高效液相色谱法的应用
高效液相色谱在药物分析中的应用
高效液相色谱在药物分析中的应用高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是分析化学中一种非常重要的手段。
在药物分析中，HPLC广泛应用于药物含量测定、杂质分析、药代动力学、药物失效机理分析、药物交互作用等方面。
因为其高灵敏度、高分离度、高准确性、高重现性等优点，被誉为现代化学分析的“铁路”。
HPLC分析原理简介HPLC的分离原理是根据样品分子在固定相和流动相之间的互相作用力不同，利用固定相呈现出的分子选择性吸附作用来实现分离。
在HPLC分析过程中，固定配合物和悬浮在流动相中溶质之间通过相互作用，使流动相中的溶质与固定相结合并阻止经过的过程成分的运动而实现分离。
高效液相色谱在药物分析中的应用1.药物含量及其杂质检测药物含量及其杂质是药物分析的重要内容。
通过HPLC可以对药物及其杂质进行可靠、灵敏、准确的检测。
例如，HPLC可以用于测定药物的纯度、杂质、活性成分、含量等。
例如，按照中国药典2015年版的规定，通过HPLC分析测定头孢曲松钠药品中的含量，结果表明该药品中含有98.4%的头孢曲松钠。
2.药物代谢动力学分析药代动力学研究是药物研发过程中必要的环节，可以分析药物在体内代谢和排泄的情况。
药物代谢动力学研究是药物治疗效果和合理用药的依据。
因此，HPLC 非常适合进行药物代谢动力学研究。
例如，使用HPLC测定维生素B2代谢动力学的过程中，首先通过内标法选取L-色氨酸等内标物，然后用HPLC分离并测定维生素B2及其代谢产物蒽醌，结果表明HPLC是非常适合于测定维生素B2代谢动力学的方法。
3.药物失效机理分析药物的失效机理是因为药物有可能产生不希望的肝毒性或其他副作用，使得药物失效。
HPLC分析可以用于药物失效机理的分析。
例如，HPLC可以用于分析站立喹啉失效的原因，结果表明站立喹啉受热环境下会分解，并产生过氧化物，导致药物失效。
4.药物交互作用分析药物与药物之间的相互作用可能会使药物的疗效大为降低或增强。
高效液相色谱法原理及其应用
※梯度洗脱的优点： 1.缩短分析周期； 2.提高分离能力； 3.峰型得到改善，减少拖尾； 4.增加灵敏度。但有时引起基
线漂移。
※（三）进样装置
一、手动注射进样器 二、六通阀进样装置 三、自动进样器
进样阀的基本要求： 1. 耐高压 2. 进样量准确 3. 进样重复性好 4. 无流量和压力波动影响
2．恒压泵：恒压泵又称气动放 大泵，是输出恒定压力的泵。
注意
避免使用对不锈钢有腐蚀性的溶剂。 例：硝酸、硫酸、盐酸、卤化物， 四氯化碳与异丙醇或四氢呋喃的混 合物等。
流动相 过滤——用滤
使用前 膜过滤或垂熔
漏斗过滤
脱气——采
用超声或过滤 的方法
冲洗
使用含酸、碱、缓冲液的流动相后， 必须用不含盐的有机溶剂-水冲洗！
第二节 高效液相色谱仪
1．贮液瓶（滤芯，可滤 去颗粒状物质）
2．高压泵（输液泵、梯 洗脱度）
3．进样装置 4．色谱柱——分离 5．检测器——分析 6．废液出口或组分收集器 7．记录装置
※（一）输液系统
一、储液装置：过滤器 二、脱气装置：脱气机 流动相脱气： （1）吹氦脱气法 （2）加热回流法 （3）抽真空脱气法
※（二）高压输液泵及梯度洗脱装置 一、高压输液泵的种类 高压输液泵可以分为以下两类： 1．恒流泵：可输出恒定体积流量的
流动相。 （1）注射式泵（又称螺杆注射泵）
（2）往复型泵 （又称往复柱塞泵）
二、高压输液泵的原理 往复柱塞泵，柱塞向前运动，液 体输出，流向色谱柱；向后运动， 将贮液瓶中液体吸入缸体。如此 往复运动，保证将流动相以稳定 的速度流过色谱柱的部件。
吸附色谱 分配色谱 离子色谱 空间排阻 亲和色谱 色谱
固定相
全多孔固 固定液载 体吸附剂 带在固相
高效液相色谱仪的原理及应用
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二、液相色谱中常用术语和参数
只针对HPLC特有的，其余术语与第三章同 。 粒间体积（V0）：色谱柱填充剂颗粒间隙中 流动相所占有的体积。
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四、正相高效液相色谱
是由极性固定相和非极性（或弱极性）流动 相所组成的HPLC体系。其代表性的固定相是 改性硅胶、氰基柱等，代表性的流动相是正 己烷。吸附色谱也属正相HPLC。 溶剂洗脱强度近似地随溶剂的介电常数增加 而增大，洗脱能力越弱，溶质在柱上保留时 间越长。
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主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高 速是高效液相色谱的特点之一。μL/min~几千mL/min 应具有压力平稳、流量稳定可调、耐腐蚀等特性
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(4) 梯度淋洗装置
高效液相色谱仪的原理 及应用
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第一节 高效液相色谱法原理
一、高效液相色谱法的定义和分类
流动相是液体的色谱称为液相色谱（ LC）。 在液相色谱中，采用颗粒十分细的高效 固定相，并采用高压泵输送流动相，全 部工作通过仪器完成，这种色谱称为高
效液相色谱（HPLC） 。
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一、高效液相色谱法的定义和分类
孔体积（Vp） ：色谱柱中多孔填充剂的所
有孔洞中流动相所占有的体积。
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高效液相色谱方法及应用
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专属型检测器
它对不同组成的物质响应差别极大，因此只能选 择性的检测某些物质，如紫外检测器、荧光检测 器和电导检测器。
通用型检测器
它对大多数物质的响应相差不大几乎适用于所有 物质，如示差折光化学检测器 。但它的灵敏度低， 受温度影响波动大、使用时有一定局限性。
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紫外吸收检测器
简称紫外检测器（ ultraviolet absorption detector ， UV），是基于溶质分子吸收紫外光的原理设计的检测 器。 因为大部分常见有机物质和部分无机物质都具有紫外吸 收性质，所以该检测器是液相色谱中应用最广泛的检测 器，几乎所有液相色谱仪都配置了这种检测器。 它不仅有较好的选择性和较高的灵敏度，而且对环境温 度、流动相组成变化和流速波动不太敏感，因此既可用 于等度洗脱，也可用于梯度洗脱。
1、适用于分离几乎所有类型的化合物。一方面通过控制化学键合反应， 可以把不同的有机基团键合到硅胶表面上，从而大大提高了分离的选 择性；另一方面可以通过改变流动相的组成合乎种类来有效地分离非 极性、极性和离子型化合物。 2、由于键合到载体上的基团不易被剪切而流失，这不仅解决了由于固定 液流失所带来的困扰，还特别适合于梯度洗脱，为复杂体系的分离创 造了条件。 3、键合固定相对不太强的酸及各种极性的溶剂都有很好的化学稳定性和 热稳定性。 4、固定相柱效高，使用寿命长，分析重现性好。
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HPLC与GC差别
相同：兼具分离和分析功能 均可以在线检测 不同：
1．分析对象的区别 2．流动相的区别 3．操作条件区别
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HPLC与GC差别
1．分析对象的区别 GC：适于能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品；但 对高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样 品，尤其对大多数生化样品不可检测，占有机物的20% HPLC：适于溶解后能制成溶液的样品（包括有机介质溶 液），不受样品挥发性和热稳定性的限制，对分子量大、 难气化、热稳定性差的生化样品及高分子和离子型样品均 可检测，用途广泛，占有机物的80%
高效液相色谱法的应用
在药品分析鉴定的作用
3 在西药鉴别中的应用 在HPLC法中,保留时间与组分的结构和性质有关,是定性的参数,可用于药物的鉴别.如中 国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定:在含量测定项下记录的色谱图中,供试品 主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致.头抱拉定,头孢噻酚钠等头孢类药物以 及地西泮注射液,曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC法进行鉴别. 4.在体内药物分析中的应用 HPLC由于测定迅速准确，流动相选择范围广，灵敏度高(10-12 g／mL以上)，填充柱种 类多，且可供选择的检测器也多。所以是实验室研究中一种很好的体内分析方法。在 国内外都很受重视．大多数药物都有紫外吸收，所以最常用的检测器是紫外检测器。 多数药物及内源性物质极性均较大，利用其极性差，可以采用RP-HPLC色谱柱，可获 得良好分离效果。
在药品分析鉴定的作用
1.天然药物分析 天然药物的来源有动物、植物和矿物之分，其中以植物类为主。由于天然药物的化学成 分复杂，其有效成分，可能有一个，也可以有多个，这对于控制药品质量，建立质量标 准来说比较困难，HPLC可通过对天然药物的有效成分进行式，可以判定药材的质量高低。 2..天然药物及复方成药分析 复方制剂、杂质或辅料干扰因素多的品种多采用高效液相色谱法。增免扶正片系由当 归、党参、黄芪（图3）等十几味天然药物精制而成，具有益气生津、活血养血、滋 补肝肾、健脾开胃之功效，主要用于抗缺氧、抗疲劳、抗衰老，长期服用可扶正祛邪 ，提高机体免疫功能，健身强体，益寿延年。该药对心、肝、脾、肾虚、纳差、心脑 血管疾病、神经衰弱、慢性肝炎、脂肪肝等都有较好的防治作用。 由于化学药品的开发费用昂贵，而且毒副作用大，近年来人们已把目光转向自然、民 族传统医药、草药、植物药等天然药物，据世界卫生组织统计，当前全世界60多亿人 口中80％的人使用过天然医药。在全世界药品市场中，天然物质制成的药品已占30％ ，国际上植物药市场份额已达300亿美元，且每年以20％ 以上的速度增长。HPLC分析 必定能为我国传统中医药实现现代化，走向世界提供强有力的技术支持。
高效液相色谱方法及应用
高压输液泵及梯度洗脱装置
一、高压输液泵 高压输液泵可以分为以下两类： 1．恒流泵：可输出恒定体积流量的流
动相。 （1）注射式泵（又称注射式螺杆泵） （2）往复型泵 2．恒压泵：恒压泵又称气动放大泵，
一类是选择性检测器，如紫外一可 见分光光度检测器；
另一类是通用型检测器，如示差折 光检测器。
(1)紫外一可见分光光度检测器。
如今此技术已在分析咖啡中的黄嘌泠、调料中的核苷酸及核苷、果汁中的有机酸、米中的维生素、牛奶中的维生素D等都对食品营养价 值提供有效数据。 热不稳定物、离子型化合物及高聚物的分离及测量有困难，致使其应用受到了很大的限制。 又如止痛药或退烧药也可用此法分离并测得各组分的含量。 染料厂排出废水中的苯胺等。 用液相色谱分析简便迅速。 分析食品中的有毒成分，如苹果中农药萘乙酸、稻米中的黄曲霉素、鱼体中的有机汞等。是输出恒定压来自的泵。二、梯度洗脱装置
1．梯度洗脱（gradient elution）又称 停流进样是在高压泵停止供液、体系压力下降的情况下，将样品直接加到柱头。
一、与经典液相色谱法比较
为梯度淋洗或程序洗脱。在同一个分析 用离子交换柱和缓冲游泳梯度淋洗。
多种不同性能的配位体键联在固相基体上 分析食品中的有毒成分，如苹果中农药萘乙酸、稻米中的黄曲霉素、鱼体中的有机汞等。
高效液相色谱法的特点
一、与经典液相色谱法比较 经典液相（柱）色谱法使用粗粒多孔固定相，装
填在大口径、长玻璃柱管内，流动相仅靠重力流经 色谱柱，溶质在固定相的传质、扩散速度缓慢，柱 入口压力低，仅有低柱效，分析时间冗长。
高效液相色谱法使用了全多孔微粒固定相，装填 在小口径、短不锈钢柱内，流动相通过高压输液泵 进入高柱压的色谱柱，溶质在固定相的传质，扩散 速度大大加快，从而在短的分析时间内获得高柱效 和高分离能力。
高效液相色谱法在药物分析中的应用
高效液相色谱法在药物分析中的应用高效液相色谱法作为一种分离、纯化、分析化合物的非常有效的工具，广泛应用于药物分析领域。
在药物开发过程中，试验和分析是必不可少的环节。
高效液相色谱法是现代药物分析领域中最常用的分析方法之一。
本文将介绍高效液相色谱法在药物分析中的应用。
一、简介高效液相色谱法是一种通过将样品与流动相混合以分离分析样品的技术。
在该方法中，样品是以液体形式注入到含有一定浓度的溶剂混合物（流动相）的色谱柱中。
高效液相色谱发展至今已经非常成熟，其技术已经广泛应用于药物分析、环境检测、化学品分析、生物学等领域。
相较于传统的色谱技术，高效液相色谱法具有分离效果好、分离速度快、灵敏度高、装置操作方便等优点。
二、高效液相色谱在药物分析中的应用高效液相色谱法在药物分析领域的应用非常广泛，包括药物结构鉴定，药物纯度分析，药物代谢产物分析等。
1. 药物结构鉴定高效液相色谱法可以用于药物分子的结构鉴定。
该方法可以通过准确地测量药物相关化合物的分子质量、极性、分子结构等参数来鉴定药物分子的结构。
通过对不同药物分子的分离和分析，研究人员可以更好地了解药物分子的化学特征，为药物的研发提供有价值的信息。
2. 药物纯度分析药物的纯度对于药物的疗效、药物的耐受性等有重要影响。
高效液相色谱法可以通过分离、检测药物中的杂质物质，准确地测量药物的纯度。
该方法可以对药物站仪硅树脂进行验证，从而保证药物的质量符合标准、安全的规定。
3. 药物代谢产物分析药物代谢产物是药物分子在体内代谢过程中形成的化合物。
该过程一般由体内酶所调节，可以为药物的生物利用提供关键信息。
通过高效液相法有助于了解药物的代谢产物，从而帮助科研人员评估药物在体内转化代谢的能力，分析药物的代谢途径，为药物研发提供更加细致的信息。
4. 药物残留分析药物残留分析是指通过系统地分析和检测药物在环境、食品、农产品、水等中存在的残留量，以评估药物是否安全使用的一种分析方法。
仪器分析-高效液相色谱法
流动相的选择与制备
选择合适的流动相
根据被分析化合物的性质， 选择适当的流动相，如有 机溶剂、缓冲液等。
流动相的配制
按照实验要求，准确称量 流动相组分，混合均匀， 并进行过滤和脱气处理。
流动相的梯度洗脱
对于多组分分离，可以采 用梯度洗脱技术，以提高 分离效果。
仪器的开机与平衡
开机
按照仪器说明书，打开仪器电源， 启动仪器操作系统。
药物制剂质量控制
高效液相色谱法可以用于药物制剂的质量控制， 检测制剂中药物的含量、纯度和稳定性等指标。
环境样品分析中的应用
污染物检测
高效液相色谱法可以用 于检测环境中的有机污 染物，如农药、多环芳 烃等，为环境污染控制 和治理提供依据。
饮用水质量检测
通过高效液相色谱法可 以检测饮用水中的有害 物质，如消毒副产物、 微量有机物等，保障公 众的饮用水安全。
粒径
色谱柱的粒径影响分离效 果和分离时间。粒径越小， 分离效果越好，但分离时 间越长。
长度
色谱柱的长度影响分离效 果和载样量。长度越长， 分离效果越好，但载样量 越小。
检测器
类型
常用的检测器有紫外-可见光检测器、荧 光检测器、电导检测器等，根据被测物质 的性质和检测需求选择合适的检测器。
响应速度
线性范围
质。
测定水体、土壤、空气 中的污染物和有害物质。
用于蛋白质、核酸、细 胞等生物大分子的分离
和检测。
高效液相色谱法的优势与局限性
优势
高分离效能、高灵敏度、高选择 性、应用范围广。
局限性
需要专业操作人员、仪器昂贵、 样品前处理复杂、耗时长。
02 高效液相色谱法的仪器构成
CHAPTER
高效液相色谱在药物分析中的应用研究进展
高效液相色谱在药物分析中的应用研究进展一、概述高效液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于药物分析的重要技术，具有快速、高效、灵敏度高和分辨率高等特点。
自20世纪70年代以来，随着色谱理论和仪器技术的不断发展，HPLC已成为药物分析领域中不可或缺的工具。
其利用不同物质在固定相和流动相之间的分配差异，通过高压泵将流动相推动通过装有固定相的色谱柱，实现样品中各组分的分离。
随后，通过检测器对分离后的组分进行检测，从而实现对药物成分的定性和定量分析。
近年来，随着药物分析需求的不断提高，HPLC在药物分析中的应用研究也取得了显著的进展。
在药物质量控制方面，HPLC可用于药物有效成分的含量测定、杂质含量的检测以及药物制剂中各组分的分离分析等。
HPLC还可应用于药物代谢产物的分析，为药物研发提供重要的参考信息。
在药品检验中，HPLC的应用不仅提高了检验的准确性和效率，还有助于实现药品检验的自动化和智能化。
同时，随着HPLC技术的不断发展，其在药物分析中的应用也将不断拓展和完善。
本文旨在综述HPLC在药物分析中的应用研究进展，为相关领域的研究和实践提供参考和借鉴。
1. 高效液相色谱技术简介高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种重要的色谱分析技术，广泛应用于化学、医学、工业、农学、商检和法检等多个学科领域。
作为色谱法的一个重要分支，HPLC以液体为流动相，通过高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱。
在柱内，各成分因与固定相发生作用的大小、强弱不同，而在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出，进入检测器进行检测，实现对试样的分析。
HPLC具有“四高一广”的特点，即高压、高速、高效、高灵敏度和应用范围广。
高压是因为流动相为液体，流经色谱柱时受到的阻力较大，需要高压泵来推动流动相通过色谱柱。
高效液相色谱法及其在中药研究中的应用
一、概述高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种应用广泛的分离和分析技术，其在中药研究中扮演着重要角色。
本文将对HPLC技术及其在中药研究中的应用进行介绍和探讨。
二、高效液相色谱法的原理及技术特点高效液相色谱法是一种基于液相为分离介质的色谱分析技术。
其原理是将待分析物质溶解于流动相中，在固定的色谱柱中经过固定相的分离。
HPLC技术具有分离效率高、分析速度快、灵敏度高、分析准确等特点，因此在中药研究中得到了广泛应用。
三、高效液相色谱法的应用1. 中药质量控制HPLC技术可以对中药中的有效成分进行定量分析，为中药的质量控制提供了重要手段。
通过HPLC技术可以对中药中的多种成分进行快速、准确的分析，实现对中药质量的快速检测。
2. 药效成分分离HPLC技术可以有效分离药效成分中的杂质，提高药效成分的纯度。
通过HPLC技术可以对药效成分进行快速分离和检测，为药物研发提供了有力支持。
3. 药物代谢动力学研究HPLC技术可以对药物在体内的代谢过程进行分析，为药物代谢动力学研究提供了重要手段。
通过HPLC技术可以对药物在体内的代谢产物进行快速分离和检测，为药物代谢过程的研究提供了有力支持。
四、当前HPLC技术在中药研究中的挑战与发展1. 检测方法的标准化当前HPLC技术在中药研究中仍面临着检测方法标准化的问题，各种方法的标准化程度有待提高。
2. 技术发展趋势随着科学技术的不断发展，HPLC技术在分辨率、分析速度、检测灵敏度等方面仍有进一步提升的空间。
未来HPLC技术有望在中药研究中发挥出更大的作用。
3. 多样性应用未来HPLC技术有望在中药研究中实现多种成分同时分析、高通量检测等多样化应用，为中药研究提供更全面的支持。
五、结论HPLC技术作为一种高效、准确、灵敏的分析技术，在中药研究中发挥着重要作用。
当前HPLC技术仍面临着标准化、技术发展等问题，但未来有望在中药研究中发挥更大的作用，为中药研究提供更全面的支持和保障。
高效液相色谱法
高效液相色谱法高效液相色谱法（High-performance liquid chromatography，HPLC）是用于分离、定量、分析化合物的一种方法。
它以根据分子在固定相和液相之间的相互作用而分离样品。
本文将深入探讨高效液相色谱法的原理、应用和未来发展方向。
一、高效液相色谱法的原理高效液相色谱法的分离机理基于非极性、极性、离子交换和尺寸排除等不同的相互作用。
一般而言，液相为一种流动相，并通过柱子中的固定相与待测化合物相互作用。
根据它们与液相和固定相之间的相互作用，化合物会沿柱子分离出来，最终得到纯化的化合物。
二、高效液相色谱法的应用HPLC是一种广泛应用于制药、化学、食品科学和环境分析中的技术。
它可以分离和确定化合物的数量和结构。
以下是HPLC技术在不同领域中的应用：1.制药领域：HPLC技术用于对药品的定量分析、纯化和结构分析。
2.食品科学：HPLC可以用于分析食品中的添加剂、色素、维生素、氨基酸和酸、碱等。
3.化学领域：HPLC用于成分分析、物质纯度和纯化。
4.环境分析：HPLC技术可以用于检测水和土壤中污染物的浓度。
三、高效液相色谱法的未来发展方向1.更高效的柱技术：柱子是HPLC的核心部件之一，因为它们直接影响到分离的质量和速度。
未来的发展方向是更高效的柱技术，以支持更快的分析速度。
2.开发基于互联网的分析：互联网的出现带来了新的分析方法，因为通过数据分析和在线传输收集的信息能够实时分析。
将HPLC技术融合到互联网中，应该会得到一种新的分析技术。
3.集成分析平台：未来的高效液相色谱法分析将成为全自动过程，包括自动进样、色谱开展和数据分析等方面。
用于HPLC技术的集成分析平台将会是未来的发展方向。
四、结论高效液相色谱法作为分析化学中的重要技术，其原理和应用已为不同领域的研究提供了很大帮助。
未来，随着技术的进步和新的需求的出现，高效液相色谱法的发展前景将会更加广阔。
高效液相色谱方法及应用
高速、高效、高灵敏度、高自动化。
1.1.2 与气相色谱法比较
应用范围广、更利于选择最佳分离条件且可在常 温下操作。
1.1.3 高效液相色谱法的特点
（1）分离效能高 （2）选择性高 （3）检测灵敏度高 （4）分析速度快 适合于高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离 分析方法。
1.2 高效液相色谱法的分类
按溶质在两相分离过程中的物理化学原理分类 1.2.1 吸附色谱（Adsorption
Chromatography） 1.2.2 分配色谱（Partition Chromatography） 1.2.3 离子色谱（Ion Chromatography） 1.2.4 体积排阻色谱（Size Exclusion
2.3.3 柱温箱的温度控制要求比较精确，因 为流体的粘度受温度的影响较大。
2.4 检测器
2.4.1 检测器的性能指标 （1）噪声 （2）基线漂移 （3）灵敏度 （4）线性范围 （5）检测器的池体积
2.4.2 检测器的种类
2.4.2.1 紫外吸收检测器
（ultraviolet－visible detector，UVD ）
• 进样系统：进样器，进样阀。 • 分离系统：色谱柱，恒温箱。 • 检测系统记录系统：检测器、记录装置
2.1 高压输液系统
2.1.1 贮液罐 2.1.2 流动相脱气
（1）吹氦脱气法 （2）加热回流法 （3）抽真空脱气法 （4）超声波脱气法 （5）在线真空脱气法
2.1.3 高压输液泵
（1）恒流泵：输出恒定体积流量的流动相 （2）恒压泵：又称气动放大泵，输出恒定压力的泵。
Chromatography） 1.2.5 亲和色谱（Affinity Chromatography）
仪器分析高效液相色谱法
仪器分析高效液相色谱法高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是目前广泛应用于仪器分析领域的一种重要分析方法。
它通过利用柱子中流动的流动相和样品的物理化学性质的相互作用，使样品组分在柱子中发生分离，再通过检测器对各组分进行定量或定性分析。
仪器分析高效液相色谱法主要由流动相供给系统、进样器、柱子、检测器和数据处理系统等组成。
流动相供给系统通过恒压或恒流的方式将流动相送入进样器中，进样器将样品注入柱子中，柱子根据物理化学性质的差异，使不同组分发生分离，之后检测器检测进入检测器的各组分的浓度，并通过数据处理系统对数据进行分析和整理。
高效液相色谱法具有分离效率高、分离时间短、适用范围广等特点。
与传统的液相色谱法相比，高效液相色谱法的流动相的流速更高，柱子填充物颗粒更小，从而大大提高了分离效率。
同时，高效液相色谱法对样品的需求量较小，具有较好的分析灵敏度。
因此，高效液相色谱法被广泛应用于生物、环境、食品、药物、化工等领域的组分分析和质量控制。
在生物领域中，高效液相色谱法常用于生物样品中代谢产物和药物的分析。
通过绑定柱子、手性柱子以及使用不同的检测器，可以对复杂的生物样品中的不同组分进行准确的分析和定量测试。
例如，对尿液中的代谢产物进行分析可以帮助人们了解人体健康状态，对药物的残留物进行分析可以保证食品和水的安全等。
在环境领域中，高效液相色谱法常用于水质、大气和土壤等环境样品中有机污染物的分析。
通过连接各种不同相的柱子，可以对复杂的环境样品中的有机污染物进行有效的分离，使用紫外-可见光检测器或质谱检测器可以对分离后的各组分进行检测和定量。
在食品领域中，高效液相色谱法常用于食品中添加剂、农药残留物和食品中的有害物质的分析。
通过选择合适的柱子和检测器，可以对复杂的食品样品进行分离和检测，以保证食品的安全性和质量。
在药物领域中，高效液相色谱法常用于药品中活性成分和杂质的分析。
高效液相色谱法的应用与发展前景
高效液相色谱法的应用与发展前景高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分析方法，在多个领域中都有着广泛的应用。
该方法基于色谱原理，通过高效分离技术，对样品进行检测和分析。
本文将介绍高效液相色谱法的应用及其在未来可能的发展前景。
药物分析在药物分析领域中，高效液相色谱法已成为一种重要的分析方法。
通过对药物及其代谢产物的定性和定量分析，该方法能够有效地控制药品质量和药物疗效。
例如，利用高效液相色谱法可以测定药物中杂质的含量，确保药品的安全性和有效性。
食品质量检测在食品质量检测方面，高效液相色谱法可用于检测食品中的添加剂、有害物质和营养成分等。
该方法具有高灵敏度和快速分析的特点，可有效保障食品安全和人民健康。
例如，通过高效液相色谱法测定水果和蔬菜中的农药残留量，确保农产品质量安全。
环境监测在环境监测领域，高效液相色谱法可用于检测水体、土壤和大气中的污染物。
该方法能够准确地测定环境中的重金属离子、有机污染物等有害物质，为环境保护和治理提供科学依据。
例如，利用高效液相色谱法检测水体中的有毒物质，为水资源的保护和管理提供技术支持。
随着科学技术的不断进步，高效液相色谱法在未来也将迎来更多的发展机遇和挑战。
下面就简要讨论一下高效液相色谱法的发展趋势和可能面临的挑战，以及如何应对这些挑战。
技术创新与优化未来，高效液相色谱法将继续在技术上进行创新和优化。
例如，开发新型的固定相和流动相，提高分离效率和检测灵敏度；采用新型的检测器，如质谱检测器、拉曼光谱检测器等，拓展了高效液相色谱法的应用范围；引入人工智能和大数据等先进技术，对色谱数据进行深入挖掘和分析，提高检测准确性和效率。
多维分离技术的发展随着样品分离需求的不断提高，多维分离技术将成为未来高效液相色谱法发展的重要方向。
多维分离技术是指同时或依次在多个分离维度上进行样品分离，如反相色谱、离子交换色谱、体积排阻色谱等。
这些技术的结合，可以实现复杂样品的高效分离和精确分析。
简述高效液相色谱法用于杂质检测的几种方法及适用条件
简述高效液相色谱法用于杂质检测的几种方法及适用
条件
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，可用于检测各种杂质。
以下是几种常见的HPLC检测杂质的方法及适用条件：
1. 离子对色谱法：适用于离子和极性化合物的检测，包括无机离子、有机酸、有机碱等。
通常使用离子对柱，并加入离子对试剂作为流动相添加剂，以提高分离度和灵敏度。
2. 反相色谱法：适用于极性和非极性化合物的检测，包括许多药品和农药等。
使用非极性反相柱，并使用有机溶剂作为流动相添加剂，以提高分离度和灵敏度。
3. 大孔毛细管色谱法（GPC）：适用于分离高分子化合物的杂质，如聚合物和蛋白质。
使用大孔柱，并在流动相中加入钙离子等添加剂，以提高分离度和灵敏度。
4. 气化柱组合技术（GC）：适用于检测挥发性和半挥发性化合物的杂质，如有机溶剂和挥发性芳香化合物。
使用毛细管柱与气相质谱仪（GC/MS）组合，可提高分离度和灵敏度。
以上几种方法在HPLC中广泛应用，适用条件包括样品的物化性质、温度、压力、流动相种类和浓度等。
选取合适的HPLC方法和条件可以有效地分离和检测各种
杂质。
高效液相色谱 作用
高效液相色谱作用：
1.有机物分析：在有机化学中，高效液相色谱法被广泛应用于分离和分析有机溶剂中的化合物，如药物、天然产物、有
机合成物等。
它可以检测和定量分析这些化合物的含量、纯度和杂质。
2.生物分子分析：在生物化学和生物医学领域中，高效液相色谱常用于分离和分析蛋白质、肽段、核酸、糖类等生物分
子。
在生物药物研发中，它常用于分析药物的纯度、杂质、降解产物等。
3.环境分析：高效液相色谱可以用于环境样品中污染物的分离和测定。
例如，它可以检测水样中的有机污染物、土壤和
空气样品中的农药残留、环境样品中的重金属等。
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高效液相色谱法在药物分析中的应用与进展
摘要：主要介绍了高效液相色谱法在药物鉴别、药物杂质检查、药物含量测定等方面具体应用以及展望了高效液相色谱法在药物分析中的应用前景。
关键词：高效液相色谱法；HPLC；药物分析；联用技术
Abstract:Mainly introduced the high performance liquid chromatography in drug discrimination, drug impurity test, determination of the content and concrete application and the prospect of the high performance liquid chromatography in pharmaceutical analysis application prospect.
Keywords:high performance liquid chromatography，HPLC,pharmaceutical analysis，hyphenated techniques
引言：
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。
HPLC在国内和国外的药物分析领域的应用范围很广，发展速度也很快，尤其在我国，近十几年来HPLC方法越来越受到重视。
HPLC 在药物的分析中的应用主要是鉴别、有关物质的检查、有效成分及含量的测定[1]；本文对高效液相色谱法（HPLC）技术在药物分析中的应用进行概述并展望其应用前景。
1 在药物分析中的应用
1.1 在药物鉴别中的应用
在HPLC 法中，药物组分的保留时间与其结构和性质有着直接的关系，不同
的药物由于结构和性质的差异在色谱图上的出峰顺序不同，是定性的重要参数，可用于药物的鉴别。
如在中国药典收载的药物利福平的鉴别项下规定：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
如中国药典收载的利福平的鉴别项下规定：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致[2]。
1.2 在杂质检查中的应用
高效液相色谱法（HPLC）分离效能高，灵敏，在药物的杂质检查中应用广泛。
主要用于药物中有关物质的检查。
“有关物质”是指药物中存在的合成原料、中间体、副产物、降解产物等物质，这些物质的结构和性质与药物相似，含量很低，只有采用色谱的方法才能将其分离并检测。
若杂质是已知的，又有杂质的对照品，可用杂质对照品做对照进行检查。
若杂质是未知的，可以采用主成分自身对照法或峰面积归一化法进行检查。
例如倪冲、廖玉山等利用高效液相色谱法（HPLC）测定曲尼司特滴眼液中曲尼司特及其有关物质的含量[3]。
李旭仁、李霞等采用高效液相色谱法（HPLC）测定甲磺酸培氟沙星片含量及有关物质[4]。
刘向红、冷晓燕等采用高效液相色谱法（HPLC）测定苄达赖氨酸滴眼液的有关物质。
金鸽、李雪等采用高效液相色谱法（HPLC）测定苄达赖氨酸滴眼液的含量和有关物质[5]。
1.3 在含量测定中的应用
用高效液相色谱法测定含量可以消除药物中的杂质，制剂中的附加剂及共存的药物对测定的干扰。
中药材及其制剂组成复杂，基中不少有效成分的含量测定也越来越多地采用了高效液相色谱法。
赵龙、王增寿利用高效液相色谱法（HPLC）测定贝特令中维生素A的含量 [6].赵蕾钟淮滨利用高效液相色谱法（HPLC）测定安降片中葛根素的含量。
此外，高效液相色谱法（HPLC）在农药检测、中药材指纹图谱[14]以及药物代谢动力学等方面的研究也发挥着重要的作用。
[7]
2 应用前景——HPLC 及其联用技术在药物分析中的应用
近年来, HPLC 仪的组成部件: 输液泵、色谱柱、检测器都有新的发展, 尤其是检测器方面的发展,如二极管阵列检测器已普遍应用, 蒸发光散射检测器对无近紫外吸收的药物, 提供了一种有效的高灵敏度的方法。
随着各个部件的改进,
也出现了多种联用技术。
譬如, 有人曾用HPLC2示差折光检测法(RID) 分析了麦芽糖等7 种糖类及软饮料中果糖、葡萄糖、柠檬酸等成分[8]。
而RID 灵敏度较低, 受温度影响较大。
GAMES 等[ 9]曾用HPLC2热喷雾(TS)2质谱(MS) , 同时分离和测定了前列腺素D2 , beclomethasone diproinate , ranitididine2N2oxide 三个药物的相对分子质量。
小角度激光散射检测器(LALLSPD) 是近代HPLC 领域中出现的一种新型检测技术。
HPLC2LALLSPD 可以快速检测多糖、蛋白质类高聚物的相对分子质量及相对分子质量分布参数, 可不需要标准品或外标要求[10]。
在药物杂质检测中, HPLC2MS 测定和HPLC2核磁共振(NMR) 测定都是简便、快速的方法,但HPLC2NMR 联用技术中NMR 测定不受HPLC 分离过程中使用的缓冲盐溶液的限制, 并可以提供大量的结构信息。
杨春等[10]用HPLC2NMR 联用技术中的连续流动和停止流动两种模式对萘哌地尔中杂质进行检测, 根据HNRM, H2HCOSY谱完成了主要杂质12萘环2丙三醇结构鉴定。
HPLC2NMR 是解决合成药物中杂质结构确证的简便、快速方法。
杨凤仙等[11]应用HPLC2电喷雾(ESI)2MS法, 分析了水和土壤中有机磷酸化合物异丙基磷酸和异丙基磷酸丙酯。
采用了选择离子监测(SIR)技术, 排除了基质干扰, 回收率分别为100 %和90 %, 灵敏度1 ng·μL - 1 。
HPLC2MS 联用在体内药物代谢研究、临床药物检测和生物大分子测定有着广泛的用途。
微柱液相色谱的研究也十分活跃, 由于分析所需的样品量及流动相的消耗大大下降, 检测的灵敏度又大大提高, 使HPLC 分析更加灵敏准确、简便快速。
特别是联用技术的发展, 使之在药物分析生命科学领域的应用更具重要意义。
小结
综上所述, HPLC 具有专属性强、灵敏度高等特点, 既可用于分离也可用于定量分析, 适用于各种各样的有机化合物。
因此在药物成分的分离与测定方面能够充分发挥其它分析方法无与伦比的优势。
而且随着计算机软件的开发、专家系统的应用、检测手段的进步、各种联用技术的出现以及其他一些相关问题的解决, HPLC 在医药研究中将会发挥越来越重要的作用。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.北京：化学工业出版社，2010.
[2] 中国药典，1990，二部.
[3] 倪冲, 缪玉山2 陈国明, 王晨霞.高效液相色谱法测定曲尼司特滴眼液中曲
尼司特及其有关物质的含量[J] .东南大学学报( 医学版) ，2008, Sep; 27( 5) : 365-367.
[4] 李绪伦,李霞,曾杰,刘映倩.HPLC法测定甲磺酸培氟沙星片含量及有关物质[J] .儿科药学杂志, 2009,15(3):49-50.
[5] 刘向红、冷晓燕，许靖.高效液相色谱法（HPLC）测定苄达赖氨酸滴眼液的有关物质[J] .石油化工应用,2008,27(2):65-67.
[6] 金鸽,李雪,王晓明,方成玲,金描真.高效液相色谱法测定苄达赖氨酸滴眼液的含量和有关物质[J] .安徽医药，2010（1）:41-42.
[7] 高珣陈晓辉韩木南毕开顺.高效液相色谱法测定肌肽滴眼液中L- 肌肽的含量及有关物质[J] .现代生物医学进展，2009(9） :2345-2346.
[8] 颜素华，李健和，曹俊华.高效液相色谱法测定法莫替丁注射液中的有关物质和含量[J] .中国现代医学杂志，2010，20（11）:1661-1668.
[9] 赵龙,王增寿.利用高效液相色谱法测定贝特令中维生素A的含量[J] .药品检测,2001 10（10） :41.
[10] 赵蕾,钟淮滨.高效液相色谱法测定安降片中葛根素的含量[J] .基层中药杂志,2001，16（4）:23-24.
[11] 梁丽梅,庞小雄.利用高效液相色谱法（HPLC）测定安神补脑液中维生素B1 的含量[J] .广东医药学报, 2006,22（2）:148-149，173.。