细胞工程复习
细胞工程学复习
一、玻璃仪器的清洗1、浸泡：购进的玻璃器皿常带有灰尘，呈弱碱性，或带有铅、砷等有害物质，故先用自来水浸泡过夜、水洗，然后再用2%-5%盐酸浸泡过夜或煮沸30分钟，水洗2、刷洗：用软毛刷、优质洗涤剂，刷去器皿上的杂种冲洗晾干3、浸酸：将器皿浸泡于清洁液中24h，如急用也不得小于4h。
清洁液由重铬酸钾、浓硫酸及蒸馏水配制而成。
有很强的氧化作用，去污能力很强。
经清洁液浸泡后，玻璃器皿残留的未刷洗的微量杂质可被完全清除。
4、冲洗：先用自来水充分冲洗，吸管等冲洗10min；器皿需每瓶灌满倒掉，反复10次以上，然后再经蒸馏水漂洗3次，不留死角，晾干或烘干备用。
二、培养基种类主要有，物理灭菌法，化学灭菌法和抗生素灭菌法。
1、物理灭菌法：蒸汽灭菌用于玻璃制品、滤器、橡胶塞、解剖用具、受热不变性的溶液等，不同物品的有效灭菌的压力和时间不同，如培养液，橡胶制品、塑料器皿等〔68kPA(115 ℃,10min〕；布类、玻璃制品、金属器械等〔103kPA(121 ℃,15min〕优点：消毒效果好，时间短缺点：需专人看管，不能离开人，应随时注意压力变化。
2、过滤除菌：此方法适用于大多数细胞培养用液，如培养液、消化液、Hanks液、血清以及其他不能用高压蒸汽消毒的液体，用0.22um的微孔滤膜可除去细菌和霉菌。
3、紫外线灭菌：紫外线的波长为200－300nm，最强为254nm，6－15平方米最少一只紫外灯，高度2.5m以下，湿度为45％－60％，杆菌效果好，球菌次之，霉菌最差，实验前应不低于30分种的照射时间。
优点：消毒效果好，面积大，使用方便缺点；产生臭氧，气味难闻4、熏蒸灭菌适用于无菌室等房间的消毒，高锰酸钾5－7g，加甲醛（40％）10－15ml，，混合放入一开放容器中，立即可见白色甲醛烟雾，消毒房间需封闭24小时，至少4小时以上。
5、煮沸消毒金属器械和胶塞在水中煮沸20－30分钟，趁热倒去水分即可使用。
紧急情况时使用。
细胞工程复习
绪论细胞工程的特点①前沿性；②争议性；③综合性；④应用性细胞工程：细胞工程是指按照一定的设计方案，通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行实验操作，获得重构的细胞、组织、器官以及个体，创造优良品种和产品的综合性生物工程。
细胞培养：指从体内组织取出细胞摹拟体内出现环境,在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下,使期生长繁殖,并维持其结构和功能的一种培养技术.第一章动物细胞工程实验室5部分：（1）无菌操作室；（2）培养与观察室；（3）制备室；（4）储藏室；（5）清洗和灭菌室CO2培养箱：CO2培养箱适合开放式或半开放式的细胞培养，能恒定地提供定量CO2,保持细胞培养时PH的稳定，通常使用条件为37℃，5％CO2。
第三章细胞生长曲线：是观察细胞在一代生存期内的增生过程的重要指标，以培养时间（d）为横坐标、细胞密度为纵坐标所做出的曲线。
细胞贴壁率:又称接种存活率，用于观察贴壁附着生长细胞，主要反映细胞的生存能力，和部分底物材料的相容性。
MTT比色法的原理：活细胞中脱氢酶能将四唑盐（MTT）还原成不溶于水的蓝紫色产物（formazan)，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。
二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的formazan量成正比。
再用酶标仪测定OD值。
体外活体染色：就是在体外条件下用某种染色剂（即活体染料）对活的细胞或组织进行染色，而不影响活细胞的生命活动的一种方法。
污染的排除可使用用抗生素，预防用药一般用双抗生素(青霉素加链霉素)。
第四章体外培养细胞的分型：1、贴壁性细胞：①上皮细胞型；②成纤维细胞型；③游走细胞型；④多形型细胞2、悬浮型细胞培养细胞的生长特点：①贴附②接触抑制③密度抑制接触抑制：细胞从接种到长满底物表面后，由于细胞繁殖数量增多相互接触后，不再增加。
密度抑制：细胞接触汇合成片后，虽发生接触抑制，但只要营养充分，细胞仍然能够进行增殖分裂，数量仍在增多，但当细胞密度进一步增大时，培养液中营养成分的减少，细胞营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制，导致细胞分裂停止。
细胞工程复习
1.细细胞工程:细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的方法，通过类似于工程学的步骤，在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获得新型生物或一定细胞产品的一门综合性科学技术。
2.细细胞工程包含的技术：细胞与组织培养、细胞融合、细胞核移植、染色体操作、胚胎工程、干细胞与组织工程、转基因生物与生物反应器细胞培养和组织培养都属于体外培养，指生物细胞和组织在立体条件下的生长和增殖。
3.细胞核移植：利用限位操作技术将细胞核与细胞质分离然后再讲来源不懂的核与质充足，形成杂合细胞。
4.染色体工程：把单个的染色体或染色体组转入或移除受体细胞，从而形成新的染色体组合和遗传构成。
5.胚胎工程：以生殖细胞和胚胎细胞为对象进行的细胞构成操作。
主要包括体外受精、胚胎移植、胚胎分割技术、胚胎冷冻保存技术和性别控制技术6.接触抑制：由细胞接触而抑制细胞运动的现象。
7.体外培养细胞的分型：1、贴壁型细胞（包括细胞与细胞之间的相互接触与细胞基质之间的相互接触两种方式）2、悬浮型细胞8.培养细胞生长特点：贴附、接触抑制、密度抑制9.培养细胞的生长与增殖过程：1、单细胞生长过程：1）G1期2）S期3）G2期4）M期；2、细胞学生长过程：1）原代培养2）传代培养3）衰退期；3、每代细胞生长过程：1）潜伏期2）指数生长期3）停止期10.细胞培养常用液体：1.水、2.平衡盐溶液、3.消化液、4.消化酶抑制夜、5.pH调整夜（碳酸氢钠溶液和HEPES溶液）、6.抗生素夜、7.谷氨酰胺补充液11.培养基培养基的基本要求：（1）营养成分：1）氨基酸2）单糖3）维生素4）其他成分；（2）促生长因子及激素（3）pH（4）渗透压天然培养基：主要来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养液（1）血清（2）鼠尾胶原（3）鸡胚浸出夜（4）水解乳蛋白合成培养基（1）基本培养基（2）无血清培养基：1）基础培养基2）添加成分12.细胞的基本培养技术（1）原代培养：1.组织取材；2.组织细胞分离；3.培养方法：组织块培养法、单层细胞培养、悬浮细胞培养。
细胞工程复习
（5）若①是胡萝卜根尖细胞，则培养成的④ 的叶片的颜色是 绿色 ，这说明根尖细胞 含有与叶绿体形成相关的基因 。 （6）若利用此项技术制造治疗烫伤、割伤的 药物——紫草素，培养将进行到（填编号） ② 。
下图为细胞融合的简略过程图，请回答：
（1）若A、B是植物细胞，在细胞融合 之前已经用纤维素酶和果胶酶 处理，除 细胞壁 ；A、B到细胞C的过程中，常 去了 用的物理方法是电刺激、振动、离心，融 合完成的标志是产生新的细胞壁 。 （2）若A、B是植物细胞则形成的D细胞 还要应用 植物组织培养 技术把D细胞培养 成植株。 （3）若A、B是动物细胞，一般取 自动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织 ， 然后用胰蛋白酶使其分散开来。A、B到C 的过程中，常用的不同于植物细胞的手段 是 ，所形成的D称为 杂种细胞 。 灭活的病毒诱导
12. 不能人工诱导原生质体融合的方法是 A.振动 B. 电刺激 D C. PEG试剂 D. 重压
13. 植物体细胞杂交的结果是（ A ） A. 产生杂种植株 B. 产生杂种细胞 C. 原生质体融合 D. 形成愈伤组织
14. 植物体细胞杂交的目的中错误的是（ D ） A. 把两个植物体的优良性状集中在杂种植株上 B. 获得杂种植株 C. 克服远源杂交不亲和的障碍 D. 实现原生质体的融合
8.“生物导弹”是指（ ） D A.单克隆抗体 B. 产生特异抗体的B淋巴细胞 C. 杂交瘤细胞 D. 在单克隆抗体上连接抗癌药物
9. 利用下列细胞工程技术培育出的新个体中， 只具有一个亲本的遗传特性的是（ ） D ① 细胞和组织培养 ② 细胞融合 ③ 动物胚胎（分割）移植 ④ 克隆羊技术（多 利） A. ①② B. ②③ C. ①③ D. ①④
6. 用高度分化的植物细胞、组织和器官进行组 织培养可以形成愈伤组织，下列叙述错误的是 （ ） B A. 该愈伤组织是细胞经过脱分化和分裂形成的 B. 该愈伤组织的细胞没有全能性 C. 该愈伤组织是由排列疏松的薄壁细胞组成 D. 该愈伤组织可以形成具有生根发芽能力的胚 状结构
细胞工程复习资料
细胞工程复习资料细胞工程复习资料细胞工程是一门研究利用生物技术手段改造和利用细胞的学科，是生物工程领域的重要分支之一。
它涉及到细胞的培养、分离、操纵和应用等方面，对于生物医学、药物研发、农业和环境保护等领域都具有重要意义。
本文将从细胞工程的基本原理、技术方法和应用领域等方面进行综述。
一、细胞工程的基本原理细胞工程的基本原理是通过改变细胞的遗传物质和表达谱，使其具备特定的功能或性状。
其中，基因工程技术是细胞工程中最常用的手段之一。
通过基因工程技术，可以将外源基因导入到目标细胞中，使其产生特定的蛋白质或表现出特定的性状。
例如，利用基因工程技术，可以将人类生长激素基因导入到大肠杆菌中，使其产生人类生长激素。
除了基因工程技术外，细胞工程还包括细胞培养、细胞分离和细胞操纵等技术。
细胞培养是指将细胞放置在适宜的培养基中，提供适当的营养物质和环境条件，使其在体外继续生长和繁殖。
细胞分离是指将混合的细胞群体分离成单个的细胞或纯化的细胞群体。
细胞操纵是指通过物理或化学手段对细胞进行操作，如细胞融合、细胞转染等。
二、细胞工程的技术方法细胞工程的技术方法主要包括基因工程技术、细胞培养技术和细胞操纵技术等。
基因工程技术是细胞工程中最重要的技术之一，它包括基因克隆、基因转染、基因敲除等多种方法。
基因克隆是指将特定的基因从一个生物体中复制出来，并导入到另一个生物体中。
基因转染是指将外源基因导入到目标细胞中，使其产生特定的蛋白质或表现出特定的性状。
基因敲除是指通过基因编辑技术，将目标基因从细胞中删除或失活。
细胞培养技术是细胞工程中最基础的技术之一，它包括细胞培养基的配制、细胞培养条件的优化和细胞培养设备的选择等方面。
细胞培养基是细胞培养的基础，它包含了细胞所需的营养物质和生长因子等。
细胞培养条件的优化是指通过调节培养基的成分和培养条件的控制，使细胞在体外获得最佳的生长和繁殖条件。
细胞培养设备的选择是指选择适合细胞培养的培养器具和设备，如细胞培养箱、生物反应器等。
细胞工程复习题
1、哺乳动物的克隆方法有哪些？（1）胚胎干细胞核移植；（2）胚胎细胞核移植；（3）胎儿成纤维细胞核移植；（4）体细胞核移植2、胚胎工程的意义（1）发挥优良母畜的繁殖能力——胚胎移植技术是提高母畜繁殖潜力的有效方法，扩大良种雌性配子的推广利用。
（超数排卵、同步发情）。
（2）促进家畜改良的速度（泌乳高的奶牛、瘦肉型猪、毛肉兼用的细毛羊等）。
（3）作为胚胎操作的基础（卵子切割、性别控制、嵌合体制作、细胞核移植、转基因操作等）。
（4）保存遗传资源——胚胎超低温冷冻技术的运用，给长期保存和运输、异地移植带来方便，还可用于建立“胚胎库”等。
3、动物细胞培养基成分有哪些？（1）氨基酸类（2）维生素类（3）大量元素----是调节培养液渗透压的主要成分。
（4）微量元素-----由血清提供的，在低血清或无血清培养液中，则需添加铁、铜、锌、硒等微量元素。
（5）葡萄糖----能量来源之一，也是某些氨基酸合成的原料。
（6）有机类（7）激素类----血清中含有许多激素。
（8）生长因子类4、血清的主要用途及注意事项（1）维持体外细胞生长；（2）提供细胞生存、生长和增值所必需的激素和生长因子；（3）补充基础培养液中没有或量不足的营养成分；（4）含有一些可供贴壁依赖型细胞在培养器皿表面粘附和铺展的生长基质成分；（5）还能为细胞提供载体蛋白，补充细胞外基质；（6）血清中还含有糠蛋白酶成分，起到中和作用；（7）为培养液提供良好的缓冲坏境；（8）血清还有一定的黏度，可以保护细胞免受机械损伤。
5、细胞培养的作用意义（1）有害物质的快速检测；（2）大面积皮肤烧伤的修复；（3）遗传病的产前诊断；（4）建立各种医学模型；（5）大量生产生物活性物质；（6）细胞与细胞之间的相互作用；（7）细胞内部与细胞外界之间的作用；（8）细胞内胞质的活动；（9）胞质与核质之间的流动6、细胞重组的方式与意义（1）方式：1）胞质体与完整细胞的融合形成胞质杂种；2）微细胞与完整细胞的融合形成微细胞异核体；3）胞质体与核体（小细胞）融合形成重组细胞（核质杂种（2）意义：1）研究核质关系；2）研究细胞器的功能及相互作用关系；3）研究细胞器的组装，甚至细胞的自我装配机理，以揭示细胞起源与进化的机制；4）结合基因转移技术，可人为地使细胞表达新的性状和产生新的产物，实现掌握细胞、利用细胞、改造并进而创造出具有特定性状和功能的工程细胞。
细胞工程复习资料最终版
第一章细胞工程：是指以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。
细胞工程的应用细胞工程是现代生物技术的基础。
细胞是大部分生命体存在的基本结构，而现代生物技术（如基因工程蛋白质工程等）无不是对细胞或细胞的物质进行改造而达到获取目的产物影响生物什么状态的目的，在这里，细胞都是这些技术开展的平台和基础。
第三章无菌技术灭菌方法：物理灭菌法、化学灭菌法、使用抗生素。
物理方法：干热、湿热、射线/微波/紫外线处理、过滤、离心沉淀、大量无菌水冲洗等。
化学方法：各种灭菌剂。
抗生素的使用：青霉素、链霉素、卡那霉素、制霉菌素等，主要用于细胞培养过程中。
细胞冷冻方法：1.缓慢冷冻法——将处于0°C或其他预处理温度的材料以1~2°C/min的降温速度从起始温度降到-100°C，稳定1h后投入液氮中保存或以此降温速度连续降温至-196°C。
按1mL每安瓿的量分装细胞悬液，在火焰下将安瓿封口。
将封口的安瓿放入慢冻机内，添加保护剂的细胞悬液按照一定梯度降低温度进行缓慢冷冻。
当温度在-25°C 以上时，可以按照1~2°C/min的梯度降温；当温度达-25°C以下时，可以按照5~10°C/min的梯度降温。
2.预冷冻法——包括两步冷冻、逐级冷冻两种，前者是将预处理后的材料先通过缓慢冷冻法降温至-40°C，保存一段时间（约30min）后，再投入液氮中保存。
后者将经过预处理的材料先制备成不同温度等级的溶液，如-10°C、-15°C、-23°C、-35°C及-40°C，并在每级温度中停留一定时间（4~6min），然后将材料投入液氮中保存。
3.快速冷冻法——将材料从0°C或者其他预处理温度直接投入液氮中保存。
细胞工程资料复习
生物工程复习第一讲一、模块：动植物人工繁殖技术、新品种培育技术、生物制品技术、干细胞与组织工程。
二、细胞工程（Cell engineering）是指主要以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。
三、研究对象：动植物细胞（原生质体），也包括细胞器、染色体、细胞核、胚胎。
四、细胞工程研究内容：a)动植物快速繁殖：植物组织培养、人工种子、试管动物、克隆动物等。
b)细胞重组与新品种培育：细胞水平上的原生质体诱变、细胞融合技术；细胞器水平上的细胞重组；染色体水平上的多倍体、单倍体育种等。
c)细胞工程生物制品：：以杂交瘤细胞培养大量制备单克隆抗体、动物细胞培养生产疫苗、转基因动植物生物反应器等。
d)细胞疗法与组织修复：利用培养的细胞或者离体再造的组织修复受损细胞、组织或器官的技术，属于细胞工程最新发展领域之一。
植物人工繁殖一、1.植物组织培养的理论基础是什么？a)细胞全能性。
二、2.植物经组织培养的再生途径有哪两种？a)器官发生途径：成熟细胞→愈伤组织→出根出芽→完整植株。
b)体细胞胚发生途径：成熟细胞→分生细胞→胚状体→完整植株。
c)概念：•体细胞胚（Somatic embryo）又叫胚状体，是指离体培养条件下没有经过受精过程而形成的胚胎类似物。
体细胞胚发生途径：是指体细胞在离体培养过程中经过了胚胎发育过程。
体细胞胚起源于非合子细胞，因此不同于合子胚。
三、3.激素在细胞分化中是如何调节器官分化？a)生长素主要用来刺激细胞分裂和诱导根的分化。
b)分裂素的生理作用主要是诱导芽的分化促进侧芽萌发生长、促进细胞分裂与扩大。
多用于诱导不定芽的分化和茎、苗的增殖，而在生根培养时使用较少或用量较低。
c)四、1。
细胞全能性、细胞分化与脱分化a)细胞全能性(totipotency)：是指分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体生长、发育所需要的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。
细胞工程复习题
细胞工程复习题细胞工程复习题一、名词解释（每小题3分，共21分） 1．酶工程：2．继代培养 3．人工种子： 4．单倍体培养： 5．微细胞： 6．胚胎工程： 7．克隆： 8．蛋白质工程： 9．外植体：10．动物细胞与组织培养： 11．组织工程： 12．雌核发育： 13．胚胎融合：14．转基因动物： 15．生物化学工程： 16．愈伤组织： 17．看护培养： 18．细胞固定化： 19．染色体工程 20．细胞重组： 21．基因工程技术：二、简答题1．细胞工程的重要应用体现在哪些方面？12．何为植物细胞两相培养技术？建立植物细胞的两相培养系统必须满足的条件是什么？3．动物细胞体外培养有哪些特点？4．动物器官培养技术中，传统的器官培养方法主要有哪些？5．什么是细胞核移植技术？以鱼类细胞核移植为例，其技术要点有哪些方面？ 6．植物组织培养与植物细胞培养有什么区别？7．何为细胞悬浮培养？怎样做到悬浮培养细胞的同步化？ 8．动物细胞生物反应器培养生产的生物制品主要有哪些种类？ 9．什么是试管动物？试管动物技术主要包括哪几个主要技术环节？ 10．何为体细胞克隆技术？多莉羊是怎样培育出的？11．芦荟组织培养快速繁殖中，通过哪些途径可以得到完整的植株？ 12．人工种子利用有何优势？13．用于动物细胞与组织培养的生物反应器应具备哪些基本要求？ 14．何为胚胎移植？主要包括哪些关键技术？ 15．转基因动物技术的应用主要体现在哪几个方面？三、论述题1．请阐述单克隆抗体的制备过程？2．植物组织培养技术主要包括哪些环节？各环节的主要工作内容有哪些？3．请阐述原生质的分离，纯化和活力鉴定的技术过程？四、计算题1．有一培养基的IAA浓度是1.5mg/L，问其?mol/L和ppm浓度各是什么？（分子量175.18）2．培养基的配方是MS?BA2.0mg/L?NAA0.5mg/L?水解酪蛋白500mg/L+3%蔗糖+0.7%琼脂粉。
MS母液的浓度分别是：大量元素10倍，微量元素100倍，铁盐100倍，有机物100倍；BA母液浓度0.5mg/ml，NAA母液浓度0.1mg/ml。
细胞工程复习提纲
《细胞工程》复习提纲第一章绪论1. 细胞工程的概念。
第二章细胞工程基础1．染色质与染色体的定义及它们的区别。
2. 细胞周期的概念。
3．细胞分化、细胞多能性和细胞全能性的概念。
第三章植物组织与细胞培养1．植物的组织培养的概念2．细胞分化、细胞脱分化及再分化的含义。
3. 植物组织培养的原理。
4. 利用植物组培技术培育植株的过程。
5．无病毒植株培养的主要依据。
6．植物组织培养的特点。
根据这些特点设计适合其培养的生物反应器、7．在工业上使用雾化生物反应器和实验室培养相比，存在的优势。
8．植物细胞培养的概念9．单细胞的培养方法，各自的操作和特点。
10．细胞的两相培养的概念及其优势。
11．应用两相培养系统进行细胞培养的有机相需满足的条件。
12．细胞固定化培养的概念及其优势。
13．植物细胞固定化的方法和采用的固定剂。
第四章动物细胞与组织培养1．动物细胞与组织培养的概念。
2．细胞原代培养，继代培养和细胞系的含义。
3．细胞贴附的概念及特点。
4．动物细胞体外培养的特点。
5．用于动物细胞培养的培养基类型和各自的特点。
6. 细胞传代培养的过程。
7. 细胞冷冻保存技术的原理及操作。
8. 进行动物细胞大规模培养的微载体类型。
9．疫苗的制备过程。
10．组织工程的概念。
11．干细胞概念。
12. 干细胞的形态和生化特征。
第五章细胞融合1．细胞融合的概念。
2．细胞融合的主要方法及各自的基本原理。
3. 单克隆抗体的制备过程。
第七章胚胎工程1．胚胎工程的概念。
2. 体外受精（IVF）的基本过程。
3．胚胎移植（MOET）的基本过程。
4．胚胎分割的概念。
5．试管动物的概念。
第八章细胞重组与克隆技术1．胞质体、核体以及微细胞的概念。
2．体细胞克隆的概念3．体细胞克隆的具体培育过程。
考试题型1. 名词解释（3’×8）2. 简述题（6’×6）3. 实验设计题（10’×2）4. 论述题（10’×2）。
细胞工程 复习资料
细胞工程复习资料一．细胞工程：是在细胞水平研究、开发、和利用各类细胞的一门技术。
主要内容就是通过无菌操作，大量培养细胞、组织乃至完整个体或者应用细胞生物学和分子生物学等方法进行细胞水平的遗传操作，以快速繁殖生物个体、改良品种、生产生物产品或活性成份。
二．植物细胞培养与动物细胞培养的区别？答：由于植物和动物在细胞结构、生长方式和营养要求等方面有很大的差别，尤其在全能性表现上存在差异。
1）虽然植物细胞和动物细胞的离休培养有一定的相似性，如基本上都是模拟体内的生长环境，提供良好的营养条件和物理环境，使组织细胞在体外无菌条件下继续生长发育的过程；2）培养的结果都是培养物在一定程度上表现出与体内相似的生长行为，如细胞生长、分裂、分化、代谢等。
但是二者在培养技术、研究内容及深度等方面存在一些差异：1）能进行离休培养的材料范围不同。
植物范围广，器官和组织、细胞、原生质体等；动物则主要是分散的细胞、组织块、一些小的不太成熟的器官或器官外植块。
2）所需的培养条件不同。
植物的组织和细胞培养大多在一定光照条件下进行，而动物细胞是异养的，完全依赖外界提供的营养才能生长，营养更全面，更复杂，对环境也更严格要求。
3）生长形式不同。
总的来说，植物材料在离休培养的条件下有较强的生长、分裂、及分化能力，而且由各种外植体分化成完整植株人全过程都可在体外进行；而动物组织在体外培养条件下的生长形式主要以细胞的存活生长、有限增殖以及一定程度的分化为特征。
四．一）．植物细胞全能性的概念？由谁提出？怎么实现全能性？答：植物细胞全能性：即一个植物细胞具有产生一个植株的潜能，也就是说，植物细胞具有本物种的全部遗传信息，不论是生殖细胞还是体细胞，在特定环境下都可能进行表达，产生一个独立完整个体。
由德国植物生理学家Haberlandt在1902年提出。
二）．植物细胞培养基的成分？答：（1）无机营养物（2）糖类（3）维生素类（4）氨基酸及有机附加物（5）植物生长调节物质此外，培养基中如加入0．5～1％的琼脂即为静止培养的固体培养基，否则为悬浮培养的液体培养基。
细胞工程复习复习
传代培养
无限传代
动物细胞培养条件
1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血 清等） 3、温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
植物细胞和动物细胞培养的比较
比较项目 原理 培养基性质 植物组织培养 动物细胞培养
细胞的全能性 固体培养基
细胞增殖 液体培养基
培养基特有成分
培养结果 培养目的
蔗糖、植物 激素
植物体 快速繁殖、培育 无病毒植株等
葡萄糖、动 物血清
细胞株、细胞系 获得细胞 或细胞产物
二.动物细胞核移植技术和克隆动物
动物细胞核移植概念：
将动物的一个细胞核，移入 一个已经去掉细胞核的卵母细胞 中，使其重组并发育成为一个新 的胚胎，这个新的胚胎最终发育 为动物个体（克隆动物）
动物体细胞核移植技术和克隆动物
培养的 体细胞
MⅡ卵母
细胞去核
电刺激 促融合、 分裂、 重组细胞 发育
重组胚胎 新个体
三、动物细胞融合 过程
细胞A
物理法、 化学法
制备单克隆抗体
细胞B
灭活的病毒
杂种细胞
不具有繁殖性 但具有融合性
诱导动物细胞融合与植物原生质体融合的原理和方法是否 基本相同？
植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较
细胞工程是指应用细胞生物学和分子 生物学的原理和方法，通过细胞水平或细 胞器水平上的操作，按照人们的意愿来改 变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一 门综合科学技术。
应用的原理和方法 概念 研究的水平 研究的目的 细 胞 工 程 分类 植物细胞工程
细胞工程复习资料
绪论1、细胞工程：按照一定的设计方案，通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行实验操作，获得重构的细胞、组织、器官以及个体，创造优良品种和产品的综合性生物工程。
2、体外培养：指生物细胞和组织在离体条件下的生长和增殖。
3、细胞融合或细胞杂交：指两个或两个以上的细胞融合形成一个细胞的过程。
（单克隆抗体技术）4、细胞核移植：利用显微操作技术将细胞核与细胞质分离，然后再将不同来源的核与质重组，形成杂合细胞。
（克隆羊“多利”）5、染色体工程：把单个的染色体或染色体组转入或移出受体细胞，从而形成新的染色体组合和遗传构成。
（植物育种）6、胚胎工程：指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术。
包括体外受精、胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干细胞培养等技术。
（畜牧优良品种繁殖技术）7、组织工程：将干细胞与材料科学相结合，将自体或异体组织的干细胞经体外扩增后种植在预先构建好的聚合物骨架上，在适宜的生长条件下干细胞沿聚合物骨架迁移、铺展、生长和分化，最终发育形成具有特定形态及功能的工程组织。
（人工软骨）8、转基因动物：通过基因工程技术将外源的目的基因导入生殖细胞或早期胚胎，并整合到受体细胞的基因组中，经发育形成所有细胞都包含目的基因的动物个体。
9、动物生物反应器：将目的基因在器官或组织中进行特异性高表达的转基因动物称为动物生物反应器。
（乳腺生物反应器）10、转基因植物：通过基因工程技术将外源的目的基因导入植物细胞直接进行诱导培养所形成的再生植株。
11、植物生物反应器：能够生产某些重要蛋白质和次生代谢产物的转基因植物。
第一章细胞培养的设施与基本条件1、细胞工程实验室应能进行六方面的工作：无菌操作、培养、制备、清洗、消毒灭菌处理和储藏2、超净工作台分为侧流式（垂直式）和外流式（水平式）：原理：将室内空气经粗过滤器初滤，由离心机压入静压箱，再经高效空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定的、均匀的断面风速通过无菌区，从而形成无尘无菌的高洁度工作环境。
(完整版)细胞工程复习题及答案
细胞工程复习题一、名词解释1.细胞工程：以生物细胞、组织或器官为研究对象，运用工程学原理，按照预定目标,改变生物性状,生产生物产品，为人类生产或生活服务的科学。
2.外植体:指用于离体培养的活的植物组织、器官等材料3.植物组织培养：将植物的器官、组织或细胞，在无菌条件下接种于人工配置的培养基上，使其细胞分裂、增值、分化、发育，甚至形成完整植株的方法。
4.愈伤组织：在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则细胞，多在外植体切面上产生。
5．离体无性繁殖:简称离体繁殖，是指利用组织培养方法进行植物离体培养，在短期内获得大量遗传性一致个体的方法。
6．继代培养：更换新鲜培养基来繁殖同种类型的材料（愈伤组织。
芽等）。
7。
体细胞杂交:(原生质体融合)指在人工控制条件下不经过有性过程，两种体细胞原生质体相互融合产生杂种的方法。
8 细胞分化：即由于细胞的分工而导致的细胞结构和功能的改变，或发育方式改变的过程.9 细胞脱分化：培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程就是细胞脱分化。
10 细胞再分化：即脱分化后的分生细胞在特定的条件下，重新恢复细胞分化能力，并经历器官发生形成单极性的芽或根，或经历胚胎发生形成双极性的胚状体，进一步发育成完整植物体，这一过程成为细胞再分化。
11 人工种子：指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中所形成的能发芽出苗的颗粒体。
12 植物细胞全能性：指植物体的每一个活细胞都具有该植物的全套遗传信息，具备发育完整植株的潜在能力。
13 胚状体:在离体培养过程中产生一种形似胚(具有明显的根端和芽端）,功能与胚相同的结构。
14 单倍体植物：单倍体是指具有配子体染色体数的孢子体（植物个体）。
具有单套染色体的细胞在人工离体条件下培养，使其单性发育成植物体。
这种具有单套染色体的植物称为单倍体植物.15 离体受精:（离体授粉）在无菌条件下培养未受精脂肪或胚珠和花粉，使花粉萌发进入胚珠，完成受精作用。
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⑷检查某种物质对细胞的影响，最好选用细胞 检查某种物质对细胞的影响， 中 分裂到________ ________期的细胞用显微镜观察其染色 分裂到________期的细胞用显微镜观察其染色 体，根据_____________ 根据_____________ 变异细胞占全部培养细胞的百分数 ________ ___ 可判断该物质的毒性。 可判断该物质的毒性。
*植物组织培养生殖的类型属于？ 植物组织培养生殖的类型属于？ 无性生殖
植物组织培养的应用实例
*培育无毒苗
.培育无毒苗用什 培育无毒苗用什 么材料？ 么材料？ 根尖、 根尖、茎尖 .提取紫草素应培 养进行到？ 养进行到？ ②愈伤组织 离体的植物 ① 器官、组织 器官、 或细胞
脱分化
*提取紫草素
② 愈伤组织
记 动物胚胎或幼龄动物 三、动物细胞培养 因为这些组织或器官上的细胞生 分散成单个细胞 的组织、 的组织、器官 命力旺盛， 命力旺盛，分裂能力强
细胞间有胶原蛋白 遗传物质 未改变 胰蛋白酶 细胞悬浮液 原代培养 10代细胞 代细胞 细胞株 50代细胞 代细胞 细胞系 无限传代 大部分细胞死亡 传代培养
2、下图为用细胞杂交方法培育番茄薯的过程图，请 下图为用细胞杂交方法培育番茄薯的过程图， 据图回答： 据图回答： 番茄细 胞 马铃薯 细胞 番茄马 铃薯细 1 胞 杂种植物 幼苗
2
植物组织培养 技术 细胞融合 技术 （1）过程1叫_________技术；过程2叫____________技术； 过程1 _________技术；过程2 ____________技术； 过程1之前进行____________的处理。 过程1之前进行____________的处理。 ____________的处理 破除细胞壁 （2）番茄马铃薯能相互嫁接，但进行有性杂交却无法获 番茄马铃薯能相互嫁接， 生殖隔离 得种子，这是因为二者存在着___________现象。 ___________现象 得种子，这是因为二者存在着___________现象。 （3）用这种方法进行杂交的最大优点是 打破了远源杂交不亲和的难题， 打破了远源杂交不亲和的难题，能获得种间杂种 _____________________________________。 _____________________________________。
再分化
*制造人工种子 .若想制作人工种
子应选用？ 子应选用？ ③胚状结构
③ 根或芽等器官 ④
植物体
1．(08江苏)下列关于植物组织培养的叙述 08江苏) 江苏 中，错误的是 A．培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和 调节渗透压 B．培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈 伤组织的生长和分化 C．离体器官或组织的细胞都必须通过脱分 化才能形成愈伤组织 D．同一株绿色开花植物不同部位的细胞经 培养获得的愈伤组织基因相同
构成生物体 生命的物质 的化学元素 基础 构成细胞的 化合物 植物 细胞 动物 工程
大量元素 微量元素 无机物： 无机物：水、无机盐 有机物：糖类、脂质、 有机物：糖类、脂质、pro
细胞
细胞 结构 功能
前期 中期 分裂期 后期 末期 癌变
分裂 间期
有丝 分裂
细胞 增殖 细胞 分化 生物体
成分、结构、 成分、结构、功能 结构、 结构、功能 细胞质基质 功能 液泡 无丝 线粒体 分裂 细胞质 叶绿体 结构 减数 细胞器 内质网 分裂 核糖体 功能 高尔基体 衰老 中心体 溶酶体
3.(08宁夏 3.(08宁夏 改)回答下列有关动物细胞培养的 问题： 问题： 随着细胞传代次数的增多， ⑵随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞 分裂停止，进而出现_________________现象； _________________现象 分裂停止，进而出现_________________现象； 衰老甚至死亡 但极少数细胞可以连续增殖， 但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞 不死 会因遗传物质发生改变而变成________细胞， ________细胞 会因遗传物质发生改变而变成________细胞， 该种细胞的黏着性________ ________， 降低 该种细胞的黏着性________，细胞膜表面蛋 白质（糖蛋白）的量________减少 白质（糖蛋白）的量________，这种传代细 ________， 胞称为__________ __________。 胞称为__________。 细胞系
3.(08宁夏 改)回答下列有关动物细胞培养的 3.(08宁夏 问题： 问题： 现用某种大分子染料，对细胞进行染色时， ⑶现用某种大分子染料，对细胞进行染色时， 观察到死细胞被染色，而活细胞不染色， 观察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因 是 由于活细胞的膜具有选择透过性， 由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入 ________________________________________ 活细胞内，故活细胞不能着色（ 活细胞内，故活细胞不能着色（或由于死细胞的膜丧失 ________________________________。 ________________________________。
（3）过程③采用的实验技术 过程③ 是 细胞融合 获得的X ，获得的X 是 杂交瘤细胞。 单克隆抗体制备过程中， （4）单克隆抗体制备过程中， 骨髓瘤细胞和B 骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融 合后， 合后，要用特定培养基筛选出杂 交瘤细胞。 交瘤细胞。在这种培养基上不能 存活、增殖的细胞是（填序号）： 存活、增殖的细胞是（填序号）： ①②③④ _______________① _______________①B淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞③ ②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞 自身融合细胞④ 自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞 自身融合细胞⑤ 自身融合细胞⑤杂交瘤细胞
D
二、植物体细胞杂交过程
原生质体制备（酶解法去细胞壁） 原生质体制备（酶解法去细胞壁）
原生质体融合（人工诱导） 原生质体融合（人工诱导）
纤维素酶、果胶酶等 纤维素酶、
杂种细胞的筛选和培养（植物组织培养） 杂种细胞的筛选和培养（植物组织培养）
杂种植株的再生与鉴定
物理法：离心、振动、 物理法：离心、振动、电刺激等 化学法： 化学法：聚乙二醇等试剂
3.(08宁夏 3.(08宁夏 改)回答下列有关动物细胞培养 的问题： 的问题： 冷冻 在细胞培养过程中，通常在________ ________条件 ⑸在细胞培养过程中，通常在________条件 下保存细胞。因为在这种条件下， 下保存细胞。因为在这种条件下，细胞中 新陈代谢 ________的活性降低 细胞____________ 的活性降低， ____________的 ________的活性降低，细胞____________的 酶 速率降低。 速率降低。 给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后， ⑹给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后， 发生了排斥现象， 发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮 肤组织当作________________进行攻击。 ________________进行攻击 肤组织当作________________进行攻击。 抗原
（5）与传统的从血清中提取的 抗体相比， 抗体相比，单克隆抗体的优点是 化学性质单一、特异 化学性质单一、 性强、 性强、灵敏度高 （6）用此单抗制成“生物导 用此单抗制成“ 其中抗体的作用是： 弹”，其中抗体的作用是： 将药物定向带到患病细胞所在部位
（7）对健康人进行该传染病免 疫预防时， 疫预防时，可选用图中基因工程 所制备的疫苗。 生产的 A蛋白 所制备的疫苗。 对该传染病疑似患者确诊时， 对该传染病疑似患者确诊时，可 从疑似患者体内分离病毒， 从疑似患者体内分离病毒，与已 核酸（基因） 比 知病毒进行 核酸（基因）序列 进 较；或用图中的 行特异性结合检测。 行特异性结合检测。 抗A蛋白的单克隆抗体
四、单克隆抗体制备过程： 单克隆抗体制备过程：
注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、 细胞融合、筛选
选择性培养基） （选择性培养基）
思考： 思考：此过程制备 的单克隆抗体能否 用于人体疾病的治 为什么？ 疗？为什么？
不能，小鼠的效应Ｂ 不能，小鼠的效应Ｂ 细胞产生的抗体与人 的效应Ｂ 的效应Ｂ细胞产生的 抗体不同． 抗体不同．
细胞膜 细胞核
杂交瘤细胞
细胞培养 筛选， 筛选，继续培养
足够数量的、 足够数量的、能产生 特定抗体的细胞群
体外培ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 注射到小鼠腹腔
单克隆抗体
4.（09山东 4.（09山东 改）人类在预防与 诊疗传染性疾病过程中， 诊疗传染性疾病过程中，常使用 疫苗和抗体。 疫苗和抗体。已知某传染性疾病 的病原体为RNA病毒， RNA病毒 的病原体为RNA病毒，该病毒表 面的A蛋白为主要抗原， 面的A蛋白为主要抗原，其疫苗 生产和抗体制备的流程之一如下 请回答： 图，请回答： 过程① （1）过程①代表的是 逆转录 。 （2）过程②构建A基因表达载体时， 过程②构建A基因表达载体时， 必须使用 限制性内切酶 和 DNA连接酶 DNA连接酶 两种工具酶。 两种工具酶。
记
遗传物质改变， 遗传物质改变， 无限增殖
动物细胞培养不能 最终培养成生物体
3.(08宁夏 3.(08宁夏 改)回答下列有关动物细胞培养的 问题： 问题： 在动物细胞培养过程中， ⑴在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生 长到细胞表面_________ _________时 长到细胞表面_________时，细胞会停止分裂 相互接触 增殖。此时， 增殖。此时，瓶壁上形成的细胞层数是 单层 _________。 _________。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下 需要用_________酶处理。 _________酶处理 胰蛋白 来，需要用_________酶处理。分离下来的细 胞配置成细胞悬浮液，再进行培养， 胞配置成细胞悬浮液，再进行培养，称为 ______________。 ______________。 传代培养