含量和有关物质方法学验证方案

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药审中心：有关物质分析方法学验证的项目及可接受标准

有关物质分析方法学验证的项目及可接受标准药审中心黄晓龙药品中的有关物质泛指在药品的生产与储存过程中产生的工艺杂质或降解产物。

本文结合国外一些大型药品研发企业在此方面的要求，提出了在对有关物质检查方法进行验证时的可接受标准，供国内的药品研发单位在进行研究时参考。

1．准确度该指标主要是通过回收率来反映。

验证时一般要求根据有关物质的定量限与质量标准中该杂质的限度分别配制三个浓度的供试品溶液各三份（例如某杂质的限度为0.2%，则可分别配制该杂质浓度为0.1％、0.2％和0.3％的杂质溶液），分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率，并计算9个回收率数据的相对标准差（RSD）。

该项目的可接受标准为：各浓度下的平均回收率均应在80%-120%之间，如杂质的浓度为定量限，则该浓度下的平均回收率可放宽至70%-130%，相对标准差应不大于10%。

2．线性线性一般通过线性回归方程的形式来表示。

在定量限至一定的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定该杂质峰的面积，计算相应的含量。

以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。

可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.990，Y轴截距应在100％响应值的25％以内，响应因子的相对标准差应不大于10%。

3．精密度1）重复性配制6份杂质浓度（一般为0.1%）相同的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于15%。

2）中间精密度配制6份杂质浓度（一般为0.1%）相同的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于20%。

4．专属性可接受的标准为：空白对照应无干扰，该杂质峰与其它峰应能完全分离，分离度不得小于2.0。

5．检测限杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。

6．定量限杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。

另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份溶液杂质峰保留时间的相对标准差应不大于2.0%，峰面积的相对标准差应不大于5.0%。

含量测定的方法学验证

含量测定的方法学验证
方法学验证是指对一种测定方法进行验证，以确定其可靠性、准确性和精密度的过程。

对含量测定方法进行验证可以确保该方法能够准确地测定样品的含量，并符合所需的质量控制要求。

方法学验证通常包括以下几个步骤：
1. 精确性验证：通过与已知精确含量的标准溶液进行比较，验证方法的准确性。

可以使用已知浓度的标准品进行测定，并计算测得的结果与标准值之间的比较，例如使用回归分析、协方差分析等方法。

2. 精密度验证：通过重复分析同一样品多次，验证方法的精密度。

可以进行重复性实验，计算测定结果的标准偏差或相对标准偏差，如相对标准偏差小于一定的限值，则认为方法具有良好的精密度。

3. 特异性验证：通过对不同成分或干扰物的加入，检验方法对目标分析物的选择性。

可以通过加入同类物质、相似物质或可能存在的干扰物质来测试方法的选择性，确保只有目标物被准确测定。

4. 线性验证：通过一系列标准品的浓度逐渐增加或减少，验证方法的线性范围。

可以绘制标准品浓度与测定结果的曲线，逐一计算每个点对应的回归方程和相关系数来判断方法的线性性。

5. 检出限和定量限验证：通过对低浓度样品或者添加不同浓度的目标成分进行测试，验证方法的检出限和定量限。

可以计算标准差、信号噪声比等指标来判断方法的灵敏度。

总之，方法学验证对含量测定方法的准确性、精密度、选择性、线性性、灵敏度等方面进行评估，确保测定结果的可靠性和合理性，是化学分析中一项重要的步骤。

注射液有关物质及含量测定方法学验证方案

注射用XX 有关物质及含量测定方法学验证方案样品：自制XX 供试品：批号：市售品：进口XX 批号：国产XX 批号：对照品：XX 对照品：自制，批号：xxxxxx ，XX 含量：51.27% 水分：1.34%A 对照品：来源：批号：B 对照品：来源：批号：C 对照品：来源：批号：1、方法验证注射用XX 是以XX 为原料通过复溶并重新冻干获得，制品期间未加入任何辅料，同时注射用XX 有关物质及含量测定方法与原料测定方法完全一致，因此注射用XX 有关物质及含量测定方法学验证可与XX 原料方法学一致，此次方法学验证使用的样品用原料（批号：xxxxxx ）代替。

2、检测方法含量测定照高效液相色谱法（中国药典2015 年版四部通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水相-甲醇-乙腈（800：160：16）为流动相；柱温：30 C ;检测波长为260nm。

取对照品溶液作为系统适用性试验溶液，量取20』注入液相色谱仪，各杂质峰之间及主成分峰与相邻杂质峰之间的分离度应符合规定，理论板数按XX 峰计算应不低于3000。

测定法取本品适量，精密称定，加水溶解制成每1ml 中约含XX 0.2mg 的溶液，作为供试品溶液。

精密量取供试品溶液20讪，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取XX对照品适量，同法测定。

按外标法以峰面积计算，按无水物计算，含XX阳离子应为50.0%〜54.0%。

有关物质照高效液相色谱法（中国药典201 5年版四部通则0512）测定。

取本品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml 中约含XX 0.5mg 的溶液，作为供试品溶液；另分别取A、B、XX、C对照品适量，精密称定，加水溶解并定量制成每1ml中约含A 2.5 jg、B 2.5 jg、XX5.0⑷、C 5.0 j的混合溶液，作为对照品溶液。

取对照品溶液20 J，注入液相色谱仪，出峰顺序依次为A、B、XX、C,调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%〜30%;再精密量取对照品溶液和供试品溶液各20讪,分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的 6 倍。

含量和有关物质方法学验证方案

含量和有关物质方法学验证方案一、引言在化学领域，即便我们知道一些物质的化学式和分子结构，我们仍然需要确切地知道其含量，因为不同含量的同一种物质在性质上可能会有很大的差异。

因此，快速、准确地确定物质的含量对于化学研究以及工业生产具有重要意义。

本文将介绍一种常用的含量测定方法：滴定法，并给出详细的验证方案。

二、滴定法原理滴定法是一种准确测定溶液中其中一种物质含量的方法。

其基本原理是通过向待测液体中加入一种已知浓度溶液的滴定液，当已知浓度溶液与待测液体反应完全时，通过滴定液与待测液体的反应量来确定待测物质的含量。

三、滴定法验证方案1.实验目的本实验旨在验证滴定法测定溶液中其中一种物质含量的方法的准确性和可靠性。

2.实验材料及设备滴定管、滴定架、比色皿、移液器、烧杯、乙醇溶液、酸性钾高氯酸溶液、甲基橙指示剂。

3.实验步骤(1)准备滴定液：称取一定质量的酸性钾高氯酸溶液，稀释至适宜的体积。

(2)准备待测液：取一定体积的待测液，如乙醇溶液。

(3)加入指示剂：向待测液中加入少量的甲基橙指示剂，使待测液呈橙色。

(4)滴定测定：将滴定液从滴定管中滴入待测液中，同时轻轻搅拌。

当待测液的颜色由橙色转变为淡黄色时停止滴定。

(5)计算含量：根据滴定液的体积和浓度，计算出待测液中物质的含量。

4.实验验证(1)准确性验证：通过多次重复实验，计算出待测液中物质的平均含量，并计算其标准偏差。

如果平均含量接近理论值，并且标准偏差较小，则说明滴定法测定物质含量的准确性较高。

(2)精密度验证：通过多次重复实验，计算出待测液中物质含量的相对标准偏差。

如果相对标准偏差较小，则说明滴定法测定物质含量的精密度较高。

(3)选择适当指示剂：在实验中，如果选择的指示剂与待测液中物质反应后出现显著颜色变化，则说明该指示剂适用于该滴定反应。

(4)确定滴定液的浓度：滴定液的浓度需要根据滴定反应的化学方程式和已知反应物质的浓度进行计算。

在实验中应当使用已知浓度的标准物质进行验证滴定液的浓度。

海藻糖鉴别(3)、有关物质、含量的测定方法验证

海藻糖鉴别（3）、有关物质、含量的测定方法验证作者：李宁刘昶李镇宏来源：《科学与财富》2019年第36期摘要：建立一个用高效液相色谱法测定海藻糖鉴别（3）、有关物质和含量测定的方法。

方法：以磺化交联的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物为填充剂的强阳离子氢型色谱柱 ;以水为流动相 ;检测45℃，柱温80℃，流速0.4ml/min。

结果：海藻糖在1.0027472～15.04419mg/ml浓度范围内线性关系良好，得线性方程y=0.0000022x-0.037297（R2=0.9999），回归系数大于0.999; ;结论：该方法简便、准确，可用于海藻糖鉴别（3）、有关物质和含量的质量控制。

关键词：海藻糖;高效液相色谱法示差检测器;方法学海藻糖是一种对生物体具有神奇的保护作用的二糖，它能够有效地保护蛋白质分子不变性失活，从而维持生命体的生命过程和生物特征。

所以海藻糖在食品、药品和化妆品领域都有广泛的应用。

特别是在医药领域今后几年需求量会有较大的增长。

而海藻糖的鉴别、有关物质和含量的检测是用高效液相RID检测器检测，RID检测器为特殊检测器，应用不是很广泛。

本文拟建立海藻糖鉴别（3）、有关物质和含量测定的方法，旨在为海藻糖的质量安全提供参考。

进一步确立海藻糖的使用安全。

1.實验部分1.1试剂与仪器海藻糖、麦芽三糖、无水葡萄糖对照品来源中国食品药品检定研究院。

纯化水，自制。

海藻糖样品。

安捷伦1260高效液相色谱仪系统（配有示差折光检测器、四元梯度泵、在线脱气装置、自动进样器、柱温箱）。

电子天平：梅特勒托利多电子天平（XS105DU）。

1.2试验方法色谱条件与系统适应性 ;以磺化交联的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物为填充剂的强阳离子氢型色谱柱;以纯水为流动相 ;示差折光检测温度为45℃，柱温80℃，流速0.4ml/min，采集运行30min。

对照品溶液的制备 ;精密称定麦芽三糖、无水葡萄糖、海藻糖对照品，分别为24.41mg、24.26mg、93.06mg，置于同一个10ml量瓶中，加水溶解并稀释制成每lml中各含2.441mg、2.424mg、9.287mg的溶液为对照1，再精密称定海藻糖对照品252.20mg置于25ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度制成每1ml含海藻糖10.027mg的溶液为对照2。

化学药品质量标准方法学验证要求

含量测定措施学验证要求
回收率配制浓度为80％、100％和120％旳供试品溶液各3份，
分别测定含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。各个浓度下平均回收率均在98.0～102.0％之内，9份回收率RSD 在2％以内。
含量测定措施学验证要求
线性在80％～120％范围内（日常检验中可扩充至50％～
化学药品质量标准方法学验证要求
1、有关物质措施学验证要求 2、含量测定措施学验证要求
有关物质措施学验证要求
检测波长及流动相确实定对仿制药来说，主要是各国药典原则旳比对，参照。检
测波长一般需要紫外扫描后拟定，流动相旳选择需要各个原则比对后拟定（即药审中心要求旳原则旳溯源）。需要注意旳是假如原料药中有新旳工艺杂质和副产物，需要考察既有原则旳合用性。
150％）配制不少于5个浓度旳样品，分别测定其主峰面积，以浓度对峰面积建立方程，进行线性回归。回归系数不得不大于0.998，Y轴截距应在100％响应值旳2％以内，响应因子旳相对原则差应在2％以内。
有关物质措施学验证要求
校正因子措施有单点计算法、斜率计算法，常用后一种，0.9～
1.1可采用本身对照法测定（实际工作中可放宽至0.8～1.2）
有关物质措施学验证要求
耐用性研究流动相pH值，水相缓冲液旳pH波动范围为0.2 缓冲液旳浓度，在满足pH条件下，缓冲液中盐旳浓度
波动范围在10％以内柱温，波动范围在10度以内流速，波动范围在50％以内
有关物质措施学验证要求
耐用性研究流动相构成，调整程度合用于流动相中旳小组份，调整
范围在30％以内，但总调整百分比在10％以内。色谱柱，不能变化固定相填料类型，采用三根不同品
牌长度旳色谱柱进行比较，假如要求色谱柱类型，则需要三个批号旳色谱柱进行比较。

含量与有关物质方法学验证方案

一般项目方法学验证方案
表一原料药检测项目及方法学验证方案
名称
检测项目
方法学验证
起始原料
性状、溶解度、鉴别、比旋度(手性中心)、干燥失重、炽灼残渣、残留溶剂、重金属、有关
物质、含量
残留溶剂、有关物质、含量
中间体
性状、有关物质、纯度
有关物质、纯度
API
性状、溶解度、引湿性、熔点、比旋度(手性中心)、鉴别、干燥失重或水分、硫酸盐、氯化物、重金属、炽灼残渣、残留溶剂、
定量限6针;
S/N≥10。主成分及杂质峰保留时间得相对标准差应不大于
2、0%,峰面积得相对标准差应
不大于5、0%。
外标法测定得杂质
溶液稳定性
供试液
供试液1份
0、1、2、4、6
、8、24小时各进1针
主成分得含量变化得绝对值
≤2、0%;
杂质含量得绝对值在±0、1％以内,
并不得出现新得大于报告限度得杂质
检测波长得确定
在流动相条件下进行UV扫描
表五有关物质方法学验证具体内容
试验内容
溶液配制方法
溶液配制份数
进样针数
评定标准
备注
系统适用性
分别取供试品、各杂质适量,加流动相超声溶解,并稀释配制成约含供试品XXmg/ml与含杂质各1%(相当于供试品浓度XXmg/ml)得混合溶
液作为系统适用性溶液。
供试液1份
仪器精密度、LOD、溶液稳定性、空白干扰
分自身对照法
耐用性
分离度、强制降解试验
加校正因子得主成分
系统适用性、仪器精密
自身对照法
度、LOD、LOQ、线性、溶液稳定性、空白
干扰、耐用性
分离度、强制降解试验

含量和有关物质方法学验证方案

外标法测定的杂质
溶液稳定性
供试液
供试液1份
0、1、2、4、6、8、24小时各进1针
主成分的含量变化的绝对值≤2.0%；
杂质含量的绝对值在±0.1％以内，
并不得出现新的大于报告限度的杂质
峰面积及峰面积的归一化含量
耐用性
供试液
系统适用性溶液
调流动相pH变化±0.2
1份供试液和1份系统适用性溶液，各条件下进2针
主峰的拖尾因子不得大于2.0；
主峰与杂质峰必须达到基线分离；主峰与杂质峰分离度符合质量标准；
各条件下的峰面积RSD符合规定；
杂质含量的绝对值在±0.1％以内
调流动相配比变化±5%
柱温±5℃（如有柱温）
不同（批号）色谱柱
流速相对值变化±20％
缓冲液中盐的浓度±10％
方法精密度
供试液
杂质对照品溶液
供试液6份
各浓度下的平均回收率应在80%-120%（低浓度为定量限，放宽至70%-130%），RSD(%)不大于10.0%
强制降解试验
供试液
控制溶液、空白溶液、酸破坏、碱破坏、光破坏、氧化破坏、热破坏、酸碱空白溶液、氧化空白溶液
各进1针
空白不干扰降解产物的检出，
分离度、仪器精密度、LOD、溶液稳定性、空白干扰
不加校正因子的主成分自身对照法
中间体
检测波长的初选、分离度、检测波长的确定
分离度、仪器精密度、LOD、溶液稳定性、空白干扰
面积归一化法
API
检测波长的初选、分离度、检测波长的确定
分离度、强制降解试验、仪器精密度、LOD、溶液稳定性、空白干扰、耐用性
不加校正因子的主成分自身对照法
一般项目方法学验证方案
表一原料药检测项目及方法学验证方案

含量和有关物质方法学验证内容

含量测定方法学验证内容及可接受标准：1．准确度该指标主要是通过回收率来反映。

验证时一般要求分别配制浓度为80％、100％和120％的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。

可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差（RSD）应不大于2.0%。

2．线性线性一般通过线性回归方程的形式来表示。

具体的验证方法为：在80％至120％的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。

以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。

可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.998，Y轴截距应在100％响应值的2％以内，响应因子的相对标准差应不大于2.0%。

3．精密度1）重复性配制6份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于2.0%。

2）中间精密度配制6份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于2.0%。

4．专属性可接受的标准为：空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得小于2.0。

以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于980。

5．检测限主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。

6．定量限主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。

另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于2.0%。

7．耐用性分别考察流动相比例变化±5％、流动相pH值变化±0.2、柱温变化±5℃、流速相对值变化±20％时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。

可接受的标准为：主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离；各条件下的含量数据（n=6）的相对标准差应不大于2.0%。

化学药物评价-含量测定分析方法验证的可接受标准(精)

含量测定分析方法验证的可接受标准本文介绍对含量测定方法进行验证时的可接受标准，仅供参考。

1．准确度该指标主要是通过回收率来反映。

验证时一般要求分别配制浓度为80％、100％和120％的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。

可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差（RSD）应不大于2.0%。

2．线性线性一般通过线性回归方程的形式来表示。

具体的验证方法为：在80％至120％的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。

以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。

可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.998，Y轴截距应在100％响应值的2％以内，响应因子的相对标准差应不大于2.0%。

3．精密度1）重复性配制6份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于2.0%。

2）中间精密度配制6份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于2.0%。

4．专属性可接受的标准为：空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得小于2.0。

以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于980。

5．检测限主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。

6．定量限主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。

另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于2.0%。

可接受的标准为：主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离；各条件下的含量数据（n=6）的相对标准差应不大于2.0%。

含量及有关物质分析方法验证的可接受标准

溶出介质体积的选择
漏槽条件即做溶出的最佳条件，是指药物所处释放介质的浓度远小于其饱和浓度，生理学解释为药物在体内被迅速吸收，制剂的体外包括释放度等测定需要模仿体内生理条件的，满足药物溶解-吸收的过程，漏槽条件起到了修正作用，一般释放介质的体积为药物饱和溶液所需介质体积的3～5倍。
（3）转篮法与桨法的选择
含量及有关物质分析方法验证的可接受标准
文章来源：药审中心审评二部黄晓龙
本文介绍了在对含量及有关物质测定所用的分析方法进行方法学验证时，各项指标的可接受标准，以利于判断该分析方法的可行性。
内容包括：准确度、线性、精密度、专属性、检测限、定量限、耐用性和系统适应性。
1.准确度
含量：该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求分别配制浓度为80％、100％和120％的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差（RSD）应不大于2.0%。
3.精密度
含量： 1）重复性配制6份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于2.0%。 2）中间精密度配制6份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得 12个含量数据的相对标准差应不大于2.0%。
化学药品溶出度方法研究
文章来源：审评二部唐素芳
化学药品普通口服固体制剂溶出度方法验证易忽视的几个问题
文章来源：审评四部审评八室郑国钢
溶出度研究试验主要包括以下内容：
（1）溶出介质的选择（2）溶出介质体积的选择（3）溶出方法（转篮法与桨法）的选择（4）转速的选择（5）溶出度测定方法的验证（6）溶出度均一性试验（批内）（7）重现性试验（批间）

HPLC测定有关物质和含量方法验证解析

HPLC测定有关物质和含量方法验证解析HPLC（高效液相色谱法）是一种常用的分析技术，在药品分析、环境监测、食品安全等领域有着广泛的应用。

在HPLC测定有关物质和含量方法验证解析中，可以从方法验证的目的、内容和步骤等方面展开。

方法验证的目的主要是验证所采用的分析方法是否可靠、精确、准确且具有可重复性，以保证在日常分析中的可靠性和可应用性。

方法验证的内容包括系统适用性、灵敏度、线性度、准确度、精密度、稳定性等，可以通过一系列实验和分析来进行验证。

方法验证的步骤一般包括以下几个方面：1.系统适用性验证：通过对样品的系统性能参数进行验证，包括压力、回峰时间、分离度和理论板数等。

通过调整仪器条件和操作参数，使得方法能够恰当地适用于所测定的物质。

2.灵敏度验证：通过测定不同浓度的标准品，确定方法的最小测定限和最小检测限。

灵敏度的验证可以通过信噪比、回归方程等指标进行评估。

3.线性度验证：通过测定一系列浓度已知的标准品，绘制浓度与峰面积或峰高的线性关系图，确认方法的线性范围和相关系数。

4.准确度验证：通过加标回收实验，比较样品中已知添加量与实际回收量的差异，评估方法的准确度。

5.精密度验证：通过同一样品的多次测定，计算相对标准偏差（RSD）来评估方法的精密度。

6.稳定性验证：通过不同储存条件下样品的测定，包括短期和长期稳定性试验，评估方法的稳定性。

在方法验证的解析中，需要对上述步骤进行详细的数据处理和结果分析。

对于系统适用性验证，需要报告各项系统性能参数的测试结果，并说明是否符合要求；对于灵敏度验证，需要计算最小测定限和最小检测限，并评价方法的灵敏度；对于线性度验证，需要绘制线性关系图，并计算回归方程的相关系数；对于准确度和精密度验证，需要计算回收率和相对标准偏差，并进行统计学分析；对于稳定性验证，需要比较不同条件下测定结果的差异。

此外，在HPLC测定有关物质和含量方法验证解析中还需要注意的是，要同步验证色谱柱的适用性、短柱、长柱分析的差异，以及可能的干扰和修正因子等因素。

AO含量测定与有关物质测定方案

AO含量测定与有关物质测定方案仪器：岛津LC10-VP PLUS NO.070701色谱柱：Gemini C18 4.6*15cm，5.0µm NO.20100702流动相：PH3.0缓冲液：甲醇：乙腈=50:35:15PH3.0缓冲液：7.0mL三乙胺至800mL水，磷酸调PH3.0，再用水稀释至1L.波长：237nm稀释液：流动相柱温：25℃进样量：20µl含量测定：标准配制：精密称取API 12.5mg至25mL容量瓶，加流动相约15mL，超声2min，加流动相定容至刻度，过滤，取续滤液1mL至10mL容量瓶中，加流动相定容至刻度。

（平行配制2份，每份打3针，共6针，当RSD%小于2时，方可做下面的实验。

）供试品配制：取片子10片，称重，研细，从研细的粉末中精密称重0.5g至25mL容量瓶中，加流动相约15mL，超声2min，加流动相定容至刻度，过滤，取续滤液1mL至10mL 容量瓶中，加流动相定容至刻度。

（平行配制2份，每份打2针，4份样品的含量的RSD%必须小于2）有关物质：空白：流动相标准品配制：精密称取API 15mg至25mL容量瓶，加流动相约15mL，超声2min，加流动相定容至刻度，从中精密移取5mL至100mL容量瓶，从上述溶液中精密移取1mL至10mL容量瓶中，加流动相定容至刻度。

（0.003mg/mL，平行做2份）（运行15min）供试品配制：10片，称重，研细，从研细的粉末中精密称重0.5g至25mL容量瓶中，加流动相约15mL，超声2min，加流动相定容至刻度，过滤，取续滤液进样。

（可以直接从含量测定项下的供试品中的第一步稀释样取）（运行35min）计算公式：100(1/F)(CS /CT)(ri / rS)CS：标准品溶液浓度（mg/ml）CT：供试品浓度（mg/ml）Ri：供试品中杂质面积rS：标准品溶液的面积F：相对保留时间。

含量和有关物质方法学验证方案

含量和有关物质方法学验证方案含量是指其中一种物质在一个给定的样品中的数量。

在实际应用中，我们常常需要确定其中一种物质的含量以及对其进行定量分析。

为了验证含量和有关物质的方法学，下面提出一种验证方案。

本文将介绍验证含量和有关物质方法学的目的、步骤和主要内容，以实现准确测定和分析物质含量的目的。

一、验证目的验证含量和有关物质方法学的主要目的是确定分析方法的准确性、可靠性和精确性，确保其能够满足要求，以得到准确的含量测定结果。

此外，还要验证该方法是否适用于不同样品的分析，并且能够满足法规和标准的要求。

二、验证步骤1.确定目标物质和参考物质：根据需要分析的样品和要求，选择目标物质和参考物质。

2.准备样品和标准溶液：将样品制备成适当的溶液，并制备一系列浓度不同的标准溶液。

3.确定分析条件和方法：确定分析条件，例如所需的仪器、设备和试剂，以及分析方法的操作步骤。

4.进行实验：按照所制定的方法，对样品和标准溶液进行实验分析。

5.数据处理：根据实验数据，使用合适的统计方法计算出含量的平均值和标准差，并进行相关性分析。

6.结果解释和讨论：根据实验结果，对分析方法进行评估和解释，并与已有的方法进行比较和讨论。

三、主要内容在验证含量和有关物质方法学时，主要进行以下几个方面的验证：1.线性范围：通过分析一系列标准溶液，确定分析方法的线性范围，即物质的浓度与测定结果之间的线性关系。

2.精确度：通过重复测定一组样品，确定方法的重复性和精确性。

计算相对标准偏差(RSD)或相对误差(RE)，以评价方法的准确性。

3.灵敏度：通过测定不同浓度的样品，确定方法的灵敏度。

计算灵敏度限(SL)或检出限(LOD)和检测限(LOQ)，判断方法的灵敏程度。

4.特异性：通过对样品进行干扰试验，确定方法对于目标物质的特异性。

确保方法只能测定目标物质，而不受其他物质的干扰。

5.稳定性：通过测定同一样品在不同条件下的含量，如不同温度，不同储存时间等，确定方法的稳定性。

含量和有关物质方法学验证

含量和有关物质方法学验证（HPLC法）系统适用性试验的配制方法：在100％浓度的主成分溶液中加入1%浓度的杂质对照品，以模拟样品中有可能存在的状态。

介绍配制方法——先配制杂质贮备液，再用供试品溶液（或浓的对照品溶液）来稀释，简便、易行！检测波长的确定涉及到各被检测物质在该波长下的响应因子是否相同，即所谓重量校正因子的问题。

（f=A杂质/A被测成分）选取主成分与各杂质具有相同紫外吸收的波长（f=1.0）。

选取各杂质紫外吸收大于主成分紫外吸收的波长（f>1.0），这样可更加严格控制杂质的限度。

如选取各杂质紫外吸收小于主成分紫外吸收的波长，应必须加入重量校正因子（f<1.0），否则将得到错误的判断。

最小峰面积的设定●其设定，不是绝对值，而是相对值。

●英国药典中有明确的说明：凡有关物质的检测采用HPLC法测定时，均规定舍弃对照溶液主峰面积几分之几的峰面积。

普通样品测定时，通常为1/10~ 1/20（即相当于样品测定浓度的0.1%~0.05%）。

如规定杂质限度为1.0%，对照溶液峰面积为10000，那么，最小峰面积可考虑设定为1000~500左右。

新药稳定性考核时，可设定到0.01%的最小峰面积。

●原料药销售与购买的合同中，为确保双方达成一致意见，此点应予以重视。

检测限（将被测物溶液不断稀释后进样测定，直至被测物峰面积无法检出为止，此时的浓度即为最低检出浓度）：●信噪比的三倍——纯属“纸上谈兵”，实际测定中根本用不上。

●是相对值，不是绝对值。

是相对于供试品溶液浓度的多少分之一而言，一般至少要在5000倍以上。

供试品溶液浓度则应是最低检出浓度的2000～5000倍。

同时还应考虑仪器、色谱柱等因素对最低检出浓度和最大进样浓度的影响(即耐用性因素)，所以供试品溶液的浓度应在保证小于最大进样量的情况下，适当设定得高些，以保证该浓度在任何试验条件下，均有足够的检测灵敏度。

表1为最低检出浓度、最大进样量、供试品溶液和对照溶液间的比例关系(进样量10μl，规定杂质限度1.0％)。

含量和有关物质方法学验证都要做线性么

含量和有关物质方法学验证都要做线性么化学物质量控制分析方法验证技术指导原则一、概述保证品安全、有效、质量可控是品研发和评价应遵循的基本原则，其中，对品进行质量控制是保证品安全有效的基础和前提。

为达到控制质量的目的，需要多角度、多层面来控制品质量，也就是说要对物进行多个项目测试，来全面考察品质量。

一般地，每一测试项目可选用不同的分析方法，为使测试结果准确、可靠，必须对所采用的分析方法的科学性、准确性和可行性进行验证，以充分表明分析方法符合测试项目的要求，这就是通常所说的对方法进行验证。

方法验证的目的是判断采用的分析方法是否科学、合理，是否能有效控制品的内在质量。

从本质上讲，方法验证就是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法能否符合检测项目的要求。

方法验证在分析方法建立过程中具有重要的作用，并成为质量研究和质量控制的组成部分。

只有经过验证的分析方法才能用于控制品质量，因此方法验证是制订质量标准的基础。

方法验证是物研究过程中的重要内容。

二、方法验证的一般原则原则上每个检测项目采用的分析方法，均需要进行方法验证。

方法验证的内容应根据检测项目的要求，结合所采用分析方法的特点确定。

同一分析方法用于不同的检测项目会有不同的验证要求。

例如，采用高效液相色谱法用于制剂的鉴别和杂质定量试验应进行不同要求的方法验证，前者重点要求验证专属性，而后者重点要求验证专属性、准确度、定量限。

三、方法验证涉及的三个主要方面（一）需要验证的检测项目鉴别、杂质检查定量测定（含量测定、溶出度、释放度等）、其他特定检测项目（分子量及分子量分布、生物活性等）鉴别的目的在于判定被分析物是目标化合物，而非其它物质，用于鉴别的分析方法要求具有较强的专属性。

杂质检查主要用于控制主成分以外的杂质，如有机杂质、无机杂质等。

杂质检查可分为限度试验和定量试验两种情况。

用于限度试验的分析方法验证侧重专属性和检测限。