waters超高效液相色谱

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(沃特世)UPLC超高效液相色谱介绍

UPLC超高效液相色谱（沃特世）主要特点超高速度1.小颗粒填料色谱柱能超乎寻常地提高分析速度而不降低分离度2.显著增加样品的通量，提高工作效率，降低分析成本3.节省以往一向耗时的方法开发与认证的时间超高灵敏度1.小颗粒技术和整体化的仪器设计，UPLC®能在改善分离度的同时提高灵敏度2.更高的柱效和更窄的色谱峰，意味着更高的色谱峰高和更高的灵敏度3.在得到超高分离度和超高速度的同时能够得到超高灵敏度超高分离度1.利用高效创新小颗粒填料（1.7μL），获得超强分离能力2.超低扩散体积，充分发挥小颗粒填料分离能力3.超高分离度，适合复杂混合物的分离分析超级创新为满足色谱实验室对历史追踪不断增长的需求，每根ACQUITY UPLC®色谱柱出售时均带一个永久性的eCord，它能记录进样次数，最高的反压和柱温，其中还含有由沃特世公司提供的该色谱柱的分析测试合格证书。

色谱柱安装后，智能化的芯片会自动地把关键参数采集进入色谱柱的历史文档，并记录色谱柱整个寿命周期的历史。

该记录不能被删除。

技术参数最大操作压力：15000psi（1mL/min）溶剂输送精度：0.075%RSD或0.02minSD流速范围：0.010-2.000mL/min，增量0.001mL/min梯度曲线：11种。

包括线性、凹线、凸线和两种步进梯度变化有效系统体积:<140μL，与系统反压无关。

带标准混合器溶剂选择:最多四种。

可在A1与A2和B1和B2之间选择交叉污染:0.005%或2nL进样范围:0.5-50μL进样精度:<0.3%RSD进样线性:>0.999样品室温度控制:4 - 40℃色谱柱历史追踪:使用eCord技术检测器配置:紫外可见检测器、光电二极管矩阵检测器、蒸发光散射检测器以及所有质谱检测器超高速度,超高灵敏度,超高分离度,超级创新为满足色谱实验室对历史追踪不断增长的需求，每根ACQUITY UPLC®色谱柱出售时均带一个永久性的eCord，它能记录进样次数，最高的反压和柱温，其中还含有由Waters公司提供的该色谱柱的分析测试合格证书。

waters超高效液相色谱仪操作步骤

第一部分：仪器准备1. 确保waters超高效液相色谱仪处于正常工作状态，检查仪器是否连接电源，是否有故障指示灯显示。

2. 打开色谱仪软件，检查仪器参数设置是否符合实验要求，包括流速、温度、检测波长等。

3. 准备所需的色谱柱、色谱柱连接器、进样器以及其他实验所需的耗材。

第二部分：样品准备1. 准备实验所需的样品，确保样品已经滤过或者处理过以去除杂质。

2. 根据实验要求，将样品溶解在适当的溶剂中，并进行稀释或者稀释。

第三部分：超高效液相色谱仪操作步骤1. 开始操作前，先进行系统平衡。

具体操作步骤为：将色谱柱连接至色谱柱连接器上，然后连接至色谱仪，用洗脱液平衡色谱柱。

2. 设置色谱仪的操作参数，包括流速、温度、检测波长等。

3. 进行样品进样，具体操作步骤为：将进样器连接至色谱仪，将稀释好的样品注入进样器中，设置好进样量。

4. 开始进行实验，监控色谱图谱的变化，记录实验数据。

5. 实验结束后，对色谱柱和色谱仪进行清洗和维护，确保仪器干净、整洁。

第四部分：数据处理和分析1. 对实验获得的数据进行处理和分析，比对标准曲线，计算样品中所含物质的浓度或者纯度。

2. 对实验结果进行统计分析，进行数据呈现，如绘制色谱图谱、制作数据统计图表等。

3. 通过数据处理和分析，得出实验结论，对实验结果进行解释和讨论。

第五部分：实验安全及注意事项1. 在操作过程中，注意个人安全，避免发生化学品溅泼或者接触有害物质。

2. 操作过程中需严格按照实验要求和操作规程进行，如有疑问请及时向实验指导老师或专业人士请教。

3. 实验结束后，及时清理实验台面和仪器设备，妥善存放试剂和耗材。

通过以上步骤的操作，可以保证在使用waters超高效液相色谱仪进行实验时，能够得到准确、可靠的实验结果，为科研工作和学术研究提供有力支持。

第六部分：精密控制与调试1. 在进行实验操作前，要确保色谱仪的各项参数已经精确调试完毕。

这包括流速、温度、压力、检测波长等参数的精准控制。

超高效液相色谱串联质谱法和离子色谱法测定饮用水中二氯乙酸、三氯乙酸的比对

超高效液相色谱串联质谱法和离子色谱法测定饮用水中二氯乙酸、三氯乙酸的比对寇斐（郑州自来水投资控股有限公司，河南郑州 450000）摘要：目的：分别利用超高效液相色谱串联质谱法与离子色谱法对生活饮用水中二氯乙酸、三氯乙酸进行测定，比较其检测性能。

方法：样品经滤膜过滤后，以乙腈/0.05%乙酸水溶液作为流动相，梯度洗脱，以三重四极杆质谱检测器进行检测，根据保留时间和特征离子峰进行定量分析。

离子色谱法以KOH作为淋洗液，IonPac AS19分析柱和IonPac AG19保护柱，8～40 mmol·L-1梯度淋洗，以电导检测器检测。

从检测时间、准确度、精密度、检出限等方面对两种方法进行对比。

结果：两种方法测定二氯乙酸、三氯乙酸线性良好，超高效液相色谱串联质谱法测定二氯乙酸检出限为0.000 6 mg·L-1，三氯乙酸检出限为0.001 8 mg·L-1，检测时间为4.5 min；离子色谱法测定二氯乙酸检出限为0.001 2 mg·L-1，三氯乙酸检出限为0.002 2 mg·L-1，检测时间为32 min。

两种方法精密度和准确度均满足实验要求。

结论：生活饮用水中二氯乙酸、三氯乙酸可以用以上两种方法进行定性和定量分析，其中离子色谱法所需有机试剂少，但检测时间长，检测限较高；超高效液相色谱串联质谱法检测限较低，灵敏度高，检测时间短。

日常检测工作中，可根据水样具体情况，选择合适的检测方法。

关键词：二氯乙酸；三氯乙酸；生活饮用水Comparison Between Ultra High Performance LiquidChromatography Tandem Mass Spectrometry and Ion Chromatography for the Determination of Dichloroacetic Acid and Trichloroacetic Acid in Drinking WaterKOU Fei(Zhengzhou Water Supply Investment Holdings Company Limited, Zhengzhou 450000, China) Abstract: Objective: Dichloroacetic acid and trichloroacetic acid in drinking water were determined by ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry and ion chromatography respectively, and their detection performance was compared.. Method: The liquid chromatography tandem mass spectrometry sample was filtered through a filter membrane, and acetonitrile/0.05% acetic acid aqueous solution was used as the mobile phase for gradient elution. The detection was performed using a triple quadrupole mass spectrometer detector, and quantitative analysis was performed based on retention time and characteristic ion peaks. The ion chromatography method used KOH as the eluent, IonPac AS19 analysis column and IonPac AG19 protection column, with a gradient elution of 8～40 mmol·L-1, and conductivity detector detection. Compare the two methods based on indicators such as detection time, accuracy, precision, and detection limit. Result: The linearity of the two methods for determining dichloroacetic acid and trichloroacetic acid was good. The detection limit of dichloroacetic acid by ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrum was 0.000 6 mg·L-1, and the detection limit of trichloroacetic acid was 0.001 8 mg·L-1, with a detection time of 4.5 min; the detection limit of ion chromatography for dichloroacetic acid is 0.001 2 mg·L-1, and for trichloroacetic acid is 0.002 2 mg·L-1, with a detection time of 32 min. The precision and accuracy of both methods meet the experimental requirements. Conclusion: Dichloroacetic acid and trichloroacetic acid in drinking water can be qualitatively and quantitatively analyzed by the above two methods. Ion chromatography生活饮用水的安全越来越受到人们的重视，随着饮用水消毒技术的发展，氯化消毒、臭氧消毒、二氧化氯等消毒技术的应用越来越广泛。

超高效液相色谱(UPLC)的应用

超高效液相色谱（UPLC）的应用
超高效液相色谱是分离科学中的一个全新类别， UPLC借助于HPLC的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。

超高效液相色谱（UPLC）是一个新兴的领域，作为世界第一个商品化UPLC产品的Waters ACQUITY UPLCTM 超高效液相色谱系统也是刚刚出现，因此目前已发表的文献资料还很缺乏。

与传统的HPLC相比，UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍。

因此其在蛋白质、多肽、代谢组学分析及其它一些生化领域里将会得到广泛应用。

另外，在天然产物的分析方面，使用UPLC与质谱检测器连接，会对天然产物分析，特别是中药研究领域的发展是一个极大的促进。

在提到“蛋白组学”或“代谢组学”时，与没有“组”的差别从分析的角度说就是样品量极大，需要在短时间分析成千上万的样品。

UPLC不损失分离度的高速度优点在这里就能充分体现。

多数生化样品及天然产物都十分复杂，图1是多肽指纹图的HPLC与UPLC两个色谱图（紫外检测）比较。

在同样条件下，UPLC能分离的色谱峰比HPLC多出一倍还多。

图2是代谢产物分析的色谱图。

在同样条件下，UPLC的分辨率能够认出更多的色谱峰（质谱检测器- LCT）。

watershsst3色谱柱说明书

watershsst3色谱柱说明书Waters HSS T3色谱柱是一种高效液相色谱柱，被广泛应用于生命科学、制药、环境和食品分析等领域。

该柱具有优异的分离性能和稳定性，可用于分离复杂的混合物，提供准确和可靠的分析结果。

以下是关于Waters HSS T3色谱柱的详细说明：1. 柱材料：Waters HSS T3色谱柱采用高质量的硅胶材料制成，具有特殊的表面处理，能够提供优异的色谱性能和稳定性。

2. 柱尺寸：Waters HSS T3色谱柱的常见尺寸为4.6mm乘250mm，具有较大的分离能力和样品容量。

此外，还提供其他规格的色谱柱可供选择。

3. 分离性能：Waters HSS T3色谱柱具有极好的分离性能，可有效分离复杂样品中的成分。

其独特的柱底和柱壁结构可以增强样品和柱相之间的相互作用，提高分离效果。

4. 稳定性：Waters HSS T3色谱柱具有出色的稳定性和重现性，可持续运行大量样品分析而不产生漂移或降解。

柱底和柱壁的特殊表面处理使得该色谱柱不易受到污染和损害，有助于保持柱的使用寿命。

5. 应用范围：Waters HSS T3色谱柱广泛适用于各种样品类型的分析，包括有机化合物、天然产物、药物、代谢产物等。

它可用于定量和定性分析，以及结构鉴定和纯化工作。

6. 色谱条件：Waters HSS T3色谱柱适用于反相液相色谱和离子对色谱法。

在反相液相色谱中，可以使用不同的流动相和梯度条件来优化分离效果。

在离子对色谱中，可以添加离子对试剂来改变运行条件。

7. 包装和存储：Waters HSS T3色谱柱以高压不锈钢柱体包装，旨在保护柱底和柱壁免受损坏和污染。

柱体上标有批号和有效期，以便用户能够正确追踪使用日期和有效期限。

该色谱柱应存放在避光、干燥和温度控制的环境中，以确保其质量和性能。

总之，Waters HSS T3色谱柱是一种优质的色谱柱，具有卓越的分离性能和稳定性，适用于各种复杂样品的分析工作。

Waters高效液相色谱系统操作规程

Waters高效液相色谱系统操作规程一. 准备1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制）。

2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

3. 接通电源，依次打开1525泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。

4. 打开Breeze软件，进入系统主界面。

二. 操作步骤1.更换流动相。

2.在主界面中点击“Manage Breeze”按钮，选择system选项，出现系统连接示意图，观察各个部件是否连接好。

若未连接好，则需点击“Diagnostics/Reconfigure”进行诊断。

3.回到主界面，选择“Manage Breeze”中的project选项，单击“Make a new project”，“Next”，在“Project Name”中输入名称，单击“Finish”。

单击“Change a project/User”，在“Project”中选择输入的名称，单击“OK”。

4.单击“View Method”按钮，点击“Pump”图标，设置泵的参数。

点击“UV Det”图标，设置紫外检测器的波长。

单击“Save Method”按钮保存设置方法。

5. 打开泵的抽液阀，使用灌注注射器抽取一定量的洗脱剂。

单击Purge图标，出现“Purge Wizard”对话框，选中“Purge Pump”选项，点击“Next”“Next”，调节A、B泵的流量分别为约3ml/min。

打开泵的参考阀，点击“Next”。

Purge结束后关闭参考阀。

6.点击主界面中的“press to equilibrate system/ monitor baseline”按钮，平衡系统0.5－1h，直至基线稳定。

7.点击“press to make a single injection”按钮，进入“Specify Single Inject Parameters”对话框，设置参数，点击“inject”。

UPLC(超高效液相色谱)简介

UPLC（超高效液相色谱）简介超越HPLC随着科学技术的进步，对液相色谱技术的要求也不断提高，单从技术角度的改进已经不行。

这就需要同时从科学与技术的角度出发，或者说从理论高度对液相色谱重新认识。

因此，UPLC（超高效液相色谱）概念得以提出，将HPLC的极限作为自己的起点。

在1996年，Waters公司推出Alliance HPLC时的主要目标是提高液相色谱的"精度"。

当时多数公司都认为HPLC技术已经发展到极致了、而同时用户对性能没有更高的需求，因此HPLC的目标应该是降低成本、走向更低的价格以获得更广泛的应用。

针对这样的观念，Waters公司提出：HPLC的技术没有到达极限，用户对HPLC有更高的要求，HPLC精度的提高对更好、更可靠的结果有极大的益处，对法规的遵从也是一个极大的促进。

站在当今世界科技前沿的液相色谱用户现在又有了新的需求。

首先是改进生产力的需求，因为大量的样品需要在很短的时间内完成，例如代谢组学分析；其次是在生化样品及天然产物样品的分析中，样品的复杂性对分离能力提出了更高的要求；第三是在与MS及MS/MS等检测技术联用时，对连接的质量提出了更高的要求。

简而言之，我们需要"更快地得到更好的结果"。

今天我们发现，随着科学技术的进步，对液相色谱技术的要求也不断提高，单从技术角度的改进已经不行。

这就需要同时从科学与技术的角度出发，或者说从理论高度对液相色谱重新认识。

因此UPLC（超高效液相色谱）概念的提出也就十分自然。

简而言之，UPLC是用HPLC的极限作为自己的起点。

理论基础早在1956年，J.J van Deemter就发表了他著名的理论：van Deemter曲线及其方程式。

最早这个理论是用在气相色谱上的，但是后来出现的液相色谱上也能应用这个理论。

Waters公司引入UPLC的概念就是由研究这个著名的方程式开始。

首先探讨一下这个著名的方程式。

waters高效液相色谱

Waters高效液相色谱操作说明一．简介本高效液相色谱实验包括：waters1525泵+waters2487双波长检测器+色谱柱+电脑（breeze 图谱处理软件）+流动相二．操作流程0.准备工作确定色谱实验方法，处理好流动相1，换好流动相，确定色谱柱选择无误1.开机打开泵开关，听到两声“嘀”的响声之后，再打开波长检测器。

检测器进入预热阶段（此时检测器面板进入5min倒计时）这期间打开电脑，进入英文windows操作系统2，待检测器自检完毕（整个自检过程约6~7min），打开电脑桌面的（Breeze软件）。

待程序完全启动，整个开机过程结束。

系统默认进入上次使用的方案。

2.建立新方法和新方案2.1新建方案方案主要用来储存你的各个实验方法，数据等内容，你可以把它理解为一个文件夹。

2.1.1创建步骤选择→单击→单击"next"→在"project name"中输入方案名称（如abc），"comments"中可填注释，也可不填。

→单击"finish"2.1.2打开创建的方案在界面下→单击→在"project"中找到你创建的方案（如abc）→点击"OK",即进入到我们自己的方案中了2.2新建方法在新建的方案中，需要建立不同的试验方法。

试验方法主要设定的包括洗脱方式，检测波长等参数。

2.2.1新建方法步骤单击→单击→单击（Flow选项卡）→在programmed flow中设定你的洗脱方式（此步在2.2.2详述）→单击→单击（channel 1选项卡）→在"wavelength"框内设定你的检测波长（如265nm,280nm,215nm等等）→（设定结束，保存）：单击→输入方法名称如（abc 1）→单击"save"32.2.2洗脱方式的设定（重要）在programmed flow中可看到。

waterse2695高效液相色谱

waterse2695高效液相色谱简介
定义与特点
定义
waterse2695高效液相色谱（HPLC）是一种分离和分析复杂样品中各种成分的实验技术。
特点
具有高分离效能、高灵敏度、高选择性等优点，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
工作原理
01
02
03
流动相
在高压下，流动相通过固定相，将待测组分分离。
参数。
峰分离不完全
可能是由于流动相组成或梯度设置不当引起的，需要调整流动相或梯度条
件。
拖尾峰
可能是由于色谱柱污染或损坏引起的，需要更换色谱柱或清洗色谱柱。
基线漂移
可能是由于流动相不纯或仪器长时间未校准引起的，需要检查并更换流动相或进行仪器校准。
05
waterse2695高效液相色谱的发展趋势与展望
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
数据处理系统
用于采集和处理检测器输出的信号，记录色谱图并计算各组分的含量。
操作流程
准备工作
检查仪器各部件是否正常，准备好流动相、样品及色谱柱等。
流动相处理
根据实验要求，配置合适的流动相，并进行过滤和脱气处理。
安装色谱柱
将色谱柱安装到仪器上，确保密封良好，无泄漏。
操作流程
平衡色谱柱
在流动相通过色谱柱后，使色谱柱达到平衡状态。
的检测技术，如化学发光检测器、质谱检测器和生物传感器等。
02
优化样品预处理方法
简化样品预处理过程，提高预处理的效率和效果，以减少分析时间和误
差。
03
开发智能化的仪器控制系统
实现仪器控制系统的智能化和自动化，提高分析的稳定性和可靠性。

water高效液相色谱仪的使用说明

转载：《分析测试百科网》Waters 600型高效液相色谱仪操作规程一．开机前准备1．根据需要选择合适色谱柱。

2．在容器中放入已过滤脱气好的流动相，把吸滤过滤头放入容器中。

二．开机1．打开所需仪器的电源开关，打开氦气阀门。

2．等各仪器自检通过后，开微机进入Windows NT，双击millog.exe，进入millennium 32工作站。

三．编辑仪器方法1．选择所需Project，run sample上击右键，选择所需仪器，联机。

2．点击instrument method 的edit，设置好各仪器参数。

3．保存所编缉的方法。

四．样品分析与采集1．点击set up，建立方法。

2．等待色谱柱、系统平衡，基线稳定后，设置好样品信息，点击Start，即开始样分析与数据采集。

五．报告输出1．在millennium 32界面点击Brown Project。

2．选择所需Project，选择所要处理的数据文件。

3．选择所要选用的报告格式，输出报告。

六．关机1．冲洗色谱柱，排出流路中可能有的缓冲液，并用双蒸水冲洗泵的柱塞杆。

2．泵停止，关闭氦气阀门。

3．退出工作站，关闭仪器电源。

4. 在记录本上记录使用情况。

注意事项：1. 所有的溶剂均选用HPLC级试剂。

2. 水相流动相需经常更换，防止长菌变质；如果流动相有缓冲盐，必须用5%甲醇或5%乙腈过渡冲洗。

3. 样品均用0.45um的滤膜过滤后才可进样。

4. 色谱柱用合适的溶剂保存，若为C18柱推荐用甲醇保存。

一、问：用HPLC液相色谱仪进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在?如何解决?答：关于漂移问题：1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题1、流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

Waters公司产品说明：高效液相色谱(HPLC)及其相关技术的简要介绍说明书

Introduction to GPCColumns, Distributions,Sample Prep., Calibration,What’s NewPolymer Analysis TechniquesHigh Performance Liquid Chromatography (HPLC) (mainly Size Exclusion Chromatography, SEC)Mass Spectroscopy (MS)Thermal Analysis (TA)Rheometry, Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy (NMR), Fourier Transform Infrared spectroscopy (FTIR)Introduction to GPC OutlineWhat is GPC?GAP of AdditivesWhat’s New?What is GPC?▪Gel Permeation Chromatography (GPC) separates samplemolecules based upon their relative size in solution▪Size Exclusion Chromatography (SEC)▪Gel Filtration Chromatography (GFC)▪GPC is an isocratic mode of separation▪GPC is well-suited for polymer analysis –provides a “molecularweight distribution”Particles arePorous, rigidpolymericmaterialsBig ones are not sloweddown because they aretoo big to go into thepores, so they elute firstWhat is GPC?▪The elution profile represents the molecular weight distribution based upon the relative content of different molecular weights…▪Based on size in solution Elution Volume (retention time)largest smallest Mn Mw Mz Mz+1B ig O nes C ome O ut F irst M o l e c u l a r W e i g h tSome definitionsMolecular weight averages are used to provide numerical differences between samples –Mn: Number average molecular weighto At this point in the curve the number of molecules in the sample to left is equal to the number of molecules to the right–Mw: Weight average molecular weighto At this point in the curve the weight of the molecules to the left is equal to the weight of the molecules to the right–Mz and Mz+1: these values are calculated based on molecular weight and abundance (obtained by ultracentrifugation and GPC software computation)o The values are used for “comparison” purposes•Known samples to unknown samplesThese averages are statistical moments calculated from the molecular weight distribution curveMolecular Weight AveragesGPC Delivers all MW information with one experiment GPC calculates the MW distributionof the polymer; this distribution canbe measured for:–Mn can affect a polymer’s brittleness,flow and compression properties.–Mw is related to strength properties,and impact resistance–Mz is related to elongation andflexibility, (Gumby -rubber)–Mz+1 is related to die swell,(extrusion parameter)Molecular Weight/Physical Property Correlations P r o p e r t y /P r o c e s s s P a r a m e t e r E f f e c t o f H i g h M W E f f e c t o f L o w M W I m p a c t S t r e n g t h M e l t V i s c o s i t y P r o c e s s i n g T e m p F l e x L i f e B r i t t l e n e s s D r a w a b i l i t y S o f t e n i n g T e m p S t r e s s -c r a c k R e s i s t a n c e M e l t F l o w Properties of PolymersGPC Process –Separates by Size in Solution Sample PolymerVo Vt“Bank” of3 GPC Columns Molecular Weight Distribution Chromatogram B igO nesC omeO utF irstWhat is happening inside a column?BOCOF Separation by size –Usually no chemical Retention mechanismBasic Column InformationColumns are put together in seriesto form a bank (>2)Always put the highest pore sizecolumn first (from the injector), andsmallest pore size column last–This reduces back pressure on themost fragile column (LMW column)Ramp the flow up slowly –0.1ml/minute –1.0 ml/minute insmall increments*Change over solvent at a0.1ml/minute flow rate over nightSome applications atHigh Temperature >150°CGPC Column TypesOrganic vs. Aqueous GPC columnsDifferent Pore SizesAnalytical vs. Preparative GPC columns Conventional vs. Solvent efficient, and High speed GPC columns.Care and Use of GPC ColumnsBasic GPC –typically a bank of 3 columns of different pore sizes to cover a broad MW range (as needed)Never use methanol or acetonitrile with Organic GPC columns because certain polar solvents will shrink the column, causing it to void–Note: Make sure to flush the complete system with solvent to be used before connecting the columns to the systemLife time of the columns can be as long as ~ 1 year or moreStore the columns in the solvent used with the column bank kept togetherMake sure that the end fittings on the column are tight to keep the column packing from drying out Be careful not to drop the columns, because they are fragileFilter sample solutionsPrevent air bubbles from getting into columnsGPC RulesPolymer is dissolved in a solvent at a low concentration (<0.10% w/v)Polymer solution passes through crosslinked, organic gel columns packed with controlled pore size particles.Larger molecules do not fit into pores (they are excluded) and elute firstVo : Exclusion volumeVt : Total volume or Permeation volumeExclusion principle assumes no adsorption of polymer molecules on packing materialEvery polymer will be eluted between Vo and VtDetectors in Polymer ChromatographyConcentration–Response ~ concentration, (C)–Refractometer; ∆N = (dn/dc) CStructure-selective–UV/Vis Detector (Also can use as concentration detector if sample has UV response), Lambert-Beer Law –IRMolecular weight sensitive–Response ~ C x f(M)–Light scattering: f(M) = M; M(C)–Viscometer: f(M) = [η] = kMα; [η]C•Where k, alpha are the Mark-Houwink constants–Mass Spec.: f(M) = 1/M; C/MRI’s were among the first detectors used in LC/GPC, (late 1960’s)Typically referred to as a “Universal Detector”Detects all dissolved solutes –“non -specific”Refractive index of any optical medium is defined as the ratio of the speed of light in a vacuum to the speed of light in the mediumDetection based on the refractive index of a given analyteMeasures the difference in RI from the eluent to the dissolved sample, (differential type)–The greater the dRI, the stronger the signal Sensitivity increase as RI difference increases Refractive Index (RI) Definition RSUV/Vis DetectionHigh SensitivityHigh SelectivityGain information on chemical compositionCan be used in gradient modeExcellent for most polymer additivesLinear response over a wide absorption range:–A = x l x C (Beer/Lambert)Sometimes UV/Vis detection is used for–Higher detection sensitivity.–Copolymer analysis (usually coupled with RI detector)–Under gradient elution condition.Polystyrene StandardsUV Detection at 260nmA U 0.000.010.020.030.040.050.060.070.080.090.100.110.120.130.140.150.16Minutes0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.57.06.0mm X 15cm RT MB-M Column (1)(Same Pore Size as Conventional Column Set)Flowrate: THF at 0.60 ml/min Injection Volume: 5 µl Detector: 2487 UV @260nm PS Standards3,840,0002,890,0001,260,000775,000422,000186,00042,80016,7005,5702,980890474Evaporative Light Scattering DetectorEvaporative Light Scattering Detection for polymer characterization–ELSD is a concentration detector.–ELSD is not affected by solvent changes–Most appropriate detector for Gradient Analysis of Polymers (GAP) or Gradient Polymer Elution Chromatography (GPEC)–Good alternative to dRI for compounds having a low dn/dcEvaporative Light Scattering Detection for additives–ELSD is a universal detector–Compounds without UV-chromophore groups will be detectedEvaporative Light Scattering DetectorPolymers are combined with low molecular compounds (0.1-3%)Additives have several key functions :–Protection : light stabilizers, antioxidants, anti-UV–Safety : flame retardants–Processing : plasticizers, slip agentsFull characterization of synthetic polymers involves detection of additivesMost of slip agents do not absorb UV light. ELS Detector is a good alternative to UV detectionAdditives MixtureComparison of Detection ModesCrodamide (oleamide) is not detected in UV mode5.0010.0015.0020.00T i n u v i n 312T i n u v i n PB H T L uw i n o x 44 B 25S u c c o n o x 16N a u g a r d 445S u c c o n o x 18T i n u v i n 328I r g a n o x 1330I r g a n o x 1076I r g a f o s 1680.005.0010.0015.0020.00T i n u v i n 312T i n u v i n PL u w i n o x 44B 25S u c c o n o x 16N a u g a r d 445S u c c o n o x 18C r o d a m i d eT i n u v i n 328I r g a n o x 1010I r g a n o x 1330I r g a n o x 1076I r g a f o s 168UV Detection (220 nm)ELS DetectionI r g a n o x 1010GPC Calibration -Narrow Standards A calibration curve is built with low dispersity (narrow) standards with known molecularweight; (ideal if same structure as unknown polymer)(PS, PMMA...).This calibration curve may be used toquantitate a polymer of different nature (PC, PMMA...). Then results are expressed in PSor PMMA equivalents, (or relative to PS orPMMA –incorrect for the polymer sample of interest).The chromatographic process is based on hydrodynamic volume (H)(size in solution), and not molecular weight.Two different polymers with the same MW will elute at different retention volumes.Vo Excluded V Total MW*RangeNoresolutionABOVEthis MW Resolutionrangeis created bydifferences inelution timeElution Time or Volume NoresolutionBELOWthis MW*MW is Log scaleSame “Pore Size” ColumnsVo Excluded V Total MW RangeNoresolution ABOVE this MWResolution range is created by differences in elution timeElution Time or VolumeNoresolution BELOW this MWVo Excluded V TotalMW RangeNoresolution ABOVE this MWResolution range is created by differences in elution timeElution Time or VolumeNoresolution BELOW this MW2 Columns of the SAME Type-SAME MW Range -More ResolutionDifferent “Pore Size” ColumnsVo ExcludedV TotalMW RangeNoresolution ABOVE this MWResolution range is created by differences in elution timeElution Time or VolumeNoresolution BELOW this MWVo Excluded V TotalNew MW RangeNoresolution ABOVE this MWResolution range is created by differences in elution timeElution Time or VolumeNoresolution BELOW this MW2 Columns of the Different Type -EXPANDED MW Range -More ResolutionActual Calibration Curves for the Different Pore SizeHT ColumnsH igh T emperatureHT 2 for Low MWHT 6 for High MWHT 6E for BlendedGPC Calibration 1 –Narrow StandardsCalibration:ually >10 standards usedbracketing MW range2.Standards may be injected as amixture3.Mixtures should be 1 order ofmagnitude different (1000, 10000,100000)To build a calibration curve:Narrow dispersity standards (PD<1.1)Elution volume at peak heightCurve : Log(M) = f(Ve)2.62.83.03.23.43.63.84.04.24.44.64.85.05.25.45.65.86.06.26.418192021222324252627Log Mol WtTime (min)11000001900009100Log(M)Elution volumeGPC Calibration –Narrow StandardsOrganic Polymers Aqueous PolymersPolystyrene Poly(ethylene oxides)Polybutadienes Poly(ethylene glycols)Poly(methylmethacrylates)PullulansPolyisoprenesNarrow Standards -Preparation ConsiderationsNarrow standards may be mixed together to develop a relative calibration curve –No more than 3 in one “cocktail” –be careful of concentrations–MW’s should be one decade apartNarrow standards should only be swirled gentlyNo need to filter narrow standardsAdd antioxidant if high temperature applicationSample Preparation ConsiderationsSample may be mixed to facilitate dissolution–Be careful of shear for high MW (>1M) samplesIn some cases, sample solution should be filtered–Presence of microgels, fillers, any other insolublesAllow enough time for complete dissolutionFor certain crystalline polymers, high temperature may be needed–Example: Isotactic polypropylene requires 2 hours at 170C in an external oven –The PP may then be run at 145CSample Concentration GuideThe more dilute the polymer solution, the better–This will prevent viscosity effects and non-reproducible retention–A dilute solution will allow the polymer to open up into its most relaxed conformation o No chain entanglemento No microgel formationInjection volume no more than 100 µL per columnFor very high MW polymers, flow rate may have to be lowered–HMW columns may be needed as well to prevent shearSample Concentration GuideMW < 1,000MW 1,000 –10,000MW 10,000 –100,000 MW 100,000 –500,000 MW 500,000 –1MMW >1M 0.20 –0.30% 0.15 –0.20% 0.10 –0.15% 0.05 –0.10% 0.01 –0.05% 0.005 –0.01%Above concentrations assumeno more than100 µL injection per columnGPC Column Operation Techniques Switch solvents by flushing to the column at0.1ml/min overnight in the new solventIncrease flow rates at 0.1 ml/minute/minute to the columns specified flow ratesRecommended to keep the flow through the columns at low flow, 50 ~ 100 m l/minute when idlingFor TCB at 140 -150 C -purge the toluene out of the columns at 0.1 mL/min. overnight at ~80C and thenramp up to temperature over 300 min after 3 column volumes of TCB have passed throughDetection–RI–Viscometry–UVPolymer DistributionsA polymer is a mixture of different size chain lengths of the same monomer. Tomeasure this distribution of sizes we use molecular weight averages.Slices are made to the chromatogram, where the height of each slice (H i), represents the population of molecules at that chain length or MW.iHlouvmeulEtionPolymer DistributionsMv High MWLow MWMw MnMv is derivedfrom ViscometryMP Mz Mz+1GPC and Flow Rate PrecisionMnMwVeLC Peak Identification (Narrow Standard)Based on retention timeMolecular Weight DeterminationGel permeation chromatography (GPC)Based on volume of solvent flowing through the column Essential for the flow rate to be absolutely constant To calibrate, plot Log MW of standards vs volume (time)Any flow variability will result in large MW errorsGPC and Flow Rate PrecisionPrecise solvent flow is essential for precise GPC…MwMnVe▪Comparisons of Molecular Weight Distributions of different samples can highlight even small MW shift information (good vs. bad PP’s below)▪Determine "good from bad" -e.g. QC of resin batches… these are typical formulators –use Mw, Mn, Mz and polydispersityPractical use –Fingerprinting the Polymerd w t /d (l o g M )0.000.200.400.60 3.504.00 4.505.00 5.506.00 6.50“Bad”“Good”Degradation of Polyethylene Terephthalate –HFIPAged PET Virgin PETd w t /d (l o g M )0.00.10.20.30.40.50.60.70.80.91.01.11.2Log Mol Wt2.83.03.23.43.63.84.04.24.44.64.85.05.25.45.6PET Exposed To Oils And Refrigerants For Several Days At Elevated TemperatureVirgin PETIntroduction to GPC OutlineWhat is GPC?GAP of AdditivesWhat’s New?Gradient Analysis of Polymers (GAP)In recent years there has been increased interest in using gradient HPLC techniques, such as Gradient Polymer Elution Chromatography (GPEC), with polymers for determining the compositional drift of copolymers, the composition of polymer blends, or for the analysis of polymer additives. Depending upon the gradient conditions and columns selected for analysis, separations may be obtained dependent on molecular weight or based upon precipitation, or adsorption mechanisms. The use of an Evaporative Light Scattering Detector (ELSD) allows one to perform solvent gradients with a universal mass detector and observe both UV absorbing and non-UV absorbing polymer samples without baseline disturbances from the solvent gradient. The addition of a Photodiode Array Detector (PDA) allows for compositional analysis across the molecular weight distribution of many copolymers, can be useful for the identification of components in a polymer blend, and also is invaluable for the quantitation of polymer additives and other small molecules in traditional reverse phase separations.Experimental ConditionsSystem:Waters Alliance 2690 Separations Module with column heater at 30 ºCDetector 1:Waters 996 Photodiode Array DetectorDetector 2:Alltech Model 500 ELSD with LTA Adapter (Drift Tube at 40º C, 1.75 Liters/min Nitrogen)Data System:Waters Millennium 32 Chromatography Manager Column:As listed in Figures, 30 ºCFlow Rate:1mL/minSamples:10 - 25 µl injections of 0.2 - 0.5% samplesGradient:Linear gradient, conditions and mobile phases as listed in Figures.GPC Analysis of a Polymer BlendGradient Analysis of a Polymer BlendStyrene-Acrylonitrile (25% Acrylonitrile)PolystyreneStyrene-ButadieneRubber (50% Styrene)% THF0102030405060708090100Minutes246810121416Symmetry Shield™ C8 Column (3.9x150mm)100% ACN to 100% THF over 20 minutes ELSD DetectionGradient Analysis of Narrow PS Standards% T H F102030405060708090100Time (Minutes)1234567891011Symmetry Shield C8 (3.9x150mm)100% ACN to 100% THF over 10 minutes ELSD DetectionStyrene Oligomers2890910043,900190,000355,000706,0001,090,0002,890,000Analysis of Styrene-Butadiene-Styrene Block% T H F102030405060708090100Minutes1011121314151617181920100% S t y r e n e40% S t y r e n e30% S t y r e n e22% S t y r e n e100% B u t a d i e n ePrototype DVB/Vinylpyrolidone Column (3.9x150mm)100% ACN to 100% THF over 20 minutes ELSD DetectionCalibration of %Styrene in SBR'sGradient Analysis of Low Molecular Weight WaxesTime (Minutes)68101214161820221112131415161718m V"Slack wax""C18 wax"Nova-Pak ®C18 (3.9x150mm)100% ACN to 100% THF over 30 minutes ELSD DetectionPolymer Additives –Tinuvins, (UV Stabilizers)4681012141618202224262814161820222426283032mVMinutesTinuvin 440Tinuvin 900Tinuvin 328ELSD DetectionPolymer Additives –Phthalate Plasticizers5.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.014161820222426283032343638mVMinutesDcHPDOP (DEHP)DIDPUDPELSD DetectionPolymer Additives -Slips and Antistats204060801001201401601802002201416182022242628303234mVMinutesOleamideErucamideStearic AcidELSD Detection。

Waters高效液相色谱柱简单介绍与选择

Waters高效液相色谱柱简单介绍与选择2016-04-25 Bruce Lee生产高效液相色谱柱的厂家有很多，如Waters，Agilent，Phenomenex，Shimadzu，Thermo等，每家供应商又生产多个系列，导致市场上的液相色谱柱的可选择性极强。

目前实验室以及公司，企业使用最多的是Waters以及Agilent所生产的RP液相色谱柱。

Waters主要有Symmetry，Sunfire，XTerra，XBridge，XSelect，CORTECS以及Atlantis系列等，其详细分类以及键合相如下。

Figure 1 Waters Symmetry column familyFigure 2 Waters Sunfire column familySymmetry与Sunfire系列色谱柱使用高纯度硅胶（B型）作为固定相基质，摒除金属离子杂质对固定相Si-O键的促进水解作用，此外由于金属离子含量特别低，在对其表面键合选择性烃基或内嵌极性官能团烃基时，可通过配体添加量控制硅胶表面键合相的多少，因此其最大特点在于批次之间的重现性。

两个系列均采用封端技术，Sunfire C8与C18表面载碳量分别为12%和16%；SymmetryC8与C18载碳量均为12%，因此两个系列的C8色谱柱对于分析物的保留能力上没有本质的区别，而Sunfire C18色谱柱则相比Symmetry C18色谱柱，对于非极性比较大的分析物具有更强一些的保留能力，当然对于有机相的最低比例也相对比较高一些。

Symmetry C8 Prep与C18 Prep色谱柱的填料粒径为7 um，其设计用途为制备；Symmetry300 C18（孔径300埃，载碳量8.5%）与Symmetry300 C4（孔径300埃，载碳量2.8%）则是为生物大分子多肽以及蛋白质的分离，分析而设计。

Symmetry Shield RP 18内嵌极性官能团色谱柱，由于在靠近硅胶表面的极性官能团的存在，增加了硅胶表面的水分子浓度，改善了与水之间的浸润状况;因此可以允许使用极高水相作为分离，分析条件，而不会出现孔隙内去湿现象，对于分析碱性等大极性分析物而言，减少其保留能力，改善峰形，具有很高的方法重现性。

Waters高效液相色谱仪

海德氨基酸工业有限公司标准操作规程1 目的规范Waters高效液相色谱仪使用操作。

2 适用范围 Waters高效液相色谱仪的使用操作。

3 责任者质管部QC检验人员。

4 内容4.1 系统进入4.1.1 依次开UPS电源、检测器、泵、打印机、电脑主机电源。

4.1.2 电脑进入自检，自检完成后，进入“Program Manager”窗口。

4.1.3 在“Program Manager”窗口，双击“Millennium”图标，进入相应窗口。

4.1.4 在“Millennium”窗口，双击“Session Manager”图标，进入“Millennium V2.10”窗口，进行内存自检。

4.1.5 内存自检完成后，进入“Millennium Login－Version2.10”窗口，在“User Name”输入“system”，在“Password”输入“manager”，按“Login”进入“Millinniam Version2.10－Session Manager－User System”窗口，双击所选“Project”图标，即进入“Project”窗口。

4.2 进样4.2.1 在“Project”窗口下，按“Tools”图标群中“Quickset”图标进入“System-open”窗口，选择“PCM－410”。

4.2.2 按“OK”加以确认，该窗口自动退出，进入自检。

4.2.3 自检完毕，进入“Quick Set”窗口，按“Mode”选择“Quick Start”进入“Method Set”窗口，选择“Using Exiting Method”自动进入“Quick Set Acquisition”窗口，按“Set Up Instrument”，进入仪器安装状态。

4.2.4 安装完毕，按“Cancel”，退出“Quick Set Acquisition”窗口，在样品登药业有限公司标准操作规程题目Waters高效液相色谱仪操作规程编号版本号共 6 页SOP-EM-319A第 2 页记表上填写样品名、类别、进样体积、运行时间。

超高效液相色谱-质谱联用仪同时测定10种水中全氟和多氟烷基类化合物

超高效液相色谱-质谱联用仪同时测定10种水中全氟和多氟烷基类化合物摘要：使用超高效液相色谱-质谱联用仪，以0.2mmol/L乙酸铵甲醇溶液、甲醇为流动相，液体自动进样器进样，来建立水中10种全氟和多氟烷基类化合物（PFAS）的检测方法。

从实验结果可以看出，PFAS中10种化合物线性范围在0.5～10.0μg/L时有较好的线性，相关系数r在0.995~0.999之间。

对浓度为0.5μg/L的混合溶液连续进样8次，相对标准偏差RSD均﹤10.0%。

对某水厂的出厂水进行不同浓度PFAS水样加标，平均回收率在84.7%~118.7%，相对标准偏差为0.7%~4.1%。

关键词：PFAS；高效液相色谱-质谱联用仪；液体自动进样器全氟和多氟烷基化合物（PFAS）是人造材料中存在的副产物，该化合物由数千种物质组成，是一类与碳相连的氢元素全部或部分被氟元素所取代所产生的化合物，按结构区分主要有全氟羧酸和全氟磺酸。

由于其结构的特殊性使得此类化合物具有较强的化学稳定性、表面活性、优良的热稳定性和疏水疏油性，可长期在自然环境中存在，因此被广泛的应用于工业生产和食品接触材料中。

PFAS可以通过饮用水、蔬菜、水果、肉类等作为载体引入人体,对人体健康产生负面影响，导致心肌发育毒性，进而导致身体发育迟缓。

同时在生殖毒性方面，PFAS中的一些组分对胎儿有极大伤害，导致胎儿的流产或畸形，PFAS还是细胞膜病变和人体胆固醇水平波动的直接原因，故检测饮用水中的PFAS尤为重要。

超高效液相色谱-质谱联用仪检测时间短，不需要有机前处理，液体直接进样，目前，在GB/T5750-2006《生活饮用水标准检验方法》中尚未规定PFAS的标准检测方法，国内外对PFAS检测的研究甚少。

笔者首次使用超高效液相色谱-质谱联用法对PFAS进行检测，探究该方法检测PFAS的灵敏度、准确度及精密度，并对某水厂出厂水进行了检测。

1.实验部分1.仪器与试剂超高效液相色谱仪（美国Waters公司，）质谱联用仪（美国Waters公司，TQ-S）、液体自动进样器（美国Waters公司，2777C）、容量瓶（德国普兰德）、氮气发生器（东宇电机股份有限公司，TJ30-97S）、移液枪（Eppendorf research，20-200μL）、甲醇（质谱纯，Fisher Scientific））；醋酸铵；高纯氩气（纯度≥99.99%）；PFASs10种混合标准溶液（PFBA、PFPeA、L-PFBS、PFHxA、PFHpA、L-PFHxS、PFOA、PFNA、L-PFOS、PFDA）浓度为5μg/mL（质谱纯，Fisher Scientific），超纯水。

waters高效液相色技术参数

在撰写高质量、深度和广度兼具的中文文章时，我们首先来探讨一下关于"高效液相色谱技术参数"这一主题的重要性和意义。

高效液相色谱技术（HPLC）是一种常见的化学分析方法，广泛应用于医药、化工、食品、环境等领域。

而对于HPLC技术参数的深入了解，则是进行有效分析和实验的基础。

我们需要了解HPLC技术参数的基本概念。

HPLC技术参数包括但不限于流动相、固定相、柱温、检测器类型、流速、护色剂类型和浓度等。

这些参数对于色谱分离的效果、分析结果的准确性以及实验效率都有着至关重要的作用。

在HPLC技术参数的选择和优化上，需要考虑的因素也是多方面的。

选择合适的流动相和固定相可以有效提高分离效果和分析速度；合理设定柱温和流速可以影响分离的选择性和分离时间；检测器类型的选择则直接关系到分析结果的灵敏度和准确性。

当然，针对不同的分析需求和样品特性，HPLC技术参数的设置也需要有所调整。

在进行蛋白质分析时，可能需要采用不同的固定相和流动相；而在进行药物代谢产物的分析时，可能需要选择不同类型的检测器和优化柱温等参数。

在实际操作中，对于HPLC技术参数的选择和优化并非一蹴而就的事情，需要通过大量的实验和经验总结。

而一旦掌握了有效的HPLC技术参数，就能够大大提高分析的准确性和效率，为实验结果的可靠性提供有力保障。

从整体来看，深入了解和熟练掌握HPLC技术参数是化学分析领域中至关重要的一环。

只有在充分了解技术参数的基础上，合理选择和优化参数，才能够提高分析效果，保证实验结果的准确性和可靠性。

基于以上研究和思考，我们可以得出结论：HPLC技术参数对于化学分析至关重要，只有深入理解和熟练掌握技术参数的作用，才能够在实验中取得准确和可靠的分析结果。

在进行HPLC分析时，需要对技术参数进行充分的了解和合理的选择，以提高实验效率和结果的可靠性。

我们在进行HPLC分析时，务必充分了解和掌握技术参数的作用和优化方法，以确保分析结果的准确性和可靠性。

waters高效液相色谱e2695-2489技术参数

美国Waters公司高效液相色谱仪技术参数1四元梯度输液泵（Alliance 2695型）1.1工作模式：相互独立、电子控制的双柱塞直线驱动装置，双压力传感器反馈回路，无需混合器和阻尼器1.2溶剂数：1—41.3流速范围：0.010—10.000ml/min, 以0.001ml/min 为增量1.4流速精度：≤0.075%RSD1.5流速准确度：±1.0%1.6*延迟体积：<650µL，不随反压变化1.7混合范围：0.0—100.0% 以0.1% 增量1.8*梯度准确度：± 0.5%，不随反压变化1.9*梯度精度：±0.15%，不随反压变化1.10压缩补偿：自动，连续1.11*梯度曲线：多种梯度曲线，线性、步进、凸线和凹线1.12控制器：内置程序控制器，液晶显示，按键操作，E2PROM程序存储器1.13*延迟体积、梯度准确度和梯度精度指标不随反压变化2进样器（Alliance 2695型）2.1自动进样方式2.2*样品瓶数：120位，由5个样品盘组成，24个2mL样品瓶/盘2.3进样次数：每个样品1—99次进样2.4进样精度：≤0.5%RSD2.5样品污染度：<0.1%，最少程度的交叉污染，保证热不稳定样品的完整性2.6进样准确度：±1uL2.7进样范围：0.1—2000µL2.8进样线性度：>0.9992.9*进样针清洗：针内外每次进样后通过专用流路自动清洗3紫外可见检测器（2489型）3.1波长、极性和灯源开关均可时间编程控制3.2内置硝酸铒滤光片，紫外光、可见光都可以校正。

3.3可变波长范围：190～700nm3.4*检测通道：2个3.5光源：氘灯3.6波长准确度：±1nm3.7带宽：5nm3.8测量范围：0.0001～4.0000AUFS3.9基线噪音：±0.25x10-5AU，230nm，10Hz，1.0s3.10漂移：1 x 10-4AU/hour，254nm在1mL/min（甲醇）3.11梯形狭缝的光路设计，从硬件上消除示差折光效应3.12*具有操作面板，可以独立设定工作参数、显示运行状态4色谱软件（2011年版Empower3型）4.1是在最新Windows 7操作系统下编写和测试，支持多窗口、多任务的操作模式。

waters高效液相操作规程

Waters 高效液相操作规程1. 简介高效液相色谱（High-performance liquid chromatography，HPLC）是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的分析技术。

Waters 公司是高效液相色谱仪器和耗材的主要供应商之一，本文将介绍 Waters 高效液相操作规程，以确保用户能正确、高效地操作 Waters 高效液相色谱仪器。

2. 仪器准备在进行高效液相色谱操作之前，首先需要准备好仪器。

以下是准备步骤：2.1 仪器检查检查仪器是否处于正常工作状态，确保所有液体泵、进样器、检测器等部件均正常联通。

2.2 操作软件启动启动 Waters 高效液相色谱仪器的操作软件，并连接仪器。

确保软件能够正常与仪器通讯。

2.3 样品准备根据分析目的，准备好待测样品溶液，并根据需要进行适当稀释或前处理。

3. 方法设置3.1 选择方法根据分析目的选择合适的方法。

在 Waters 高效液相色谱仪器操作软件中，点击“Method”（方法）选项卡，选择已有方法或新建方法。

3.2 参数设置根据分析需求设置方法参数，包括流速、柱温、分析时间等。

在操作软件的方法设置界面中进行参数设置。

3.3 样品进样选择进样器类型（自动或手动），设置进样体积和进样方式。

将样品溶液注入进样器，并进行相关设置。

4. 色谱柱操作4.1 切换柱根据需要，选择合适的色谱柱，并确保柱已经连通到色谱系统中。

4.2 柱平衡对于新柱，需要首先进行柱平衡。

在操作软件中选择柱平衡功能，根据提示进行操作。

5. 运行实验5.1 实验开始确认实验条件设置正确后，点击操作软件中的“Run”按钮，开始实验运行。

5.2 监控运行在实验运行过程中，密切监控柱压、流速和检测器信号等参数，确保实验正常进行。

5.3 数据记录实验运行结束后，保存实验数据。

点击操作软件中的“Save”按钮，选择保存路径和文件名。

6. 仪器关闭6.1 实验结束实验完成后，点击操作软件中的“Stop”按钮，停止实验运行。

Waters高效液相色谱系统操作规程

2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

3. 接通电源，依次打开1525泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。

4. 打开Breeze软件，进入系统主界面。

二. 操作步骤1.更换流动相。

2.在主界面中点击“Manage Breeze”按钮，选择system选项，出现系统连接示意图，观察各个部件是否连接好。

若未连接好，则需点击“Diagnostics/Reconfigure”进行诊断。

3.回到主界面，选择“Manage Breeze”中的project选项，单击“Make a new project”，“Next”，在“Project Name”中输入名称，单击“Finish”。

单击“Change a project/User”，在“Project”中选择输入的名称，单击“OK”。

4.单击“View Method”按钮，点击“Pump”图标，设置泵的参数。

点击“UV Det”图标，设置紫外检测器的波长。

单击“Save Method”按钮保存设置方法。

5. 打开泵的抽液阀，使用灌注注射器抽取一定量的洗脱剂。

单击Purge图标，出现“Purge Wizard”对话框，选中“Purge Pump”选项，点击“Next”“Next”，调节A、B泵的流量分别为约3ml/min。

打开泵的参考阀，点击“Next”。

Purge结束后关闭参考阀。

6.点击主界面中的“press to equilibrate system/ monitor baseline”按钮，平衡系统0.5－1h，直至基线稳定。

7.点击“press to make a single injection”按钮，进入“Specify Single Inject Parameters”对话框，设置参数，点击“inject”。

超高效液相色谱(uplc)

超高效液相色谱(UPLC TM)：重新定义液相色谱分离科学的能力随着首次成功地使用小颗粒得到惊人的分离能力而进入了一个新的时空。

这个新的色谱领域，所谓超高效液相色谱（UPLC TM），与传统的HPLC技术相比提供了更高的效率，因而具有更强的分离能力。

作为世界第一个商品化UPLC TM产品的Waters ACQUITY UPLC TM超高效液相色谱系统，利用创新技术进行整体设计，大幅度地改善了液相色谱的分离度、样品通量和灵敏度。

UPLC TM的商品化，是分离科学和技术的巨大进步，液相色谱亦由此进入了全新的时代。

基于1.7 μm小颗粒技术的UPLC TM，与人们熟知的HPLC技术具有相同的分离原理。

不同的是：UPLC TM不仅比传统HPLC具有更高的分离能力，而且结束了人们多年不得不在速度和分离度之间取舍的历史。

使用UPLC TM可以在很宽的线速度、流速和反压下进行高效的分离工作，并获得优异的结果。

小颗粒分离的理论与科学基础图1：填料技术的沿革液相色谱30年的发展史是颗粒技术的发展史。

颗粒度的改变直接影响到柱效，从而对分离结果产品直接影响。

由上图可知：随着颗粒度的不断降低，色谱分离度不断提高。

事实上，上述规律的理论基础是著名的范德米特(van Deemeter)方程――这是全世界所有从事色谱研究的科学家熟知的理论。

由此得到的范德米特(van Deemeter)曲线，亦是色谱科学家预测颗粒度变化而引起的色谱变化的根本依据。

该曲线预测最佳柱效与相应的流动相流速。

由曲线得知：随着颗粒度减小，相应的理论塔板高度（HETP）也下降，得到的柱效会更高。

还应该注意到1.7 μm颗粒的HETP最小值区域扩大了，这表明可以在比大颗粒更宽的流量范围内得到最高的柱效，结果可以不损失高分离度的同时来优化流速（分析速度）。

小颗粒为色谱分离带来如此的高柱效和速度优势，使利用小颗粒技术成为色谱科学家梦寐以求的目标。

然而HPLC系统的设计，一直苦于难于发挥出最小颗粒的优点。