核受体免疫组织化学染色时抗原修复方法的选择_张富军
几种抗原修复方法研究
几种抗原修复方法研究
王晋芬;田相义;丛娟;殷卫东;张景文;龚方纯
【期刊名称】《诊断病理学杂志》
【年(卷),期】1997(4)1
【摘要】由于常规福尔马林固定和石蜡包理过程造成的抗原封闭与结构改变，限制了一些抗体在免疫组织化学中的应用。
为了恢复组织的抗原性，提高免疫组织化学的检测阳性率，我们应用高压锅，微波炉和胰蛋白酶分别对石蜡切片进行处理。
结果显示，一些抗体过去只能用于冰冻切片，经前处理后可用于石蜡切片，一些抗体的敏感性增强，经高压锅处理的免疫染色重复性较微波炉处理得好，个别抗体适用于酶消化。
总之，在免疫组织化学染色过程中应根据抗原抗体的特性选用适当的前处理方法。
【总页数】2页(P34-35)
【关键词】抗原修复;抗体;免疫组化
【作者】王晋芬;田相义;丛娟;殷卫东;张景文;龚方纯
【作者单位】山西省肿瘤医院;山西省卫生厅
【正文语种】中文
【中图分类】R392－33
【相关文献】
1.免疫组织化学染色中抗原修复方法的比较研究 [J], 杜宇;赵莹;李寒松
2.鼻咽癌组织潜伏膜蛋白1不同抗原修复方法的比较研究 [J], 权莉;张锦波;李华仁
3.几种修复P53蛋白抗原免疫组化方法的比较 [J], 高亚兵
4.不同热修复抗原方法与胰腺导管腺癌分子标记物CD105免疫组化方法的研究[J], 廖德贵;周春辉;缪秋玲
5.真空负压、微波辐射和电炉三种不同处理方法对抗原修复的比较研究 [J], 蔡俊杰;邱红明
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免疫组化中抗原修复方法及修复液的比较
免疫组化中抗原修复方法及修复液的比较邹亮【摘要】目的本实验通过比较几种常用的抗原修复技术在免疫组化中的效果,寻求一种简洁、方便、实用的抗原修复方法.方法分别选取10种细胞核及细胞浆或膜标记的抗体,对理论上阳性的组织进行标记,对每种抗体均分别采用不修复,PH6.0柠檬酸煮沸,PH6.0柠檬酸高温高压修复,PH9.0EDTA煮沸,PH9.0EDTA高温高压修复.结果本实验的20种抗体均标记理论上为阳性的组织,不修复的有16种抗体阴性,水煮热修复与高压热修复的修复效果并无明显差别.抗原修复液中高PH值(9.0)时的染色结果明显好于相同修复方式的低PH值(6.0).结论免疫组化质量与是否进行抗原有关,但与抗原修复方法无关;抗原修复液PH值影响免疫组化质量,掌握抗体最佳的修复液能提高免疫组化结果的阳性率、染色强度,稳定性及准确性.【期刊名称】《健康研究》【年(卷),期】2013(033)003【总页数】3页(P176-178)【关键词】免疫组化;抗原修复;PH【作者】邹亮【作者单位】浙江大学医学院附属第一医院,病理科,浙江,杭州,310003【正文语种】中文【中图分类】R365免疫组织化学技术具有特异性、灵敏性、简洁性等优点,还能够将形态和功能结合,定性、定位和定量相结合,因此,在半个多世纪以来免疫组织化学技术广泛应用于病理诊断,尤其是在肿瘤诊断中不可缺少。
其原理是用已知抗体去检测未知抗原,而抗原在组织固定过程中因蛋白质的氨基与醛基交联成羧基,使部分蛋白抗原决定族被封闭,因此,在免疫组化染色前,必须进行抗原修复,打开其封闭状态使其充分暴露,才能与抗体充分结合,故在免疫组织化学技术中抗原的暴露修复是至关重要的[1]。
自1991年加热抗原修复报道后,免疫组化工作者对抗原修复方法及修复液进行了不断的探索,并对其效果进行比较研究,归纳起来影响抗原修复的因素主要有两种,一是抗原修复的温度,二是抗原修复的PH值。
本文对常用的两种修复液及最常用的两种修复方式进行比较分析。
核受体免疫组织化学染色时抗原修复方法的选择_张富军
第31卷第2期2010年3月西安交通大学学报(医学版)J our nal of Xi πan J iaot ong U niversity (Medical Scie nces )V ol.31No.2Mar.2010◇技术方法◇核受体免疫组织化学染色时抗原修复方法的选择张富军,任 娟,王飞苗,吕社民,李冬民(西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系,陕西西安 710061)摘要:目的 探讨不同抗原修复法对DA.1U 大鼠肝组织内核受体检测结果的影响。
方法 应用微波修复法、高压修复法、酶修复法和高压加酶修复法对DA.1U 大鼠肝组织切片进行修复,然后进行免疫组化染色。
结果 DA.1U 大鼠肝组织内核受体L XR 2α、L XR 2β、PPAR 2γ和FXR 经高压抗原修复后,染色阳性强度较其他修复方法明显增强,而且定位较佳。
结论 在核受体免疫组化染色中高压抗原修复法染色效果优于其他抗原修复法。
关键词:核受体;免疫组织化学;抗原修复中图分类号:R329233 文献标志码:A 文章编号:167128259(2010)022*******Selection of antigen retrieval methods in immunohistochemicalstaining of nuclear receptorsZHAN G Fu 2jun ,REN J uan ,WAN G Fei 2miao ,L ΒShe 2min ,L I Dong 2min(Depart ment of Genetics and Molecular Biology ,Medical School ofXi πan Jiaotong University ,Xi πan 710061,China )ABSTRACT :Objective To explore t he eff ects of diff ere nt met hods of antige n ret rieval on t he results ofimmunohist ochemical staining of nuclear recep t ors.Methods A ntige ns were ret rieved by using microwave oven ,aut oclave ,e nzyme and aut oclave plus e nzyme ,respectively ,in liver sections f rom DA.1U rats ,f ollowed by immunohist ochemical staining.Results Af ter a ntige n ret rieval wit h aut oclave ,t he p ositive staining inte nsity ofnuclear recep t ors L XR 2α,L XR 2β,PPAR 2γa nd F XR in t he liver sections f rom DA.1U rats was enhanced obviously ,a nd t he location of nuclear recep t ors was better by using t his met hod t han t he ot hers.Conclusion In t heimmunohist ochemical staining of nuclear recep t ors ,using aut oclave t o ret rieve a ntige ns is t he best met hod.KE Y WOR DS :nuclear recep t or ;immunohist oche mical staining ;a ntige n ret rieval收稿日期:2009202224 修回日期:2009203229基金项目:国家自然科学基金(No.30400249,30571725,30630058);陕西省国际合作项目(No.20072kw 206);陕西省自然科学基金项目(No.2004C256)Supported by t he National Natural Science Foundation of China (No.30400249,30571725,and 30630058),Interna 2tional Cooperation Foundation of Shaanxi Province (No.20072kw 206)and t he Natural Science Foundation of Shaanxi Province (No.2004C256).通讯作者:李冬民.E 2mail :lidongm @ 作者简介:张富军(19632),男(汉族),实验师.E 2mail :zfj @ 核受体在生物体内广泛分布,与配体结合后活化,调控基因的表达,在机体生长发育、新陈代谢等生理过程中发挥重要作用。
抗原修复方法及注意事项
柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复法(强烈推荐)1.适用范围：适合于大量中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复，其效果优于微波修复法和直接煮沸修复法,使得免疫组化结果更加可靠2.仪器设备：市售不锈钢家用压力锅，大小尺寸可根据需要而定(内径18cm为好)；1000-1500W电炉一台；不锈钢或耐高温塑料切片架。
3.所需试剂：0.01M柠檬酸型缓冲液，pH=6.0±0.14.操作步骤：(1)常规组织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后，浸泡于蒸馏水中待用。
(2)取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液(800-1500ml)于压力锅中，大火加热直至沸腾；将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中。
盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热至喷汽，从喷汽开始计时，1-2分钟后，压力锅离开热源，冷却至室温(稍冷后，可在自来水笼头下加速冷却)，取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS(pH=7.2-7.4)冲洗两次，每次3分钟(2×3')。
(3)按有关试剂盒的操作步骤执行。
5.注意事项：(1)加热时间长短的控制很重要，从组织切片放入缓冲液到高压锅离开火源的总时间控制在5-8分钟为好，时间过长可能会使染色背景加深。
(2)必须使用不锈钢或耐高温塑料切片架，不能使用铜架，以防缓冲液pH值增高而导致掉片。
(3)高压锅离开火源后必须等缓冲液冷切后，才能把切片取出。
(4)为防止组织脱落，玻片必须经清洁处理后，涂覆Poly-L-Lysine((5)缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。
EDTA 抗原热修复法1. 适用范围：适用于部分中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复。
2. 仪器设备：电磁炉、不锈钢锅和耐高温塑料染色架。
3. 所需试剂：EDTA抗原修复液，pH9 .04. 操作步骤：(1)抗原修复液的配制：根据所需工作液的量，取迈新公司产品MVS-0098适量，按1:50 的比例稀释。
一种新的抗原修复方法的应用
一种新的抗原修复方法的应用张富军;侯卫坤;韩燕;宁启兰;王淑红;吕社民【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2010(026)003【摘要】@@ 在用多聚甲醛固定组织时,常在组织中的氨基酸残基的分子间或分子内形成醛键,从而使得一些抗原决定簇封闭起来,在免疫组织化学过程中需要进行抗原修复,使被封闭的抗原决定簇重新暴露而容易被检测到[1-3].因此,抗原修复是免疫组化中非常重要的步骤.常用的抗原修复方法有高压修复、微波修复、胰酶修复、胃蛋白酶修复、透明质酸酶修复、蛋白酶K修复以及复合酶修复等.一般认为修复能力由强到弱依次是:高温高压法>高温煮沸法>微波法>超声法>酶消化法[4].对于某些特定的抗原,加热修复法并不是最理想的修复方法[5].尿素作为一种蛋白质的变性剂,可以打断分子间的化学键,从而暴露抗原决定簇.【总页数】2页(P375-376)【作者】张富军;侯卫坤;韩燕;宁启兰;王淑红;吕社民【作者单位】西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系,西安,710061;西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系,西安,710061;西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系,西安,710061;西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系,西安,710061;西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系,西安,710061;西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系,西安,710061【正文语种】中文【中图分类】R36-33【相关文献】1.在OpenGL中一种新的拾取方法及其应用--基于对象缓冲区的选择拾取方法 [J], 王亚平;余柯;罗堃2.一种新的油层定量分析方法——贴近度分析方法——及其应用探讨 [J], 鲍云杰;刘方;陈玉斌3.一种新的决策分析方法——VFT的原理、方法与应用 [J], 程静;于越华;张合勇4.一种新的剩余油研究方法在南泥湾油田新窑区的应用 [J], 李新5.一种新的应用方法──可拓方法 [J], 陈薇;苏时光因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
免疫组化抗原修复方法
免疫组化抗原修复方法嘿，咱今儿就来聊聊免疫组化抗原修复方法。
这可真是个相当重要的事儿呢！你想想看啊，免疫组化就像是一场探寻细胞秘密的奇妙之旅。
而抗原修复呢，那就是打开这神秘大门的关键钥匙呀！就好比你要进一个宝库，得先找到那把对的钥匙才行。
目前常见的抗原修复方法有热修复和酶修复。
先说热修复吧，这就像是给细胞来了一场“热浴”。
通过加热，让那些隐藏起来的抗原能重新现身，是不是很神奇？就好像原本躲起来的小精灵，被这股热气给召唤出来了。
热修复又分高压热修复和微波热修复呢。
高压热修复就像是给抗原来了个强力冲击，一下子把它们给震出来了；微波热修复呢，则像是温柔地烘烤，慢慢地让抗原现身。
酶修复呢，就像是请了一群小助手来帮忙。
这些酶会去找到那些被藏起来的抗原，然后把它们解放出来。
不同的酶有着不同的本领，就跟我们人一样，各有所长嘛。
那在实际操作中该怎么选呢？这可得好好琢磨琢磨。
要是你的样本比较特殊，那可得小心选择，不然选错了方法，那不就像走岔了路一样，找不到正确的方向啦？而且在进行抗原修复的时候，可得注意各种细节哦。
温度啦、时间啦，都得把握好，不然就可能达不到最好的效果。
这就跟做饭似的，火候和时间掌握不好，做出来的菜味道可就差远啦。
还有啊，在做抗原修复之前，一定要把样本处理好呀。
这就像是给房子打地基，地基不牢，房子可就不稳啦。
处理样本的时候要细心再细心，可别马马虎虎的。
你说，这免疫组化抗原修复方法是不是很有意思？它就像是一个魔法，能让我们看到细胞里那些隐藏的秘密。
咱可得好好研究研究，把这个魔法运用得炉火纯青呀！这样才能在免疫组化的世界里畅游无阻，发现更多的奥秘呢！所以啊，一定要重视抗原修复方法，可别小瞧了它哟！这可是关乎我们能不能顺利探索细胞世界的重要一步呢！。
免疫组织化学及HE染色实验步骤
免疫组织化学及HE染色实验步骤免疫组织化学（immunohistochemistry，简称IHC）是一种用于检测组织切片中特定蛋白质的方法，其原理是通过特异性抗体识别目标蛋白质并将其可视化。
本文将介绍IHC实验的基本步骤和HE染色实验的步骤。
IHC实验步骤：1.组织切片制备：从取材到固定、包埋和切片，保证组织样本的质量和完整性。
2.抗原修复：将组织切片放入含有钠胼胝土缓冲液或其它抗原修复液中进行抗原修复。
可以选择使用高温或酶解等方法。
3.阻断非特异性结合：将组织切片浸泡在阻断液中，如BSA、牛血清蛋白等，以防止抗体与非特异性的蛋白质结合。
4.一抗孵育：将含有一抗的抗体溶液滴在组织切片上，孵育一段时间，使一抗与目标蛋白质发生特异性结合。
5.二抗孵育：选择与一抗宿主不同的二抗标记物，如荧光素、过氧化物酶等，将含有二抗的溶液滴在组织切片上进行孵育。
6.吸附剂清洗：将组织切片用洗涤缓冲液洗去未与标记物结合的二抗。
7.标记物检测：根据所选择的标记物，可以进行荧光显微镜观察、酶反应等，将目标蛋白质可视化。
8.盖片封装：将组织切片用适当的缓冲液封装至玻璃盖片上。
HE染色实验步骤：1.组织切片制备：从取材到固定、包埋和切片，保证组织样本的质量和完整性。
2.脱蜡：将组织切片放入甲醇中脱去石蜡包埋。
3. 染剂处理：将组织切片依次浸泡在嗜铬酸钾溶液中，漂洗后浸泡在碱性染剂中，如伊红（Eosin）染料。
4. 酸性染剂处理：将组织切片浸泡在酸性染剂中，如苏木红（Hematoxylin）染料。
5.脱染：将组织切片用酒精和醋酸溶液进行脱染。
6.脱水：将组织切片依次浸泡在酒精梯度中，脱去水分。
7.透明化：将组织切片逐渐浸泡在透明剂中，如苯酚乙醇、二甲苯等，使组织切片透明。
8.盖片封装：将组织切片用适当的透明剂封装至玻璃盖片上。
以上是免疫组织化学和HE染色实验的基本步骤。
通过这些步骤，可以标记和可视化组织切片中的特定蛋白质，进而获得研究和诊断所需的信息。
免疫组化中抗原修复的方法(一)
免疫组化中抗原修复的方法(一)免疫组化中抗原修复1. 引言在免疫组化实验中，抗原修复是一项重要的步骤。
由于组织样本中的抗原可能会被固定、石化或脱变，导致免疫染色的效果不佳。
因此，进行抗原修复可以提高抗体与抗原的结合率，增强信号的强度和特异性。
2. 抗原修复的方法热原修复法热原修复法是最常用的抗原修复方法之一。
具体步骤如下：•将切片置于含有缓冲液的载玻片上；•将载玻片放置在加热板上，设定适当的温度和时间，通常为95°C，15-20分钟；•等待切片冷却至室温，继续下一步的处理。
酶解原修复法酶解原修复法适用于某些情况下，特别是当形状石化的抗原需要修复时。
具体步骤如下：•将切片置于含有酶解液的载玻片上；•将载玻片放置在适当的温度和湿度条件下进行酶解，通常为37°C，30分钟；•冷却切片至室温，然后进行下一步处理。
酸性原修复法酸性原修复法主要用于修复石蜡包埋组织标本中的抗原。
具体步骤如下：•将切片浸泡在含有酸性溶液的容器中，通常使用的酸性溶液；•在合适的温度条件下进行酸解，通常为95°C，30分钟；•将切片冷却至室温，并进行下一步处理。
高压原修复法高压原修复法是相对较新的抗原修复方法，它利用高压力来提高修复效果。
具体步骤如下：•将切片置于含有修复液的载玻片上；•将载玻片放置在高压原修复设备中，设定适当的压力和时间；•冷却切片至室温，并进行后续处理。
3. 结论抗原修复在免疫组化实验中起到至关重要的作用，可以修复被固定、石化或脱变的抗原，提高抗体与抗原的结合率，增强信号的强度和特异性。
常用的抗原修复方法包括热原修复法、酶解原修复法、酸性原修复法和高压原修复法。
选择合适的方法进行抗原修复，可以提高免疫组化实验的准确性和可靠性。
以上就是本文对免疫组化中抗原修复的相关方法进行的详细介绍。
希望对读者在免疫组化实验中的抗原修复环节有所帮助。
4. 热原修复法的原理和优缺点原理热原修复法是利用高温对抗原进行恢复性变性处理，使其重回天然的结构状态。
免疫组化中抗原修复的方法
免疫组化中抗原修复的方法免疫组化中抗原修复什么是抗原修复抗原修复是一种在免疫组化实验中常用的技术，用于恢复被固定和处理的细胞或组织中的抗原活性。
在某些情况下，固定和处理的过程会导致抗原的失活或变性，因此抗原修复是十分重要的步骤，以确保准确的免疫组化结果。
抗原修复的常用方法1. 热处理法热处理法是一种常用的抗原修复方法，通过高温引起细胞或组织中的抗原变性。
热处理一般在微波炉或水浴中进行，温度和时间要根据具体的样品和实验要求进行调整。
2. 酶切法酶切法是通过使用特定的酶来消化固定和处理过程中引起抗原失活的组织部分。
常用的酶包括蛋白酶K、胰蛋白酶等，酶的选择应该根据具体的抗原性质和实验目的进行。
3. pH诱导法pH诱导法通过调整溶液的pH值来恢复抗原的活性。
一般来说，较高的pH值有利于抗原的恢复，但具体的pH值还需根据具体实验进行调整。
4. 盐溶液法盐溶液法是通过使用高盐浓度的溶液来解离和去除组织中的蛋白质交联，从而恢复抗原的活性。
盐溶液的具体浓度和种类应该根据样品的特性和实验目的进行选择。
5. 高压法高压法是一种通过应用高压力来打破细胞和组织中的蛋白质交联，从而恢复抗原活性的方法。
高压法一般需要在特定的设备中进行，压力和时间需要根据样品和实验要求进行调整。
如何选择合适的抗原修复方法在选择合适的抗原修复方法时，需要考虑以下几个因素：•样品类型：不同类型的样品可能对抗原修复方法的要求不同，例如活体细胞和组织与固定的组织具有不同的特性。
•抗原性质：不同的抗原具有不同的特性，对抗原修复方法的要求也不同，如某些蛋白质抗原可能对热处理敏感，而其他抗原可能对酶切法更为适用。
•实验目的：实验目的也是选择抗原修复方法时需要考虑的因素之一，如是否需要保留细胞或组织的形态结构等。
在实际操作中，为了确保准确的实验结果，一般会进行不同的抗原修复方法的对比实验，以选择最适合的方法。
总结抗原修复是免疫组化实验中不可或缺的一步，通过恢复抗原的活性，可以得到准确可靠的实验结果。
抗原修复方法及注意事项
抗原修复方法及注意事项一、抗原修复的概念与原理抗原修复，简单来说，就是通过特定的处理方法，使在组织处理过程中被封闭或破坏的抗原决定簇重新暴露出来，从而提高抗原抗体的结合效率，增强免疫反应的信号强度。
在组织标本的制作过程中，如固定、脱水、包埋等步骤，可能会导致蛋白质发生交联、变性等变化，使得抗原决定簇被掩盖或破坏。
抗原修复的原理就是通过打破这些交联、逆转蛋白质的变性，恢复抗原的天然构象和活性。
二、常见的抗原修复方法（一）热诱导抗原修复（HIER）这是目前应用最为广泛的抗原修复方法之一。
主要包括以下两种方式：1、微波修复将切片放入盛有修复液的容器中，然后置于微波炉内进行加热。
微波修复的优点是加热均匀、速度快，但需要注意控制好加热时间和功率，以免造成组织过度损伤。
2、高压修复将切片和修复液放入高压锅中加热。
这种方法能够更有效地打破蛋白质交联，但操作相对复杂，需要严格控制压力和时间。
（二）酶消化法常用的酶包括蛋白酶 K、胃蛋白酶等。
酶消化法通过酶的作用分解蛋白质交联，暴露抗原决定簇。
但酶的作用具有一定的特异性和局限性，需要根据抗原的性质和组织类型选择合适的酶，并精确控制酶的浓度和作用时间。
（三）非加热抗原修复方法如使用某些化学试剂，如尿素、盐酸胍等，来破坏蛋白质的交联。
但这些方法的应用相对较少，效果也不如热诱导抗原修复方法显著。
三、抗原修复方法的选择选择合适的抗原修复方法需要考虑多个因素，包括抗原的性质、组织类型、抗体的特性等。
一般来说，如果抗体的说明书中推荐了特定的抗原修复方法，应优先遵循。
对于未知的抗原，通常可以先尝试热诱导抗原修复方法，如果效果不佳，再考虑酶消化法或其他方法。
在实际操作中，还可以通过预实验来比较不同抗原修复方法的效果，以确定最佳的修复方案。
预实验可以选择一组已知阳性的组织切片，分别采用不同的抗原修复方法进行处理，然后进行免疫染色，观察染色结果的强度和特异性。
四、抗原修复液的选择常用的抗原修复液包括柠檬酸盐缓冲液（pH 60）、EDTA 缓冲液（pH 80 或 90）等。
免疫组化抗原修复方法
免疫组化抗原修复方法免疫组化（Immunohistochemistry, IHC）是一种用于检测组织或细胞中抗原的方法，通过使用特异性抗体和染色剂来定位和定量目标抗原。
然而，在实际的免疫组化实验中，可能会出现抗原修复不完整的情况，导致结果不准确甚至失真。
因此，免疫组化抗原修复方法的研究和应用显得尤为重要。
目前，常见的免疫组化抗原修复方法包括热诱导抗原修复（heat-induced epitope retrieval, HIER）和酶诱导抗原修复（enzyme-induced epitope retrieval, EIER）。
热诱导抗原修复是通过高温和缓冲液来还原和暴露被固定、包埋或变性的抗原，使其恢复到可以与抗体结合的状态。
而酶诱导抗原修复则是利用蛋白酶来降解和去除与抗原结合的蛋白质，从而使抗原重新暴露出来。
这两种方法各有优势，可以根据实验需求选择合适的修复方法。
除了常规的抗原修复方法外，近年来还出现了一些新的免疫组化抗原修复方法，如微波诱导抗原修复（microwave-induced epitope retrieval, MIER）、超声波诱导抗原修复（ultrasonic-induced epitope retrieval, UIER）等。
这些新方法在修复效果和操作便捷性上都有所突破，为免疫组化实验提供了更多的选择。
在选择免疫组化抗原修复方法时，需要考虑样本的类型、固定方式、抗原的性质等因素。
例如，对于经过长时间固定的组织样本，可能需要选择更强效的修复方法来恢复抗原的活性；而对于一些蛋白质结合紧密的抗原，则需要选择更温和的修复方法，以免造成抗原的损伤或丢失。
此外，在进行免疫组化抗原修复时，还需要注意修复液的配制和处理，以及修复条件的控制。
合理的修复液配制可以提高修复效果，而适当的修复条件控制可以避免对组织结构和抗体活性的影响。
综上所述，免疫组化抗原修复方法在免疫组化实验中起着至关重要的作用。
不同的抗原修复方法在免疫组化染色中的应用
不同的抗原修复方法在免疫组化染色中的应用郭丽;祁荣;吴鹏【摘要】目的:选择最适宜的抗原修复法.方法:在免疫组织化学染色中,选用鼠抗人5种单克隆抗体,用不同的抗原修复法,对不同染毒剂量、正常对照暴露大脑皮质及海马,石蜡组织切片,依阳性颗粒表达的情况,确定适宜的抗原修复.结果:抗原修复的方法直接影响到组织中抗原的暴露,高压加热法能把被掩盖或交联变性的抗原暴露或修复,使免疫组化的结果更准确可靠,特别是核阳性组织,适用于高压加热法；电炉煮沸法,阳性结果不佳；酶消化抗原修复法,与高压锅加热抗原修复法的阳性结果无区别.结论:核阳性表达的抗体应选用高压锅抗原修复法,推测核阳性表达的抗体也适用于酶消化抗原修复法.【期刊名称】《沈阳医学院学报》【年(卷),期】2012(014)003【总页数】2页(P152-153)【关键词】免疫组化染色;抗原修复;核阳性表达【作者】郭丽;祁荣;吴鹏【作者单位】沈阳医学院科学实验中心,辽宁沈阳110034;沈阳医学院科学实验中心,辽宁沈阳110034;沈阳医学院科学实验中心,辽宁沈阳110034【正文语种】中文【中图分类】R392-33目前，免疫组化染色技术已成为病理学诊断的重要手段。
几年来抗原修复广泛应用于免疫组化检测，抗原修复使抗原决定簇充分暴露是免疫组化染色成功的关键。
在热修复法中，压力锅加热法又较微波炉加热法更有效，酶消化法修复的抗原免疫组化的染色效果不如热修复法[1] 。
有少数抗原酶消化后染色的结果优于热修复法[2]。
电炉煮沸抗原修复法也被许多人所采用。
为了选择适宜的抗原修复法，我们先后采用压力锅抗原修复、电炉煮沸抗原修复、复合酶抗原修复法，对五种抗体的免疫组化染色结果进行筛选，选择最适宜的抗原修复法，以获得最佳的免疫组化的阳性结果。
1 材料与方法1.1 实验动物与染毒 Wistar大鼠120只(沈阳药科大学实验动物中心提供)体质量230～250 g，按雌∶雄为2∶1于每晚6时合笼，次晨7～9时阴道涂片检查精子，查到精子定为妊娠0 d。
免疫组化染色中不同抗原修复方法的应用探讨
免疫组化染色中不同抗原修复方法的应用探讨魏素姣【期刊名称】《国际医药卫生导报》【年(卷),期】2018(024)013【摘要】Objective To discuss the application effect of different antigen retrieval methods with autoclave and microwave oven in immunohistochemical staining.Methods 12 cases of esophageal cancer tissue specimens in our hospital from August 2016 to June 2017 were collected for the study,four different antigens (CD4,CD8,Ki67,IL17) located in the cell membrane,nucleus,cytoplasm were selected to do staining,two antigen retrieval methods with autoclave and microwave oven were performed.The immunohistochemical staining results of the two antigen retrieval methods were analyzed.Results The antibody positive rate of CD4 of the antigen retrieval method with autoclave was as high as 100％,which was higher than that of the antigen retrieval method with microwave oven (45.5％) (P＜0.05);there were no statistically significant differences in the antibody positive rates of CD8,Ki67,and IL17 (P＞0.05).Conclusion In the case of non-shedding tissue,the antigen retrieval method with autoclave has the advantages such as simple operation,light background coloring,clear positioning,stable result;in the case of no significant difference in the positive rate of retrieval cases,the microwave antigen retrieval method is proposed.%目的主要探讨高压锅与微波炉抗原修复方式在免疫组化染色中的应用效果.方法以本院2016年8月至2017年6月收集的12例食管癌组织标本作研究对象,选用定位于细胞膜、细胞核、细胞浆的CD4、CD8、Ki67、IL17四种不同抗原做染色标记,并应用高压锅与微波炉两种抗原修复方式,对两种抗原修复法应用免疫组化染色结果进行分析.结果在高压锅抗原修复方式下,CD4抗体阻性率高达100％,而在微波炉抗原修复方式下,CD4抗体阳性率仅达45.5％,两组相较而言,高压锅抗原修复法CD4抗体阳性率较高(P＜0.05);CD8、Ki67、IL17抗体阳性率对比差异无统计学意义(P＞0.05).结论在组织不脱片情况下,选用高压锅抗原修复方式,操作简单,背景着色浅,定位清晰,结果稳定;在修复方式阳性率比较无明显差异情况下,建议选用微波抗原修复方式.【总页数】4页(P2000-2003)【作者】魏素姣【作者单位】471003 郑州大学附属洛阳中心医院病理科【正文语种】中文【相关文献】1.不同抗原修复方法在免疫组化染色的应用比较 [J], 余杏娟;王博;许静2.不同抗原修复方法对层粘连蛋白免疫组化染色结果的影响 [J], 刘鲜艳;郝斌威;马爱玲;何进喜;陈娟3.不同的抗原修复方法在Ⅳ型胶原免疫组化染色中的应用 [J], 陈余朋;张声;王行富;李国平;王鹏程;王密4.不同的抗原修复方法在免疫组化染色中的应用 [J], 郭丽;祁荣;吴鹏5.不同的抗原修复方法在免疫组化染色中的应用 [J], 鞠学萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
免疫组化染色前抗原修复方法的合理选择
免疫组化染色前抗原修复方法的合理选择
王晓秋
【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》
【年(卷),期】2006(22)3
【摘要】由于组织在福尔马林或其他固定液中固定，经常会引起蛋白质空间结构的改变而导致抗原决定簇被封闭，阻碍了抗原和抗体的结合，随着免疫组化技术在临床病理诊断中不断深入和广泛应用，抗原修复技术在免疫组化操作过程中成为了一个极其重要的环节。
我们针对不同的抗原，采取不同的修复方法，取得较理想的染色效果。
常用的抗原修复技术方式有微波加热修方法、
【总页数】2页(P367-368)
【作者】王晓秋
【作者单位】安徽省立医院病理科,合肥,230001
【正文语种】中文
【中图分类】R446.8
【相关文献】
1.免疫组化染色中不同抗原修复方法的应用探讨 [J], 魏素姣
2.3种抗原修复方法对免疫组化染色效果的影响 [J], 郑秋桦;李钰湘;柯野;张海明
3.不同抗原修复方法对层粘连蛋白免疫组化染色结果的影响 [J], 刘鲜艳;郝斌威;马爱玲;何进喜;陈娟
4.不同的抗原修复方法在免疫组化染色中的应用 [J], 鞠学萍
5.SEMA3A、SEMA3B蛋白免疫组化染色中抗原修复方法的优化 [J], 闫红娟;马晓平;李曼;张楠;郁晓丹;徐江
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
免疫组化常见抗原修复方法
免疫组化常见抗原修复方法大多数甲醛固定的组织在开始染色之前都需要先修复抗原，这是由于在固定过程中产生了亚甲基桥使蛋白之间交联屏蔽了抗原位点。
两种抗原修复方法为热修复法（称之为热诱导抗原表位修复或HIER）和酶解法。
一、热修复法1. 热修复缓冲溶液下面是三种HIER较为常用的缓冲溶液，对于一个特定的抗体，在没有其他研究者建议的情况下，要通过实验确定选用哪种修复缓冲液。
1) 枸橼酸钠缓冲液(10 mM Sodium Citrate，0.05% 吐温- 20, pH 6.0)2) 1 mM EDTA, 调至pH 8.03) Tris/EDTA 缓冲液(10mM Tris, 1 mM EDTA 溶液， 0.05% 吐温-20, pH 9.0)2. 热修复方法a) 高压蒸汽法玻片要置于金属架上1)材料及试剂· 家用不锈钢高压锅· 加热板· 玻片架放置容器（容量大约400-500ml）· 抗原修复缓冲液（如Tris/EDTA pH 9.0，枸橼酸钠pH 6.0）2)方法1. 将合适的抗原修复缓冲液加入高压锅内，然后将锅置于加热板并开至最大功率，此时不要把盖子盖紧。
在等待煮沸过程中，进行脱蜡至水。
2.煮沸后，将玻片从自来水中取出放入高压锅内。
小心热溶液- 使用镊子。
依照说明书加上加压阀。
3.高压锅达到最大压力后，维持3分钟。
4.3分钟过后，关掉加热板，将高压锅取下放置。
5.打开高压锅阀门，冷水冷却锅身。
压力降下后，打开锅盖，冷水冷却10分钟。
6.继续染色。
b) 微波法1)材料和试剂· 家用(850W)或科研专用微波炉· 微波炉专用玻片放置架及容器（容量大约400-500ml）或染色缸· 抗原修复缓冲液（如Tris/EDTA pH 9.0，枸橼酸钠溶液pH 6.0，等等）2)方法1.将切片脱蜡至水。
2.向微波炉专用容器中加入合适的修复缓冲液。
免疫组化步骤中抗原修复的原因以及抗原修复的方法
免疫组化步骤中抗原修复的原因以及抗原修复的方法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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免疫组化中抗原修复的方法
免疫组化中抗原修复的方法介绍免疫组化是一种重要的实验技术，用于检测细胞或组织中的特定抗原。
然而，在某些情况下，抗原可能会失去其天然的组织学特性，从而导致免疫组化结果的不准确性。
为了解决这个问题，可以使用抗原修复的方法。
本文将详细探讨免疫组化中抗原修复的方法。
抗原修复的目的抗原修复的目的是恢复组织中的抗原在免疫组化实验中的表达，以提高免疫组化结果的准确性。
抗原修复的方法可以解决以下问题： 1. 组织固定时可能导致抗原的变性或掩盖。
2. 组织切片时可能导致抗原的丢失。
3. 某些抗体需要与特定抗原结合才能发挥作用。
常用的抗原修复方法煮沸法煮沸法是一种简单而常用的抗原修复方法。
具体步骤如下： 1. 将组织切片置于含有缓冲盐水的容器中。
2. 将容器放入煮沸器中，保持沸腾10-30分钟。
3. 取出容器，将切片冷却至室温。
4. 切片清洗，以去除残余盐水。
酸性解偶联剂法酸性解偶联剂法可以用于修复因羟烯酸基团损伤而导致的抗原修复问题。
具体步骤如下： 1. 将组织切片置于含有酸性解偶联剂的缓冲溶液中。
2. 在室温下孵育切片1-2小时。
3. 清洗切片，以去除残余缓冲溶液。
高温蛋白酶法高温蛋白酶法可用于修复由于过度固定而导致的抗原修复问题。
具体步骤如下： 1. 将组织切片置于含有高温蛋白酶的缓冲溶液中。
2. 在适当的温度下孵育切片一段时间，并定期观察抗原修复的程度。
3. 停止孵育，冷却切片至室温。
4. 清洗切片，以去除残余缓冲溶液。
抗原修复方法的选择选择适当的抗原修复方法取决于多个因素： 1. 组织的类型和性质。
2. 使用的抗体种类。
3. 实验的目的和要求。
结论抗原修复是免疫组化中的重要步骤，可以提高实验结果的准确性。
本文介绍了煮沸法、酸性解偶联剂法和高温蛋白酶法三种常用的抗原修复方法。
选择适当的抗原修复方法对于免疫组化实验的成功至关重要。
在实际应用中，应根据组织的类型和性质、使用的抗体种类以及实验的目的和要求来选择合适的抗原修复方法。
石蜡切片免疫组化中抗原修复方法的选择和注意事项
石蜡切片免疫组化中抗原修复方法的选择和注意事项免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）是一种通过抗原抗体特异性反应来检测并定位蛋白的方法，目前广泛应用于组织病理学诊断。
其中，抗原修复（Antigen repair，AR）是免疫组化过程中不可忽略的关键步骤。
原因是组织经福尔马林等固定液固定和石蜡包埋后，抗原决定簇与核酸易发生交联，引起蛋白质空间结构的改变，导致抗原决定簇被封闭，使抗原与抗体的结合点减少，从而令抗原的阳性检测率及着色强度相对减弱。
这种交联在高温加热或是蛋白酶水解的作用下会发生可逆反应，恢复蛋白的原有构象，这一过程就是抗原修复。
一AR常用的方法是否进行AR、采用什么方法进行AR 要按抗体说明书的要求决定，不同的抗体选择适合该抗体的AR方法，有的要求高温修复，有的要求酶消化。
➤微波法方法：切片于抗原修复液中经微波炉内微波辐射5-20min。
它是利用微波每秒以24亿5千万次的快速运动产生瞬间热。
微波辐射可以使各物质分子作极性运动，促进形成的醛键断裂开。
分子间运动所产生的瞬间热可导致甲醛固定后的蛋白的变性。
该法的特点是：产热迅速，容易操作，但也容易引起抗原修复液的沸腾，使得修复液温度不稳定。
➤高温高压法方法：切片于抗原修复液中在高压锅中加热至沸腾，盖上压力阀至喷汽后持续1-5min。
该法利用高压和高热来促进醛键的断裂，当加热至开锅，加上高压阀后，汽体喷出，此时的温度在100℃-120℃之间，而高压也易使蛋白变性。
➤真空负压法方法：切片于抗原修复液中在预先调至95℃的真空负压干燥箱中真空负压处理5-10min。
这是一种操作简单，效果特佳，温度恒定，能一次性处理大量切片的方法。
该法特点是分子在失重的情况下四处飘游，可以增加各分子间的碰撞机会，而且恒定的温度能保证使甲醛固定的蛋白发生变性又不会使抗原修复液达到沸点。
➤酶修复法方法：0.10%胰蛋白酶或0.40%胃蛋白酶在室温或37℃消化切片15-30min。
免疫组化中抗原修复方法及注意事项-2022
免疫组化中抗原修复方法及注意事项问：为什么要进行抗原修复：答：福尔马林固定时，组织中的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成了醛键，使得不少抗原决定簇被封闭。
同时，由于甲醛的聚合作用，使蛋白质分子间相互交联形成大分子网络，也导致了抗原决定簇被掩盖，这就使得相当部分的抗原不能与抗体很好是进行反应。
因此，抗原修复也是影响免疫组化染色结果的基本因素。
抗原修复中柠檬酸缓冲液的配制方法：A液：枸橼酸，C6H8O7.H2O，21.01g 加水定容至1000ml；B液：枸橼酸钠，C6H5Na3O7.2H2O, 29.41g 加水定容至1000ml;使用时：A液9 ml, B液41 ml，加水至500ml，即可配成工作液。
抗原修复(Antigen retrieval ，AR)技术，是指石蜡、冰冻、火棉胶、塑料切片免疫组织化学（IHC）前用胰蛋白酶、尿素、表面活性剂、微波缓冲液和金属盐等，使被掩盖的抗原决定簇或变性的抗原重新暴露或抗原性得到一定程度的恢复过程。
抗原修复能最大程度地恢复在制片等过程中损失的抗原性，使原来认为不能在石蜡切片上进行IHC的许多抗体获得了良好的染色结果，成为一种有效的补救措施。
本文的目的是概述AR-HIC的发展、应用和标准化。
一、AR技术加热AR技术微波加热方法. 在传统标准方法,经脱蜡、脱水和用3%H2O2阻断内源性过氧(化)物酶，石蜡切片经蒸馏水冲洗，放置在塑料Coplin缸中。
加入AR液，如蒸馏水、缓冲液、金属盐液、尿素等，盖上并置家用微波炉加热5或10分钟（注意防止切片干躁）。
有时在加热5分钟后，间隔1分钟，再加热5分钟（在第一个5分钟后检测液体高度）。
加热后，从微波炉取出塑料Coplin缸，冷却15分钟。
片子经蒸馏水冲洗二次后在PBS液中浸5分钟，才进行IHC 染色。
为了保持一致的加热条件，必须设定靠近微波炉中心相同的位置及同一编号的Coplin 缸，按照不同的抗体设定不同的加热时间，尽可能的建立标准的加热条件。
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第31卷第2期2010年3月西安交通大学学报(医学版)J our nal of Xi πan J iaot ong U niversity (Medical Scie nces )V ol.31No.2Mar.2010◇技术方法◇核受体免疫组织化学染色时抗原修复方法的选择张富军,任 娟,王飞苗,吕社民,李冬民(西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系,陕西西安 710061)摘要:目的 探讨不同抗原修复法对DA.1U 大鼠肝组织内核受体检测结果的影响。
方法 应用微波修复法、高压修复法、酶修复法和高压加酶修复法对DA.1U 大鼠肝组织切片进行修复,然后进行免疫组化染色。
结果 DA.1U 大鼠肝组织内核受体L XR 2α、L XR 2β、PPAR 2γ和FXR 经高压抗原修复后,染色阳性强度较其他修复方法明显增强,而且定位较佳。
结论 在核受体免疫组化染色中高压抗原修复法染色效果优于其他抗原修复法。
关键词:核受体;免疫组织化学;抗原修复中图分类号:R329233 文献标志码:A 文章编号:167128259(2010)022*******Selection of antigen retrieval methods in immunohistochemicalstaining of nuclear receptorsZHAN G Fu 2jun ,REN J uan ,WAN G Fei 2miao ,L ΒShe 2min ,L I Dong 2min(Depart ment of Genetics and Molecular Biology ,Medical School ofXi πan Jiaotong University ,Xi πan 710061,China )ABSTRACT :Objective To explore t he eff ects of diff ere nt met hods of antige n ret rieval on t he results ofimmunohist ochemical staining of nuclear recep t ors.Methods A ntige ns were ret rieved by using microwave oven ,aut oclave ,e nzyme and aut oclave plus e nzyme ,respectively ,in liver sections f rom DA.1U rats ,f ollowed by immunohist ochemical staining.Results Af ter a ntige n ret rieval wit h aut oclave ,t he p ositive staining inte nsity ofnuclear recep t ors L XR 2α,L XR 2β,PPAR 2γa nd F XR in t he liver sections f rom DA.1U rats was enhanced obviously ,a nd t he location of nuclear recep t ors was better by using t his met hod t han t he ot hers.Conclusion In t heimmunohist ochemical staining of nuclear recep t ors ,using aut oclave t o ret rieve a ntige ns is t he best met hod.KE Y WOR DS :nuclear recep t or ;immunohist oche mical staining ;a ntige n ret rieval收稿日期:2009202224 修回日期:2009203229基金项目:国家自然科学基金(No.30400249,30571725,30630058);陕西省国际合作项目(No.20072kw 206);陕西省自然科学基金项目(No.2004C256)Supported by t he National Natural Science Foundation of China (No.30400249,30571725,and 30630058),Interna 2tional Cooperation Foundation of Shaanxi Province (No.20072kw 206)and t he Natural Science Foundation of Shaanxi Province (No.2004C256).通讯作者:李冬民.E 2mail :lidongm @ 作者简介:张富军(19632),男(汉族),实验师.E 2mail :zfj @ 核受体在生物体内广泛分布,与配体结合后活化,调控基因的表达,在机体生长发育、新陈代谢等生理过程中发挥重要作用。
核受体L XR 2α、L XR 2β、PPAR 2γ和FXR 在糖、脂代谢调控中起重要的作用,参与2型糖尿病的发生发展。
免疫组织化学染色是根据抗原与抗体特异性结合的原理,用标记的特异抗体对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量研究。
甲醛溶液固定导致许多抗原决定簇被掩盖,不能与抗体很好结合。
核受体位于核内,镜下观察染色结果时,若隐若现,抗原表达不均匀。
为了解决该问题,使抗原决定簇能很好的暴露出来,我们采取了微波修复法、高压热修复法和酶修复法等。
抗原修复方法对DA.1U 大鼠肝组织切片进行修复;比较分析不同抗原修复法对DA.1U 大鼠肝组织内核受体免疫组化染色结果的影响。
1 材料与方法1.1 仪器与试剂 Olymp us DP71图像分析仪。
L XR 2α、L XR 2β、PPAR 2γ和FXR 抗体购自Abcam 公司;免疫组化(SP 法)试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。
1.2 组织材料 病理切片来自DA.1U 大鼠糖尿病模型肝组织,经40g/L 多聚甲醛固定,石蜡包埋,连续切片,5μm 厚,每个蜡块各切5片。
1.3 抗原修复 组织切片常规脱蜡至水,3%(体积分数)H 2O 2灭活内源性过氧化物酶,0.02mol/L2期张富军,任 娟,王飞苗,等.核受体免疫组织化学染色时抗原修复方法的选择PBS 冲洗后抗原修复。
1.3.1 微波修复法 将切片插入塑料切片架,放置于盛有150mL 0.01mol/L 柠檬酸盐缓冲液(p H 6.0)的容器中,置微波炉内加热1min 40s ,使缓冲液温度保持于82℃以上。
取出切片架,室温放置3min ,然后将切片架置于凉水中冷却15min 。
1.3.2 高压修复法 将切片插入金属架,放置于盛有400mL 0.01mol/L 柠檬酸盐缓冲液(p H 6.0)的烧杯中,将烧杯放入高压锅内,盖锅、压阀。
待煮沸喷气后,计时2～3min ,然后将压力锅端离电炉,自然冷却20min 后取出切片。
1.3.3 酶修复法 将复合消化液滴加于切片组织上并完全覆盖,将切片放入湿盒内,37℃温箱中消化10min 。
1.3.4 高压加酶修复法 按上述方法高压修复后取出切片,蒸馏水冲洗,PBS 洗2min ×3次后,将复合消化酶滴加于切片组织上并完全覆盖,将切片放入湿盒内,37℃温箱中消化3min 。
1.4 免疫组织化学染色 经上述步骤处理后的切片均用PBS 冲洗3次,各5min ;滴加正常动物血清封闭液,室温放置20min ,甩去多余液体;每张切片滴加Ⅰ抗30μL ,4℃过夜,次日37℃复温45min ,PBS 冲洗2min ×3次;每张切片滴加生物素标记Ⅱ抗30μL ,37℃20min ,PBS 冲洗5min ×3次;滴加链酶亲和素2过氧化物酶复合物,37℃20min ,PBS 冲洗5min ×3次;DAB 2H 2O 2显色,在显微镜下控制染色程度,自来水冲洗10min ;苏木素复染。
以PBS 替代Ⅰ抗作为阴性对照。
2 结 果核受体L XR 2α、L XR 2β、PPAR 2γ和FXR 均表达于核内,以核内出现棕黄色或棕色颗粒为阳性。
对4种核受体抗原采用4种抗原修复方法,以PPAR 2γ为例说明(图1):①阴性对照,未见特异性免疫染色,肝细胞核均被苏木素染为蓝色;②不修复,可见肝细胞核均为蓝色,未见棕色颗粒;③微波修复,在少数肝细胞质中出现棕色颗粒,核仍为蓝色,定位不准确;④酶修复,采用复合消化液修复肝组织后,细胞核未被染色;⑤高压修复,该法修复肝组织切片后,染色强度明显强于其他修复法,而且背景清晰;⑥高压加酶修复,通过该法修复后,肝组织染色强度强,但是组织碎裂,且背景深。
L XR 2β免疫组化染色结果见图2。
图1 不同抗原修复方法对核受体PPAR 2γ免疫组化染色结果的影响Fig.1Effect of different antigen retrieval methods on immunohistochemical staining of nuclear receptorPPAR 2γ(SP ,×400)A :阴性对照;B :不修复;C :微波修复;D :酶修复;E :高压修复;F :高压加酶修复。
352 西安交通大学学报(医学版)第31卷图2 高压修复法对核受体L XR2β免疫组化染色结果的影响Fig.2Effect of antigen retrieval by autoclave on immuno2 histochemical staining of nuclear receptor L XR2β(SP,×400) A:不修复;B:高压修复。
3 讨 论甲醛固定时,蛋白质的自由氨基与醛基形成羧甲基,或蛋白质氨基酸残基在分子内或分子间形成醛键,使得蛋白质抗原决定簇部分被封闭,无法表达出来,影响免疫组化的结果[1]。
抗原决定簇是否充分暴露,是决定免疫组化结果的关键因素。
为了更好地暴露抗原,目前世界公认的方法就是进行抗原修复。
抗原修复方法主要包括热修复和酶修复。
高温抗原修复方法机理复杂,高压可使交联断裂或折叠的肽链解开,从而暴露抗原决定簇[2];微波场内离子或极性分子直接碰撞,使扭曲、折叠的异常结构恢复正常[3]。
热修复法比较稳定,因高压修复法避免了外界环境对温度的影响,在染色强度和重复性方面优于微波修复法[4]。
酶修复法则是通过溶解抗原表面的变性蛋白使之暴露,但是酶消化时间因组织不同而异,不易控制,结果不稳定。