巯基还原剂(55mM in D-PBS)
荧光染料巯基
荧光染料巯基引言荧光染料是一类具有特殊荧光性质的化学物质，可以吸收特定波长的光并发射出较长波长的荧光。
巯基是一种含有硫原子的官能团，具有很强的亲硫性质。
本文将介绍荧光染料巯基的特性、应用领域以及合成方法。
特性荧光染料巯基具有以下特性：1.荧光性：巯基染料能够吸收紫外光并发射出可见光，具有较高的荧光量子产率和较长的荧光寿命。
2.良好的溶解性：巯基染料通常具有良好的溶解性，可溶于有机溶剂和一些极性溶剂。
3.可调性：通过调整巯基结构和取代基，可以改变巯基染料的荧光波长、荧光强度和稳定性。
应用领域巯基染料在许多领域中得到广泛应用，如：1.生物荧光成像：巯基染料可以用作生物标记物，用于细胞和组织的荧光成像，如细胞膜标记、细胞器标记和蛋白质标记等。
2.生物传感器：巯基染料可以被用作荧光探针，用于检测生物分子的存在和浓度变化，如DNA、RNA和蛋白质等。
3.光电子器件：巯基染料可以作为有机光电子器件中的荧光层，用于有机发光二极管（OLED）、有机太阳能电池和有机激光器等。
4.化学分析：巯基染料可以用于化学分析中的荧光检测，如药物分析、环境监测和食品安全等。
合成方法巯基染料的合成方法多种多样，常见的合成方法包括：1.缩合反应：通过巯基化合物与芳香醛或酮类化合物进行缩合反应，生成巯基染料。
该方法具有反应条件温和、反应效率高的优点。
2.环化反应：通过巯基化合物与合适的环化试剂进行环化反应，生成巯基染料。
该方法适用于含有活泼氢原子的巯基化合物。
3.取代反应：通过巯基化合物与合适的取代试剂进行取代反应，生成巯基染料。
该方法适用于含有活泼氢原子的巯基化合物。
4.偶联反应：通过巯基化合物与合适的偶联试剂进行偶联反应，生成巯基染料。
该方法适用于含有活泼氢原子的巯基化合物。
结论荧光染料巯基是一类具有特殊荧光性质的化学物质，具有良好的溶解性和可调性。
巯基染料在生物荧光成像、生物传感器、光电子器件和化学分析等领域有着广泛的应用。
巯基染料的合成方法多种多样，常见的方法包括缩合反应、环化反应、取代反应和偶联反应。
2023年药学类之药学(师)模考模拟试题(全优)
2023年药学类之药学（师）模考模拟试题(全优)单选题（共50题）1、肠外营养液混合顺序中正确的是A.电解质加入氨基酸溶液中B.微量元素加入葡萄糖溶液中C.磷酸盐加入氨基酸溶液中D.电解质加入葡萄糖溶液中E.微量元素加入脂肪乳剂中【答案】 A2、生殖技术引起的社会伦理问题有( )A.生殖技术可以用于优生B.生殖技术可以治疗、弥补不育，有利于婚姻家庭C.生殖技术可以有利于计划生育D.生殖技术破坏自然法则【答案】 D3、左旋多巴抗帕金森病的机制是A.补充脑中多巴胺B.直接激动多巴胺受体C.抑制外周多巴脱羧酶D.中枢M受体阻断作用E.促使多巴胺释放【答案】 A4、中药饮片库房中除湿最简捷的方法是用A.氯化钠B.熟石灰C.硫酸钙D.生石灰E.氯化镁【答案】 D5、下列关于药品储存的叙述，错误的是（）。
A.药品常按药品的剂型采取同类集中存放的方法保管B.仓储药品按其自然属性、养护措施及消防方法的一致性划分为若干个类别分类存放C.根据仓库保管场所的建筑、设备等条件，将库区划分为若干个保管区，分区储存一定种类的药品D.仓储药品库区划分为：普通库，阴凉库，冷冻库E.将存放地点划分为若干个货区，每个货区又划分为若干货位，并按顺序编号【答案】 D6、有关药品的作用和合理应用，不正确的是A.同一种药物相同的剂量应用于不同个体，可能因个体差异产生的作用不一定相同B.药物作用于人体可能具有性别差异C.老年人的用药量应比成人的用药量大D.肝肾功能受损的患者应用表现出来的效应可能与正常患者不同E.小儿用药剂量的大小与体重有关【答案】 C7、制定给药方案时，应首先明确A.药物不良反应B.目标血药浓度范围C.药物半衰期D.合适的用药时机，强调早治疗E.治疗成本【答案】 B8、女性，65岁，诊断为高血压病2级，很高危组，Ⅲ度房室传导阻滞，心力衰竭Ⅱ度，2型糖尿病，查体：血压165／95mmHg，心率100次／分，面部潮红，辅助检查：钾离子：3.3mmol／L，血尿酸升高，微量白蛋白尿，则该患者最适宜选用的降压药物为A.氢氯噻嗪B.贝那普利C.普萘洛尔D.硝苯地平E.维拉帕米【答案】 B9、男性患者，59岁，诊断为消化性溃疡病，医生为其开具了抗菌药物，该患者应用抗菌药的目的是A.保护胃黏膜B.抗幽门螺杆菌C.减轻溃疡病的症状D.抑制胃酸分泌E.清除肠道寄生菌【答案】 B10、影响药物制剂降解的环境因素（）。
常用蛋白还原剂和变性剂
常用蛋白还原剂1．DTT中文名称为二硫苏糖醇（Dithiothreitol，简称为DTT），是苏糖醇的C-1及C-4位羟基置换成巯基的化合物。
在生化反应中用做还原剂，保护蛋白质或酶中的巯基不致氧化而失活。
也常用于还原蛋白质分子中的二硫键等。
DTT是一种小分子有机还原剂，化学式为C4H10O2S2。
其还原状态下为线性分子，被氧化后变为包含二硫键的六元环状结构。
二硫苏糖醇的名字衍生自苏糖（一种四碳单糖）。
DTT的异构体为二硫赤糖醇（DTE），即DTT的C3-差向异构体。
DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。
但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不可及）的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性（高温加热或加入变性剂，如6M 盐酸胍、8M 尿素或1% SDS）。
反之，根据DTT存在情况下，二硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。
2.β-巯基乙醇英文名称：β-Mercaptoethanol，化学式：HOCH2CH2SH，分子量：78.13，是一种具有特殊臭味的无色透明液体，易燃、易溶于水和醇、醚等多种有机溶剂。
β-巯基乙醇(又称为2-巯基乙醇、1-硫代乙二醇、2-羟基乙硫醇、β-硫醇代乙醇）是一种有机化合物，其化学式为HOCH2CH2SH，英文通用缩写为ME或β-ME。
它兼具乙二醇（HOCH2CH2OH）和乙二硫醇（HSCH2CH2SH）的官能团，为挥发性液体，具有较强烈的刺激性气味。
β-ME通常用于二硫键的还原，可以作为生物学实验中的抗氧化剂。
它被广泛使用的原因是它的羟基使它能够溶解于水中，并且降低它的挥发性。
由于具有较低的蒸汽压，它的难闻的情况比起恶臭的硫醇要好得多。
2-巯基乙醇可以打开蛋白质中存在的二硫键：cysS-Scys+2HOCH2CH2SH→2cysSH+ HOCH2CH2S-SCH2CH2OH，二硫键被打开后可以使蛋白质的四级或三级结构被破坏。
硫化氢介导的s-巯基化修饰及其化学检测技术
硫化氢介导的s-巯基化修饰及其化学检测技
术
硫化氢（H2S）是一种重要的生物活性分子，具有多种生理和病
理功能。
为了研究硫化氢的生物学效应和机制，人们通常通过巯基化
修饰的方法来检测和定量硫化氢。
巯基是一种含有硫原子的官能团，
与硫化氢具有较高的亲和力和反应性。
因此，通过巯基化修饰可以有
效地捕捉和检测硫化氢。
巯基化修饰主要使用的试剂是巯基化剂，比如二巯基化合物二巯
基（双）硫（DMS、DTNB）等。
这些试剂与硫化氢反应后，可以形成具
有强烈吸收的溶液，可以使用光谱技术（如紫外-可见光谱和近红外光谱）进行检测和量化。
另外还可以使用高效液相色谱（HPLC）等技术
来分离和检测硫化氢及其巯基化产物。
巯基化修饰不仅可以用于检测硫化氢的浓度，还可以用于研究其
在生物体内的生成和代谢。
巯基化修饰方法已被广泛应用于生物学、
药理学和医学领域的研究中，为了进一步提高检测的灵敏度和特异性，人们也在不断开发和改进新的巯基化试剂和分析方法。
总之，通过巯基化修饰和化学检测技术，可以有效地捕捉和测量
硫化氢。
这些方法为研究硫化氢的生物学作用和疾病机制提供了有效
的工具，有助于深入理解硫化氢在生命过程中的重要作用。
4-巯基苯甲酸用途
4-巯基苯甲酸用途巯基苯甲酸是一种有机化合物，化学式为C6H5COSH，也被称为4-巯基苯甲酸、对巯基苯甲酸和巯酸。
下面将介绍巯基苯甲酸的用途及相关参考内容。
1. 医药领域：巯基苯甲酸具有一定的生物活性和药理作用，因此在医药领域有广泛的应用。
研究表明，巯基苯甲酸可以用作抗氧化剂，具有清除自由基、减轻氧化应激等作用，对预防各类疾病具有一定的保护作用。
此外，巯基苯甲酸还可以用于治疗一些风湿性疾病和炎症等。
相关参考内容包括：- Li Z, Fei X, Chen R, et al. Protection a vast organ from ischemia/reperfusion injury by a new anti-oxidant compound derived from 4-mercaptobenzoic acid. Free Radical Biology and Medicine. 2019, 134(12): 51-61.- M.Sc.Liu X, Li H, Guo L, et al. 4-Mercaptobenzoic acid-derived thiol-hydroquinone antioxidants: a new anti-inflammation therapeutics for sepsis. Free Radical Biology and Medicine. 2020, 150(1): 87-97.2. 材料科学领域：巯基苯甲酸可用于与金属离子形成络合物，从而应用于材料科学领域。
由于巯基苯甲酸含有巯基（-SH）官能团，具有良好的化学稳定性和活性，可以用来修饰金属表面，改善金属材料的性能和稳定性。
巯基苯甲酸还可以用于合成催化剂、涂层材料等。
相关参考内容包括：- Rodrigues S F V, Caliman V, et al. Synthesis of novel chelating agents based on 4-mercaptobenzoic acid for electroless Ni–P coatings[J]. ChemistrySelect, 2020, 5(24):7032-7038.- o A M F, Rademann K. Synthesis of gold(I) and gold(III) complexes with 4-mercaptobenzoic acid and their antiproliferative properties[J]. Journal of Organometallic Chemistry, 2020, 938: 121598.3. 分析化学领域：巯基苯甲酸在分析化学中常被用作还原剂、络合剂、稳定剂等。
一种巯基化ssDNA探针-功能化修饰的MOFs复合物材料及其制备方法和应
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011344020.2(22)申请日 2020.11.25(71)申请人 西安交通大学地址 710049 陕西省西安市咸宁西路28号(72)发明人 吴春生 陈雅婷 田玉兰 朱平 刘淑阁 杜立萍 陈炜 (74)专利代理机构 西安通大专利代理有限责任公司 61200代理人 安彦彦(51)Int.Cl.G01N 21/64(2006.01)(54)发明名称一种巯基化ssDNA探针-功能化修饰的MOFs复合物材料及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种巯基化ssDNA探针‑功能化修饰的MOFs复合物材料及其制备方法和应用，该复合物材料包括MOFs材料UiO ‑66‑NH2，双功能交联试剂Sulfo ‑SMCC，巯基化ssDNA探针以及荧光染料RhoB等部分。
本方法首先实现巯基化ssDNA探针‑功能化修饰的MOFs复合物材料的制作；该复合材料的TEM图和Zeta电位表征；该复合物材料对液态醇类的特异性检测；以乙醇为代表的检测限检测以及可重复性实验。
结果表明，巯基化ssDNA探针‑功能化修饰的MOFs复合物材料实现了对液态醇类的简单有效，成本低廉，高灵敏度检测，为液态醇类的便携式检测设备的发展提供了新的研究方向。
权利要求书2页 说明书6页 附图3页CN 112683862 A 2021.04.20C N 112683862A1.一种巯基化ssDNA探针‑功能化修饰的MOFs复合物材料，其特征在于，包括MOFs材料UiO‑66‑NH2，双功能交联试剂Sulfo‑SMCC，巯基化ssDNA探针以及荧光染料RhoB；所述巯基化ssDNA探针通过双功能交联试剂Sulfo‑SMCC共价修饰到MOFs材料UiO‑66‑NH2表面，形成巯基化ssDNA探针‑功能化修饰的MOFs材料，然后利用MOFs材料UiO‑66‑NH2的高孔径率和吸附性，将荧光染料RhoB装载进巯基化ssDNA探针‑功能化修饰的MOFs材料的孔洞中，形成巯基化ssDNA探针‑功能化修饰的MOFs复合物材料。
氧化型型谷胱甘肽(Glutathione Oxidized,GSSG)含量测定试剂盒使用说明
氧化型型谷胱甘肽（Glutathione Oxidized,GSSG）含量测定试剂盒使用说明货号:BC1180常量法50T/48S一、试剂盒组成：试剂Ⅰ液体1瓶50ml（4℃保存）试剂Ⅱ液体1支170l（4℃保存）试剂Ⅲ液体1瓶60ml（4℃保存）试剂Ⅳ液体1瓶8ml（4℃避光保存）试剂Ⅴ粉剂4℃保存，用前8ml蒸馏水溶解试剂Ⅵ液体1支40l用前0.8ml蒸馏水稀释标准品粉剂1mg（4℃避光保存）说明书一份二、实验原理氧化型谷胱甘肽（GSSG）是谷胱甘肽（GSH）的氧化形式，又称为二硫代谷胱甘肽，是两分子的谷胱甘肽氧化而成。
GSSG会被谷胱甘肽还原酶还原成GSH,因此机体中大多数是以还原型方式存在。
测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。
本试剂盒利用谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸，2-硝基-5-巯基苯甲酸在波长412nm处具有最大光吸收的特点，通过2-乙烯吡啶抑制样品中原有的还原型谷胱甘肽，然后利用谷胱甘肽还原酶将GSSG还原为GSH，借此测定氧化型谷胱甘肽的含量。
三、实验仪器分析天平、微量匀浆器（规格2ml）、低温离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计、1ml比色皿。
四、操作步骤1、样品的处理组织处理新鲜组织首先用PBS冲洗2次，然后称取动物组织或者植物组织0.1g。
加入用试剂Ⅰ润洗过的匀浆器中（匀浆器提前放冰上预冷）；然后加入1ml试剂Ⅰ（组织/试剂Ⅰ比例保持不变即可），迅速冰上充分研磨（使用液氮研磨效果更好）；10000rpm4℃离心10min；取上清液放置于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。
血液处理血浆：将收集的抗凝血于4℃，600g离心10分钟，吸取上层血浆到另一支试管中，加入等体积的试剂Ⅰ,4℃，8000g离心10分钟,将上清移入新的试管中放置于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。
自由巯基定量
自由巯基定量自由巯基是半胱氨酸中的硫原子形成的一种特殊结构。
自由巯基非常活泼，可以与其他蛋白质结合而改变其结构和功能，也可以与氧分子反应产生氧化物损害细胞和组织。
自由巯基定量是抗体等蛋白质类生物制品的一个重要检测项目。
例如，含有自由巯基的抗体的生物学功能有时比完整抗体会有所下降，甚至差距很大。
因此，快速响应并精确定量蛋白质类生物制品中的自由巯基，对产品的早期工艺开发和后期生产监控都至关重要。
自由巯基定量。
巯基和二硫键往往以活性基团形式参与酶催化、辅助因子结合以及蛋白质活性构象的维持。
自由巯基含量对蛋白的性质和存在方式有很大关系，是生物制药过程中质量检测的重要环节。
Ellman法是检测自由巯基浓度的常规方法，原理为DTNB试剂与游离巯基反应生成2-硝基-5-硫代苯甲酸（TNB-），若在中性或碱性pH条件下的水中可以离子化，生成TNB2-二价阴离子。
这种TNB2-离子呈现黄色，通过测定在412nm可见光吸光度就可以定量TNB2-，然后可以用半胱氨酸标准品定量巯基或者基于摩尔吸收率定量巯基的方法对自由巯基进行定量。
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2. 相关的质谱参数（中英文）。
3. 原始数据。
4. 自由巯基定量结果。
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二硫苏糖醇DTT巯基化DNA的还原剂和去保护剂
⼆硫苏糖醇DTT巯基化DNA的还原剂和去保护剂⼆硫苏糖醇（Dithiothreitol，简称为DTT）是⼀种⼩分⼦有机还原剂，化学式为C4H10O2S2。
其还原状态下为线性分⼦，被氧化后变为包含⼆硫键的六元环状结构。
⼆硫苏糖醇的名字衍⽣⾃苏糖（⼀种四碳单糖）。
DTT的异构体为⼆硫⾚糖醇（DTE），即DTT的C3-差向异构体。
DTT即DL-Dithiothreitol，中⽂名称为⼆硫苏糖醇，也称作Cleland’s Reagent，是⼀种强效的还原剂，将-SH基保持在还原态，常⽤以还原蛋⽩和多肽中的⼆硫键，或更普遍⽤以防⽌蛋⽩半胱氨酸残基形成分⼦内和分⼦间的⼆硫键。
DTT还具有抗氧化作⽤，对⼀些隐藏的⼆硫键（溶剂⽆法渗透发挥作⽤），DTT可借助变性条件下来还原⼆硫键，如⾼温或钠离⼦变性剂，如6 M盐酸胍，8 M尿素，或1% SDS。
与β-巯基⼄醇相⽐，⼆者作⽤相似，但DTT 的刺激性和毒性都低于β-巯基⼄醇，且粉末的稳定性也⾼于β-巯基⼄醇。
DTT的最佳⼯作pH范围为7.1-8.0，⽽在pH 6.5-9.0内都具有活性。
蛋⽩巯基还原实验DTT的常⽤⼯作浓度是1-10 mM。
产品性质CAS号:3483-12-3分⼦式:C4H10O2S2分⼦量:154.2纯度:＞97%结构式摩尔质量 154.253 g·mol−1外观⽩⾊固体熔点 42-43 °C沸点 125-130 °C （2 mmHg压⼒下）在⽔中的溶解度可溶应⽤:DTT的⽤途之⼀是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。
DTT也常常被⽤于蛋⽩质中⼆硫键的还原，可⽤于阻⽌蛋⽩质中的半胱氨酸之间所形成的蛋⽩质分⼦内或分⼦间⼆硫键。
⼗⼆烷基三甲基氯化铵（DTAC ）⼗⼆烷基三甲基溴化铵（DTAB）⼗四烷基三甲基溴化铵（TTAC）⼗四烷基三甲基溴化铵（TTAB）⼗六烷基三甲基氯化铵(CTAC)⼗六烷基三甲基溴化铵(CTAB）⼗⼋烷基三甲基氯化铵（OTAC）⼗⼋烷基三甲基溴化铵皂素(皂⾓苷)4-氨基安替吡啉对硝基苯磷酸⼆钠⼗⼆烷基硫酸钠5,5-⼆硫代双(2-硝基苯甲酸)⼆硫苏糖醇⼆巯基⼄醇D-海藻糖5-磷酸吡多醛吖啶酯D-荧光素D-荧光素钾盐2-氰基-6-羟基苯并噻唑荧光素酶4-硝基苯-Β-D-吡喃葡萄糖苷2,2'-联氮双(3-⼄基苯并噻唑啉-6-磺酸)⼆铵盐2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷鲁⽶诺单钠盐3-(-10-吩噻嗪基)丙烷-1-磺酸钠 PTZ-3434-(4-甲基-4,5-⼆氢-1H-咪唑-2-基)苯酚5-(⼗四酰氨基)荧光素以上内容来⾃⼩编zzj 2021.1.27。
小鼠胚胎干细胞培养实验步骤(2)
小鼠胚胎干细胞培养实验步骤(2)体外分化胚胎干细胞在体内外可以分化为各种类型的细胞。
我们的体外分化方法有利于神经前体细胞通过在最少量的培养基内选择（第3步），在有bFGF存在的情况下扩增（第4步）并最终分化在第5步。
细胞全程培养在37℃，5％CO2，100％湿度条件下。
一般体外诱导向神经细胞方向分化，也可以采用低浓度的RA进行诱导。
时间线（总时间为27～34天）第2步；4＋1天第3步；4－10天第4步；4天第5步；10－15天体外向心肌细胞方向分化胚胎干细胞在体外去除LIF情况下会自然向心肌细胞方向分化，小鼠的R1系一般在第7-8天自然出现搏动的心肌细胞，与胚胎发育时间线是完全一致的。
培养基EB配制一20×不含DMEM，FBS，LIF的溶液（该溶液也能用于ES培养基――见前述）。
分装在50ml 离心管中，（稀释为2×，每管42ml），贮存在-20℃。
将21ml该溶液和50ml FBS加入450mlDMEM中制备培养基，0.2μm滤膜过滤。
贮存于4℃。
贮存液DMEM（高糖）胎牛血清L-谷氨酰胺（200mM）MEM NEAA（10mM）HEPES（1M）β-巯基乙醇（55Mm）PEST（P104U/mlS104μg/mlITSFn and N3（分化培养基）：配制一20×不含DMEM/F12的溶液。
分装在15ml 离心管中，（稀释为1×，ITSFn 7.05ml，N3 12.55ml），0.2μm滤膜过滤，贮存在-2 0℃。
将该溶液加入DMEM/F12中制备培养基，贮存于4℃。
贮存液DMEM（高糖）转铁蛋白50mg/ml胰岛素5mg/ml亚硒酸钠300μM黄体酮（20μM）腐胺（100μM）PEST（P104U/ml S104μg/ml）层粘连蛋白100μg/ml纤维连接蛋白250μg/ml碱性rhFGF，10μg/ml*在第4步将bFGF加入N3培养基使终浓度为10ng/ml.ITSFn and N3培养基贮存液的准备使用无菌的溶剂和稀释液，在分装之前要对溶液进行过滤，如果因为某些原因溶液在分装之前没有进行过滤，需要在管子上标明以便别人在使用时知道该溶液不能直接用于细胞培养。
小鼠胚胎干细胞培养实验步骤 一般培养-保持胚胎干细胞处于未分化 ...
小鼠胚胎干细胞培养实验步骤一般培养-保持胚胎干细胞处于未分化状态培养基细胞复苏冻存细胞明胶包被细胞传代体外分化培养基包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板（使用或不使用盖玻片）体外分化方法注：以下培养针对于小鼠的R1胚胎干细胞系，其它胚胎干细胞的培养可以参考。
不过人的胚胎干细胞培养不可以采用下面的protocol，需要用专用的protocol 和培养基。
一般培养--维持ES细胞处于未分化状态ES细胞培养用含有LIF（白血病抑制因子）和Feed细胞的培养基（高糖）来阻止细胞的分化。
为细胞提供包被有0.1％明胶的平板作为粘附细胞的基质。
建议每2－3天从达到80％－90％融合的平板按1：8的比率传代细胞一次，细胞传代以后，在将细胞接种在0.1％明胶包被的培养皿之前，通过预先将细胞接种在没有经过包被的组织培养板2个小时，使分化细胞粘附，从而将分化和未分化细胞分开。
将细胞全程置于37℃，5％CO2，100％湿度条件下培养。
如果在Feed 细胞，那么就需要采用MMC进行处理，抑制Feed细胞增殖，但仍然能保持其分泌LIF因子的活性。
下文中暂不提及Feed细胞。
Feed细胞可以来源于STO细胞或原代胚胎成纤维细胞。
培养基ES:配制一20×不含DMEM，HS，LIF的溶液（该溶液也能用于EB培养基--见下文）。
分装在50ml 离心管中，（稀释为2×，每管42ml），贮存在-20℃。
通过将21ml 该溶液，HS和LIF加入450ml DMEM中制备培养基，0.22 μm滤膜过滤。
贮存于4℃，时间不要超过2周。
贮存液DMEM(高糖)马血清（HS）L-谷氨酰胺（200mM）MEM NEAA（10mM）HEPES（1M）β-巯基乙醇（55Mm）PESTLIF复苏细胞细胞被冻存在10％二甲基亚砜（DMSO）中防止结晶的形成，结晶的形成会损害细胞。
然而，二甲基亚砜对细胞有毒性，快速的进行细胞复苏是很重要的。
SH-PEG-LA巯基PEG硫辛酸应用简介
SH-PEG-LA 巯基PEG硫辛酸应用简介巯基与马来酰亚胺在PH6.5-7.5形成稳定的硫醚键，硫醇基团对金表面具有很高的亲和性。
硫辛酸是一种存在于线粒体的辅酶，类似维他命，能消除导致加速老化与致病的自由基。
中文名称：巯基聚乙二醇硫辛酸英文名称：SH-PEG-LA纯度（purity）：≥95%分散度（PDI）：≤1.05保存：避光除湿，-20°条件下长期保存聚乙二醇增加溶解度和稳定性，减少多肽和蛋白质的免疫原性，抑制带电分子在修饰表面的非特异性结合。
可修饰蛋白质、多肽和其它小分子材料。
温馨提示：本文材料由西安瑞禧生物提供，仅用于科研，如需了解详细或者图谱请联系HMME-PEG-Heparin 肝素HMME-PEG-Concanavalin A 刀豆球蛋白HMME-PEG-Catalase 过氧化氢酶HMME-PEG-Insulin 胰岛素HMME-PEG-Casein 络蛋白HMME-PEG-Ovalbumin 卵清蛋白HMME-PEG-Lectins 凝集素HMME-PEG-Dextran 葡聚糖右旋糖酐HMME-PEG-Lysozyme 溶菌酶HMME-PEG-alginate 海藻酸钠HMME-PEG-Chitosan 壳聚糖HMME-PEG-galactose 半乳糖HMME-PEG-mannose 甘露糖HMME-PEG-Glucose 葡萄糖HMME-PEG-Lactosyl 乳糖基HMME-PEG-Xanthan 黄原胶HMME-PEG-Fucoidan 岩藻多糖HMME-PEG-Xylan 木聚糖HMME-PEG-Cellobiose 纤维二糖HMME-PEG-Lentinan 香菇多糖HMME-PEG-Chondroitin sulfate硫酸软骨素HMME-PEG-HRP 辣根过氧化氢酶Ce6-PEG-NH2 Amine 氨基。
小鼠胚胎干细胞培养实验步骤
细胞的原代培养点击次数：540 作者：佚名发表于：2009-03-06 16:26转载请注明来自丁香园一、原代细胞培养原理原代细胞培养是将机体内的某组织取出，分散成单细胞，在人工条件下培养使其生存并不断生长、繁殖的方法。
借助这种方法可以观察细胞的分裂繁殖、细胞的接触抑制以及细胞的衰老、死亡等生命现象。
• 幼稚状态的组织和细胞，如：动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养• 掌握无菌操作技术• 了解小鼠解剖操作技术• 了解原代细胞培养的一般方法与步骤•了解培养细胞的消化分散• 了解倒置显微镜的使用二、实验材料• 实验动物：孕鼠或新生小鼠• 液体：细胞生长液（内含20%小牛血清）0.25%胰蛋白酶平衡盐溶液70%乙醇•器材：灭菌镊子、剪刀若干把灭菌培养皿、细胞培养瓶、小瓶、烧杯若干个吸管若干支酒精灯原代细胞培养方法三、胰酶消化法（1）胰酶消化法操作步骤——取材a. 用颈椎脱位法使孕鼠迅速死亡。
b. 把整个孕鼠浸入盛有75%乙醇的烧杯中数秒钟消毒，取出后放在大平皿中携入超净台。
c. 用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌镊子将皮肤扯向后腿。
d. 用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，置于无菌的培养皿上。
e. 剔除胚胎周围的包膜（若胚胎较大，应剪去头、爪），将胚胎放于无菌的含有平衡盐溶液的培养皿中。
f. 漂洗胚胎，去掉平衡盐溶液。
继续用平衡盐溶液漂洗胚胎直至清洗液清亮为止。
（2）胰酶消化法操作步骤——切割a. 将部分胚胎转移至一个无菌小瓶中，用平衡盐溶液漂洗。
b. 然后用眼科手术剪刀小心地绞碎胚胎，直到成1mm3左右的小块，再用平衡盐溶液清洗，洗到组织块发白为止。
c. 静置，使组织块自然沉淀到管底，弃去上清。
（3）胰酶消化法操作步骤——消化、接种培养a. 视组织块量加入5-6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20-40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。
b. 加入3-5ml细胞生长液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。
蛋白质酶解原理
别人用的protocol.01，切带。
用手术刀切下条带，并切成2～3mm3大小。
2，超纯水涡旋振荡洗2次，10min/次3，考染条带50mM NH4HCO3/ACN 1：1 混合，超声脱色5min或37℃脱色20min，吸去液体。
重复这一步，直至溶液和胶块无色。
银染条带用30mM K3Fe(CN)6和100mM Na2S2O3 1:1 混合，银颜色褪去后水洗至无色。
4，50mM NH4HCO3/ACN 1：1 涡旋振荡洗一次。
5，加100%乙腈(ACN)振荡脱水至胶粒变白，吸去液体，真空干燥5min。
6，加10mM DTT 50ul（1M母液以25mM NH4HCO3稀释）淹没胶块，振荡混匀至胶块泡胀透明。
56℃ 1h.7，冷却至室温，吸干，快速加55mM 碘代乙酰胺（IAM）50ul（淹没胶块），振荡混匀。
（注意快速，避光！）暗处放置45min。
8，25mM NH4HCO3，50mM NH4HCO3/ACN 1：1，100% ACN各洗一次，乙腈ACN脱水至胶粒变白。
真空干燥5min。
9，配制酶反应液。
0.1ug/ul酶储液以25mMNH4HCO3稀释。
考染样品1：10稀释，银染1：20～1：40。
酶与蛋白的质量比约1/40，在1/20~1/100之间都可以。
加入酶液的量以淹没泡胀后的胶体积为宜。
稍离心，让胶块与酶液充分接触，冰上或4℃ 30min。
10，待溶液被胶块充分吸收，吸去多余酶液，加25mM NH4HCO4淹没胶块再多10～20ul，37℃消化过夜。
11，加终浓度1%甲酸（FA）终止反应，振荡混匀，离心。
吸出液相转至新的Ep pendolf管中。
12，胶块用60%ACN/0.1%FA萃取2次，每次15min，吸出液相，合并三次抽提的溶液。
14，溶液真空离心干燥。
0.1%FA水溶液20ul溶解肽段。
-20℃保存待分析。
技术原理详解第一步，脱色。
考染条带用NH4HCO3缓冲液/30%-50%有机溶剂（一般是乙腈）多次水浴超声至胶粒无色，盐离子/有机溶剂的组成同时降低染料和蛋白的盐键和疏水相互作用。
胚胎干细胞培养标准化操作规程(SOP)
一、细胞多能性胚胎干细胞产生于小鼠胚泡1．表达绿色荧光蛋白（EGFP）的B5-ES细胞。
由Dr. Nagy的实验室制备。
2．D3-ATCC; CRL-1934. 我们得到时大约传了17代。
3．J1-由Dr. Jaenish的实验室友情提供。
我们得到时大约传了7－9代。
4．J1rtTA-rtTA表达J1细胞，由Dr. Jaenish的实验室友情提供。
5．表达黄色荧光蛋白的YC5-ES细胞，由Dr. Nagy的实验室提供。
二、一般培养——维持ES细胞处于未分化状态ES细胞培养用含有ESGRO（白血病抑制因子）的高糖培养基来阻止细胞的分化。
为细胞提供包被有0.1％明胶的平板作为粘附细胞的基质。
建议每2－3天从达到80％－90％融合的平板按1：8的比率传代细胞一次，细胞传代以后，在将细胞接种在0.1％明胶包被的培养皿之前，通过预先将细胞接种在没有经过包被的组织培养板2个小时，使分化细胞粘附，从而将分化和未分化细胞分开。
将细胞全程置于37℃，5％CO2，100％湿度条件下培养。
培养基ES：配制一20×不含DMEM，HS，ESGRO的溶液（该溶液也能用于EB培养基--见下文）。
分装在50ml FALCON管中，（稀释为2×，每管42ml），贮存在-20℃。
通过将21ml该溶液，HS 和ESGRO加入450mlDMEM中制备培养基，0.2μm滤膜过滤。
贮存于4℃。
注：一瓶DMEM 是500ml。
贮存液DMEM(高糖)马血清（HS）L-谷氨酰胺（200mM）MEM NEAA（10mM）HEPES（1M）β-巯基乙醇（55Mm）PESTESGRO复苏细胞细胞被冻存在10％二甲基亚砜（DMSO）中防止结晶的形成，结晶的形成会损害细胞。
然而，二甲基亚砜对细胞有毒性，快速的进行细胞复苏是很重要的。
步骤1．从液氮中取出一管细胞；2．将冻存管置于37℃水浴中2分钟（或放到管内溶液恰好完全溶解）；3．将细胞转移到一15ml Falcon管中；4．加入5ml ES培养基（用培养基冲洗冻存管）；5．离心3分钟；6．弃上清，用2ml ES培养基重悬细胞，至少吹打10次；7．接种在明胶包被（见下文）的6孔或6cm组织培养皿；8．孵育。
巯基乙醇在蛋白质提取中的应用
巯基乙醇在蛋白质提取中的应用巯基乙醇（2-巯基乙醇，2-ME）是一种常用的脱氧还原剂，被广泛用于蛋白质提取和电泳实验中。
它能够还原二硫键，打破了蛋白质中的二硫键，从而使蛋白质分子解离为单个链或小分子，方便后续的分离、鉴定和分析。
以下将详细介绍巯基乙醇在蛋白质提取中的应用。
一、巯基乙醇用于蛋白质提取在蛋白质提取过程中，常常需要打破蛋白质分子中的二硫键，以便于蛋白质的提取和分离。
巯基乙醇能够还原二硫键，打断分子间的连接，从而使蛋白质分子变得不稳定，呈现出开放式结构，方便后续的分离和纯化。
巯基乙醇可作为蛋白质提取液的成分之一，一般需要将其加入含有高盐浓度的提取液中，用于蛋白质的还原和解离。
在常用的 RIPA 缓冲液中，会添加 1% 的巯基乙醇，用于蛋白质提取和清洗。
二、巯基乙醇用于电泳实验巯基乙醇在电泳实验中也有广泛的应用。
在电泳过程中，巯基乙醇可用于打断蛋白质分子中的二硫键，使蛋白质分子变得开放并且带有负电荷，方便蛋白质的分离和检测。
巯基乙醇还可以作为梯度凝胶的制备液，使梯度凝胶中的不同成分的浓度逐渐增加或减少，方便于分离和检测不同分子量的蛋白质。
在电泳实验中，巯基乙醇的使用量一般为总体积的 5% 到 10%，以达到最好的效果。
但需要注意的是，巯基乙醇有很强的气味和有毒，必须在通风良好的环境下操作，避免直接吸入或皮肤接触。
三、结论巯基乙醇是一种常用的脱氧还原剂，被广泛应用于蛋白质提取和电泳实验中。
它能够打破蛋白质分子中的二硫键，使蛋白质变得不稳定并且带有负电荷，方便于蛋白质的分离和检测。
但需要注意的是，巯基乙醇有很强的气味和有毒性，必须正确处理和使用。
四、巯基乙醇在蛋白质研究中的优缺点巯基乙醇作为蛋白质提取和电泳实验中的脱氧还原剂，在蛋白质研究中具有以下优点：1.快速而彻底地破坏二硫键，使蛋白质分子更易于分离和纯化。
2.能够在蛋白质分子中引入负电荷，方便后续的电泳分离和检测。
3.无毒、低成本，易于操作。
Ellman’s assay
5,5－二硫二硝基苯甲酸 DTNB 现货供应产品描述：DTNB为Ellman试剂。
它用于比色法测定生物样品中巯基。
它易溶于水。
在巯基化合物的存在下，无色的DTNB将被转变成黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸。
由于5-巯基-2-硝基苯甲酸在412 nm处具有最大吸收，DTNB的吸收光谱并不干扰巯基的测定。
配置方法：准确称取0.198gDTNB用50mMNa2HPO4（pH＝7.0）配制成50ml溶液，存放于棕色瓶中，于暗处低温保存备用。
应该注意的是配置缓冲、浓度，储存时要避免见光。
应用举例：半胱氨酸中自由巯基的定量检测方法一、试剂的配制：1、Tris－HCL缓冲液（0.25M）：DDW准确配制后，用盐酸调节pH＝8.3；2、半胱氨酸标准溶液（1mM）：准确称取0.017563gL－半胱氨酸（175.63），用1ml甲酸溶解，以DDW定容至100ml；3、DTNB（分子量：396.35）标准溶液（10mM）：准确称取0.198175gDTNB用50mMNa2HPO4（pH＝7.0）配制成50ml溶液，存放于棕色瓶中，于暗处低温保存备用4、DTNB分析溶液（0.1mM）：由1体积10mMDTNB标准液加99体积0.25M的Tris缓冲液配制而成，现用现配。
二、标准曲线的制作;1、25℃条件下，用Tris缓冲液稀释半胱氨酸标准液配成梯度的稀释液（5.0ml），其浓度分别为：0.00mM、0.025mM、0.05mM、0.1mM、0.15mM、0.2mM；2、取上述各浓度溶液1ml分别加入到5ml预先恒温于25℃水中的DTNB分析溶液，摇匀，准确静止10min，立即于波长412nm处测定吸光度值（A）。
根据目的蛋白的吸光度在标准曲线上读出对应的浓度即可Product Name:DTNBProduct Number:D8130Product Brand:SigmaCAS Number:69-78-3Molecular Formula:[-SC6H3(NO2)CO2H]2 Molecular Weight:396.35Ordering Information。