酶免疫技术原理

合集下载

酶联免疫吸附法原理

酶联免疫吸附法（ELISA）是一种常用的生物化学分析方法，它

基于抗体与抗原相互作用的原理，可以用于检测特定蛋白质的存在

和浓度。酶联免疫吸附法具有高灵敏度、高特异性和易操作等优点，因此在医学诊断、生物学研究和生物制药等领域得到了广泛的应用。

首先，酶联免疫吸附法的原理是基于抗体与抗原的特异性结合。在实验中，首先将待检测的抗原溶液加入到微孔板中，使其吸附在

孔板表面。然后，加入特异性的一抗抗体，与待检测的抗原发生特

异性结合。接着，加入酶标记的二抗抗体，它会与一抗抗体结合形

成复合物。最后，加入底物，酶与底物发生反应产生可测的信号，

通过测定信号的强度来确定待检测抗原的存在和浓度。

其次，酶联免疫吸附法的原理还包括两种常用的方法，间接法

和夹心法。间接法是指在待检测抗原与一抗抗体结合后，再加入酶

标记的二抗抗体，通过二抗抗体与一抗抗体的结合来增强检测信号。夹心法是指在待检测抗原与一抗抗体结合后，再加入抗原特异性的

酶标记抗体，形成抗原-抗体-酶标记抗体的夹心复合物，从而增强

检测信号。

此外，酶联免疫吸附法还可以根据检测信号的产生方式分为颜色反应法和发光反应法。颜色反应法是指在酶与底物发生反应后产生可见的颜色变化，通过比色计或酶标仪来测定信号强度。发光反应法是指在酶与底物发生化学反应产生发光信号，通过发光计来测定信号强度。发光反应法具有高灵敏度和低背景信号的优点，因此在一些对灵敏度要求较高的实验中得到了广泛的应用。

总的来说，酶联免疫吸附法原理简单、灵敏度高、特异性强，操作简便，可以同时检测多个样品，因此在科研和临床诊断中得到了广泛的应用。随着生物技术的不断发展，酶联免疫吸附法在蛋白质检测、疾病诊断和药物研发等领域将会发挥越来越重要的作用。

酶联免疫吸附法原理

酶联免疫吸附法（ELISA）是一种常用的免疫学实验技术，广泛应用于医学诊断、生物学研究和生物制药等领域。该技术通过酶标记的抗体与特定抗原结合，再通过酶底物的反应产生可定量测定的色素或荧光信号，从而实现对抗原或抗体的检测和定量分析。

酶联免疫吸附法的原理主要包括固相酶联免疫吸附法和溶液相酶联免疫吸附法

两种类型。固相酶联免疫吸附法是最常见的类型，其原理是将抗原或抗体固定在微孔板上，再加入酶标记的抗体或抗原进行反应，最后通过底物的反应来测定结果。而溶液相酶联免疫吸附法则是将酶标记的抗体或抗原与待测物体系中的抗原或抗体反应，再通过固相进行分离和检测。

酶联免疫吸附法的操作步骤一般包括以下几个关键步骤，包被、孵育、洗涤、

检测和计量。首先是将待检测的抗原或抗体包被在固相载体上，形成固相复合物。然后加入酶标记的抗体或抗原，让其与待检测物发生特异性结合，形成夹心复合物。接着进行洗涤步骤，以去除非特异性结合物质。随后加入底物，使酶与底物发生反应，产生可测定的信号。最后通过光度计或荧光计等设备对信号进行测定和计量，从而得出待检测物的含量或浓度。

酶联免疫吸附法具有高灵敏度、高特异性、操作简便、快速、经济等优点，因

此被广泛应用于临床医学、生物学研究和生物制药等领域。在临床医学中，ELISA

技术常用于检测各种疾病的标志物，如肿瘤标志物、感染病原体抗体、药物残留等。在生物学研究中，ELISA技术常用于蛋白质的定量分析、细胞因子的检测等。在

生物制药领域，ELISA技术常用于药物的质量控制和稳定性研究。

酶联免疫吸附法原理

酶联免疫吸附法（ELISA）是一种常用的免疫学实验技术，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和生物制药等领域。它通过酶与抗原或抗体的特异性结合来检测样品中特定的蛋白质分子，具有高灵敏度、高特异性和简便易行的特点。下面将详细介绍酶联免疫吸附法的原理。

首先，酶联免疫吸附法的基本原理是利用酶标记的抗体或抗原与待检测的抗原或抗体结合，再通过酶底物的作用来间接或直接检测样品中的特定蛋白质。整个实验过程可以分为固相吸附、特异性结合、非特异性结合和酶底物反应等步骤。

固相吸附是酶联免疫吸附法的第一步，通常将待检测的抗原或抗体通过物理吸附或共价结合的方式固定在固相载体（如微孔板）上。这样做的目的是为了使待检测的抗原或抗体能够与酶标记的抗体或抗原发生特异性结合。

特异性结合是酶联免疫吸附法的关键步骤，它是指将酶标记的抗体或抗原与待检测的抗原或抗体发生特异性结合。在这一步骤中，酶标记的抗体或抗原将与待检测的抗原或抗体形成免疫复合物，而非特异性结合则会被洗涤去除。

非特异性结合是指除了特异性结合外，固相载体上还可能存在一些非特异性结合的情况。为了减少非特异性结合的干扰，需要通过洗涤的方式将非特异性结合的物质去除，以保证后续的酶底物反应的准确性和特异性。

最后，酶底物反应是酶联免疫吸附法的最后一步，当酶标记的抗体或抗原与待检测的抗原或抗体发生特异性结合后，加入酶底物后，酶将催化底物的变化，产生可测量的信号。通过测定信号的强度或颜色的变化，可以间接或直接检测样品中特定蛋白质的含量或存在情况。

总的来说，酶联免疫吸附法是一种基于酶与抗原或抗体的特异性结合来检测特定蛋白质的技术。它通过固相吸附、特异性结合、非特异性结合和酶底物反应等步

免疫酶技术的原理及应用

1. 什么是免疫酶技术？

免疫酶技术是一种利用抗体-抗原相互作用进行生物分析的方法。它通过利用抗体与特定抗原结合的高度特异性，将酶标记的抗体用于检测和定量目标分子，广泛应用于医学、生物学和生物化学等领域。

2. 免疫酶技术的原理

免疫酶技术的原理是基于抗原与抗体之间的高度特异性结合。一般来说，免疫

酶技术包括以下几个步骤：

2.1 抗原的制备

首先，需要获得目标分子的抗原。抗原可以是蛋白质、多肽、病毒、细胞表面

蛋白等。通常，抗原会被纯化并加工成适合免疫动物生产抗体的形式。

2.2 抗体的制备

接下来，需要制备与目标分子结合的特异性抗体。通常，抗原会被免疫动物

（如兔子、小鼠等）注射，形成抗体。

2.3 酶标记的抗体制备

为了便于检测和定量目标分子，可以将酶标记与抗体结合，形成酶标记的抗体。常用的酶标记包括辣根过氧化酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）等。

2.4 抗原-抗体结合反应

将样品中的目标分子与酶标记的抗体一起孵育，使抗原与抗体发生特异性结合。这样，目标分子就被标记上了酶，成为可检测的复合物。

2.5 酶的作用和检测

添加适当的底物和辅助试剂后，酶会催化底物的反应，产生可测量的信号。常

见的底物有TMB（3，3′，5，5′-四甲基苯基二氨基甲烷）、BCIP（溴硝基硼邻萘

酚磷酸盐）等。

3. 免疫酶技术的应用

免疫酶技术在医学、生物学和生物化学等领域有广泛的应用。以下是免疫酶技

术的一些常见应用：

3.1 免疫诊断

免疫酶技术在临床诊断中被广泛应用。例如，ELISA（酶联免疫吸附测定法）通过检测血清中特定抗原或抗体的浓度，可以用于诊断疾病，如各类感染病、自身免疫性疾病等。

酶联免疫法的原理

①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

②使抗原或抗体与某种酶(环球医学网提供酶联免疫法的原理介绍)连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又

保留酶的活性。在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶

标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用

洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最

后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加

入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中

受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量

分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测

定方法达到很高的敏感度。

ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种

必要的试剂：

①固相的抗原或抗体

②酶标记的抗原或抗体(环球医学网提供酶联免疫法的原理介绍)

③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备

条件，可设计出各种不同类型的检测方法。

酶联免疫吸附试验 elisa原理

酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常见的实验室技术，用于检测生物分子如蛋白质、抗体、荷尔蒙和病毒等。ELISA技术基于抗原和抗体的特异性结合，通过酶标记物和底物的反应来检测分子的存在或浓度。

ELISA技术的原理可以分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA 和夹心ELISA等几种。其中，间接ELISA是最常见的类型，下面将详细介绍其原理和步骤。

一、间接ELISA的原理

间接ELISA利用抗体与抗原的特异性结合来检测分子的存在或浓度。该方法需要用到两种抗体：第一种是特异性抗体，用于检测目标分子；第二种是酶标记抗体，用于检测第一种抗体的结合情况。

具体步骤如下：

1. 将抗原溶液加入微孔板中，并在室温下孵育一定时间，使抗原吸附于微孔板表面。

2. 将微孔板洗涤干净，以去除未结合的抗原和杂质。

3. 加入一定浓度的非特异性蛋白质，如牛血清蛋白或奶粉，以防止非特异性结合。

4. 加入一定浓度的特异性抗体，使其与抗原结合。

5. 将微孔板洗涤干净，以去除未结合的抗体和杂质。

6. 加入一定浓度的酶标记抗体，使其与第一种抗体结合。

7. 将微孔板洗涤干净，以去除未结合的酶标记抗体和杂质。

8. 加入底物，使酶标记抗体产生颜色反应。

9. 测量吸光度，来确定目标分子的存在或浓度。

二、间接ELISA的优缺点

间接ELISA具有以下优点：

1. 可以检测极低浓度的分子，如病毒和荷尔蒙。

2. 可以同时检测多个样本。

3. 可以检测多种类型的生物分子，如蛋白质、抗体、荷尔蒙和病毒等。

4. 可以使用多种酶标记抗体，如辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）和过氧化物酶（POD）等。

酶联免疫吸附的原理和步骤

酶联免疫吸附（ELISA）是一种常用的免疫学实验技术，广泛应用于医学、生物学、生物化学、环境监测等领域。它主要是通过酶标记抗体或抗原与待检测样品中的特定分子发生特异性反应，利用酶的催化作用来检测目标物质的存在量和浓度。

一、酶联免疫吸附的原理

酶联免疫吸附的原理是基于免疫学和酶学的原理。它利用抗体和抗原之间的特异性结合关系来检测待测物质的存在和浓度。ELISA的原理主要分为两种类型：直接ELISA和间接ELIS A。

直接ELISA是将酶标记的抗体或抗原直接与待检测物质结合，然后用底物检测酶的活性，从而测定待检测物质的存在和浓度。

间接ELISA是将待检测物质与特异性抗体结合，再加入酶标记的二抗与第一抗体结合，最后用底物检测酶的活性，从而测定待检测物质的存在和浓度。

二、酶联免疫吸附的步骤

酶联免疫吸附的步骤主要分为以下几个方面：

1.涂层：将抗体或抗原涂在微孔板上，使其与微孔板表面结合。

2.阻断：用蛋白质或其他物质阻止非特异性结合。

3.样品加入：加入待测样品，使其与涂层的抗体或抗原发生特异性结合。

4.洗涤：用缓冲液洗去未结合的物质。

5.酶标记的抗体或抗原加入：加入酶标记的抗体或抗原，使其与待测物质结合。

6.洗涤：用缓冲液洗去未结合的物质。

7.底物加入：加入底物，使其与酶发生反应，产生可测量的信号。

8.停止反应：加入停止反应剂，停止底物的反应。

9.测量：用酶标仪或光度计测量信号的强度，从而计算出待测物质的存在量和浓度。

三、酶联免疫吸附的实际应用

酶联免疫吸附在医学、生物学、生物化学、环境监测等领域都有广泛的应用。

酶免疫技术原理

酶免疫技术是一种常用的实验技术，其原理是将酶标记的抗体与待检测物相互作用，通过检测酶标记的反应产物来间接检测待检测物的存在或浓度。酶免疫技术可以用于检测抗体、蛋白质、核酸等生物分子，也可以用于定量或半定量分析。

酶免疫技术的步骤通常包括以下几个步骤：

1.抗原或抗体的加样和固定

将待检测物加入到试剂盒中的孔洞中，然后使其在盒子表面固定。

2.疫苗抗体的反应

将已知的疫苗抗体加入到试剂盒孔洞中，使其与待检测物结合。

3.标记酶的加入

将用于标记酶的物质加入到试剂盒孔洞中，使其可以与疫苗抗体结合。

4.洗涤

用冷凝水或其他方式，将未结合的物质从孔洞中提取出来，以保证准确性。

5.色素反应

加入染料或颜料，使得待检测物和标记酶协同反应，产生色素反应。

6.结果的读取和分析

根据产生的颜色和染料的浓度，来分析待检测物的浓度和质量。

酶免疫技术通常有两种形式：

1.间接ELISA

间接ELISA是酶免疫技术中最常用的一种方法。它利用酶标记的二抗与待检测物的一抗结合，通过检测酶标记反应产物来间接检测待检测物的存在或浓度。间接ELISA具有灵敏度高、特异性好、反应快、操作简便等特点。

2.竞争ELISA

竞争ELISA是利用酶标记的抗体与水相抗原或待测物相竞争结合的一种方法。当待测物或水相抗原与标记抗体竞争时，标记抗体附着在固定物上的数量姗姗而后，细胞内的信号会变弱或消失。通过测定标记抗体的数量，可以计算出被测物质的含量。

酶免疫技术是一种有效的生物分析技术，其通过简单的实验流程和基于酶反应的原理，可以快速准确地检测分析生物分子的存在和浓度。酶免疫技术在生物医学、环境科学、食

酶免技术_ppt课件

原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
1、固相化抗人 IgM
2、加待测物只有非特异性IgM 和抗人IgM结合
3、加特异性抗原，不能与非特异性IgM结合
4、加酶标抗体无抗原结合，加底物不显色
-
第四节酶免疫测定的应用
均相酶免疫测定主要用于药物和小分子物质的检测。非均相免疫测定中的 ELISA 应用更为广泛， ELISA 广泛用于传染病的诊断，病毒如病毒性肝炎（甲肝抗体、“乙肝三对”、丙肝抗体、丁肝抗体、戊肝抗体）、风疹病毒、疱疹病毒、轮状病毒等；细菌如结核杆菌、幽门螺杆菌等。也用于一些蛋白质检测，如各种免疫球蛋白、补体、肿瘤标志物（甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺特异性抗原等）。
抗原抗体反应示踪物标记
特异性
标记免疫技术的主要特点：高特异性、高灵敏性
灵敏性
标记免疫技术
❖ 标记免疫技术指用示踪物标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应；
❖ 并借助于荧光显微镜，射线测量仪，酶标检测仪，电子显微镜和发光免疫测定仪等精密仪器，对实验结果直接镜检观察或进行自动化测定；

酶联免疫吸附技术的原理及应用

引言

酶联免疫吸附技术是一种常用的免疫学实验方法，通过标记酶的抗体来检测特

定的抗原。它具有高灵敏度、高特异性的优点，在生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域得到广泛应用。本文将详细介绍酶联免疫吸附技术的原理和应用。

原理

酶联免疫吸附技术是基于免疫反应的原理进行设计的。主要原理包括免疫反应、酶标记和酶促反应三个方面。

1.免疫反应

–酶联免疫吸附技术是基于抗原-抗体反应的原理，特异性抗原与其对应的抗体结合形成免疫复合物。

–免疫反应的特异性保证了酶联免疫吸附技术能够准确检测目标抗原。

2.酶标记

–在酶联免疫吸附技术中，为了使免疫复合物形成可检测的信号，常用酶对抗体进行标记。

–常用的酶标记物包括辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等。这些酶具有较高的特异性和灵敏度。

3.酶促反应

–酶联免疫吸附技术利用标记酶的催化作用，将底物转化为可见的色素或荧光信号。

–常用的底物包括TMB（3,3’,5,5’-四甲基苯基亚硝基态苯胺）、ABTS（2,2’-氨基二乙基三甲基苯并噻唑磺酸盐）等。

应用

酶联免疫吸附技术在生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域有着广泛的应用。

1.生物医学研究

–酶联免疫吸附技术可以用于研究抗原与抗体的相互作用，进而研究疾病的发生机制。

–可以检测细胞因子、生长因子、蛋白质等生物分子的含量和表达水平。

2.临床诊断

–酶联免疫吸附技术在临床诊断中常用于检测病原微生物、肿瘤标志物等。

–可以用于快速、准确地诊断疾病，对临床诊断起到重要作用。

3.药物开发

–酶联免疫吸附技术在药物开发中可以用于筛选药物候选化合物的特异性和亲和性。

酶免疫技术的特点方法原理

免疫酶技术是指在一定的生物反应器内,利用酶的催化作用,进行物质转化的技术.其应用范围已遍及工业、医药、农业、化学分析、环境保护、能源开发和生命科学理论研究等各个方面。下面是店铺给大家酶免疫技术的特点方法原理，希望能帮到大家!

酶免疫技术的特点

(1)酶和酶作用的底物：

①辣根过氧化酶(HRP)：是一种糖蛋白，含糖量约18%;分子量为44kD;是一种复合酶，由主酶(酶蛋白)和辅基(亚铁血红素)结合而成的一种卟啉蛋白质。主酶为无色糖蛋白，在275nm波长处有最高吸收峰;辅基是深棕色的含铁卟啉环，在403nm波长处有最高吸收峰。在反应中H2O2是受氢体底物，DH2无色的供氢体底物，在HRP的催化下脱氢而显色，此即HRP作为示踪物的原理。

②碱性磷酸酶(AP)：是从牛肠粘膜或大肠杆菌中提取。从大肠杆菌提取的最适pH为8.0;用小牛肠粘膜提取的AP最适pH为9.6。

③其他的酶：有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶和脲酶等。

(2)酶标记的抗体或抗原：

称为结合物。制备方法通常有戊二醛交联法(包括有一步法和二步法)和过碘酸盐氧化法。标记抗体的最佳用量：通常采用棋盘滴定法进行滴定。

(3)固相载体：

主要试剂：固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体和与标记酶直接关联的酶反应底物。可作固相载体物质最常用的是聚苯乙烯。与聚苯乙烯类似的塑料为聚氯乙烯。聚苯乙烯作为ELISA固相载体，载体还包括微孔滤膜和含铁磁性微粒。聚氯乙烯板的特点为质软板薄，可切割，价廉、但光洁度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有时也略高。

酶免疫组化技术的原理

酶免疫组化技术（Enzyme-linked immunohistochemistry，简称IHC）是一种常用的免疫组化方法，利用酶-抗体互相作用来

检测和定位特定蛋白质在细胞或组织中的表达情况。

酶免疫组化技术的原理如下：

1. 定位抗原：首先，组织样本（如切片）被固定在载玻片上，并经过脱水和脱脂处理。然后，使用一个特异性的抗体来与目标蛋白质的抗原决定簇结合。这种抗体可以是单克隆或多克隆抗体，根据实验需求选择。

2. 二抗结合：免疫组化中的主要问题是如何检测抗原-抗体复

合物。为此，需要加入一种与抗原-抗体复合物特异结合的次

级抗体。通常，次级抗体被标记有一种特定的酶（如辣根过氧化物酶HRP），以便后续酶的检测。

3. 酶底物加入：将特定的酶底物加入样本中，并与酶发生反应。酶底物与酶的作用形成可见的色素沉积物或发光反应，从而可以观察到特定的反应区域。

4. 反应停止：当反应达到所需的程度后，可以通过加入适当的停止剂（如酸溶液）来停止酶的作用。这有助于固定和稳定酶产生的可见信号，并防止颜色的继续发展。

5. 观察和分析：最后，使用显微镜观察样本，并根据所得的结果对组织或细胞中的目标蛋白质进行定位和定量分析。一般来

说，颜色越明亮表示目标蛋白质的表达越高。

总的来说，酶免疫组化技术利用酶标记的次级抗体对特定抗原进行检测和定位，通过酶底物反应生成可见色素或发光信号，从而实现对目标蛋白质在组织或细胞中的表达情况的研究。

简述酶联免疫吸附试验的原理及基本步骤

简述酶联免疫吸附试验的原理及基本步骤酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测体内特定抗原或抗体的存在和数量。其原理基于抗原-抗体的特异性结合作用以及酶的催化作用。

酶联免疫吸附试验的原理：

酶联免疫吸附试验主要利用酶作为标记物，将待检测的抗原或抗体与其特异性抗体或抗原结合，再用酶标记抗体或抗原与待检测物结合，形成酶-抗原-抗体或酶-抗体-抗原复合物。最后通过酶反应产生的色素变化或发光信号，来间接或直接定量分析待检测物的含量。

酶联免疫吸附试验的基本步骤：

1.固相抗原或抗体的吸附：在反应板的孔中吸附抗原或抗体。一般采用多孔吸附板作为载体，将抗原或抗体溶液加入孔中，经过一段时间的孵育后，以使抗原或抗体与孔板表面结合。

2.无特异性位点的封闭：将未被吸附的非特异性蛋白质如牛血清蛋白（BSA）添加到孔中，对未被特异性抗原或抗体吸附的区域进行封闭，防止非特异性结合的发生。

3.加入标记物：加入被标记的抗体或抗原，使其与孔中的特异性抗原或抗体发生特异性结合。常用的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）等。

4.洗涤：用缓冲液洗涤孔中多余的未结合抗体或抗原，降低非特异性背景。

5.底物反应：加入适当的酶底物，酶底物与酶结合发生催化反应，使底物产生颜色或发光等可检测的反应产物。

6.反应终止：加入终止剂，停止底物的反应，防止颜色或发光信号进一步变化。

7.读取结果：使用酶标仪或光度计测定标记物的颜色或发光强度，根据标准曲线计算出待检测物的浓度。

简述酶联免疫技术的基本原理

酶联免疫技术（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一

种广泛应用于生物医学研究和诊断的重要技术。它通过酶的催化反应来标

记和检测特定抗原或抗体，具有高灵敏度、高特异性和高重复性的特点。

其基本原理主要包括四个步骤：涂覆固相、特异性结合、信号产生和检测。

首先，涂覆固相是ELISA的第一步。涂覆固相是将抗原或抗体固定在

固相载体（如微孔板、磁珠等）上。常用的固相载体为96孔微孔板，每

个孔内都可以涂覆不同的固定抗原或抗体。固定方式有物理吸附、共价键

合等。通过涂覆固相可以将待检测的抗原或抗体捕获并固定在孔底，为后

续特异性结合提供基础。

第二步是特异性结合。该步骤中，涂覆固相上固定的抗原或抗体与待

检测样品中的抗原或抗体特异性结合。此时，固相上的特异性抗原或抗体

与待测样品中的目标分子形成特异性复合物。这种特异性结合是ELISA技

术的核心步骤，也是检测的关键。特异性结合可以通过直接结合法、间接

结合法、竞争结合法等方式进行。

第三步是信号产生。在特异性结合之后，为了可视化或定量检测目标

分子的浓度，需要引入能够产生可检测信号的物质。常用的信号产生物质

有酶类物质，如辣根过氧化物酶（HRP），碱性磷酸酶（AP）等。这些酶

可以与特异性结合的复合物反应，产生可观察到的信号。通常使用酶标记

的二抗或酶标记的探针进行信号产生。例如，如果固相上固定的是抗体，

则可以使用酶标记的与该抗体结合的二抗来引入酶，形成复合物并进行信

号产生。

最后一步是检测，即对信号进行定量或可视化检测。通常这一步骤是通过化学反应来实现的。例如，在使用酶为信号产生物质的情况下，可以通过加入底物和底物转化物来产生有颜色的产物。这个产物的颜色强度与样品中目标分子的浓度成正比。通过比色反应或荧光反应等探测方法来对信号进行读取和分析。常用的读取设备有酶标仪、荧光光度计等。

酶免疫组化技术的原理

引言

酶免疫组化技术（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析蛋白质、抗体或其他生物分子在生物样本中的存在和浓度。它基于抗原-抗体反应的原理，通过酶标记的二抗或底物使产生的信号与待检测分子的浓度呈正相关，从而实现对目标物质的检测和定量。

ELISA的原理

ELISA技术主要包括间接ELISA、直接ELISA、竞争ELISA和抗体夹心ELISA等几种类型。下面分别介绍每种类型的原理。

间接ELISA

1.固相吸附：将待检测抗原分子溶液加入酶标板的孔中，经过一定条件下的孵

育，使抗原分子与酶标板表面的特异性抗体结合。孔中未结合的抗原分子将被洗去，以去除非特异性结合。

2.抗原结合：孔中的抗原结合的特异性抗体与待检测抗原结合，形成抗原-抗

体复合物。这个特异性抗体是用于检测待检测抗原的抗体。

3.二抗结合：加入酶标记的次抗体，如HRP标记的抗人IgG二抗，在孔中与第

二抗体结合。这一步增强了免疫反应的信号，提高了ELISA的敏感性。4.底物反应：加入底物溶液，在酶的作用下，底物发生染色反应或发光反应。

反应的颜色或荧光强度与待检测抗原的浓度成正比。

5.读取结果：通过光谱仪或酶标仪测定底物反应的信号强度，进而计算出待检

测抗原的浓度。

直接ELISA

1.固相吸附：将待检测抗原分子溶液加入酶标板的孔中，经过一定条件下的孵

育，使抗原分子与酶标板表面的特异性抗体结合。

2.抗原结合：孔中的抗原结合的特异性抗体与待检测抗原结合，形成抗原-抗

酶联免疫法原理

酶联免疫法是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析目标蛋白质或抗原的存在和浓度。其原理是利用特定抗体与目标蛋白质或抗原之间的特异性结合，再借助酶的催化作用，将目标物与酶的反应产物相关联，通过测量反应产物的信号强度来间接测定目标物的存在和浓度。

酶联免疫法的步骤通常包括以下几个主要步骤：

1. 预涂板：将具有特异性的抗体或抗原预先涂覆在微孔板的表面上，形成抗原或抗体捕获层；

2. 孵育：将待检测样品加入微孔板中，样品中的目标物与捕获层上的抗体或抗原结合，形成特异性复合物；

3. 洗涤：通过洗涤步骤，去除未结合的样品成分，减少背景干扰；

4. 二抗结合：加入与目标物结合的抗体标记物，这种抗体与目标物不同的抗体结合，形成“夹心”结构；

5. 再次洗涤：去除未结合的二抗成分，减少背景干扰；

6. 底物添加：加入底物，底物与酶结合，酶的催化作用使底物产生可测量的信号，例如颜色变化；

7. 反应停止：通过加入反应停止剂，停止底物与酶的反应；

8. 信号检测：使用仪器测量底物的信号强度，常见的方法包括吸光度测定或荧光测定；

9. 数据分析：根据测得的信号强度，通过对照样品进行定量分析，计算目标物的浓度。

酶联免疫法通过将酶的催化作用与特异性抗体或抗原结合，能够高灵敏度地检测目标物，并且可同时处理多个样品，因此在生物医学研究和临床诊断中得到了广泛应用。