Jackson酶标二抗说明书
二抗及酶联物稀释液
Zeus(优仕) EB VCA IgG ELISAEB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）是Epstein和Barr于1964年首次成功地将Burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒，故名。
一、生物学性状EB病毒的形态与其他疱疹病毒相似，园形、直径180nm，基本结构含核样物、衣壳和囊膜三部分。
核样物为直径45nm的致密物，主要含双股线性DNA，其长度随不同毒株而异平均为17.5×104 bp分子量108。
衣壳为20面体立体对称，由162个壳微粒组成。
囊膜由感染细胞的核膜组成，其上有病毒编码的膜糖蛋白，有识别淋巴细胞上的EB病毒受体，及与细胞融合等功能。
此外在囊膜与衣壳之间还有一层蛋白被膜。
EB病毒仅能在B淋巴细胞中增殖，可使其转化，能长期传代。
被病毒感染的细胞具有EBV的基因组，并可产生各种抗原，已确定的有：EBV核抗原（EBNA），早期抗原（EA），膜抗原（MA），衣壳抗原（VCA），淋巴细胞识别膜抗原（LYDMA）。
除LYDMA 外，鼻咽癌患者EBNA、MA、VCA、EA均产生相应的lgG和LgA抗体，研究这些抗原及其抗体，对阐明EBV与鼻咽癌关系及早期诊断均有重要意义。
EB病毒长期潜伏在淋巴细胞内，以环状DNA形式游离在胞浆中，并整合天染色体内。
二、致病性EB病毒在人群中广泛感染，根据血清学调查，我国3～5岁儿童EB病毒VCA-lgG抗体阳性率达90%以上，幼儿感染后多数无明显症状，或引起轻症咽炎和上呼吸道感染。
青年期发生原发感染，约有50%出现传染性单核细胞增多症。
主要通过唾液传播，也可经输血传染。
EB病毒在口咽部上皮细胞内增殖，然后感染B淋巴细胞，这些细胞大量进入血液循环而造成全身性感染。
并可长期潜伏在人体淋巴组织中，当机体免疫功能低下时，潜伏的EB病毒活化形成得复发感染。
由EBV感染引起或与EBV感染有关疾病主要有三种：（一）传染性单核细胞增多症是一种急性淋巴组织增生性疾病。
HRP标记二抗
二抗：山羊抗小鼠（HRP标记）山羊抗小鼠说明本二抗为辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG(H+L)(HRP-labeled Goat Anti-Mouse IgG(H+L))，用于Western、ELISA和IHC等的二抗。
HRP，即horseradish peroxidase，中文名为辣根过氧化物酶，可以在Western检测时催化ECL 类试剂(如ECL、BeyoECL等)产生化学发光，可以在ELISA时催化TMB产生蓝色，也可以在IHC 或Western blot检测时催化DAB产生棕色沉淀。
本辣根过氧化物酶标记山的羊抗小鼠IgG(H+L)用于WB、ELISA和IHC的推荐稀释比例参考上表，实际实验操作过程中需根据抗原和抗体的具体情况适当调节二抗的稀释比例。
对于WB，推荐的稀释范围为1:500-2000。
本二抗为用纯化的小鼠IgG免疫山羊，然后用亲和纯化柱对获得的抗血清进行纯化，并经过人IgG吸附纯化的优质山羊抗小鼠二抗。
对人IgG几乎没有结合能力。
·二抗用途本山羊抗小鼠二抗如果用于常规的Western检测，以每次检测需5毫升1:1000稀释的二抗计，至少可以检测20次。
·使用方法Western、ELISA或IHC请参考相关实验步骤进行。
起始稀释浓度按照产品简介中推荐的稀释比例进行稀释。
叠氮钠会抑制辣根过氧化物酶的活性，在含有辣根过氧化物酶的二抗中不可加入叠氮钠。
·使用建议稀释比：ELISA，1:200；Western blot，1:1000；Immunohistochemistry，1：50.稀释后的一抗，回收后可重复使用，回收后的稀释一抗可在4°C短期保存。
·保存条件本山羊抗小鼠二抗4°C保存，一年有效。
·其他说明详细内容请参考说明书。
熊蜂SMRTER蛋白多克隆抗体的制备
中国蜂业熊蜂SMRTER 蛋白多克隆抗体的制备徐伟林 孙成（中国农业科学院蜜蜂研究所，北京 100093）摘 要：熊蜂是重要的传粉昆虫，在促进农业生产及维护生态系统平衡等发面发挥着重要作用。
Smr 基因编码的蛋白为SMRTER（SMRT-related and ecdysone receptor interacting factor），是一个转录因子。
在模式生物中发现，Smr 基因参与调控包括器官发育、代谢及其他多个重要的生物学过程。
本研究利用基因合成技术获得熊蜂Smr 基因的编码序列，并把它克隆进原核表达载体进行诱导表达，产生SMRTER 重组蛋白。
然后，利用纯化的SMRTER 蛋白制备兔抗SMRTER 多克隆抗体。
进一步的检测发现，此多克隆抗体对SMRTER 蛋白具有良好的特异性。
该研究对于更好理解Smr 基因在熊蜂中所发挥的生物学功能具有重要的意义。
关键词：熊蜂；Smr 基因；多克隆抗体Preparation of polyclonal antibodies against bumblebee SMRTER proteinXu Weilin, Sun Cheng(Institute of Apicultural Research, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100093, China)Abstract: Bumblebees are important pollinators. Smr gene encodes SMRTER (SMRT-related and ecdysone receptor interacting factor). The gene is involved in many important biological processes, including reproductive organ development, metabolism and neurogenesis. In this study, the coding region of bumblebee Smr gene was obtained by gene synthesis technique, which was then inserted into bacterial expression vector. Next, we induced the expression of Smr gene and its protein products were purifi ed. Then, rabbit anti-SMRTER polyclonal antibody was prepared. The polyclonal antibody has good specificity to SMRTER protein. Our study laid foundation for further investigation of Smr gene in bumblebee.Key words: bumblebee; Smr gene; polyclonal antibody基金项目：国家自然科学基金（31971397）作者简介：徐伟林（1993-），男，硕士研究生，从事特种经济动物饲养研究，E-mail:*****************通讯作者：孙成，研究员，博士生导师，E-mail:****************研究论文熊蜂是重要的传粉昆虫，在促进农业生产及维护生态系统平衡等发面发挥重要作用[1, 2]。
如何选择二抗
如何选择二抗抗体简介抗体：是高等动物在抗原物质的刺激下由浆细胞产生的一类能与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。
抗体通常存在于血清合淋巴（组织液）中。
单克隆抗体及多克隆抗体：由单一克隆的细胞（通常是单一克隆的杂交瘤细胞）所产生的识别某一抗原表位的单一抗体；多克隆抗体是由多种细胞分别接触相应抗原而产生的多种抗体的总和，多克隆抗体抗原识别抗原的多个表位。
抗体结构：抗体是由四条肽链构成的“Y”形对称的分子，包括两条重链和两条轻链。
在“Y”的尖端部位的氨基酸顺序在不同的抗体分子中差别很大，是负责与抗原进行特异性结合的区域，称为可变区，余下的区域则称为恒定区。
抗体分类抗体分类：根据重链恒定区的血清学类型，可将抗体分为IgM，IgG，IgA，IgD，IgE五类，它们的重链分别为mu, gamma, alpha, delta, epsilon链。
在上述每一类别中，按重链构造上的变异又可分为几个亚类，例如人的IgG可分为IgG1，IgG2，IgG3，IgG4四个亚类。
轻链分为两种类型，kappa链和lambda链，但每种抗体中只存在一种类型的轻链。
二抗：二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体，上面通常连有酶或荧光素等标签。
由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以应用广泛，如western blot（通过与特异性抗体结合来鉴定蛋白质），ELISA（以耦联有酶的抗体或抗原为标记来检测特异性的蛋白质，尤其是相应的抗原或抗体），免疫组织化学（检测组织中的特异性抗原），免疫细胞化学（通过免疫学方法检测细胞的抗原组成），流式细胞术（通过检测激光所激发荧光来鉴定分离不同类型的细胞）及免疫沉淀（通过抗原与抗体的特异性结合作用来分离相应抗原）。
二抗针对某一特定物种（如小鼠）的所有抗体均具有特异性，因而使用标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记，大大节省了时间和费用；此外，一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子，从而使信号大大增强，提高了实验灵敏度。
第二抗体
第二抗体是能和抗体结合的，即抗体的抗体。
主要用于检测抗体的存在。
二抗在免疫学实验中起着举足轻重的作用。
如何选择二抗二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，BioTNT能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。
检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要需要从下面几个方面考虑：【二抗产品分类】按照标记分：有HRP、AP、生物素等标记二抗，FITC、TRITC、Rhodamine、Cy3/5、Dylight等荧光二抗；按照检测物种分，有抗人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛，以及多种细菌类二抗；另外，还有IgG、IgA、IgM以及IgG（Fc）、IgG（ab’）2等不同类型抗体。
BioTNT二抗的选择：【一抗的种属来源】二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。
即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。
BioTNT能为您提供最全的抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。
【一抗的类别亚型】二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。
这通常是针对单克隆抗体而言。
多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。
其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。
如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。
免疫荧光一抗二抗的选择及其技巧
免疫荧光一抗二抗的选择及其技巧据一抗种属及类型-如何选择二抗?如何选择二抗——根据一抗种属及类型选择合适的二抗二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。
检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属来源】二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。
即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。
艾美捷能为您提供最全的抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。
【一抗的类别亚型】二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。
这通常是针对单克隆抗体而言。
多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。
其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。
如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。
在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG。
艾美捷能为您提供通用的IgG（H+L）二抗，或者特异性只结合IgM的Anti IgM （mu） Antibody、IgA的Anti IgA （alpha-Antibody、IgE的Anti IgE （epsilon） Antibody等。
人血管生成素2(ANG-2)酶联免疫分析
人血管生成素2(ANG-2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E04500h检测范围：0.78 ng/ml - 50 ng/ml最低检测限：0.195 ng/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人ANG-2，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、心包积液、细胞培养上清或其它相关生物液体中ANG-2含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
概述血管生成素(angiopoietin,Ang)是近年来发现的与血管新生密切相关的一个新家族,包括Ang-1、Ang-2、Ang-3、Ang-4，参与胚胎血管的发生及成年机体生理、病理性血管形成，尤其Ang-2，在肿瘤组织中的表达明显高于周围正常组织。
Ang-2是特异性血管生成刺激因子，也是恶性肿瘤早期的标志分子。
Ang-2与Ang-1 60%同源，相互间易形成异二聚体结构，自身也常以同源二聚体及多聚体结构存在。
Ang-2的生物学功能与Ang-1完全相反。
Ang-1与血管内皮细胞的Tie-2受体结合，促进血管成熟及稳定，Ang-2与Tie-2结合，不使Tie-2磷酸化而激活Tie-2，反而拮抗Ang-1的生物活性，破坏血管完整性，影响内皮细胞之间及其与支持细胞之间的连接。
在肿瘤发生的早期，Ang-2参与破坏瘤体周边原有的正常血管，而促进肿瘤新生血管的生成，在瘤体周边形成所谓的血管共择（co-option）区。
当肿瘤形成以后，Ang-2与血管内皮生长因子（VEGF）有协同作用，共同促进肿瘤血管生成，并阻碍血管的完整性，使得肿瘤新生血管能在各种因子的刺激下不断增生。
二抗说明书
即用型第二代免疫组化EliVision TM plus广谱试剂盒Data sheet: 40405a适用于一抗：产品编号:Mouse/Rabbit KIT-9901/9902/9903前言即用型第二代免疫组化E liVision TM plus广谱试剂盒在第一代E liVision TM试剂盒基础上，将多个抗鼠和抗兔的IgG分子与辣根过氧化物酶聚合，所形成的聚合物直接与一抗结合，从而放大了抗原抗体结合的信号。
此试剂盒是基于聚合物技术的新一代免疫组化非生物素检测系统，放大功率更高，操作简便，背景更清晰，鼠、兔抗体均适用，核定位更强。
应用范围适用于免疫组织化学方法以显示抗原的分布，适用于常规福尔马林固定石蜡包埋切片、冰冻切片、培养固定的细胞涂片，以及新鲜制备的血涂片等，尤其适合于生物素含量较高的组织细胞或因抗原修复后内源性生物素背景影响的免疫组化研究。
试剂盒组成试剂A: Polymer Enhancer 6.0ml/18ml/110ml 试剂B: Polymerized HRP-Anti Mouse/Rabbit IgG 6.0ml/18ml/110ml试剂盒规格及贮存条件规格：6ml(120片)/18ml(360片)/110ml(2200片)贮存条件：本试剂盒宜4℃保存，稳定期1年免疫组化染色步骤1.石蜡切片脱蜡和水化后，用PBS(pH7.4)冲洗三次，每次3分钟（3x3`）。
2.根据每一种抗体的要求，对组织抗原进行相应的修复。
3.如果有必要，每张切片加1滴或50μl的3%H2O2，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。
PBS冲洗3x3`。
4.除去PBS液，每张切片加1滴或50μl的第一抗体(用户自选)，室温下孵育60分钟或4℃过夜，建议参见每种抗体的说明书。
5.PBS冲洗3x5`。
除去PBS液，每张切片加1滴或50μl聚合物增强剂(试剂A)，室温下孵育20分钟。
PBS冲洗3x3`。
6.除去PBS液，每张切片加1滴或50μl酶标抗鼠/兔聚合物（试剂B），室温下孵育30分钟。
Jackson ImmunoResearch 公司二抗选用指南-8页精选文档
Jackson ImmunoResearch 公司二抗选用指南(此部分内容来源于Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc网站，如有疑问，请参考原网站）亲和层析法纯化的二抗用亲和层析法纯化的抗体是指，利用耦联到琼脂糖凝胶上的抗原将抗血清中的抗体亲和层析下来。
我们采用一种特有的连续的洗脱过程将抗体从固态抗原上分离出来。
我们提供的未标记的亲和层析法纯化的抗体是不含有稳定剂和防腐剂的无菌液体。
耦联标记物的抗体是冻干粉，里面含有稳定剂和防腐剂，但是过氧化物酶标记的抗体里面不含防腐剂。
(下面内容中的页码指的是Jackson 2019年原版目录中的页码）亲和层析纯化抗体的选择和定位第一步：选择Whole IgG（8－17页）、F(ab’)2片段（18－22页），或者Fab片段（23－25）抗体。
我们提供三种亲和纯化的抗体：Whole IgG，F(ab’)2片段，Fab片段。
Whole IgG（8－17页）抗体是从抗血清中分离出来的完整的分子。
这些抗体有一个Fc部分和两个与抗原结合的Fab部分，因此是二价的。
Whole IgG抗体适用于多数情况（见F(ab’)2片段、Fab片段的特例），也是性价比最高的。
F(ab’)2片段（18－22页）抗体是用胃蛋白酶消化IgG去除Fc部分，剩下两个靠二硫键连接的结合抗原的Fab部分（依然是二价的）。
这些抗体用在特定的情况中，例如避免抗体与Protain A 或G 结合，或者与有Fc受体的活细胞结合。
但是，如果一抗是whole IgG，不管二抗是哪种形式都可能出现结合Fc受体。
这时，为了阻止抗体结合到Fc受体上，可以在4度将细胞预培养于含有叠氮钠和二抗来源物种正常血清的缓冲液中。
注意：当使用的是带标记的二抗时，千万不能用一抗来源物种的正常血清和IgG来封闭。
如果血清中的免疫球蛋白非特异性的结合到样品上，他们会被带有标记的二抗识别，导致背景过高。
普腾免疫试剂二抗应用说明书
IntroductionApplications ForSecondary AntibodiesIn many biological assays, the target antigen is visualizedindirectly. That is, the secondary antibody, bound to the primary antibody, produces the signal. Since many secondary antibodies can bind to one primary antibody, the result is signal amplification and increased sensitivity.The choice of the appropriate secondary antibody is determined by the specifications (i.e. species, subclass, and fragment type) of the primary antibody and the application. Proteintech ®* offers a variety of secondary antibodies suitable for Western Blotting, ELISA, cellular imaging, and flow cytometry: –Enzyme/Biotin conjugated–Conventional fluorescent conjugatedWestern Blotting ELISAImmunofluorescence Staining ImmunohistochemistryFlow CytometrySECONDARY ANTIBODIES*Proteintech and the Proteintech logo are trademarks of Proteintech Group registered in the US Patent and Trademark Office.Secondary AntibodiesSelecting A SuitableSecondary AntibodyFor Your ApplicationUnderstanding Common Secondary Antibody Nomenclature 1. Host Species Of Primary AntibodyThe secondary antibody has to be raised against the host species of the primary antibody (e.g., anti-mouse, rabbit, rat).2. Class Of Primary AntibodyIn addition to the host specificity, the secondary antibody also has to be specific for the isotype of the primary antibody (e.g., IgG, IgA, IgM).4. Assay RelevanceThe intended application determines the type of conjugate (eg., enzyme orfluorescent conjugated).5. Additional Purification StepsA common purification technique for secondary antibodies is High Affinity Purification, resulting in reduced non-specific binding. In addition, secondary antibodies can go through an additional purification step to reduce potential cross-reactions with other species. Therefore, the secondary antibody solution is passed over different columns containing sera proteins of different species to filter out the non-specific secondary antibody (e.g., for multi-stainings).3. Antibody FragmentsIf the primary antibody is not thewhole antibody but a fragment,the secondary antibody shouldalso be fragment-specific to reducenoise signal (e.g., F(ab’)₂ fragmentsecondary antibodies penetratetissue easier in IHC).Ms Mouse Gt Goat rRb Rabbit Sh SheepRt Rat BV Bovine Hn Human Sw SwineIgG (H+L), heavy and light chain IgG3IgG1 IgG, Fc, receptor bindingIgG2a IgAIgG2bIgMUnderstanding the needs of the primary antibody and assay-dependent requirements are essential for selecting an appropriatesecondary antibody.2Seconday Antibodies3 Enzyme Conjugated/ Biotin Secondary AntibodiesConventional Fluorescent ConjugatedSecondary AntibodiesOPTIMIZE YOUR ANTIBODY EXPERIMENTS WITH PROTEINTECHRequest your free technical guide from .LIVE CHAT TWITTER@proteintechBLOG/news/blog YOUTUBE/ProteintechSupportAvailable 24 hours via Live Chat and 9-5 (CDT) via phone.Email support also available.1 (888) 4PTGLAB (1-888-478-4522) (toll free in USA),or 1(312) 455-8498 (outside USA)1 (312) 455-8408Proteintech Group, Inc.5400 Pearl Street, Suite 300, Rosemont, IL 60018, USA **********************PHONEFAX ADDRESSEMAILPHONE EMAIL FAX ADDRESSEMAIL+44 (161) 8393007+44 (161) 2413103Proteintech Europe, Ltd. 4th Floor,196 Deansgate, Manchester, M3 3WF ***********************************Sales and technical support only.PHONE FAX ADDRESSEMAIL************or 4006-900-926************Wuhan Sanying Biotechnologies D3-3, No.666 Gaoxin Avenue,Wuhan East Lake Hi-tech Development Zone Wuhan, Hubei, P .R.C******************We are ISO 9001 and ISO 13485 accredited.Proteintech GroupUS Head OfficeProteintech EuropeUnited KingdomProteintech EuropeGermanyProteintechChina OfficeCONTACT US。
怎么样稀释一抗
怎么样稀释一抗简单说几句，封闭血清的原理主要有两点，第一是待检样本会非特异性的和蛋白结合，从而导致背景过高，因此可以用BSA或血清封闭掉这部分非特异性的结合，从这点看，BSA和血清没有明显区别。
第二是待检样本中可能会有Fc受体，可以和抗体恒定区结合，与抗体特异性无关，封闭血清中有抗体，因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间结合。
BSA则无法封闭Fc受体。
不能用来自一抗同物种的血清举个例子就清楚了，比如一抗是鼠抗人的抗体，二抗是兔抗鼠的抗体，你要先加一抗后再封闭的话，一抗就会结合到固相表面上，这种结合力是非特异性的疏水作用力，这种作用力是比较强的，经过处理的固相表面如硝酸纤维膜，酶标板对蛋白的吸附力更强，你再去封闭就没有作用了。
当然，也不是说封闭蛋白就完全不会封闭掉一抗的蛋白结合位点，在蛋白过量的条件下，蛋白质之间会有黏附和堆积作用，但这种作用通常是不稳定的。
如果你所选择的一抗与固相抗原亲和力较高，在适合的buffer条件下，一抗会竞争它的结合位点。
蛋白质之间那点黏附和堆积作用力当然竞争不过它啦。
下面是从书上摘下的几句话，希望对你有帮助：" 组织中非抗原抗体反应出现的阳性染色称为非特异性背景染色，最常见的原因是蛋白吸附于高电荷的胶元和结缔组织成分上。
最有效方法是在用第一抗体前加制备第二抗体动物之非免疫血清(1:5~1:20) 封闭组织上带电荷基团而除去与第一抗体非特异性结合。
必要时可加入2%~5% 牛血清蛋白，可进一步减少非特异性染色。
作用时间为10~20min。
也可用除制备第一抗体以外的其它动物血清(非免疫的)。
有明显溶血的血清不能""对消除背景的非特异性染色有很好的效果。
当然使用特异性高、效价高的第一抗体是最重要的条件。
""抗原-抗体是免疫球蛋白分子上的抗原结合簇与抗原分子上的抗原决定簇相互吸引以及多种分子间的引力参与发生的。
这种反应没有化学键的形成。
中英文说明书丨Jackson正常兔血清
中英文说明书丨Jackson正常兔血清动物实验是医学科学发展的不可缺少学科。
家兔又是动物实验时的shou选动物，为使动物实验资料和科学性更加完善，接下来一起了解下艾美捷Jackson 正常兔血清。
Jackson 正常兔血清产品可应用于大多数免疫学实验,用作封闭液或空白对照.Jackson正常兔血清使用：正常兔血清是以冻干粉形式提供的，本品需要先溶解配制成100%原液后再稀释使用。
溶解方法：用5 mL 蒸馏水（dH2O）充分溶解冻干粉（如果不澄清，可对其离心处理），此时得到的即是100%原液。
然后按照1:20的比例用缓冲液，如PBS或PBST，稀释到需要的5%工作液。
也可以根据自身实验条件，稀释到合适的工作液浓度。
011-000-120正常兔血清化学性质：全名：正常兔血清丨Normal Rabbit Serum蛋白浓度（Protein concentration）：60 mg/mL缓冲液（Buffer）：0.01 M磷酸钠，0.25 M氯化钠，pH 7.6防腐剂（Preservative）：0.05%die氮化钠运输与保存方法：冰袋运输。
冻干粉保存于2-8℃。
InformationNormal serums are lipid extracted to improve clarity, dialyzed against phosphate buffered saline (PBS) containing sodium azide, and freeze dried. Normal serum diluted to 5% (v/v) in PBS is strongly recommended as a blocking reagent to reduce background from non-specific, conserved sequence and/or Fc receptor binding. Best results are obtained with diluted normal serum from the same host as the labeled antibody, as a separate incubation step before addition of the primary antibody.UsagePhysical State: Freeze-dried solidStorage and Rehydration: Store freeze-dried solid at 2-8°C. Rehydrate with the indicated volume of dH2O and centrifuge if not clear. Prepare working dilution on day of use. Product is stable for about 6 weeks at 2-8°C as an undiluted liquid.Extended Storage after Rehydration: Aliquot and freeze undiluted product at -20°C or below. Avoid repeated freezing and thawing.Expiration date: one year from date of rehydration. The expiration date may be extended if test results are acceptable for the intended use.Preservative: 0.05% Sodium AzideSuggested Working Concentration or Dilution Range:For blocking purposes, use 5% (v/v) solution (1:20 dilution from rehydrated volume). Rehydration according to instruction yields 100% serum.。
铕螯合剂对甲胎蛋白单克隆抗体标记的研究
２．３ 标 记抗体 的荧光强 度
标记前 后 ＡＦＰ—ＭｃＡｂ的浓 度 ，如 表 ２所 示 。根
据标 记抗 体的荧 光强 度计 算 回收率 和标 记率 ，如表 ３ ２．４ 标 记 抗 体 免 疫 活 性
所 示 。 回收 率 一标 记 抗 体 （ｍｇ／ｍ１）ｘ 标 记 后 体 积
探 究铕 螯 合 剂 标 记 对 ＡＦＰ—ＭｃＡｂ免疫 活 性 的
ｌ／孔 ，冲洗 ５次 ，拍 干 ；加 显 色液 １００ Ｊ／孔 ，３７℃孵 育 １０ ｍｉｎ；加 入终 止液 ５０ １／孔 ；在 酶标 仪上 进行 检 测 ，读 取 ０Ｄ值 。 ２ 结 果 ２．１ 铕 螯 合 剂 的 特 点
铕 螯合 剂 的结 构式 如 图 １所示 ，它是 双 功 能穴 状 螯合 剂 。该铕 螯合 剂 含 有 吡 啶一２，２－联 吡 啶结 构 ， 通 过共 价形 式将 铕离 子包 绕在 内 ，当受到 激发 时 ，该
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｏｆ ａｌｐｈａ—ｆｅｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＡＦＰ—ＭｃＡｂ）ｌａｂｅｌｅｄ ｂｙ
ｅｕｒｏｐｉｕｍ ｃｒｙｐｔａｔｅ．Ｍ ｅｔｈｏｄｓ Ｅｕｒｏｐｉｕｍ ｃｒｙｐｔａｔｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｂｙ ＥＤＣ ａｎｄ Ｎ ＨＳ ｗｅｒｅ ｃｏｕｐｌｅｄ ｉｎｔｏ ＡＦＰ—Ｍ ｃＡｂ．Ａｆｔｅｒ ｄｉａ—
JacksonImmunoResearch山羊抗羊驼IgG说明书
JacksonImmunoResearch山羊抗羊驼IgG说明书Jackson ImmunoResearch AffiniPure 山羊抗羊驼 IgG (H+L)基于免疫电泳和/或 ELISA，抗体与全分子羊驼 IgG 和美洲驼 IgG 反应。
该抗体主要与 Fc 区反应，不推荐用于检测 VHH 抗体。
未检测到针对非免疫球蛋白血清蛋白的抗体。
该抗体可能与来自其他物种的免疫球蛋白发生交叉反应。
通过免疫亲和层析从抗血清中分离出完整的 IgG 抗体。
它们具有一个 Fc 部分和两个通过二硫键连接在一起的抗原结合 Fab 部分，因此它们是二价的。
据报道，平均分子量约为160 kDa。
整个 IgG 形式的抗体适用于大多数免疫检测程序。
Jackson ImmunoResearchAffiniPure 山羊抗羊驼 IgG (H+L)参数：目标： Alpaca宿主： GoatAntibody 形式： Whole IgG特异性： IgG (H+L)Conjugate： Unconjugated类别： Anti-Alpaca 二抗克隆性：多克隆物理状态：无菌过滤液体储存：在无菌条件下储存在 2-8°C。
在使用当天准备工作稀释液。
纯度：使用与琼脂糖珠偶联的抗原，通过免疫亲和层析从抗血清中纯化抗体。
缓冲液： 0.01M 磷酸钠，0.25M NaCl，pH 7.6防腐剂：无建议工作浓度或稀释范围：10-20 µg / ml稀释因子以范围的形式呈现，因为最佳稀释度是许多因素的函数，例如抗原密度、渗透性等。
实际使用的稀释度必须凭经验确定。
AffiniPure 山羊抗羊驼 IgG，亚类 2+3 特异性AffiniPure 山羊抗羊驼 IgG，VHH 结构域AffiniPure Goat Anti-Alpaca IgG、VHH 结构域。
宿主物种丨Jackson告诉你选择二抗的注意事项
宿主物种丨Jackson告诉你选择二抗的注意事项蛋白质印迹实验中二抗的选择是非常重要的。
那么接下来就一起来看Jackson ImmunoResearch公司选择二抗的相关注意事项吧~ 宿主物种的相容性如果使用多种二抗，例如探测两种一抗，请选择相同的宿主物种以尽量减少任何交叉反应。
如果这不可能，则选择与实验中其他二抗的宿主物种交叉吸附的二抗。
交叉反应物种虽然在蛋白质印迹中不常见，但某些应用需要针对其他物种吸附的二抗，以尽量减少对内源性免疫球蛋白的识别（例如用抗大鼠一抗探测小鼠组织裂解物）或其他一抗。
因此，请选择可用于预期应用的具有适当交叉吸附的二抗宿主。
经验或偏好宿主物种的选择通常归结为个人偏好或先前的实验验证。
在不同宿主物种中产生的二抗之间似乎几乎没有质量差异，只是某些物种更适合大规模生产。
特异性选择具有正确特异性的二抗很重要。
尽管全 IgG (H+L) 适用于大多数免疫测定，但其他专业特异性允许设计更复杂的实验，以消除不必要检测的潜在干扰。
抗 IgG (H+L)Jackson ImmunoResearch 公司抗 IgG (H+L)与 IgG 分子的重链和轻链都发生反应，即与 IgG 的 Fc 和 F(ab')2 / Fab 区发生反应（图 1）。
抗 IgG (H+L) 抗体也与其他免疫球蛋白类别（IgM、IgA、IgD、IgE）和亚类发生反应，因为它们都共享相同的轻链（kappa 或 lambda）。
抗 IgG (H+L) 抗体比抗片段特异性抗体具有更广泛的表位识别。
它们也被建议用于所有一般的免疫检测程序。
同种型特异性：Fc 特异性抗体大多数一抗是 IgG 同种型。
有时根据抗体的产生方式使用其他类别，例如 IgM 和 IgA。
对免疫球蛋白的 Fc 域特异的二抗将特异于该特定 Fc 域的同种型。
因此，Fcγ特异性抗体将对IgG特异性，而对Fcα特异性的抗体将特异性检测IgA，而Fcμ将检测IgM。
抗双链DNA抗体检测试剂盒酶联免疫法专项说明书
抗双链DNA抗体检测试剂盒（酶联免疫法）阐明书【产品名称】通用名称：抗双链DNA抗体检测试剂盒（酶联免疫法）英文名称：Test Kit for Antibody to Double Stranded DNA (ELISA)【包装规格】48人份/盒。
【预期用途】本试剂盒用于体外定性检测人血清中旳抗双链DNA抗体（ds-DNA抗体）水平。
合用于系统性红斑狼疮（SLE）旳辅助诊断[8]。
【检查原理】本试剂盒应用间接酶联免疫吸附实验原理。
在微孔板预包被ds-DNA抗原，加入样本稀释液及待检样本进行温育，样本中存在旳抗ds-DNA抗体与包被抗原形成“包被抗原-抗体”复合物，洗板清除不与包被抗原结合旳物质；加入酶结合物（辣根过氧化物酶标记旳抗人IgG抗体）进行第二次温育，酶标二抗将与“包被抗原-抗体”复合物结合，形成“包被抗原-IgG抗体-酶标二抗”复合物；再次洗板后加入显色剂，复合物上连接旳HRP催化显色剂反映，生成蓝色产物。
终结反映后，变为黄色。
若样本中无抗ds-DNA抗体，不显色或很浅色。
【重要构成成分】表1. 抗双链DNA抗体检测试剂盒（酶联免疫法）构成成分【储存条件及有效期】1. 储存条件：2～8℃避光贮存。
2. 有效期：12个月。
3. 打开后旳包被板条用自封袋密封，2～8℃避光贮存不超过2周。
【合用仪器】含波长450nm旳酶标仪。
【样本规定】1. 本试剂使用旳样本为人血清。
2. 不能检测具有叠氮钠旳样本，因叠氮钠克制辣根过氧化物酶旳活性；不能检测具有悬浮纤维蛋白或汇集物、重度溶血旳样本。
3. 样本中应无微生物。
无菌分离旳样本可在2～8℃贮存1周，低于-18℃贮存三周，避免反复冻融。
4. 使用前请将样本置于室温（10～30℃）平衡30分钟以上，冷冻样本实验前需解冻至室温（10～30℃）并混匀。
【检查措施】1. 配液：用蒸馏水或去离子水将1瓶浓缩洗涤液所有稀释至450ml。
2. 样本稀释：取90μl生理盐水于塑料试管中，再加10μl样本混匀。