核受体免疫组织化学染色时抗原修复方法的选择_张富军

第31卷第2期2010年3月西安交通大学学报(医学版)

J our nal of Xi πan J iaot ong U niversity (Medical Scie nces )V ol.31No.2Mar.2010

◇技术方法◇

核受体免疫组织化学染色时抗原修复方法的选择

张富军,任　娟,王飞苗,吕社民,李冬民

(西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系,陕西西安　710061)

摘要:目的　探讨不同抗原修复法对DA.1U 大鼠肝组织内核受体检测结果的影响。方法　应用微波修复法、高压修复法、酶修复法和高压加酶修复法对DA.1U 大鼠肝组织切片进行修复,然后进行免疫组化染色。结果　DA.1U 大鼠肝组织内核受体L XR 2α、L XR 2β、PPAR 2γ和FXR 经高压抗原修复后,染色阳性强度较其他修复方法明显增强,而且定位较佳。结论　在核受体免疫组化染色中高压抗原修复法染色效果优于其他抗原修复法。关键词:核受体;免疫组织化学;抗原修复

中图分类号:R329233 文献标志码:A 文章编号:167128259(2010)022*******

Selection of antigen retrieval methods in immunohistochemical

staining of nuclear receptors

ZHAN G Fu 2jun ,REN J uan ,WAN G Fei 2miao ,L ΒShe 2min ,L I Dong 2min

(Depart ment of Genetics and Molecular Biology ,Medical School of

Xi πan Jiaotong University ,Xi πan 710061,China )

ABSTRACT :Objective To explore t he eff ects of diff ere nt met hods of antige n ret rieval on t he results of

immunohist ochemical staining of nuclear recep t ors.

Methods A ntige ns were ret rieved by using microwave oven ,

aut oclave ,e nzyme and aut oclave plus e nzyme ,respectively ,in liver sections f rom DA.1U rats ,f ollowed by immunohist ochemical staining.

Results Af ter a ntige n ret rieval wit h aut oclave ,t he p ositive staining inte nsity of

nuclear recep t ors L XR 2

α,L XR 2β,PPAR 2γa nd F XR in t he liver sections f rom DA.1U rats was enhanced obviously ,a nd t he location of nuclear recep t ors was better by using t his met hod t han t he ot hers.

Conclusion In t he

immunohist ochemical staining of nuclear recep t ors ,using aut oclave t o ret rieve a ntige ns is t he best met hod.

KE Y WOR DS :nuclear recep t or ;immunohist oche mical staining ;a ntige n ret rieval

收稿日期:2009202224 修回日期:2009203229

基金项目:国家自然科学基金(No.30400249,30571725,30630058);

陕西省国际合作项目(No.20072kw 206);陕西省自然科学基金项目(No.2004C256)

Supported by t he National Natural Science Foundation of China (No.30400249,30571725,and 30630058),Interna 2tional Cooperation Foundation of Shaanxi Province (No.20072kw 206)and t he Natural Science Foundation of Shaanxi Province (No.2004C256).

通讯作者:李冬民.E 2mail :lidongm @ 作者简介:张富军(19632),男(汉族),实验师.

E 2mail :zfj @

核受体在生物体内广泛分布,与配体结合后活化,调控基因的表达,在机体生长发育、新陈代谢等生

理过程中发挥重要作用。核受体L XR 2α、L XR 2

β、PPAR 2γ和FXR 在糖、脂代谢调控中起重要的作用,参与2型糖尿病的发生发展。

免疫组织化学染色是根据抗原与抗体特异性结合的原理,用标记的特异抗体对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量研究。甲醛溶液固定导致许多抗原决定簇被掩盖,不能与抗体很好结合。核受体位于核

内,镜下观察染色结果时,若隐若现,抗原表达不均匀。为了解决该问题,使抗原决定簇能很好的暴露出来,我们采取了微波修复法、高压热修复法和酶修复法等。抗原修复方法对DA.1U 大鼠肝组织切片进行修复;比较分析不同抗原修复法对DA.1U 大鼠肝组织内核受体免疫组化染色结果的影响。1　材料与方法

1.1　仪器与试剂　Olymp us DP71图像分析仪。

L XR 2α、L XR 2β、PPAR 2γ和FXR 抗体购自Abcam 公司;免疫组化(SP 法)试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.2　组织材料　病理切片来自DA.1U 大鼠糖尿病

模型肝组织,经40g/L 多聚甲醛固定,石蜡包埋,连续切片,5μm 厚,每个蜡块各切5片。

1.3　抗原修复　组织切片常规脱蜡至水,3%(体积

分数)H 2O 2灭活内源性过氧化物酶,0.02mol/L