甘草及其制剂中甘草酸含量测定研究进展

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甘草颗粒中甘草酸含量HPLC测定方法的建立

动物医学进展，２０２０，４１（１２）：７４７９ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ甘草颗粒中甘草酸含量ＨＰＬＣ测定方法的建立　收稿日期：２０１９０４１３　基金项目：２０１８年农业行业（国家）标准项目兽药国家标准制修订计划（２０１８Ｚ０１８）　作者简介：李　军（１９８２－），男，山西浑源人，副教授，硕士，主要从事中药制剂的开发及质量研究。

李　军１，杨　奇２，刘立轩１，李　敏２，冷晓红１，马春芳２，吴春燕２（１．宁夏职业技术学院宁夏中药材开发与利用工程技术研究中心，宁夏银川７５００２１；２．宁夏兽药饲料监察所，宁夏银川７５００１１）摘　要：为完善甘草颗粒的质量标准，以Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）柱为色谱柱，甲醇０．２ｍｏｌ／Ｌ醋酸铵冰醋酸（５６∶４４∶０．４）为流动相，流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２５０ｎｍ，进样量为１０μＬ的色谱条件建立了ＨＰＬＣ法测定甘草酸含量，并进行方法学验证。

结果表明，甘草酸色谱峰峰形良好，且与相邻峰良好分离；进样浓度在０．１ｍｇ／ｍＬ～０．５ｍｇ／ｍＬ（０．１μｇ～０．５μｇ）范围内，与峰面积呈良好的线性关系（狉＝０．９９９８）；精密度和稳定性等考察结果的相对标准偏差均小于２．０％；样品平均回收率为９７．９２％（ｎ＝６），ＲＳＤ为１．８７％。

建立的方法可靠，准确度高，重现性好，为完善甘草颗粒的含量测定方法提供了依据。

关键词：甘草颗粒；甘草酸；高效液相色谱；含量测定中图分类号：Ｓ８５３．７２；Ｓ８５９．２文献标识码：Ａ文章编号：１００７５０３８（２０２０）１２００７４０６甘草颗粒是由具有清热解毒、祛痰止咳作用的甘草制成的兽用制剂［１］，有良好的免疫调节、抑制病毒、保肝、抗炎及镇咳作用，甘草酸作为其最重要的活性成分之一，其药理作用包括抗炎、抗溃疡、抗肝毒素以及抗癌等［２］。

《中国兽药典》２０１５年版（第二部）中收载甘草颗粒为甘草浸膏经加工制成的颗粒，并收录了甘草颗粒的质量标准［１］。

甘草的化学成分研究进展

甘草的化学成分研究进展一、主要成分甘草的化学成分包括：甘草酸（Glycyrrhizic acid）、甘草素（Glycyrrhizin）、甘草甜素（Glycyrrhetinic acid）、异甘草素（Isoliquiritigenin）、黄酮类、三萜类、三萜醇类等。

其中甘草酸和甘草素是甘草中最主要的化学成分以及活性成分之一。

甘草酸结构如下：甘草酸含有11个不同的呈现多种不同的生物活性。

研究表明，甘草酸具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、降血脂、抗凝血、保护肝脏等多种作用。

甘草素结构如下：甘草素是甘草中最为重要的成分之一，广泛应用于临床上，其主要生物活性有消炎、抗过敏、抗病毒、抗肿瘤、降血压等作用。

甘草素具有表面活性，能够改变细胞膜的通透性和稳定性，从而影响细胞的生长和分化。

此外，甘草素还可以提高肝脏酶活性，使得肝脏细胞功能得到改善。

二、其他成分1. 糖类：葡萄糖、果糖、山梨糖、甘露糖、异甘露糖等。

2. 氨基酸：天门冬氨酸、赖氨酸、丙氨酸、谷氨酸等。

3. 皂苷类：甘草皂苷、异甘草皂苷、龙胆皂苷、沙皮皂苷等。

4. 黄酮类：黄芩苷、栀子苷、山萸苷、芍药苷等。

5. 环烷醇类：β-环烷醇、β-麦角固醇、β-谷甾醇等。

6. 植物酸类：苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、马来酸等。

7. 脂肪酸：油酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸等。

8. 矿物质：钙、铁、钾、锌等。

三、药理作用1. 抗炎作用甘草中的甘草酸和甘草素具有抗炎作用，可以有效地减轻机体炎症反应，改善炎症相关疾病的临床症状。

甘草酸和甘草素属于天然的抗氧化剂，可以有效地清除自由基，减轻氧化应激对身体的伤害，从而起到保护细胞和组织的作用。

3. 降血糖作用甘草中的甘草酸和甘草素可以促进胰岛素的分泌，降低血糖水平，对糖尿病的治疗具有重要的临床价值。

甘草中的甘草酸和甘草素是天然的抗肿瘤剂，具有良好的抗癌作用和抗转移作用，可以延缓恶性肿瘤的生长和发展，减轻肿瘤的痛苦。

甘草中的成分可以抑制炎症因子的产生，减轻炎症反应，起到消炎作用。

分析高效液相色谱法测定中药中甘草酸的含量

世界最新医学信息文摘 2019年第19卷第69期121投稿邮箱：zuixinyixue@·药物研究·分析高效液相色谱法测定中药中甘草酸的含量高晓宁，刘沙，张立娟，白少静（神威药业集团有限公司，河北石家庄 051430）0　引言我国诸多中药材中较为常见的一种是甘草，甘草中，甘草酸是相对重要的活性成分[1]。

高效液相色谱法是检测甘草酸含量的主要方法。

1　实验1.1　检测仪器与试剂。

电子精密天平、色谱柱、高效液相色谱仪；甘草酸标准品，甘草，复方甘草片，乙腈；其它试剂均是分析纯；蒸馏水为实验用水。

1.2　配置标准溶液。

利用电子精密天平称取50 mg 甘草酸标准品，通过流动相溶解，将其定容到25 mL ，获取储备液0.2 mg/mL ，由流动相稀释标准并保存获取的液体即为低浓度标准溶液。

1.3　处理样品。

本次实验样品为复方甘草片与甘草，随机挑选购买。

利用粉碎机粉碎甘草，将粗粉过筛。

复方甘草片通过研钵将其研细。

在两个离心管中分别置入5 mg 样品粉末，添加5 mL 0.3%氨水，超声提出，时间为5 min ，完成提取后制冷并过滤，通过流动相定容滤液至10 mL ，最终获取试品溶液。

1.4　色谱条件。

流动相与流速分别是55%乙腈和1.0 mL/min ；进样体积、检测波长及柱温分别是20 μL 、256 nm 和30℃；色谱柱为Syncronis C18色谱柱。

2　结果与讨论2.1　确定研究方法2.1.1　确定色谱条件：甘草酸是属于酸性化合物，羧基作为分子中的一部分，处于流动相中的羧基具有较高的解离发生率，进而诱发色谱峰脱位，产生甘草酸色谱峰对称性减弱。

实验期间，需要合理选择流动相，并对相的筛选进行固定，保证甘草酸检测含量的准确性与高效性。

避免解离羧基，实验过程中，可通过不同比例的磷酸添加对流动相进行调节，使其呈酸性[2]。

其次，甘草样品中具有诸多杂质，使得色谱分离难度增加，所以，实验时，需要对色谱柱合理选择，探索并研究流速，以便更好地设置分离度，保证性能、分析方法等与分析要求相符。

甘草及其活性成分的药理活性研究进展

甘草及其活性成分的药理活性研究进展发表时间：2013-03-19T13:38:05.763Z 来源：《医药前沿》2013年第2期供稿作者：刘雪玲[导读] 人们经常遭遇中毒，病毒的侵袭，在不断的寻找抗御这些疾病的良药。

刘雪玲 (山东省菏泽市中医医院山东菏泽 274000)【摘要】甘草是一种药材，是用于治疗各种疾病的最有效的药物，它来源于乌拉尔甘草、光果甘草和胀果甘草的干燥根和根茎，这种药物经研究发现不但有提高吞噬细胞的功能，还能抑制某些疾病的产生，还具有抗炎等功能。

本文主要对甘草里面的物质进行分析和介绍他们的主要作用。

【关键词】甘草三萜皂苷黄酮药理活性活性成分【中图分类号】R28 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）02-0099-02引言在古代的时候，人们就开始对甘草进行研究，由于当时的科学不发达，只能通过人来辨别物质，我们得出了甘草主要适用于预防感冒，驱寒，补脾等疾病的治疗，认为是最有效的治疗感冒头疼的药材。

因为社会的不断发展使得人们不断地对甘草进行研究。

从而得出不同的结论。

一、甘草及其提取物的药理活性研究甘草作为一种古老的药物，在很多国家都有记载，到现在已经有千年的历史，甘草用于各种疾病的治疗，主要是甘草对多种疾病都有很好的疗效，副作用也小。

近年来国内一直对甘草进行研究和挖掘，到现在为止科学家们研究出甘草及其提取物具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗癌、抗氧化、保肝、神经保护、美白、降糖、增强记忆力等多种活性,还在肝病，糖尿病缺血再灌注损伤、阿尔茨海默症、帕金森氏症、癫痫、抑郁、癌症治疗有很好的开发。

1.1 抗菌与抗病毒活性人们经常遭遇中毒，病毒的侵袭，在不断的寻找抗御这些疾病的良药。

通过甘草的使用情况，提出甘草可能有很好的抗病毒倾向。

根据现在的研究表明甘草的水提取部位具有抗菌的效果，但是对一些菌类有抑制作用，这些菌类是多种革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌，此外还发现甘草对前些年流行的病毒如非典，免疫力缺陷的病毒有防御作用。

甘草饮片中甘草苷和甘草酸含量分析

甘草饮片中甘草苷和甘草酸含量分析蔡翠芳　冀小君　堐榜琴　高淑红【摘要】　目的　测定甘草饮片中甘草苷和甘草酸含量,为甘草饮片质量标准制定提供依据。

方法　以甘草苷和甘草酸为指标,采用HP LC法对十家饮片企业的甘草饮片进行含量测定。

结果　所测甘草饮片中的甘草苷和甘草酸含量全部达到《中国药典》2005年版一部甘草药材标准要求,且野生甘草饮片明显高于栽培甘草饮片。

结论　甘草饮片中的甘草苷和甘草酸含量差异较大,建议加强甘草产地适宜性、规范化栽培和饮片质量标准及工艺制备研究。

【关键词】　甘草饮片;甘草苷;甘草酸;高效液相色谱法The con ten t ana lysis of the L iqu i r iti n and Glycyr rh iz ic Ac id i n Rad ix et Rh izoma Glycyrrh iza Pra2 epara t a　CA I Cui2fang,J I X iao2jun,A i B ang2qi,et al.Shanxi B iological Application Vocational Technical Col2 lege,Taiyuan,030031,Shanxi,China【Abstract】　O bjecti ve　To measure the the Content analysis of the liquiritin and glycyrrhizic acid in Ra2 dix et Rhizoma Glycyrrhiza Praeparata and t o p r ovide the accordance f or the quality standard of the Radix et Rhizoma Glycyrrhiza Praeparata.M ethods　Taking the liquiritin and glycyrrhizic acid as the target,Wo meas2 ured the content of the Radix et Rhiz oma Glycyrrhiza Praeparata in10medicine p lants in HP LC.Results　The content of the liquiritin and glycyrrhizic acid in Radix et Rhiz oma Glycyrrhiza Praeparata all reached the stand2 ard of the glycyrrhiza medicines listed in Chinese Medicine D icti onary published in2005,and the content of the natural Radix et Rhizoma Glycyrrhiza Praeparata wasmuch more than the gr owing one obvi ously.Conclusi on　The content difference is bigger of the liquiritin and glycyrrhizic acid in Radix et Rhiz oma Glycyrrhiza Praepara2 ta,theref ore it is suggested t o strengthen the accli m atizati on of the p r oducing area of the glycyrrhiza,t o stand2 ardize the gr owing and the medicine quality and the research of the technol ogy and the p reparati on.【Key words】　Radix et Rhizoma Glycyrrhiza Praeparata;L iqniritin;Glycyrrhizie acid;HP LC 甘草具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药的作用,是国内年销量最大的中药饮片之一。

国内甘草酸测定方法研究进展

维普资讯
第３０卷第４期
２００２年７月
东
北
林
业
大
学
学
报
Ｊｕ１２２００
．
ＪＵＲＮＡＬＯＯＦＮＯＲＴＨＥＡＳＴＦＯＲＥＳＴＲＹＵＮＩＶＥＲＳＴＹＩ
国内甘草酸测定方法研究进展
谷会
为诱人的发展前景 ‘ 。如祖元刚等应用美国ＰＥ公司２０７Ａ—ＨＴ型高效毛细管电泳仪（Ｖ检测器，ｕ毛细管为６ｍ×７ｍ未处理的石英毛细管，测波２ｃ５检
作用Ｊ甘草酸作为甘草中的主要有效成分，医。在药、品、妆品、烟等行业有着极其广泛的应食化卷用］。甘草及其产品中常以甘草酸作为定量指标，用
ｏｔ．ＤｅｅｏｐｎｉｅｔｏｓｉｄｅｃｖｌｉｇｄｒｃｉｎｏｅｔｍａｔｎｏｌｃｒｈｉｉｏｔｎｎＧｌｃｒｈｚｒｅ￣ｓｗａｓｓｕｓｄｉｈｓｐｐｒｆｉｇｙｙｒｚｎｃｎｅｔｉｙｙｒｉａｕａｌｎｉｓａｏｄｉｃｓｅｎｔｉａｅ．ｏｆｌ
ＫｅｗｏｒＧｌｃｒｈｚｃｄ；Ａｃｉｅｃｏｅｔｍｉｔｏｙｄｓｙｙｒｉａａｉｔｖｎｔｎｔｄｅｅｒｎａｉｎ；Ｍｅｎｓ；Ｓａｕｍｍａｙｒ
甘草为豆科甘草属植物，根茎是常用的中草药其

HPLC法测定甘草配方颗粒中甘草酸的含量

司）其他试剂均为分析纯。；
２方法与结果
２１色谱条件与系统适用性试．验“ 色谱柱：ＨｎＢｎｌａｇａｇＣ８柱
（０ ×４６ｍ，；２０．ｍ５ｍ）流动相：甲醇
水（５５ｖｖ，４：５／）使用前以０４／．５ｍ￣微孔滤膜减压过滤；检测波长为
９．０ＲＤ：１５％（５。结论：ＰＣ法操作便捷，７１％，Ｓ．４＝）ＨＬ分离效果好，重现性好，稳定性高，生产甘草配方颗是
粒较理想的质量监控方法。
关键词甘草配方颗粒；甘草酸；高效液相色谱法；含量测定中图分类号：２４１Ｒ８．文献标识码：Ａ文章编号：０３７９２０）５０６２１０ —０１（０６０ —０５ —０
一
Ａ甘草酸对照品
Ｂ供试品
Ｃ阴性样品
２４ｍ；７ｎ流速为０５ｌｍｎ进样量．ｍ／ｉ；
・
图１ＨＬＰＣ色谱图广西中医药２００６年１月第２卷第５０９期
５（３４）６・总０
维普资讯
２２对照品溶液的制备．
０。见将单味中药水提后真空减压为１／。０１此条件下甘草酸峰与相邻甘草酸峰计算应不低于２００￣
。浓缩、喷雾干燥，制成配方颗粒方峰分离度大于１５．，理论塔板数按图１便患者使用，已在部分医院推广使
用，但关于中药配方颗粒的质量标
称取甘明，本法的重现性较好。

高效液相色谱法测定甘草颗粒中甘草酸的含量

中国兽药杂志
２１，５７：２～４张剑勇，０１４（）３３／等
高效液相色谱法测定甘草颗粒中甘草酸的含量
张剑勇，杨，晓峰罗金
（贵州省兽药监察所，贵阳５００）５０３
［收稿日］００— ６０［期２１０ —１文献标识码］［Ａ文章编号］０２１８（０１０ — ０２— ３［１０ — ２０２１）７０３０中图分类号］８３７￥５．６
（７：３：）ｅｃｏａｅｅｇｈｗｓ２０ｎ．Ｔｅｌｅｒｒｎｅｗｓ００２—１００ｍ／Ｌｏｒｌｉ６３１．Ｄｔｔｎｗｖｌｔａ５ｍｅｉｎｈｉａａｇａ．０ｎ．０ｇｍ，ｃｒａｏｅｔｎ
［摘要］建立了测定甘草颗粒中甘草酸含量的高效液相色谱检测法。以甲醇一．ｏ／０２ｍＬＬ醋酸铵溶液一冰醋酸（７：３：）６３１为流动相，测波长为２０ｎ检５ｍ。样品采取流动相超声提取，高效液相色
效液相色谱仪及Ｌｏｔｎ色谱管理软件；国沃Ｃｓｕｏｌｉ美特斯ｗｔｓ６５高效液相色谱仪及Ｅｐｗｒａｅ２９ｒｍｏｅ２色谱
管理软件；甲醇、醋酸铵、醋酸均为分析纯。冰１２对照品及试验样品来源甘草酸铵对照品，．中国药品生物制品检定所，号１０３批１７１—２０１。０６５甘草颗粒：品１批号２０００；品２批号样：０８８１样：

甘草中甘草酸的含量测定方法研究

供试品溶液：精密称定甘草粉末约０．２ｇ置具塞锥形瓶中，
加入１００ｍＬ７０％乙醇，密塞摇匀后称定重量，超声处理半小时后放冷再称定重量，用７０％乙醇补足减失的重量后摇匀滤过，取续滤液。
２结果与分析２．１重复性试验
精密量取对照品溶液１０μＬ注入液相色谱仪，连续进样６次，考察甘草酸含量测定重复性，结果见表１。
１实验部分１．１主要试剂
标准品：甘草酸单铵盐（中国药品生物制品检定所）；原料：甘草（河北圣山生物科技有限公司）；试剂：乙醇、磷酸等，均为分析纯；乙腈，色谱纯；超纯水。
１．２主要仪器
Ｕ－３０００型高效液相色谱仪（美国热电仪器有限公司）；电子天平（天津市天马仪器厂）；紫外－可见分光光度计（德国耶拿仪器公司）等。
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃａｃｉｄｉｎｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｃｏｌｕｍｎｗａｓＣ１８（１５０ｍｍ ×４．６ｍｍ，５μｍ），ｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｗａｓａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－０．０５％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄ（３８∶６２），ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ２５２ｎｍ，ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１．０ｍＬ· ｍｉｎ－１，ａｎｄｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓｒｏｏｍｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ．Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎｉｎｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｒａｎｇｅｏｆ５０～３５０μｇ／ｍＬｓｈｏｗｅｄａｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈｔｈｅｐｅａｋａｒｅａ（ｒ２＝０．９９９９３）．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ１００．４１％，ａｎｄｔｈｅＲＳＤｗａｓ０．５７％（ｎ＝９）．Ｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙｗａｓｇｏｏｄ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅ，ａｎｄｉｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃａｃｉｄｉｎｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａａｎｄｉｔｓｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ；ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃａｃｉｄ

甘草提取物中甘草酸含量测定

编号:FZD0148 甘草提取物中甘草酸（Glycyrrhizic Acid）含量测定方法一、色谱条件
色谱柱：Zorbax SB-C18 15cm×4.6mm 5μm
流动相：乙腈:水:冰醋酸（33:73:4，V/V）
流速：1.0mL/min
柱温：25℃
检测波长：254nm
进样量：10μL
二、溶液制备
1. 对照品溶液制备精密称取干燥至恒重的甘草酸对照品约5mg 于50mL容量瓶中，加入流动相溶解定容。

避光保存。

2. 样品溶液制备精密称取甘草提取物约200mg于50mL容量瓶中，加入30mL流动相，超声60min溶解后，放置至室温，流动相定容，用0.45μm微孔滤膜过滤即得样品溶液。

三、样品测定
在上述色谱条件下，待仪器稳定基线平稳后进样测定。

甘草酸保留时间约为34min，用外标法计算含量。

HPLC法测定甘草中甘草酸的含量

２ｍＬ容量瓶中，５定容，离心。作为供试品 Ⅱ ３］ ③ 称［。 “ 取甘草粉末０３．ｇ置于１ｍＬ容量瓶中，５乙醇Ｏ加Ｏ冷浸１ｈ取浸液离心，２，提取，补加５乙醇到刻度，０作
为供试品 Ⅲ＿。４ｊ３结果与讨论３１三种提取剂的比较采用同．样的流动相甲醇分别对三份供试品溶液进行测定，结
甲醇：乙酸（０：１）冰９０干扰峰较多，分离效果不好且
由表１可见，水对于甘草酸具有很好的提取效果。氨
３２三种流动相的比较．
选择氨水提取物，用不同采
流动相，验结果如下。实表２
约０１．ｇ置于三角瓶中，入７甲醇２ｍＬ，０水加００５℃
பைடு நூலகம்
乙腈：乙酸（８：２冰３６）
干扰峰较多，分离效果不好且
由表２可见，甲醇作流动相，离效果相对较好。分
参考文献
［］段伟奇，胜利．１姬甘草酸抗病毒活性的研究进展Ｄ］．
运用高效液相色谱法对甘草中的甘草酸进行测定，比较不同的提取剂，同的流动相对甘不草酸测定的影响。采用ＯＤＳ柱（５ｍ ×４６ｍ）检测波长为２４ｍ，速０８／ｎ１ｃ．ｒａ，５ｎ流．ｍＬｍｉ。

高效液相色谱法测定甘草配方颗粒中甘草酸的含量

ＺｈｅｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＨｅｎａｎＴｕｍｏｒＨｏｐｉｔａ１），Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５０００８，Ｃｈｉｎａ；２．ＴｈｅｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓｃｈｏｏｌｏｆＺｈｅｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｙ，ｔＺｈｅｎｇｚｈｏｕ４５０００１，Ｃｈｉｎａ）
ＺＨＡＮＧＹｏｎｇ — ｎａＺＨＡＯＸｉｕ－ｌｉ，ＣＨＥＮＸｉｕ－ｙｉｎｇ（１．Ｄｅｐｔ．ｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＴｕｍｏｒＨｏｓｐｉｔａｌｏｆ
ｗａｓ２５０ｎｍ．ＲＥＳＵＬＴＳｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｗａｓｌｉｎｅａｒａｔａｒａｎｇｅｏｆ０．４９２—７．８７２ｔｘｇｆｏｒｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃａｃｉｄ（ｒ＝
学院郑州４５０００１）
摘要：目的建立甘草配方颗粒中甘草酸的含量测定方法。方法采用ｃｌ８色谱柱，以甲醇－０．２ｍｏｌ・Ｌ－１醋酸铵（６５：３５，醋酸调节ｐＨ值至
甘草酸在０．４９２— ７．８７２１ｘｇ之间呈现良好的线性关系，ｒ＝０．９９９９；平均加样

高效液相色谱法测定两种中药颗粒中甘草酸含量

高效液相色谱法测定两种中药颗粒中甘草酸含量【摘要】目的：探讨高效液相色谱法测定两种中药颗粒中甘草酸含量，并且论述了其提取工艺。

方法：应用高效液相色谱法同时测定复方甘草酸苷颗粒和甘草酸二铵颗粒的2份样品中甘草酸的含量，并分析比较了提取方法和测定条件。

结果：甘草酸在276nm处有最大吸收，最佳提取条件为：乙醇用量6倍于样品质量，提取温度为60℃，pH值为12。

同时在测定中，操作简便迅速，准确度和精密度均较理想，重现性好。

结论：高效液相色谱法测定复方甘草酸苷颗粒和甘草酸二铵颗粒中的甘草酸，操作简便迅速，精密度和准确度均较理想，稳定性强，回收含量高，值得推广应用。

【关键词】高效液相色谱法；复方甘草酸苷颗粒；甘草酸二铵颗粒；甘草酸本文建立了一种高效液相色谱分析方法来测定两种中药的甘草酸含量。

结果表明该方法操作简便迅速，精密度和准确度均较理想，稳定性强，回收含量高，可为测定中中药颗粒中甘草酸物质提供方法依据。

现报告如下。

1 材料与仪器试剂：95% 乙醇；无水乙醇；氯仿；正丁醇；丙酮；无水乙醚；盐酸；碳酸钡；；乙酸酐，以上试剂均为分析纯。

仪器：UV-2401P紫外分光光度仪(岛津公司)，TG328B光电分析天平(岛津公司)；CKQ-250DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

gilentlloo高效液相色谱仪(岛津公司)；HH-s2系列恒温水浴锅(岛津公司)；FTIR-8400S型红外光谱仪(岛津公司)；GSP-84-02型磁力恒温搅拌器(岛津公司)。

复方甘草酸苷颗粒(万通药业公司，批准文号：国药准字Z23020820/Z23020822)。

甘草酸二铵(北京制药厂，国药准字H20056547)。

2 方法与结果2.1 甘草酸的提取复方甘草酸苷颗粒和甘草酸二铵颗粒各100mg加入6倍体积量(V/V)的60%乙醇，NaOH饱和溶液调节pH至12，温度：60℃，加热回流提取2次，得到提取液200ml，然后进行减压浓缩得到浓缩液约100ml。

高效液相色谱法测定甘草提取物中甘草次酸的含量

高效液相色谱法测定甘草提取物中甘草次酸的含量确定以236nm为测定波长,测得314nm为氯霉素的等吸收点,为参比波长.2.2标准曲线的制备精密称取干燥至恒重的甲硝唑对照品50mg,置lOOmL的量瓶中,加乙醇适量使溶解,加水至刻度,摇匀,为储备液.分别精密量取1,2,3,4,5mL的甲硝唑储备液置lOOmL量瓶中,加水至刻度,摇匀,得其浓度分别为5,10,15,20,25p.g?mL的溶液.以236nm为测定波长,314nm为参比波长.分别测得其吸收度差△A.以吸收度差△A为x,甲硝唑对照品溶液浓度为Y作线性回归,得方程为Y=29.41X一0.3530,r=0.9998.甲硝唑浓度在5～25p.g?mL之间呈良好的线性关系.2.3加样回收率及精密度取已测得含量的样品,加入甲硝唑储备液适量,按含样品量测定方法,测得其浓度,计算出回收率.结果见表1.表1加样回收率测定结果(n=5)Tab1Resultsofrecoverytest(n=5)2.4溶液的稳定性按样品测定方法分别配制10p.g?mL的甲硝唑溶液和氯霉素溶液,在0,4,8h时分别测得236nm波长和314nm波长的吸收度,吸收度基本无变化.2.5样品测定精密量取样品1mL置lOOmL量瓶中,加水至刻度,摇匀,精密量取5mL置lOOmL量瓶中,加水至刻度,照分光光度法,以236nm为测定波长,314nm为参比波长,分别测得其吸收度,得到两波长吸收度差值△A.另取经恒重的甲硝唑对照品15mg.置lOOmL量瓶中,加乙醇适量使溶解,加水至刻度,摇匀,精密量取5mL置lOOmL量瓶中,加水至刻度,同法操作,求得吸收度差△A.按公式甲硝唑含量(相当于标示量%)=15×△A/△A×100/标示量×100%,计算得甲硝唑含量(相当于标示量%)分别是97.5%,96.7%,97.3%,97.8%,96.2%.3讨论3.1该制剂由甲硝唑和氯霉素组成,考虑用本法必需有对照品,中国药品生物制品鉴定所可供应的只有甲硝唑对照品,而氯霉素只有标准品暂时无化学对照品.因此,本实验先选择对甲硝唑进行含量测定.如氯霉素有化学对照品,则同样可用本法设计出双波长分光光度法测定氯霉素的含量.3.2本实验方法快速,简便,可用于药品生产过程中的质量控制.参考文献[1]中国药典2005年版二部[S].2005:125;776.[2]李发美.分析化学.北京:人民卫生出版社,2003:212.收稿日期:2005—12—16高效液相色谱法测定甘草提取物中甘草次酸的含量刘翠哲,李翠芹,刘喜纲(1.承德医学院中药研究所,河北承德067000;2.承德市中心医院,河北承德067000)摘要:目的用高效液相色谱法测定甘草提取物中甘草次酸的含量.方法采用的色谱柱为DiscoveryC.8柱(250×4.6mm),流动相为乙睛水.甲醇=7:2:1,流速为0.8mL.min～,检测波长268nm,柱温15~C.结果甘草次酸的线性范围为0.392~g～1.960~g,r=0.9998,重复性RSD=1.1%,平均加样回收率102.33%,RSD=1.3%.结论此法操作简单,重现性好,其它组分无干扰,可用于甘草次酸的含量测定.关键词:甘草;甘草次酸;高效液相色谱中图分类号:R917.799.1文献标识码:B文章编号:1007-7693【2006)03-0237-03 DeterminationofglycyrrhetinicacidintheRadixetShizomaGlycyrrhizaeextractbyRP-HP LCLIUCui—zhe,LICui—qin,LIXi—gang(1.1~titmeofChineseMateriaMedicaChengdeMedicalCollege,Chengde067000,Ch i-ha;2.TheCenterHmphdofChengde,Chengde067000,China)ABsTICT:OBJEC.IIⅦT0determinethecontentofglyeyrrhetinieacidinthedistilledlicoricebyHPLC.M研rHoDSThede—terrainationwascarriedoutbyRP.HPLConDiscoveryCl8column,,I1IIemobilephasewasC CN:H2O:MeOH(7:2:1)with0.8mL.min_.offlowrate.andthedetectionwavelengthWasat268nm,columntemperaturewas15℃.RESULTSThelinearrangeofglyeyr-thetinicacidwasfrom0.392~gto1,960~Lg.andthepeaineneesquotientWas0.9998,Thesam pleRSDofreproducibilitytestwas1.1%.theaveragerecoveryforglyeyrrhetinieacidWas102.33%andRSDwas1,3%.CONCL USIONThemethodissimple,re—produeibleandseleetine.ItCanbeusedforqualitycontrolofRadixetzomaGlyeyrrhizaeextra ct.中国现代应用药学杂志2006年6月第23卷第3期—ChinJMAP —,2006June.V o1.23No.3.237'KEYWORDS:licorice;glycyrrhetinicacid;RP.HPLC甘草(Radixglyc)Trhizae)为豆科植物甘草(GlycyrrhizauralensisFisch),胀果甘草(Glycyrrhizainflo~Bat.),或光果甘草(GlycyrrhizaglabraL.)的干燥根和茎,药理作用有解毒,抗炎,镇咳,平喘等….含有甘草酸和甘草次酸等有效成分,其中甘草酸是最为重要的成分,口服时甘草酸经酸水解后形成甘草次酸,在体内发挥药理作用.将甘草经过提取后得到甘草的提取物,含有以上两种成分,可以通过直接测定甘草次酸的含量来控制其含量.以前测定甘草次酸有中和滴定法,薄层扫描法,分光光度法,气相色谱法等引.我们用高效液相法测定甘草提取物中甘草次酸的含量,该法操作简单,分析时间短,重现性好.1仪器和试药1.1仪器高效液相色谱仪,uV.1575可见紫外检测器,PU.1580泵,CkChom色谱工作站(日本JASCO);AG-254型电子分析天平(瑞士梅特勒);LG16一W型医用离心机(北京医用离心机厂).1.2试药乙腈(色谱纯,天津市大茂化学试剂厂);甲醇(优级纯,天津市福晨化学试剂厂);双蒸水(自制);甘草次酸对照品(中国药品生物制品检定所);甘草(市售,经承德市药品检验所何会君副主任药师鉴定为豆科植物甘草).2实验方法和结果2.1色谱条件色谱柱:DiscoveryCl8柱(250mm×4.6mm,5p.m);流动相:乙腈一水一甲醇(7:2:1);流速:0.8mL.min～;检测波长: 268Bin;柱温:15℃;进样量10uL.2.2标准曲线的制备精密称取甘草次酸对照品约10mg,置于25mL量瓶中,用甲醇适量超声溶解,加甲醇至刻度,摇匀,配成甘草次酸对照品溶液.再精密吸取1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL,置10mL量瓶中,配成各个浓度的甘草次酸标准品溶液.2.3标准曲线的绘制分别取各个浓度的甘草次酸对照品溶液10依次进样,测定峰面积,记录色谱图及色谱峰面积,以进样量()对峰面积进行线性回归,得标准曲线方程为Y=1339468X+ 8860.1,相关系数r=0.9998,线性范围为0.392—1.960~g. 2.4精密度试验取标准品溶液,分别连续进样5次,每次进样101.~L,记录吸收峰面积,测定结果RSD=0.22%.2.5样品的含量测定2.5.1样品的制备将甘草用氨性醇提取后…,浓缩干燥,即得甘草提取物.对溶解样品的溶剂的种类,溶剂的用量, 条件进行考察,分别用乙醇,甲醇,乙酸乙酯和水;体积分别为10,25,50mL;溶解方法用加热和超声,结果确定样品的制备方法为:取样品约10mg,精密称定,置于25mL量瓶中,用适量甲醇溶解,超声处理15min,放冷,加甲醇至刻度,充分摇匀,于15000r?min下离心10min,取上清液备用.2.5.2含量测定分别吸取样品的上清液10进样,记录吸收峰面积,同时进样甘草次酸标准品液,用外标一点法,计'238'ChinJ而20算样品中甘草次酸的含量.在选定的色谱条件下,测得供试品中甘草次酸色谱峰不受其他成分干扰.结果见表l,图1,2.图1甘草次酸对照品的高效液相图谱Fig1ChromatogramofglycyrrhetinicacidstandardO5lOl5t(min)图2甘草提取物的高效液相图谱(图中为甘草次酸)Fig2ChromatogramofRadixetRhizomaGlycyrrhizae(slycy~- rhetinicacid)表1甘草提取物中甘草次酸的重复性实验Tab1Thereproducibilityoftheassay2.6加样回收率试验取已知含量的甘草次酸样品,精密称定5份,置于25mL量瓶中,分别加入甘草次酸对照品溶液,再加入甲醇适量,超声15min,放冷,用甲醇定容至25mL,转速15000r?min离心10min,精密进样101.~L,测定含量,计算加样回收率.结果见表2.2.7稳定性试验取甘草次酸样品溶液,室温放置,每2h上样1次,结果在12h内稳定.2.8样品测定按照"2.5.1"样品制备方法,测定三批甘草提取物的含量,结果见表3.中国现代应用药学杂志2006年6月第23卷第3期表2甘草提取物中甘草次酸的加样回收实验Tab2Recoveryofassayfordeterminationofglycyrrhetinicacid表3不同批次的提取物样品中甘草次酸的含量Tab3Thecontentsofglycyrrhetinicacidindifferentbatchesof sample3讨论3.1本实验对甘草提取物中甘草次酸进行了含量测定,在选择分离条件时,对其他成分未加分离,这样约20min可分析一个样品.3.2因为标准曲线中a>>b(a/b>100),采用了外标一点法,样品测定时进行随行对照品的方法,分析结果可得到较好的准确性.在进行加样回收时,并未进行梯度浓度加样,只考察了等量加入法,结果令人满意.3.3在选择制备样品溶液方法时,选择甲醇作溶剂,用超声法即可将有效成分提取出来.有的文献中采用波长250nm和流动相磷酸水甲醇系统分析体内的样品,但在本实验中,对得到的提取物进行分离效果不理想,而用其它溶剂和方法时结果均没有本实验中含量高.参考文献[1]苑可武,白芳,杨波,等.甘草酸的提取和精制法概述[j].中国医药工业杂志,2002,33(7):362-364.[2]范云鸽,史作清,何冰琳.甘草酸,甘草次酸的提取分离及应用概况[J].天然产物研究与开发,1996,8(4):9409.[3]胡玉兰.胃乐胶囊中甘草次酸含量测定分析[J].广西医科大学,2002,19(1):137—138.[43王骊丽,任平,黄熙,等.RP-HPLC法同时测定大鼠血中甘草甜素和甘草次酸[J].第四军医大学,2001,22(12):l1l1一lll3.收稿E1期:2005-04-05泛影葡胺增强扫描引起重度不良反应的少见原因及改良措施何远宇(鞍山市立山医院CT科,辽宁鞍山114031)中图分类号:ILo69.3文献标识码:B文章编号:1007-7693(2006)03-0239-01 造影增强扫描是当今CT诊断中一个很重要的技术,有些不易辨认或界线不清的病变,通过造影剂的强化,提高了病变和正常组织的对比度.随着CT技术的广泛应用,造影剂的使用也越来越多,如何合理的选择和使用就显得格外重要.现将我院连续发生的三例泛影葡胺过敏实验阴性进行增强扫描时,出现重度不良反映的表现,其原因及改良的措施报告如下,以供大家参考及引起大家注意.一般情况:发生时间,2005年12月问,男2例,女1例,年龄45—59岁,平均54岁,平时体健,无肝肾功能异常,无心脏病,糖尿病史,无过敏史.均为考虑肝内血管瘤,脂肪肝,肝脓肿而进行CT增强扫描.造影剂应用6o%泛影葡胺90—100mL,静脉人工推注,过敏实验阴性,扫描前肌注地塞米松10mg,三例患者均在推注后2—3rain左右,出现不同程度的面色苍白,呼吸困难,口唇发绀,以至很快昏迷,呼吸停止.即刻进行紧急吸氧,静脉注射地塞米松,皮下注射肾上腺素,静脉滴注多巴胺,等lOmin后,上述症状消失,检查生命体征恢复,送入病房,观察后恢复常态.CT造影剂的增强效果主要和碘含量有关,而不良反应主要与造影剂的渗透压,含有电荷有关.泛影葡胺是一种高渗性造影剂,渗透压明显高于血浆和体液,由于渗透压高可中国现代应用药学杂志2006年6月第23卷第3期以引起对机体内皮细胞和血脑屏障的损害,使内皮细胞发生渗透性皱缩,细胞问紧密性连接松散开放,造影剂通过毛细血管进入神经组织,产生一系列反应;另一方面,使红细胞内水份缺失,硬化,黏滞度高,微循环紊乱.同时它是离子型造影剂,在水溶液中,可解离成带有电荷的阴离子(含碘)和阳离子(含甲胺,钙,镁等),扰乱了电离环境和电解质平衡,虽然有诸多缺点,平时尚未发生有重度不良反映.但就我院冬季连续发生的三例病例中,我们发现重度不良反应的出现均与药物温度有关,因为北方冬季的气温,水温都很低,一次性大剂量的进入血液中,可能是引起各种理化反应的诱因,其具体发生的机制有待讨论.由于我们及时纠正改良了使用方法,在使用前将药物加温至与体温相符的状态,再进行增强扫描未再发现此类不良反应.由于造影剂的不良反应,重时可危及生命,必须引起高度重视,除了日常诸多注意事项及原因外,造影剂的温度尤应引起重视,特别是在冬季,合理选择,合理用药,减少不良反应的发生,可以使造影剂的使用在CT诊断技术中发挥更重要的作用.收稿日期:2005-09-27—Chin—JMAP,2006June,V o1.23No.3'239'。

高效液相色谱法测定中药中甘草酸的含量

高效液相色谱法测定中药中甘草酸的含量翟紫怡;刘方正;王琳;陈向明【摘要】建立高效液相色谱测定中药中甘草酸含量的方法.以0.3%的氨水超声提取甘草酸,在Syncronis C18色谱柱上,以55%乙腈(含0.2%磷酸)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温30 ℃,检测波长为256 nm.甘草酸在1.5~50 μg/mL范围内呈现良好的线性关系(r=0.9991),检测限为0.019 μg/mL,方法精密度RSD=0.08%(n=5).该方法具有分析速度快、灵敏度高、线性范围宽的优点.应用该方法测定了甘草和复方甘草片中甘草酸的含量.%A HPLC method was established for the determination of the content of glycyrrhizic acid in traditional Chinese medicine.In ultrasonic extraction of glycyrrhizic acid with 0.3% ammonia water, glycyrrhizic acid was separated on a Syncronis C18 column with 55% acetonitrile as mobile phase, flow rate of 1.0 mL/min and column temperature of 30 ℃.The detection wavelength was set at 256 nm.The calibration curve of glycyrrhizic acid showed good linearity in the range of 1.5~50 μg/mL, the correlation coefficients (r) was 0.9991 and limit of detection was 0.019 μg/mL, methods precision RSD=0.08%(n=5).The method has the advantages of high analysis speed, high sensitivity and wide linear range.It is used to determine the content of glycyrrhizic acid in glycyrrhiza uralensis and compound liquorice tablets.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2017(045)009【总页数】3页(P133-134,148)【关键词】高效液相色谱法;甘草酸;紫外检测【作者】翟紫怡;刘方正;王琳;陈向明【作者单位】滨州医学院药学院,山东烟台 264003;滨州医学院药学院,山东烟台264003;滨州医学院药学院,山东烟台 264003;滨州医学院药学院,山东烟台264003【正文语种】中文【中图分类】O657.7甘草是我国常用大宗药材，药用部位为根和根茎[1]，具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药的功效[2]。

高效液相色谱法分析测定甘草、甘草酸制品及中成药中β-型甘草次酸的含量

口公司提供，特此致谢。
参考文献
１江苏新医学院。中药大辞典
１７５７９７６
上海：上海人民出版社，中国药典。部北京：一人
２中国卫生部药典委员会编民卫生出版社，９７１２１７３
３ｏｈＴｋｏＭａａＫｓｉａＭｉｉＳｉａａＹｓｉａｉ，ｓｊｏｈｋ，ｃｋｈｋｗｅｏｎｉｏｈｏｏｔ
ａ．ＰａｔＭｅ，９９３（）７８ｌｌｎａｄ１７；６１：４
对上述三种不同提取方法制备的样品溶液进行
４舒永华，炘，徐光唐伟杰等。中草药，９６１１８７５１０
５ＢｒｂｒｅｌａｅｔＢ，ＭａｔｅｉＭｔｏｎａｄｌＥ，ＧｂｔａｒｉｌＥｅａ．ＣＡ，ｎｌｌ１８；２２４７．９０９：８５ｃ
考察：吸取标准溶液稀释至５ｇｍ／Ｌ左右，进行紫外
光谱测定，发现２４ｍ处有最大吸收峰，本实验５ｎ故选在此波长下扫描，谱峰较好。准确吸取标准溶液１Ｌ，后加入到所测样品溶液中，ｍ然稀释至刻度２ｍ，０Ｌ依前述测样品操作进行测试（见表４。
（／。ＶＶ
动相为甲醇水冰乙酸＝７２１９０，进样量
测波长２４ｍ。５ｎ
Ｌ，
流速１５ＬｍｉＰ－柱１０ｉ４６ｍｄ，．ｍ／ｎＳＣ８５５ｍｎ．ｍｉ．检．
标准曲线的绘制
准确称取５ｍ０ｇ左右（确精芤
至
００ｍ）．１ｇ甘草次酸标准品，放入５Ｌ容量瓶ｍ

甘草中有效成分甘草酸的提取和测定方法研究概况

·综述·甘草中有效成分甘草酸的提取和测定方法研究概况鲁守平,孙　群,王建华,孙宝启3(中国农业大学农学与生物技术学院,北京100094)[摘要]　综述了甘草中有效成分甘草酸的提取、纯化和测定方法的研究概况。

稀醇溶液对甘草酸的提取效果较好,添加稀氨水后可提高甘草酸的提取收率;超声波强化或微波辅助提取可提高甘草酸的提取效率并节约提取溶剂和提取时间,C O 2超临界流体法无毒、高效且不需加热即可将甘草酸与溶质分离开来;T LC ,HP LC ,CE 方法可实现甘草酸及甘草次酸含量的快速、准确测定。

[关键词]　甘草;甘草酸;提取;测定[中图分类号]R 284　[文献标识码]A [文章编号]100125302(2006)0520357204[收稿日期]　2005204219[通讯作者]　3孙宝启,T el :(010)62732775,E 2mail :sbq5583@ 甘草是我国常用的中草药品种之一,除主要医药用外,还广泛地应用于烟草、食品、酿造以及化妆品工业等领域[1]。

甘草的主要有效成分为甘草酸(glycyrrhizic acid )或甘草甜素(glycyrrhizin )及甘草次酸(glycyrrhetinic acid )等三萜类化合物、甘草黄酮类化合物以及甘草多糖等[2]。

药理研究表明,甘草酸及甘草次酸具有解毒、消炎、镇痛、抗肿瘤的作用,近年来,还用于防治病毒性肝炎、癌症以及艾滋病等[3]。

甘草酸及甘草次酸的提取和含量的测定在甘草研究中具有举足轻重的地位。

我国虽是甘草生产和出口的大国,但对甘草主要有效成分甘草酸的生物合成、作用机制、精制加工和综合利用的深入研究还落后于日本等国。

受技术条件和工艺限制,应用传统方法提取的甘草酸粗品的纯度低,在国际市场上的价格低,并且提取效率也低,对甘草资源的利用不充分,影响了我国甘草产业的发展。

目前,国内外涌现出许多先进的提取技术(如超临界流体提取法、微波辅助提取法等),以及高效灵敏的测定方法(如高效液相色谱、毛细管电泳[4]等),对这一领域研究的一些进展进行简单的概括,希望有助于我国甘草的研究和利用开发。