敏实验和表2的TMP+SMZ的联合 作用。
药物制剂的微生物学检查
1.掌握药物的体外试菌试验方法（琼脂扩散法和系列稀释法）， 了解药物的体内抗菌实验。 2.掌握一般灭菌制剂的无菌检查方法和原理，熟悉特殊药品的 无菌检查法。 3.掌握非灭菌药物的微生物总数测定方法，熟悉药品的大肠杆菌 检查方法。 4.了解一般药品的沙门菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和破 伤风杆菌的检查方法。
1、联合抗菌试验主要用于测定两种抗菌药物联合应用时的相互影响。
①无关作用小，两种药物联合作用的活性 等于其单独活性；
②拮抗作用，两种药物联合作用显著低于 单独抗菌活性；
③累加作用，两种药物联合作用时的活性 等于两种单独抗菌活性之和；
④协同作用，两种药物联合作用显著大于 其单独作用的总和。
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2. 打洞法
含菌琼脂平板上打洞,所以说微量法适于药物血浓度 的监测。优点是微量（血清用量少）敏感，操作简便。 除此之外还有管碟法、直接滴加法和挖沟法：适用于 测试一种药物对几种细菌的抗菌作用。方法是先制备 普通琼脂平板，并在平板上挖直沟，在沟内滴加药液， 在沟侧接种细菌。经过培养以后观察加细菌生长的情 况。我们可以根据沟和细菌间的抑菌距离的长短，来 判断该药物对这些细菌的抗菌能力。
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2. 活菌计数法
将定量的试验菌加入到一定浓度的定量药物中，作 用一定时间后，取样进行活菌数计数，从存活的微生物 数量计算出药物对试验菌的致死率，从而判断药物的杀 菌能力。
活菌计数一般是将定量的药物与试验菌作用后混合液 稀释后，混入琼脂培养基做成平板，培养后数平板上形 成的菌落数，由于一个菌落是由一个细菌繁殖而来的， 所以可以用菌数乘以稀释倍数，计算出混合液中存活的 细菌数。或者也可以用微孔滤膜过滤药物与试验菌的混 合液，洗净药液，将滤膜放在平板上培养后数菌落数 （CFU)。
常用方法 1. 棋盘格法
棋盘稀释法是常用的定量方法，首先分别测定拟联合的抗菌药物对 检测菌的MIC。
药物的稀释分别在方阵的纵列和横列进行，这样在每管（孔）中可 得到不同浓度组合的两种药物混合液。 接种菌量为5×105CUF／ml，35℃孵育 18h后观察结果。计算部分抑菌浓度
（FIC）指数 0．5为协同作用； 0．5－1为相加作用； 1～2为无关作用； ＞2为拮抗作用。
2020/10/13
药物的抗菌试验
药物的体外抗菌试验包括用于区别药物是抑菌或 杀菌药物的抑菌试验；
测定药物杀菌活性的杀菌试验；以及检查两种药物 联合作用的联合抗菌试验等。
一般抑菌药物只能抑制微生物生长，不能杀死微生 物，抑菌药物被除去，微生物又可以恢复继续生长。 杀菌药物能杀死微生物，杀菌药物除去后，微生物仍 然不能生长。