实验1.2 培养基的配制(2016)
培养基配置
1000ml
自然 pH
实验器材
牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂，1mol/LNaOH, 1mol/LHCl，KNO3，K2HPO4·3H2O， MgSO4·7H2O，FeS04·7H2O，马铃薯，蔗糖等。
试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙， pH 试纸(pH 5.5~9.0)，
pH 值调到一定的范围。 牛肉膏蛋白胨培养基配方
牛肉膏 蛋白胨
3.0 g 10.0g
NaCl
5.0g
水
1000mL
pH
7.4~7.6
高氏 I 号培养基配方
可溶性淀粉 20g
NaCl 0.5g
KNO3 1g K2HPO4·3H2O MgSO4·7H2O FeSO4·7H2O 琼脂 15—25g
0.5g 0.5g 0.01g
水 1000mL
pH 7.4~7.6
马铃薯培养基配方
马铃薯（去皮）
200g
葡萄糖（或蔗糖）
20g
琼脂 水
15~25g 1000ml
自然 pH 察氏培养基配方
蔗糖
30g
NaNO3
2g
K2HPO4
1g
KCl
0.5g
MgSO4· 7H2O
0.5g
FeSO4· 7H2O 琼脂
0.01g 15~25g
蒸馏水
以上熔化成液体，而在 45℃左右开始凝固成固体。在配制培养基时，根据各类微生物的特 点，就可以配制出适合不同种类微生物生长发育所需要的培养基。
培养基除了满足微生物所必需营养物质外，还要求有一定的酸碱度和渗透压。霉菌和酵
母菌的 pH 偏酸；细菌、放线菌的 pH 为微碱性。所以每次配制培养基时，都要将培养基的
实验二.培养基的配制及灭菌
实验二培养基的配制及灭菌一、实验目的：1. 掌握常用培养基的制备方法；2. 了解培养基的成分、类型及特点；3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。
4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。
二、实验原理人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。
培养基的主要成分的详细内容见课本p26~29。
为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。
基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。
在配制母液时应注意防止沉淀产生。
绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要时加入稀酸或稀碱等物质促溶。
各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。
通常使用的浓度单位是mg/L。
配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。
灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。
培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间见课本P32表2ˉ2。
培养基必需保证绝对无菌，否则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生而导致植物死亡。
灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。
（一）、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
植物组织培养实验报告
院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师）年级13级学号17130208 组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期2016.3-6指导老师实验名称植物组织培养综合实验一、实验目的1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法；3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法；4.了解组织培养的基本程序；5.掌握接种的方法和材料的培养过程；6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术；7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体；8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别二、实验原理1.植物细胞的全能性一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。
植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。
2.植物细胞表现出全能性的条件1.离体状态；2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）；3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型3.无菌条件把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。
用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。
在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。
组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。
4.脱分化与愈伤组织已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。
脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。
所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。
5.培养基植物组织培养常用的培养基为MS培养基。
常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。
培养基的配制及灭菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）n源：包括无机氮和有机氮。
（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。
微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
培养基的配制及灭菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）n源：包括无机氮和有机氮。
（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。
微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
培养基的配制
• 干热灭菌 • 湿热灭菌
• 过滤除菌 • 辐射灭菌
• 放射线辐照灭菌 • 紫外线灭菌
• 化学药品灭菌
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一般培养基用0.1Mpa，121.5℃,15～ 30min可达到彻底灭菌的目的。灭菌的温 度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量 等具体情况而有所改变。
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过滤除菌
定无菌生长，方可使用。
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几种常用培养基配方
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：
牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0g
NaCl 水 pH
5.0g 1000ml 7.4～7.6。
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高氏Ⅰ号培养基配方如下：
可溶性淀粉
20g
NaCl
0.5g
KNO3 K2HPO4·3H2O MgSO4·7H2O FeSO4·7H2O
• 碳源：提供微生物繁殖所需碳元素的营养物质。用途：糖、 蛋白质、核酸合成。
• 氮源：提供微生物繁殖所需氮元素的营养物质。用途：蛋 白质、核酸合成。
• 能源：提供微生物生命活动最初能量来源的营养物或辐射 能。
• 生长素：微生物生长必需，但又不能自行合成的有机物。 • 无机盐：提供微生物繁殖所需各种重要元素。 • 水分：水是保证生命活动重要的介质。
• 称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 • 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。 • 调pH值：用1MNaOH或1MHCl调pH，用pH试纸对照。 • 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。 • 分装：注意不要污染棉塞。 • 包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培养基。 • 灭菌备用：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h，确
琼脂
菌株培养操作规程
菌株培养操作规程1.菌株培养1.1仪器的灭菌将养菌所需的所有仪器放在高压锅内灭菌，然后放入烘箱烘干，在实验操作前30min放入无菌操作台，打开紫外灯，待用。
1.2培养基的配制按照配方配置肉汤固体培养基250ml，肉汤液体培养基250ml，120度高压灭菌，放置于冰箱4℃备用。
（培养基的配制参照《微生物学实验》，徐威主编，中国医药科技出版社，第172页，微生物实验常用培养基配方）1.3菌株传代将高压灭菌完的固体培养基在酒精灯上融化，待温度降到45℃左右，取无菌培养皿，打开，沿着培养皿一侧倒入固体培养基，倒入的量是培养皿体积的1/3时停止，将培养皿盖好盖子，放在无菌操作台上，待培养基凝固。
取出从医院拿回的菌株（标记为F0代，一直储存在4℃，在操作前半个小时放在室温下适应），用接种环取一环接种于凝固好的固体培养基上，放入37℃细菌培养箱中培养18h。
培养18h后，得到F1代菌，将其保存于冰箱4℃（从医院取回的菌株数量有限，并且不能长期保存，为了后面的实验有足量的菌株完成实验，所以大量传代得到F1代菌，保存于冰箱，以后的实验都是从F1代菌开始进行）。
2.菌株保存2.1菌株短期保存从医院取回的菌株（F0代）,通过传代得到F1代菌，用胶带将培养皿封存好，放置于冰箱4℃保存，称为短期保存。
短期保存的时间一般为20天到一个月。
2.2菌株的长期保存取无菌培养皿，倒入融化的固体培养基，待培养基凝固后，用接种环取一环F1代菌接种于培养皿上，放入37℃细菌培养箱培养18h得到F2代菌。
用移液枪取2ml无菌液体培养基于试管中，用接种环取一环F2代菌接种于试管中，放入细菌培养箱培养8h。
取100ml无菌锥形瓶，倒入50ml液体培养基，用移液枪从试管中取0.5ml菌液于100ml锥形瓶中，37℃摇床培养16h得到F3代菌。
将买回的甘油配成80%浓度，然后将甘油和F3代菌液按体积比1:1混合，再用移液枪将混合液吸入冻存管中，1ml/管，在冻存管上用记号笔标记冻存菌液的名称，代数，日期，放入冰箱-20℃保存，保存年限为1-2年，此保存法称为“甘油管冻存法”。
培养基配方及配置
培养基配方及配置
一般来说，培养基的配方包含基础培养基、添加剂和调节剂。
基础培养基是指提供生物体基本生长必需的基本成分，包括能源物质、有机和无机原料、氮源、矿质元素和缓冲物质等。
常用的基础培养基有
LB培养基、MS培养基等。
添加剂是指用于满足特定实验需求的成分，如抗生素、抗菌剂、激素、维生素等。
添加剂的种类和浓度根据实验目的的不同而有所差异。
调节剂是指用于调节培养基pH值、渗透压、表面张力等物理化学性
质的成分，如缓冲液、pH调节剂等。
以下是一个常用的细菌培养基LB的配方及配置：
1.基础培养基成分：
- 水：900ml
-蛋白胨：10g
-酵母提取物：5g
-NaCl：5g
2.添加剂：（可根据实验需求进行必要的添加）
- 抗生素（如氨苄青霉素）：100μg/ml
- 抗菌剂（如氯霉素）：25μg/ml
3.配制方法：
-将蛋白胨、酵母提取物和NaCl加入水中，并搅拌混合均匀。
- 将培养基溶液倒入容量瓶中，加水至1000ml，并混合均匀。
-调节pH值至7.0-7.2（一般使用缓冲液进行调节）。
-用自制滤纸过滤器滤过，将溶液分装至培养皿或试管中。
-如需添加抗生素或抗菌剂，将相应的药物加入培养基中，并充分溶解。
-培养基装瓶后可以高温高压灭菌，或使用滤器过滤进行无菌处理。
以上是一个简单的LB培养基的配方和配置流程，不同实验需要可能
会有所调整和变化。
在设计培养基配方时，需要结合具体实验目的和生物
体的特性来确定合适的成分和浓度，并注意配制和保管过程中的无菌操作，以确保培养基的质量和有效性。
培养基的配制方法
培养基的配制方法培养基是微生物学、生物学等实验中将微生物培养的一种物质基质，它提供了微生物生长所必需的营养和环境条件。
培养基的配制方法主要包括选择基质、添加营养成分、调节pH值、灭菌和包装等步骤。
以下是一般的培养基配制方法及注意事项。
1.选择基质培养基的基质可以选择为水或含有必要营养成分的溶液。
一般情况下，使用蒸馏水或双蒸馏水作为基质是比较常见的选择。
2.添加营养成分培养基中必须添加适当的营养成分，以满足微生物的生长需求。
常用的营养成分有碳源、氮源、无机盐、维生素和生长因子等。
常用的碳源有葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等，常用的氮源有氨基酸、酵母浸出物、肉浸出物等。
此外，还可以根据微生物的特殊要求增加一些其他的营养成分。
3.调节pH值pH值对于微生物的生长十分重要，大多数微生物的最适生长pH在6.5-7.5之间。
因此，培养基在配制过程中需要进行pH值的调节。
可以使用酸碱溶液（如HCl和NaOH）进行pH调节，并通过使用pH试纸或pH计监测pH值。
4.灭菌培养基的灭菌工作非常重要，它可以防止杂菌的污染。
常用的灭菌方法有高压灭菌、干热灭菌和滤过灭菌等。
高压灭菌是指将配制好的培养基放置在高压锅中，经过高温高压的处理。
干热灭菌是将配制好的培养基放置在烘箱中进行加热处理。
滤过灭菌是将培养基通过0.22um的无菌滤膜过滤，以去除微生物。
灭菌后，需要用无菌操作将培养基倒装入无菌培养器皿中。
5.包装灭菌后的培养基需要进行包装保存，以防止污染。
常用的包装方式有试管包装、琼脂平板包装和瓶装包装等。
试管包装是将培养基倒入试管中，用苏打棒打破试管口，并通过注封的方法密封试管。
琼脂平板包装是将培养基倒入无菌琼脂平板中，并使用无菌的平板封口膜密封。
瓶装包装是将培养基倒入无菌玻璃瓶中，用无菌胶塞封闭瓶口。
在配制培养基的过程中，还需要注意以下几点：1.保持操作环境无菌，使用无菌操作台、无菌器具和无菌操作方法。
2.注意各种添加物的浓度，不可过量或过少。
珂字棉312组织培养体系的建立
珂字棉312组织培养体系的建立作者：邹甜郑顺利匡琛周仲华来源：《棉花科学》2016年第04期摘要：以珂字棉312为试验材料，以无菌苗的下胚轴为外植体诱导愈伤，并将愈伤组织置于不同培养基下诱导分化，初步建立棉花组织培养体系。
结果表明：一是对珂字棉312组织培养体系建立较好的各阶段培养基分别是愈伤组织诱导培养基为MS+0.1 mg/L 2，4-D+0.5 mg/L KT+30 g/L 葡萄糖+8 g/L琼脂，胚性愈伤组织的诱导培养基为MS +30 g/L葡萄糖+2.5 g/L phytagell，分化培养基为MS+0.1 mg/L IAA +30 g/L葡萄糖+2.5 g/L phytagell，生根培养基为MSB5 （双倍KNO3，无NH4NO3）+0.1 mg/L GA3 +30 g/L葡萄糖+2.5 g/L phytagell；二是各培养基调节pH值为5.8，培养温度为28℃时能够获得植株再生体系。
关键词：棉花；珂字棉312；组织培养中图分类号： S562. 文献标识码： A 文章编号：2095-3143（2016）04-0003-05Abstract： Using the Coker 312 cotton cultivar as experimental material， We took its aseptic seedling’s hypocotyl as explant for callus induction， then took the callus into different culture medium for inducing differentiation and preliminarily built cotton tissue culture system. The results showed： first， the better culture mediums for the estabishment of the tissue culture system of Coker 312 in each stage were respectively that the callus-inducing medium was MS+0.1 mg/L 2，4-D+0.5 mg/L KT+30 g/L glucose+8 g/L agar， Induction medium of embryogenic callus was MS+30 g/L glucose +2.5 g/L phytagel， differential medium was MS+0.1 mg/L IAA +30 g/L glucose +2.5 g/L phytagel， rooting medium was MSB5 （double KNO3， without NH4NO3）+0.1 mg/L GA3 +30 g/L glucose +2.5 g/L phytagel； second， the suitable pH value and culture temperature of culture medium for obtaining plant regeneration system were respectively 5.8 and 28 ℃.Key words： Cotton； Coker 312； Tissue culture0 引言棉花组织培养技术自Price和Smith在1979年第一次报道以来发展较快，目前已经建立了多个不同棉花品种的再生培养体系，例如谢德意，等[1]在2007年建立了鄂抗棉3号、鄂抗棉5号、鄂棉20、鄂棉23、豫棉9号、豫早73、豫棉12、豫棉1221等8个品种植株再生体系；孙京燕，等[2]在2009年建立了一套简便高效的低酚陆地棉直接体细胞胚胎发生和植株再生组织培养体系；罗晓丽，等[3]建立了晋棉5号、中棉所27和辽棉10号等3个早熟棉品种的再生组织培养体系；周晶，等[4]建立了新陆早19号和新陆早23号的再生组织培养体系；刘丽，等[5]通过对新陆早32号和新陆早33号的诱导研究，建立了它们的再生组织培养体系。
培养基的制备实验报告
培养基的制备实验报告
实验目的，通过本次实验，掌握培养基的制备方法，为后续微生物实验提供基
础条件。
实验原理，培养基是微生物生长繁殖的营养物质，其主要成分包括碳源、氮源、磷源、微量元素和水。
培养基的制备需要根据不同微生物的生长需求进行配方，通常包括基础培养基和选择性培养基两种类型。
实验步骤：
1. 称取适量蔗糖和琼脂，加入蒸馏水中，混合搅拌至完全溶解；
2. 加入适量氨基酸、磷酸盐和微量元素，搅拌均匀；
3. 调节pH值至7.0，加热煮沸，然后灭菌；
4. 倒入培养皿中，待凝固后即可使用。
实验结果，制备好的培养基呈黄色透明凝胶状，无异味，pH值稳定在7.0左右。
实验分析，本次实验中，我们成功制备了基础培养基，为后续微生物的培养提
供了必要条件。
在实验过程中，需要注意控制好各种原料的比例和加热时间，以保证培养基的质量和稳定性。
实验结论，通过本次实验，我们掌握了基础培养基的制备方法，并取得了良好
的实验结果。
培养基的质量对微生物的培养和研究具有重要影响，因此在实验过程中需要严格按照配方和操作规程进行操作，确保培养基的质量和稳定性。
实验改进，在今后的实验中，可以尝试制备不同类型的培养基，以满足不同微
生物的生长需求，并且可以对培养基的配方和制备工艺进行进一步优化，提高培养基的质量和效率。
总结，培养基的制备是微生物实验的基础，掌握好培养基的制备方法对于后续实验的顺利进行具有重要意义。
通过本次实验，我们对培养基的制备方法有了更深入的理解，为今后的实验工作奠定了基础。
以上就是本次培养基的制备实验报告内容，希望对大家有所帮助。
培养基的配制实验报告
培养基的配制实验报告实验名称：培养基的配制实验报告实验目的：掌握微生物培养基的配制方法及影响因素，加深对微生物生长和培养的认识。
实验原理：微生物的生长和培养需要用到适宜的培养基。
培养基的成分和配制方法不同会对微生物生长和培养产生影响。
本实验选用普通营养琼脂培养基为例，以掌握培养基制备的基本方法和技术操作。
实验材料：普通营养琼脂培养基粉末、培养基配制器具（烧杯、量筒、过滤器、移液器等）、革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌。
实验步骤：1. 称取所需的琼脂粉末，按照要求的比例加入适量的蒸馏水中，溶解均匀。
2. 用不锈钢网过滤琼脂溶液，去除颗粒和杂质，减小后续培养的干扰。
3. 将琼脂溶液分装至烧杯中，加热至溶解，然后用自由落滴法测定琼脂的pH值。
4. 加入所需的营养成分，如碳源、氮源、矿物质等，调节培养基的成分。
同时，根据需求在培养基中加入相应抗生素或生长因子。
5. 将培养基配制至预定体积，混合均匀后用带滤芯的移液器过滤。
6. 将培养基分装至耐热培养皿中，约1/3满，放入高压灭菌锅中高压灭杀15-20分钟。
7. 取出被高压灭菌的培养皿，放置至室温下自然冷却或以水冷却。
8. 在无菌条件下将预先生长的细菌转移到已灭菌的琼脂培养基中，然后在适宜的环境下进行培养观察。
实验结果和分析：本实验制备的普通营养琼脂培养基满足生长条件，多种菌种都能够成功生长。
制备过程中，各个步骤都需要精确、细致地操作，如琼脂的过滤、配制和自由落滴pH值的测定、高压灭菌等。
这些步骤的误差可能会导致培养基的成分产生变化，进而影响培养效果。
结论：微生物的培养需要适宜的培养基，不同生物和实验需求需要不同的配方和配制方法。
掌握基础的培养基配制技术，能够快速、精准地制备适宜的培养基。
这对于微生物研究和应用有着重要的意义。
培养基配制和灭菌方法验证
培养基配制和灭菌方法验证一、培养基配制培养基是一种供养菌落生长的基础物质，可以提供细菌所需的营养物质和环境条件。
培养基的配制是非常关键的步骤，如果配制不当会影响到培养菌落的生长和观察结果的准确性。
1.1固体培养基的配制固体培养基是通过在液体培养基中加入凝固剂（如琼脂）使其凝固，形成固体的培养基。
固体培养基可以用来分离纯菌、观察菌落特征以及保存菌种。
配制固体培养基的主要步骤如下：步骤一：准备配方根据不同的菌种需要，选择适当的培养基配方。
常见的培养基如营养琼脂(NA)、大肠杆菌琼脂(MacConkey)、血琼脂(Blood Agar)等。
步骤二：计量和溶解根据配方，按照适当的比例称量需要的成分，并加入适量的蒸馏水。
然后，将成分加热溶解，直至成分完全溶解。
步骤三：凝固将已溶解的培养基液倒入培养皿或试管中，装入适量的培养基液。
温度下降至约50℃时，可以添加相应的抗生素(如青霉素)等，促进无菌条件的保持。
待培养基液凝固后，即可进行灭菌处理。
1.2液体培养基的配制液体培养基主要用于培养大量的菌落或进行革兰氏染色等实验。
液体培养基的配制步骤与固体培养基配制类似，只是不需要加入凝固剂。
为了确保培养基无菌，常常需要进行灭菌处理。
2.1常见的灭菌方法常见的灭菌方法主要包括以下几种：1)高压灭菌法：利用高温高压的环境，将培养基中的微生物逐一被杀死。
常用的高压灭菌法是使用高压蒸汽灭菌器进行处理。
2)紫外线灭菌法：使用紫外线灭菌器，将细菌暴露在紫外线下，排除细菌生长的可能性。
3)化学灭菌法：使用化学物质，如乙醛、次氯酸钠等，浸泡培养基或在培养基上喷雾，杀灭细菌。
2.2检验培养基灭菌效果的验证方法验证培养基灭菌效果的方法主要有两种：物理指标法和培养法。
1)物理指标法：即通过检测物理指标，如温度、压力等，来验证灭菌效果。
例如，在培养基中放置一个温度计，通过测量温度变化来判断灭菌的有效性。
2)培养法：即将培养基在灭菌前后进行对照培养，观察菌落的生长情况，或通过采样培养基，进行菌种分离和鉴定。
培养基的配制
培养基的配制简介培养基是用于在实验室中培养和繁殖各种微生物或细胞的基础物质。
正确的培养基配制对于成功进行实验和研究非常重要。
本文将介绍培养基的配制过程和常用的配方。
培养基的配方培养基的配方通常包含以下几个组分：1.碳源：提供能量和碳原子，常用的碳源有葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等。
2.氮源：提供微生物或细胞合成蛋白质和核酸的氮原子，常用的氮源有氨基酸、尿素、硝酸盐等。
3.矿物盐：提供微生物或细胞所需的微量元素，如钠、钾、镁、铁等。
4.生长因子：对于特定微生物或细胞的生长和生理活性非常重要，如维生素、激素等。
5.pH 缓冲剂：维持培养基的酸碱平衡，通常使用磷酸盐缓冲盐、碳酸盐等。
6.凝固剂：用于使液体培养基成为固体培养基，常用的凝固剂有琼脂、琼脂糖等。
常见培养基配方示例LB 培养基（大肠杆菌培养基）LB 培养基是一种常用的通用培养基，适用于大肠杆菌等许多细菌的培养。
配方： - 蛋白胨：10 g - 酵母提取物：5 g - NaCl：10 g - pH 缓冲剂（磷酸盐缓冲盐）：1 g - 水：1 L将以上所有成分加入适量的蒸馏水中，加热搅拌至完全溶解后，使用滤器或高温高压灭菌器对培养基进行灭菌。
冷却后即可使用。
DMEM 培养基（哺乳动物细胞培养基）DMEM 培养基是一种常用的哺乳动物细胞培养基，适用于许多哺乳动物细胞的培养。
配方： - DMEM 培养基粉末：1 包（可在生物实验试剂商店购买） - 葡萄糖：4 g - 生长因子（如胰岛素、转铁蛋白等）：依需求添加 - 水：1 L按照包装上的说明将 DMEM 培养基粉末溶解于适量的蒸馏水中，加入葡萄糖和所需的生长因子，搅拌均匀后使用滤器或高温高压灭菌器对培养基进行灭菌。
注意事项在进行培养基的配制时，有几点需要特别注意：1.使用无菌操作：在配制培养基的过程中，需要保持无菌操作，使用无菌器材和试剂，避免污染。
2.严格按照配方比例配制：不同微生物或细胞对于培养基成分的需求是不同的，需要严格按照配方比例进行配制。
培养基制备实验实训报告
一、实验目的1. 理解培养基制备的基本原理和方法。
2. 掌握牛肉膏蛋白胨培养基的配制过程。
3. 学习培养基消毒和灭菌的操作技术。
4. 熟悉实验室无菌操作规范。
二、实验原理培养基是微生物生长繁殖的必需物质，它为微生物提供碳源、氮源、水、无机盐和生长因子等营养物质。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的通用培养基，适用于多种微生物的培养。
三、实验材料与仪器材料：- 牛肉膏- 蛋白胨- 氯化钠- 琼脂- 蒸馏水- pH试纸- 灭菌剂仪器：- 电子天平- 烧杯- 玻璃棒- 锥形瓶- 高压灭菌锅- 无菌操作台- 移液管- 研钵- 玻璃珠四、实验步骤1. 称量：称取牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g，放入烧杯中。
2. 溶解：加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌至完全溶解。
3. 调节pH：使用pH试纸测定溶液的pH值，调节至7.4-7.6。
4. 加琼脂：称取琼脂15g，加入锥形瓶中，加入适量蒸馏水，加热溶解。
5. 混合：将溶解好的琼脂溶液倒入含有牛肉膏蛋白胨溶液的烧杯中，用玻璃棒搅拌均匀。
6. 分装：将混合好的培养基分装到锥形瓶中，每瓶约100mL。
7. 灭菌：将锥形瓶放入高压灭菌锅中，121℃灭菌15分钟。
8. 冷却：将灭菌后的培养基取出，待冷却至50-60℃。
9. 倒平板：将冷却后的培养基倒入无菌平皿中，用玻璃棒轻轻搅拌，使培养基均匀铺平。
10. 凝固：待培养基凝固后，进行无菌试验。
五、实验结果与分析实验过程中，成功制备了牛肉膏蛋白胨培养基，并进行了无菌试验。
结果表明，培养基制备过程符合无菌操作规范，无污染现象。
六、实验讨论1. 在培养基制备过程中，应注意称量准确，避免误差。
2. 溶解过程中，应充分搅拌，确保各成分均匀分布。
3. 调节pH值时，应使用pH试纸，避免使用pH计。
4. 灭菌过程中，应严格控制时间，避免过度灭菌或灭菌不足。
5. 倒平板过程中，应避免产生气泡，影响平板质量。
七、实验总结本次实验成功制备了牛肉膏蛋白胨培养基，并掌握了培养基制备的基本原理和方法。
培养基的配置
菌素的效价等。
3.按培养基的特殊用途
①选择性培养基:根据不同的微生物对营养的特殊要求,或对 物理化学条件的抗性而设计的培养基，利用这一类培养基可 以把需要微生物从混杂的其他微生物分离和确定。 ②加富培养基: 加入血、血清或动植物提取液用以培养对营 养要求苛刻的异养微生物。 ③鉴别培养基:是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使 培养菌产生某种变化，从而区别不同的微生物的生长。如加 入刚果红培养根瘤菌，根瘤菌不着色，以区别染上红色的其 他细菌，以鉴别不同微生物。
4、灭菌 用漏斗将完全熔化的上述培养基趁热倒入 250ml的三角烧瓶加塞后 ，外包两层牛皮纸（用纱绳以活结形式扎好），置于灭菌锅中以 1.05kg/cm2、121℃,15—30分钟高压蒸汽灭菌。同时还须将洗净、 干燥的培养皿套上牛皮纸包扎后一起灭菌。
5、分装 待灭菌好的培养基冷却到50℃左右，在启动的超净工作台上打开牛 皮纸，用酒精灯火焰烧瓶口后，分装于灭过菌的培养皿中备用。
培养自养型微生物，培养基只需简单的无机物；
培养异养型微生物，培养基应有≥1种有机物； 对营养缺陷型微生物，要加所需的生长素或氨基
酸或碱基等有机化合物；
若要分离培养某种特异的微生物要根据特殊要求
配制培养基。
2. 注意营养物质的浓度比和C/N比
C/N:一般指元素C/N的比值，也指培养基中还原糖的
3、调PH
在未调PH前，先用精密PH试纸测量培养基的原始PH值，而后加入 10%NaOH或10%盐酸调节PH达7.2—7.4。
微生物的生长繁殖除需要一定的营养物质外，还要求适当的PH范围。 不同微生物对PH要求不同，霉菌和酵母菌的培养基PH是偏酸性的，而 细菌和放线菌的培养基PH为中性或微碱性。所以配制培养基时，要根 据不同微生物对象将PH值调到合适的范围。
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二.大肠杆菌的培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
㈡培养大肠杆菌：
1.接种：
划线法 2.培养：
将接种后的平板倒置放入37℃恒温箱中培养2～3d
Q：为什么划线法接种能观察到单个菌落？
划线法接种时，使接种物逐渐稀释，最后 出现单个细菌，培养后出现单个菌落。
划线
划线法优点：
可对微生物进行分离、纯化，获 得单一菌落
4、调节pH
5、分装
6、灭菌
灭菌——高压灭菌
1.05kg/cm2、121℃，15—30min
灭菌锅
高压灭菌作用：杀死所有活的微生物及芽孢
（补充：倒“平板”）
超 净 工 作 台
约50℃
倒平板
灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基
防止培养皿盖上的水珠滴落污染培养基
7、恒温培养（恒温培养箱）
培养基的配制
计算
加热熔化琼 脂（搅拌）
定容 调节PH至 7.2-7.4
称量
熔化
调节pH
分装
恒温培养
灭菌
倒入三角烧瓶，与 其他器具一起放入 灭菌锅 高压灭菌
（一般需要作无菌检查）
核心：保证无菌操作
超净工作台、酒精灯火焰旁操作
超净工作台
1、如何检验培养基是无菌的？
将未接种的培养基放在恒温培养箱中适宜条 件下培养2-3d，如果无菌落产生，则培养基 是无菌的。 2、常用灭菌方法有哪些？
微生物重点实验2 ——微生物的培养
•掌握划线法接种方法与作用
菌落是由单个细胞分裂形成的种群
补充：菌落 1.定义： 单个 菌体 固体培养基上
大量繁殖
子细胞群体
2.特征： 大小、形状、光泽度、 颜色、硬度、透明度等。 3.功能： 鉴定菌种的重要依据
常用工具图示
接种环
玻璃刮铲
微生物（如大肠杆菌）的培养：
用于培养基、培养皿、锥形瓶等 高压（蒸气）灭菌 灼烧灭菌 用于接种环等金属器具
3、消毒与灭菌的区别
（1）消毒（如巴氏消毒法62℃，30min、酒精 擦拭等）仅杀死活的微生物，不能杀死芽孢。
（2）灭菌（高压灭菌1.05kg/cm2、121℃、1530min；灼烧灭菌、干热灭菌等）能杀死所有微 生物及其芽孢。
大肠杆菌菌落 菌落灰白色，圆形，透明或半透 明
枯草杆菌菌落 菌落灰白色，较 大，边缘比较粗 糙
滕黄八叠球菌菌落 菌落黄色，圆形、边缘 光滑
为什么在操作的第一步以及每次划线之前都 要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要 灼烧接种环吗？为什么？ 操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上 的微生物污染培养物 杀死残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种 直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次 数的增加，使每次划线时接种物逐渐稀释，培 养后得到单个菌落。 避免接种环上的细菌污染环境和感染操作者。
㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算 2.称量 3.熔化 4.调节pH 5.分装 6.灭菌 7.恒温培养
二.大肠杆菌的培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ㈡培养大肠杆菌： 1.接种： （超净工作台上、酒精灯火焰旁进行） 划线法 冷却后刮取菌苔 接种环
菌种
划线法接种： 使接种物逐渐 稀释，培养后 出现单个菌落 划线法接种
微生物重点实验1
——实验1.2 培养基的配制
• 学习目标：
– 掌握培养基的配制的过程 – 理解无菌操作
组内合作：
1、说出培养基配制流程；
2、讨论消毒与灭菌的区别，小结常用
NaCl H2O 琼脂 5.0g 10.0g 5.0g 1000mL 2.0g
2、称量
3、熔化
3、下列对于灭菌和消毒的理解，不正确的是（ B ） A.灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B.消毒和灭菌实质上是相同的 C.接种环用灼烧法灭菌 D.常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸气灭 菌等
4、培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、
空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是（
①化学消毒 ④紫外线消毒 A.⑤⑤②①④⑥ ②灼烧灭菌 ⑤高压灭菌 ③干热灭菌 ⑥巴氏消毒法
A
）
B.①②③④⑤⑥
C.⑥②③④①⑤
D.③④②①⑥⑤
1、鉴别培养基是否被杂菌污染的方法是（ A.将未接种的培养基放在实验桌上培养 B.将未接种的培养基放在窗台上培养 C.将未接种的培养基放在恒温培养箱中培养 D.将已接种的培养基放在恒温培养箱中培养
C
）
2、要将配制好的培养基进行灭菌，通常采用的方 法是（ B ） A.灼烧灭菌 B.高压蒸气灭菌 C.干热灭菌 D.煮沸灭菌