抑菌活性实验设计方案

合集下载

药物抑菌实验报告

一、实验目的为了探究不同种类抗生素的抑菌效果，本研究采用体外抑菌实验方法，对青霉素、氨苄西林、头孢克洛和氯霉素四种抗生素进行抑菌活性测试，为临床合理用药提供依据。

二、实验材料1. 实验菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等常见革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

2. 实验试剂：青霉素、氨苄西林、头孢克洛和氯霉素等抗生素粉末，琼脂、牛肉膏、蛋白胨、pH试纸、无菌生理盐水等。

3. 实验仪器：培养箱、恒温培养箱、电子天平、移液器、显微镜、培养皿、锥形瓶、滴管等。

三、实验方法1. 菌株活化：将保存的菌株在适宜的培养基上培养24小时，备用。

2. 制备菌悬液：用无菌生理盐水将菌株稀释至适宜浓度，备用。

3. 制备抗生素溶液：分别将青霉素、氨苄西林、头孢克洛和氯霉素粉末用无菌生理盐水溶解，配制成一定浓度的抗生素溶液。

4. 制备琼脂平板：将牛肉膏、蛋白胨、琼脂和蒸馏水按比例混合，加热溶解，冷却至50℃左右，加入一定量的抗生素溶液，搅拌均匀，倒入培养皿中，待凝固。

5. 涂布菌悬液：用无菌棉签将菌悬液均匀涂布在琼脂平板表面。

6. 抑菌实验：将涂布好菌悬液的琼脂平板放入培养箱中，分别加入青霉素、氨苄西林、头孢克洛和氯霉素纸片，培养24小时。

7. 观察结果：观察平板上的抑菌圈直径，记录数据。

四、实验结果1. 青霉素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的抑菌圈直径分别为：15mm、10mm和8mm。

2. 氨苄西林对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的抑菌圈直径分别为：10mm、8mm和6mm。

3. 头孢克洛对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的抑菌圈直径分别为：12mm、9mm和7mm。

4. 氯霉素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的抑菌圈直径分别为：18mm、15mm和13mm。

五、实验结论1. 青霉素、氨苄西林、头孢克洛和氯霉素均具有较好的抑菌效果。

2. 氯霉素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的抑菌效果最好，其次是青霉素、头孢克洛和氨苄西林。

抑菌实验实训报告

一、实验目的1. 了解抑菌实验的基本原理和方法。

2. 掌握常用抑菌剂的抑菌效果。

3. 培养实验操作技能，提高对微生物学实验的实践能力。

二、实验原理抑菌实验是通过测定抑菌剂对微生物的生长抑制情况，来评价其抑菌效果的方法。

实验中，抑菌剂与微生物接触，通过干扰微生物的代谢过程或破坏其细胞结构，从而抑制其生长。

三、实验材料1. 菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。

2. 抑菌剂：苯酚、酒精、氯霉素等。

3. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。

4. 实验仪器：无菌培养皿、无菌移液器、无菌接种环、酒精灯等。

四、实验方法1. 将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基中，37℃培养24小时，制成菌悬液。

2. 取无菌培养皿若干，分别加入适量的牛肉膏蛋白胨培养基。

3. 在每个培养皿中央加入适量的抑菌剂，用无菌移液器均匀涂抹。

4. 将菌悬液用无菌接种环取适量，均匀涂布于每个培养皿的抑菌剂周围。

5. 将培养皿倒置，37℃培养24小时。

6. 观察并记录抑菌圈的大小。

五、实验结果1. 苯酚：金黄色葡萄球菌抑菌圈直径约为1.5cm，大肠杆菌抑菌圈直径约为2.0cm。

2. 酒精：金黄色葡萄球菌抑菌圈直径约为1.0cm，大肠杆菌抑菌圈直径约为1.5cm。

3. 氯霉素：金黄色葡萄球菌抑菌圈直径约为2.5cm，大肠杆菌抑菌圈直径约为3.0cm。

六、实验分析1. 苯酚对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有一定的抑制作用，但效果不如氯霉素。

2. 酒精对金黄色葡萄球菌的抑制作用较弱，而对大肠杆菌的抑制作用较好。

3. 氯霉素对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有较强的抑制作用。

七、实验讨论1. 抑菌实验是微生物学实验中的重要内容，通过实验可以了解不同抑菌剂的抑菌效果，为临床用药和食品加工等提供参考。

2. 实验过程中，无菌操作至关重要，否则会导致实验结果不准确。

3. 本实验结果表明，氯霉素是一种高效的抑菌剂，在临床用药和食品加工等领域具有广泛的应用前景。

八、实验总结本次抑菌实验实训，使我对抑菌实验的基本原理和方法有了更深入的了解，提高了我的实验操作技能。

抑菌试验方案

利用吸附法测定壳聚糖无纺布抑菌性能试验方案一、实验原理：本实验参考了国标GB/T20944方法，根据我们的材料特性进行了微调。

即：选取革兰氏阴性菌（大肠杆菌（25922））和革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌（25923））两类代表性指示微生物。

将测试材料浸泡在活化好的菌悬液（浓度控制为107CFU/ml）中，设置不同处理时间，稀释涂布，平板单菌落计数，计算无纺布材料的抑菌性能。

二、实验方法：2.1试验菌种的活化1）冻干粉接种至大豆蛋白肉汤(TSB)培养基，37℃培养24h。

一部分用于抑菌试验，另一部分用于划线接种至斜面或平皿冷藏保藏（可保藏1个月）。

2）培养液稀释。

活化好的菌悬液用稀释液稀释20倍，取1ml培养液添加到19ml稀释液（应提前灭菌）中。

3）式样预处理。

大小合适的试样饱和吸水，灭菌处理。

（周教授负责）4）菌悬液洗涤。

将稀释好的菌悬液转移到试样中，分别震荡15min 和30min，为防止微生物传代，影响试验结果，立即放入冰箱冷藏。

5）洗涤液梯度稀释。

处理后的洗涤液立即梯度稀释到10-1, 10-2,10-3,10-4和10-5。

具体方法：取1ml洗涤原液加入9ml稀释液此时为10-1梯度；取1ml稀释后的10-1菌液加入到9ml稀释液，此时为10-2梯度；······。

6）涂布。

分别取10-3,10-4和10-5的稀释液200ul涂布到平板（计数培养基，简称EA），每个处理做2个平行，37℃，培养24-48h，计数。

7）抑菌效果评价。

参照GB/T20944。

三、试验简易流程注：如果活化后的菌液浓度较高，可取10-4、10-5和10-6梯度稀释液涂布。

四：所需准备耗材：1、大豆蛋白液体培养基（7.1，TSB）250ml培养瓶装100ml 3瓶，2瓶分别接种，1瓶备用；2、大豆蛋白固体培养基,（7.2，TSA）250ml培养瓶装100ml 1瓶，到平板后用于菌种保藏；3、稀释液（7.5）15或18ml试管装9ml 50支，42支稀释，8支备用；4、计数固体培养基（7.6，EA）250ml培养瓶装160ml 6瓶，准备50皿。

抑菌试验

4. 菌液涂布：吸取1mL 菌液入平板表面，用涂布器涂布将菌液涂布均匀
5. 摆放牛津杯：在培养基表面垂直摆放牛津杯，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙。
6.加入待检药液：在杯中加入不同稀释度的药液或待检样品。
7. 孵育：加满后在37 ℃培养16~18 h。
8. 结果报告：用毫米尺量取抑菌圈直径，参考表的标准判读结果，按敏感（S）、中介（I）、耐药（R）报
一、实验原理
抗生素浓度越高，抑菌圈越大。在抑菌圈的边缘处，琼脂培养基中所含抑菌
物质的浓度即为该菌悬液中对该种指示菌的最低抑菌浓度（MIC）。抑菌圈直径与药物对测试菌的最低抑菌浓度呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
二、实验材料
培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基菌种：
注意事项
在超净工作台中或酒精灯旁操作平板倒好，一定要平牛津杯立直，才能保证杯内抑菌物质均匀
的向四周扩散牛津杯均匀摆放于培养基上，位置安排适
中，防止出现抑制圈重叠，可在平皿中央摆一个，外周等距离摆5－6个。
思考题
青霉素、头孢菌素类药物的抗菌机制如何？
药敏试验
抗菌药物敏感性试验，简称药敏试验，是指对敏感性不能预测的分离菌株进行试验，测试抗菌药在体外对病原微生物有无抑制作用，以指导选择治疗药物和了解区域内常见病原菌耐药性变迁，有助于经验性治疗选药
大肠杆菌（E.coli) 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus) 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis) 药品：阿莫西林、黄芪多糖、其他：牛津杯、培养皿、酒精棉、酒精灯、涂布器、移液枪、 1mL、200uL 枪头、恒温培养箱、超净工作台、接种环

体外抑菌实验方案

体外抑菌实验方案一、实验目的1.探究不同抑菌剂对特定细菌的抑制效果。

2.优化抑菌剂的配方，提高抑菌效率。

3.为临床应用提供理论依据。

二、实验材料1.实验菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等。

2.抑菌剂：酒精、碘伏、过氧化氢等。

3.实验器材：培养皿、移液器、酒精灯、生物安全柜等。

三、实验方法1.菌株活化：将实验菌株从冻存管中取出，接种至斜面培养基，37℃培养24小时。

2.制备菌液：将活化后的菌株用无菌生理盐水洗涤，调整菌液浓度为10^6CFU/mL。

3.抑菌剂配制：按照实验设计，配制不同浓度和配比的抑菌剂。

4.抑菌实验：在生物安全柜中，将菌液均匀涂布于培养皿，加入不同抑菌剂，置于37℃培养箱培养24小时。

5.观察结果：观察各培养皿中细菌生长情况，记录抑菌效果。

6.数据处理：统计分析各抑菌剂的抑菌效果，计算抑菌率。

四、实验步骤1.活化菌株：从冰箱取出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等菌株，接种至斜面培养基，放入37℃培养箱培养24小时。

2.制备菌液：将活化后的菌株用无菌生理盐水洗涤，调整菌液浓度为10^6CFU/mL。

3.配制抑菌剂：按照实验设计，配制酒精、碘伏、过氧化氢等抑菌剂的不同浓度和配比。

4.抑菌实验：在生物安全柜中，将菌液均匀涂布于培养皿，加入不同抑菌剂，放入37℃培养箱培养24小时。

5.观察结果：观察各培养皿中细菌生长情况，记录抑菌效果。

6.数据处理：统计分析各抑菌剂的抑菌效果，计算抑菌率。

五、实验结果1.不同抑菌剂对金黄色葡萄球菌的抑制效果：酒精浓度为75%时，抑菌效果最佳，抑菌率为99.99%；碘伏浓度为5%时，抑菌率为99.95%。

2.不同抑菌剂对大肠杆菌的抑制效果：过氧化氢浓度为3%时，抑菌效果最佳，抑菌率为99.99%；酒精浓度为75%时，抑菌率为99.90%。

3.不同抑菌剂对白色念珠菌的抑制效果：碘伏浓度为5%时，抑菌效果最佳，抑菌率为99.99%；过氧化氢浓度为3%时，抑菌率为99.95%。

抑菌活性实验方案

八宝景天抑菌活性实验方案1 材料与仪器1.1 材料八宝景天（茎、叶、花），采摘于吉林农业大学校园，去离子水洗净，阴干，经粉碎机粉碎(过40～60 目筛)，所得植物粉用密封袋于遮光处保存备用。

1.2 微生物真菌：黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、黄瓜黑星病菌（Cladosporium cucumerinum）、辣椒炭疽病菌（Colletotrichum nigrum）由吉林省蔬菜花卉科学研究院提供。

番茄叶霉病菌( Fulvia fulva )、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、甜瓜茎腐病菌(Fusarium gramimearum)、水稻立枯病菌（Rhizoctonia solani Kuhn）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、黄瓜菌核病菌(Sclerotinia sclerrotium) 均由吉林农业大学农学院植物病理研究室提供。

1.3 试剂与仪器95%乙醇分析纯国药集团化学试剂有限公司葡萄糖分析纯国药集团化学试剂有限公司琼脂粉生化试剂天津科密欧化学试剂有限公司马铃薯JFSD-100粉碎机上海淀久中药机械制造有限公司JJ200型精密电子天平美国双杰兄弟有限公司常熟双杰测试仪器厂HH-S数显恒温水浴锅江苏省金坛市医疗仪器厂RE-2000旋转蒸发器上海亚荣生化仪器厂SHZ-III型循环水真空泵上海亚荣生化仪器厂TDL-5A低速大容量离心机上海悦丰仪器仪表有限公司生化培养箱SPX-250型上海跃进医疗器械厂ZKF035电热真空干燥箱上海实验仪器厂有限公司KQ5200B型超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司不锈钢手提式灭菌器上海申安医疗器械厂超净工作台上海生物科技有限公司1.4 培养基的制备真菌都用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)马铃薯(去皮) 200g 葡萄糖20g琼脂20g水1000mL pH值自然培养基具体制作方法是：将200g马铃薯去皮，去芽眼，切成小条放入铝锅中，加入1000mL水，煮沸20～30分钟左右至马铃薯软而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补水至1000mL，加入琼脂熔化，再加入糖搅拌均匀，趁热分装于试管或锥形瓶中。

抑菌实验方案

抑菌实验方案抑菌实验方案一、菌种大肠杆菌ATCC25922 金黄色葡萄球菌ATCC6538二、培养基LB培养基：胰蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠10g/L、琼脂15~20g，用10mol/LNaOH调pH，范围7.0~7.4倒平板（平板培养基）1.将培养皿洗净、干燥，使各培养皿盖方向一致，用牛皮纸包好，或放入特制铁罐内，注明皿盖的方向。

高压灭菌或干燥灭菌后备用。

2.取刚灭菌后尚未凝固的培养基置于无菌箱或超净工作台内，先左手持三角瓶,右手反转手掌用中指和无名指拨出棉塞或硅胶赛(或不翻转手掌用小指和手掌拨出棉塞) ,同时将三角瓶转换至右手，而后左手拿平皿,以大拇指和中指将皿盖打开一缝，至瓶口刚好伸入。

三角瓶口经火焰烧灼后，倾入灭菌或溶化、冷却至55~60°C的培养基约15mL(勿使瓶口靠在平皿壁上，以免沾染皿壁)，迅速盖好皿盖，置于桌上轻轻旋转平皿,使培养基均匀分布于整个平皿底部,冷凝后即为平板培养基。

有时凝固后的培养基表面有冷凝水，可将平皿盖打开倒置于37℃温箱，除去冷凝水，否则将影响平板分离培养效果。

为防止冷凝水过多，也可将培养基冷却至45 ~ 50°C再倒平板。

培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。

一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用三、器械培养皿（90mm）、滤纸、三角耙、接种环、试管四、实验步骤（一）、抑菌圈的测定(滤纸片法)1、菌种接种将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌反复转种2次，使菌种新鲜，置30℃恒温培养箱培养1d，备用。

2、菌悬液制备在超净台里将转接后生长良好的菌种试管斜面注入适量无菌水(约5mL)，接种环轻刮菌落，摇晃混匀。

3、涂布在超净台里用枪取0.1ml菌悬液注入平板，放置5min左右后用三角耙涂布均匀，每种菌设置两个重复平板4、贴片在超净台里将平板平均分为6个区，对角设置平行组，同时用无菌水做对照组,硫酸链霉素(10U)作阳性对照。

每两张滤纸片(直径1.1cm或0.6cm)为一贴，用镊子夹着滤纸片在样品中轻轻蘸一下后，取出贴在平板的指定位置，轻摁一下使滤纸片牢固，置(正放)4℃冰箱中放24h。

抑菌试验预习方案

抑菌试验1 定义抑菌试验，用于测定抗菌药物体外抑制细菌生长效力的试验称为抑菌试验抑菌活性的研究实验方案。

实验方法1. 纸片法（抑菌圈法）将测定菌株接种到培养基中，置37度条件下培养6-24小时，取出备用。

再用无菌吸管吸取上述培养液0.1ml，再用三角刮刀将菌液涂匀。

待培养基表面稍干后，用无菌小镊子分别取出所需的药敏纸片均匀地贴在培养基的表面，轻轻压平，各纸片间应有一定距离，并分别做上标记。

将培养皿置37度恒温箱内培养18-24小时后，测量各种药敏纸片抑菌圈直径的大小。

2. 挖孔法（1）在平板上打孔，然后将药液滴入孔内，用经酒精灯灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。

具体方式：用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2，依次划线，自至细菌均匀密布于平皿（将测定菌株接种到培养皿中，置37度条件下培养18-24小时，用灭菌的棉拭子将带将细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。

要求涂布均匀）。

（2）以无菌操作将灭菌的不锈钢小管，（外径4mm，孔径与孔距均为3mm，管的两端要光滑，也可用玻璃管和瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（3）加样时，按不同药液加样，用无菌滴管将样品加至满而不溢为止。

3. 牛津杯法（1）双碟的制备方法：将灭菌培养基溶化后取15ml倒入灭菌平皿内。

吸取待测菌株的菌液1-5ml与100ml冷至45度的培养基混匀，然后分别每一平皿加入5ml。

并均匀摊布在具有底层培养基的平皿内。

（2）待培养基凝固后，在每碟中均匀立放小钢管（及牛津杯）4个，用陶瓦盖覆盖。

（3）将下列实验药液分别加入小钢管中，置37度培养18-24小时，量取抑菌圈大小，判定抗菌药物抑菌作用的强弱。

乳酸菌的抑菌实验1产抑菌活性物质乳酸菌的初筛采用纸片法。

将培养好的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌培养液 OD 600分别调整到 0.17、0.19、0.10，各取 100μL 接种于 LB 固体培养基，涂布均匀，固定1h。

抑菌性能考察实验方案

纳米材料抑菌性能实验方案纳米银和纳米金的抑菌作用是其环境效应表现的一部分。

本研究将对生物合成的银和金纳米颗粒进行详细的抑菌能力性能测试。

本实验拟采用革兰氏阴性菌大肠杆菌（Escherichia coli）和革兰氏阳性菌金色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为模型菌进行抗菌实验。

实验采用通用的扩散法进行测定。

固体培养基组成（或LB培养基）：1L去离子水中加入蛋白胨5g，酵母提取物2g，氯化钠5g，牛肉膏1g，琼脂15g。

抑菌性能考察实验方案（1琼脂纸片扩散法，又称琼脂扩散法）取100µL细菌培养液（104cell/mL）平铺在固体培养基上，取新鲜合成的纳米颗粒50µL滴加在直径为5.5mm的圆形滤纸上，并放入固体培养基表面。

没有加入硝酸银进行纳米银合成的植物提取液作为空白样品同样进行抗菌实验。

样品最开始被放在4°C条件下进行扩散，然后在37°C条件下培养24h。

同时，采用广谱抗菌剂-庆大霉素或链霉素进行阳性实验对照。

根据抑菌圈的大小对抑菌效果进行评价。

图1 琼脂纸片扩散法抑菌性能考察实验方案（1琼脂井化扩散法，又称琼脂打孔扩散法）取1mL新鲜细菌培养液（细菌浓度为1×107 CFU）16-18h细菌培养液（刚过对数增长期）平铺在琼脂培养皿上。

自然干燥5min以后，使用无菌打孔器在琼脂板上开凿直径约5mm的孔，每个培养皿开凿4个孔，分别位于培养皿对称四个角上，如图所示。

然后用移液枪分别向各孔中滴加50µL不同浓度的提取液和生物合成纳米颗粒胶体溶液。

然后，将培养皿在37°C下培养24h。

在实验过程中，采用链霉素或庆大霉素作为阳性对照实验。

经过培养以后，细菌的生长抑制可以通过测定井化抑菌圈尺寸来进行考察。

实验需要平行三组样品。

图2 琼脂井化抑菌实验图3.6. Silver nanoparticle immobilization on cloth and disk diffusion studiesThe cloth immobilized with sterile water containing silver nanoparticles did not show much difference in texture, wherea the cloth immobilized with PVDF containing silver nanoparticles turned slightly rigid. This change in texture is due to PVDF occupying the interface area of the fiber and forming a membrane-like structure upon drying. PVDF was selected based on its hydrophobic property, stability at wider range of temperatures and inertness to many chemicals. Fig. 5 shows the disk diffusion studies at various concentrations of silver nanoparticles. The cloth sprayed with sterile water and PVDF devoid of silver nanoparticles served as controls for respective plates. There was totally no inhibition by the cloth sprayed with only sterile water, whereas cloth sprayed with only PVDF showed mild inhibition of bacterial growth. From the Fig. 6, it was clear that increase in silver nanoparticle concentration increased the inhibition zone area on the plate, which directly represents the increase in toxicity. The cloth immobilized with sterile water containing silver nanoparticles showed larger inhibition zone than cloth immobilized with PVDF. This may be attributed to the free availability of the silver nanoparticles in cloth immobilized with sterile water. In cloth immobilized with PVDF, a coat of the polymer might slightly inhibit the availability of the silver nanoparticles and thereby its toxicity. But the inhibition zone around the cloth immobilized with sterile water containing silver nanoparticles decreased vastly in consecutive cyclesafter washing compared to cloth immobilized with PVDF (Fig. 6). The purpose of using PVDF in the present study is to bind the silver nanoparticles to the cotton cloth, which will decrease the loss of the silver nanoparticles in consecutive washing. Thus as expected the loss of silver nanoparticles was lesser in cloth immobilized with PVDF compared to cloth immobilized with sterile water. In case of the cloth immobilized with sterile water containing silver nanoparticles,Fig. 5. Image of Petri plates showing the growth inhibition of E. coli by (A) cloth immobilized with silver nanoparticles using sterile water and (B) cloth immobilized with silver nanoparticles using PVDF.Fig. 6. Growth inhibition of E. coli in consecutive cycles by (A) cloth immobilized with silver nanoparticles using sterile water and (B) clothimmobilized with silver nanoparticles using PVDF.。

抑菌试验方法

抑菌试验方法一、引言抑菌试验是一种常用的实验方法，用于评估不同物质对微生物生长的影响。

该试验可用于评估抗菌剂的效果、食品、药品和化妆品的微生物安全性，以及环境中抗菌材料的性能等。

本文将介绍抑菌试验的一般步骤和常用方法。

二、试验步骤1. 试验前准备在进行抑菌试验前，首先要准备好所需的试验材料和设备。

包括培养基、试验物质、细菌菌株、培养皿、试管、移液器等。

同时，要保持实验环境的清洁和无菌。

2. 菌种培养选择合适的细菌菌株，将其接种到含有适当培养基的试管中，并在37℃恒温培养箱中培养过夜，使其达到指定的细菌浓度。

3. 制备菌液将过夜培养的菌株转移到新的培养基中，通过菌液稀释法，制备出所需的菌液浓度。

菌液的浓度应根据试验要求进行调整。

4. 试验组装将试验物质分别添加到培养基或培养皿中，使其与菌液充分接触。

同时，设置对照组，用无抑菌物质的培养基或培养皿进行对照。

5. 培养条件将试验组和对照组置于适当的培养条件下，如温度、湿度等。

根据不同的试验要求，可选择不同的培养时间和培养条件。

6. 菌落计数在培养结束后，使用显微镜或肉眼观察试验组和对照组的菌落情况，并进行菌落计数。

菌落计数可通过平板计数法或滴定法进行。

7. 数据分析根据菌落计数结果，对试验组的抑菌效果进行评估。

常用的评估指标包括菌落形成率、抑菌率、最小抑菌浓度等。

三、常用方法1. 纸片扩散法该方法常用于评估固体试样的抑菌效果。

将试验物质涂布于纸片上，然后将纸片放置在含菌液的培养基表面上，通过观察菌落的生长情况来评估抑菌效果。

2. 悬浮液法该方法常用于评估液体试样的抑菌效果。

将试验物质与菌液混合，通过培养一定时间后，观察菌液的浑浊度或使用菌落计数法来评估抑菌效果。

3. 筛选法该方法常用于筛选具有抑菌活性的试验物质。

将试验物质与菌液混合后，通过培养一定时间后，观察菌落情况，筛选出对菌株有明显抑制作用的试验物质。

4. 斑点法该方法常用于评估试验物质对特定细菌菌株的抑菌效果。

抑菌试验

抑菌活性测试
(1) 培养皿的干热灭菌
将培养皿用牛皮纸包好，置于干燥箱中，161℃，1h。

(2)琼脂的配制与高压蒸汽灭菌
取38g琼脂置于1000mL的无菌水中，加热至溶解，将溶解了的培养基分装至三角瓶中，放入高压灭菌锅灭菌（秋冬季121℃，20min，春夏季121℃，30min）
(3)样品溶液的配制
分别称取样品0.0256g，置于10mL的无菌烧杯中，加入DMSO溶解，用10mL 的容量瓶定容，得到2560ug/mL溶液，取2mL加入2mL DMSO，得1280ug/mL 溶液；同法依次取2mL加入2mL DMSO系列倍比稀释，得浓度分别为640、320、160、80、40ug/mL的系列样品溶液。

(4) 含药琼脂平板的制备
将已配比稀释的的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在45～50℃水浴中平衡的琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿。

分别取上述已配比稀释的的不同浓度的样品溶液2mL加入18mL已加热溶解，并在45～50℃水浴中平衡的琼脂中立即混匀，置水平台待凝后得到浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2ug/mL的含药平板。

(5) 接种物的制备和接种
取实验菌种新鲜斜面菌种，适当稀释，与0.5号麦氏比浊管对比，制备菌悬液浓度约为108 CFU/ml,将制备好的菌液接种于含药琼脂表面，接种后至30℃培养16～20h，观察结果。

抑菌活性实验方案

抑菌活性实验方案抑菌活性实验方案薄层层析(TLC)是一种广泛应用于氨基酸、多肽、核苷酸、脂肪类、糖脂和生物碱等多种物质的分离和鉴定的层析方法。

(1) 初始发酵培养基的筛选在250 mL三角瓶装100 mL基础培养，将种子培养基以6%接种量接入各种基础培养基中，细菌37℃160r/min培养1d，放线菌28℃、170 r/min培养5d，测定不同培养基下发酵液对供试病原菌的抑制率，确定最佳基础培养基。

(2) 发酵时间的确定将活化的种子培养基以6%接种量接入筛选出的基础培养基中，细菌37℃160r/min培养1d，放线菌28℃、170 r/min培养不同时间段，测定每个时间段发酵液上清液对供试病原菌的抑制率，确定最佳发酵时间。

(3) 发酵初始pH值的初步确定将优化后碳氮源的基础培养基的pH分别调成3、5、7、9、11，然后再按6 %接种种子培养基，28 ℃、170 r/min培养一定时间后，测定不同pH培养基发酵液无菌滤液对供试病原菌的抑制率，确定初始pH范围。

(4) 发酵温度的初步确定以优化后碳氮源的基础培养基为发酵培养基，按6 %接种种子培养基，分别在20 ℃、24 ℃、28 ℃、32 ℃、36 ℃，170 r/min培养一定时间后，测定不同温度下发酵所得发酵液对供试病原菌的抑制率，确定发酵温度范围。

(5) 发酵接种量的初步确定以优化后碳氮源的基础培养基为发酵培养基，分别按2 %、4 %、6 %、8 %、10 % 接种种子培养基，在28 ℃、170 r/min培养一定时间后，测定不同接种量对发酵液抑菌活性的影响，确定发酵接种量范围。

(6) 发酵转速的初步确定以优化后碳氮源的基础培养基为发酵培养基，按6 %接种种子培养基，28 ℃、以100r/min、130 r/min、160 r/min、190 r/min、210 r/min培养一定时间后，测定不同发酵转速对发酵液抑菌活性的影响。

(7) 发酵装液量的初步确定以优化后碳氮源的基础培养基为发酵培养基，在250 mL锥形瓶中装入50 mL、75mL、100 mL、125 mL、150 mL，按6 %接种种子培养基，28 ℃、170 r/min 培养一定时间后，测定不同发酵装液量对发酵液抑菌活性的影响。

抑菌实验方案

抑菌实验方案一、菌种大肠杆菌ATCC25922 金黄色葡萄球菌ATCC6538二、培养基LB培养基：胰蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠10g/L、琼脂15~20g，用10mol/LNaOH调pH，范围7.0~7.4倒平板（平板培养基）1.将培养皿洗净、干燥，使各培养皿盖方向一致，用牛皮纸包好，或放入特制铁罐内，注明皿盖的方向。

高压灭菌或干燥灭菌后备用。

有时凝固后的培养基表面有冷凝水，可将平皿盖打开倒置于37℃温箱，除去冷凝水，否则将影响平板分离培养效果。

为防止冷凝水过多，也可将培养基冷却至45 ~ 50°C再倒平板。

培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。

2、菌悬液制备在超净台里将转接后生长良好的菌种试管斜面注入适量无菌水(约5mL)，接种环轻刮菌落，摇晃混匀。

抑菌活性实验方案

抑菌实验方案

实验试剂：石膏样小孢子菌、PBS、0.9%生理盐水、RPMI-1640培养基
实验器材：电子分析天平、研钵、移液枪、离心管、96孔板
一.菌悬液的配制
1.无菌条件下，取3支石膏样小孢子菌试管斜面，加入无菌生理盐水适量（量少一点），用接种环轻轻挑取培养基表面的丝状培养物，倒入无菌的研钵中研磨。

2.从研钵中吸取菌液，放入离心管中，移液枪吸打混匀，15s内完成。

用血细胞计数板计数，将菌悬液的浓度配制成1×104-5×104CFU/mL。

二.凝集素的配制
1.准确称取1mg凝集素粉末，加入100ul的PBS配制成10mg/mL母液。

采用96孔板，用RPMI-1640培养基（pH为6.9~7.1）进行稀释母液稀释100倍(取7ul的母液加入693ul的培养基)，每排1~10孔依次加入90uL的培养基和90uL的100ug/ml凝集素。

2.在1~10孔中加入20ul菌悬液，第11孔中加入180ul无菌不含药物培养基和20ul菌悬液，作为生长对照。

第12仅加入200ul无菌不含药物培养基做阴性对照。

3.每个样品设置三个重复。

三.培养和抑菌结果判定
1。

将接种菌悬液的药敏板置于28℃恒温培养箱中培养，7d后取出，用酶标仪在450nm波长下测定其浑浊度，与生长对照组相比第一个浑浊度下降50%的样品浓度为该凝集素对菌株的MIC值。

RPMI．1640培养液：取RPMI-1640 10．49，用约800ml去离子蒸馏水溶解，加入MOPS 34．539，葡萄糖209，混匀后用Imol／LNaOH调pH为7．0(25℃)定容至1000ml。

用0．22l，tm滤
器滤过灭菌后4℃保存待用。

抑菌实验步骤

抑菌实验：待测菌金色葡萄球菌；枯草芽孢杆菌；大肠杆菌；绿脓杆菌菌种活化：菌种，进行活化，可以划线，也可以涂布，划线：直接用接种环在酒精灯上烧过之后，等之冷却，蘸取进行划线！涂布：用枪头吸取100ul的菌液涂布既可！本实验采用涂布法1.金色葡萄球菌最佳生长条件(过夜培养一般为12h)2. 枯草芽孢杆菌培养条件（过夜培养）3.绿脓杆菌最佳培养条件（14-17h）培养基MH（A）培养基( Mueller-Hinton Agar)成分：牛肉浸粉（牛肉膏） 5g；酪蛋白水解物 17.5g；淀粉 1.5g；琼脂 12.5gMH液体培养基配制方法：称取本品36.5克，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟备用。

牛肉膏蛋白胨固体培养基（LB培养基）：牛肉膏10 g，蛋白胨10 g，琼脂15g，NaCl 5 g，双蒸水1000mL，pH 7.2-7.5，121℃灭菌20min。

牛肉膏蛋白胨液体培养基：不加琼脂，其他同牛肉膏蛋白胨固体培养基。

菌悬液的配制将冰箱保存的大肠杆菌移接到牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于37℃恒温培养箱中培养24 h ，用接种环挑取少许菌体与装有无菌生理盐水的试管中，震荡均匀，制成菌悬液。

具体为用接种环挑取一环（本实验是吸取100uL 菌悬液）于5 mL 的无菌生理盐水中，每10倍稀释一次地逐级稀释，取（10-8、10-9、10-10 、10-11）的浓度100μL 做涂布实验，每个梯度平行三组，加100μL 药品溶剂（二甲基亚砜）的空白对照3个平板，完全不加任何样品即只是LB 培养基的完全空白对照1个平板，调整菌悬液浓度，用平板菌落法测定其菌液浓度，使其含菌体数为103 cfu/mL ，即为供试菌悬液。

抑菌作用初步筛选将灭菌固体培养基加热至熔化，待冷却至50℃时，每20ml 培养基倒入无菌培养皿中。

待平板自然晾干后，分别移取0.1ml 待测药品，0.1 mL 供试菌悬液，均匀涂布于加药平板上，每个处理3次重复。

抑菌试验方案

害虫方面，我们将到野外筛选采集。
2、病原菌的纯种分离
2.1培养基的制备
根据实验需要制备培养病原菌所需培养基，主要为牛肉膏蛋白胨培养基（用来培养细菌）、PDA培养基（用来培养真菌）。
2.2病原菌稀释平板计数2. Nhomakorabea.1.制备病原菌悬液
将带有土壤的丹皮烂根放入锥形瓶中，加入9ml无菌水中，振荡20min，让菌充分分散，静置5min.
2.2.4取样
用3支1ml无菌吸管分别精确地吸取10-4、10-5、10-6的稀释菌液0．2ml，对号放入编好号的无菌培养皿中。
2.2.5倒平板
于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中，倒入溶化后冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基约10—15ml，置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，倒置于37℃温室中培养。
在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取经稀释10倍的土壤悬液-环在平板上划线(图Ⅴ-3)。划线的方法很多，但无论哪种方法划线，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使形成单个菌落。常用的划线方法有下列二种：
⑴用接种环以无菌操作挑取病原菌悬液一环，先在平板培养基的一边作第一次平行划线3-4条，再转动培养皿约70°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线(图Ⅴ-4，A)。划线完毕后，盖上皿盖，倒置于温室培养。
一、实验材料的制备
（一）病虫害的制备
1、病虫害的采集
本实验所用材料分病原菌及害虫两类。
其中病原菌分别从宣木瓜和丹皮两种地道药材植物上采集。宣木瓜的病原菌本实验室已有，并且提取了单一菌种。丹皮方面需要我们查阅资料以及请教师姐，把握最佳采集时间和采集类型，然后我们进行实地考察以及集采。采集丹皮根部，连同根部泥土带回。

抗生素抑菌实验报告

抗生素抑菌实验报告抗生素抑菌实验报告引言：抗生素是一类能够抑制或杀死细菌生长的药物，广泛应用于医疗领域。

然而，近年来，由于滥用和不当使用抗生素，细菌对抗生素的抵抗性逐渐增强，导致了严重的公共卫生问题。

为了更好地了解抗生素的抑菌效果，本实验旨在研究不同类型的抗生素对细菌生长的影响。

实验设计：1. 实验材料：- 细菌培养基：含有营养物质的培养基，提供细菌生长所需的营养。

- 不同类型的抗生素：如青霉素、头孢菌素等。

- 培养皿：用于培养细菌的容器。

- 细菌培养物：含有特定细菌的培养物，用于实验。

- 培养箱：用于控制实验环境的温度和湿度。

2. 实验步骤：- 步骤一：准备细菌培养基和培养皿，将细菌培养基均匀倒入培养皿中。

- 步骤二：在培养皿上均匀涂抹细菌培养物，使细菌均匀分布。

- 步骤三：在培养皿上分别滴加不同类型的抗生素，形成不同的实验组。

- 步骤四：将培养皿放入预先调节好的培养箱中，控制温度和湿度。

- 步骤五：观察培养皿中细菌的生长情况，记录实验结果。

实验结果与分析：经过一段时间的培养，观察到不同实验组中细菌的生长情况有所不同。

下面将对实验结果进行分析：1. 对照组：对照组中没有加入任何抗生素，细菌在培养基上生长繁殖。

这是因为培养基提供了细菌所需的营养物质，使其能够正常生长。

2. 青霉素组：青霉素是一种广谱抗生素，对多种细菌具有抑制作用。

观察到在青霉素组中，细菌的生长明显受到抑制，数量较对照组明显减少。

这是因为青霉素能够破坏细菌细胞壁的合成，导致细菌无法正常生长和繁殖。

3. 头孢菌素组：头孢菌素是一种β-内酰胺类抗生素，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有抑制作用。

观察到在头孢菌素组中，细菌的生长也受到明显抑制，数量明显减少。

这是因为头孢菌素能够抑制细菌的细胞壁合成，导致细菌无法正常生长和繁殖。

结论：通过本实验的结果可以得出以下结论：1. 抗生素对细菌的生长具有明显的抑制作用。

2. 不同类型的抗生素对细菌的抑制效果有所差异，这与抗生素的作用机制和细菌的耐药性有关。

体外抑菌实验报告

为了评估不同抗生素药物的抗菌能力，本实验通过体外抑菌实验，观察并记录抗生素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌等常见细菌的抑菌效果，以期为临床合理用药提供参考。

二、实验材料1. 菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌等。

2. 药物：头孢克洛、氨苄西林、阿莫西林、庆大霉素、红霉素等。

3. 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、M-H肉汤培养基。

4. 实验器材：培养皿、移液器、无菌试管、锥形瓶、酒精灯、高压蒸汽灭菌器等。

三、实验方法1. 菌株培养：将菌株接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，37℃培养24小时。

2. 药物制备：将抗生素药物溶解于M-H肉汤培养基中，制成不同浓度的药物溶液。

3. 抑菌实验：将培养好的菌株接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，制成平板。

将不同浓度的药物溶液滴加于平板上，37℃培养24小时，观察抑菌圈直径。

4. 数据记录：记录不同浓度药物溶液的抑菌圈直径，计算抑菌率。

四、实验结果1. 头孢克洛对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌的抑菌效果较好，抑菌圈直径分别为18mm、15mm、13mm。

2. 氨苄西林对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果较好，对铜绿假单胞菌的抑菌效果较差，抑菌圈直径分别为12mm、10mm、5mm。

3. 阿莫西林对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果较好，对铜绿假单胞菌的抑菌效果较差，抑菌圈直径分别为10mm、8mm、4mm。

4. 庆大霉素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌的抑菌效果较好，抑菌圈直径分别为20mm、18mm、16mm。

5. 红霉素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果较好，对铜绿假单胞菌的抑菌效果较差，抑菌圈直径分别为14mm、12mm、6mm。

1. 头孢克洛、庆大霉素等抗生素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌具有较强的抑菌效果，可作为临床治疗此类细菌感染的首选药物。

2. 氨苄西林、阿莫西林等抗生素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果较好，但对铜绿假单胞菌的抑菌效果较差，临床应用时需注意。