石蜡切片制作标准程序

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石蜡切片制作流程

石蜡切片制作流程以石蜡切片制作流程为标题，写一篇文章。

石蜡切片制作是一项常见的实验技术，在生物学、医学和材料科学等领域广泛应用。

石蜡切片可以用于显微镜下的观察和分析，能够提供关于细胞和组织结构的详细信息。

下面将介绍一下石蜡切片的制作流程。

1. 组织固定：首先，需要从感兴趣的样本中取得组织样本，并将其进行固定。

固定是为了保持组织的形态结构和化学成分，常用的固定剂有福尔马林、乙醛等。

固定过程中，需要确保样本完全浸泡在固定液中，通常需要数小时至数天的时间，以确保组织被充分固定。

2. 脱水：固定后的组织样本需要进行脱水处理，以去除其中的水分。

脱水是将样本中的水分逐渐替代为有机溶剂，常用的有乙醇、丙酮等。

通常采用递增浓度的有机溶剂，从低浓度逐渐提高到高浓度。

每个浓度的脱水液中，样本需要浸泡一定的时间，以确保脱水彻底。

3. 渗透：脱水后的组织样本需要进行渗透处理，以使其与石蜡更好地结合。

渗透剂通常为石蜡溶液，可以将样本浸泡在石蜡溶液中，以使其逐渐渗透进入组织内部。

渗透过程中，需要注意控制温度和时间，以确保渗透均匀。

4. 包埋：渗透后的组织样本需要进行包埋处理，即将其嵌入到石蜡中。

首先，将组织样本放置在石蜡模具中，并加入适量的石蜡。

然后，将模具放入石蜡包埋机中，利用加热和真空等处理，使石蜡与组织样本充分结合。

包埋过程中需要严格控制温度和时间，以确保石蜡固化完全。

5. 切片：包埋后的组织样本需要进行切片处理，以获取薄片供观察。

首先，使用切片机将石蜡块切割成薄片。

然后，将薄片置于载玻片上，并加热使其与载玻片结合。

最后，使用刮片等工具将石蜡薄片修整成所需的形状和大小。

6. 然后，对切片进行染色处理，以增强对组织结构的观察。

常用的染色方法有血液学染色、免疫组化染色等。

染色后，可以使用显微镜观察和分析切片中的细胞和组织结构。

总结起来，石蜡切片制作流程包括组织固定、脱水、渗透、包埋、切片和染色等步骤。

每个步骤都需要严格控制条件和时间，以确保制作出高质量的石蜡切片。

石蜡切片的主要制备程序

石蜡切片的主要制备程序
石蜡切片的主要制备程序可以概括为以下几个步骤：
1. 准备样品：选择需要切片的样品，如组织样本、细胞样品等，并采取相应的固定、处理和染色等预处理步骤，以保证样品的稳定性、可观察性和对比度。

2. 材料准备：准备好所需的石蜡、切片盒、切片刀、载玻片等材料，并进行清洁和消毒处理，以避免污染和交叉感染。

3. 石蜡浸透：将处理好的样品转移到石蜡中进行浸透。

首先将样品置于温度逐渐升高的浸透剂（如正己烷）中，以去除组织内水分和其他溶质，然后置于石蜡中进行浸透。

4. 切片制备：将石蜡浸透的样品固定于切片盒中，将石蜡块剪碎成适当大小，并放置在切片刀的刀脊上。

调整切片机参数（如温度、角度、速度等），并逐个切割出薄片。

5. 切片贴片：将切好的薄片浮于温水中或使用其他方法，如电离子器、热平台等，以使切片展平并附着于载玻片上。

6. 干燥固定：将切片连同载玻片一起进行干燥固定处理，以去除水分并保持切片的形态稳定。

7. 切片染色：根据实验需求，对切片进行适当的染色处理（如组织学染色、免疫组化染色等），以增强样品的可视化效果和区分感兴趣的结构。

8. 封片封装：将切片封装至封片盖玻片上，使用透明化导电胶或其他封片剂固定切片，并尽量排除气泡、保证封片质量。

9. 切片质控：对制备好的切片进行质量控制，使用显微镜观察和评估切片的清晰度、结构完整性、染色效果等。

最后，制备完成的石蜡切片可以用于显微镜观察、组织形态分析、病理学研究等应用。

需要注意的是，在整个制备过程中，应遵循标准实验操作规程、注意安全，以及依据实验要求进行相应的优化和调整。

石蜡切片流程范文

石蜡切片流程范文石蜡切片是一种常见的组织学技术，用于制备生物组织薄片，使其可以在显微镜下观察和分析。

下面是石蜡切片制备的详细流程。

1.组织固定：首先，需要选择适当的方法将生物组织进行固定，以保持其形状和结构。

最常用的方法是使用福尔马林溶液进行组织固定。

将组织样品置于福尔马林溶液中，通常需要固定24至48小时。

2.去水：固定完毕后，需要将组织中的水分除去，以便进行后续的处理。

通过逐渐提高样品中酒精浓度（例如70％、80％、95％和100％构成的酒精梯度）来逐步去除水分，通常每次浸泡20至30分钟。

3.清洁：去水后，通常需要对样品进行清洁，以去除可能存在的污物和其他杂质。

可以用清洁的醇溶液（例如100％酒精）浸泡样品数分钟，然后用去福尔马林等溶液洗涤样品。

4.浸渍：在石蜡切片制备过程中，需要将组织样品浸泡在石蜡中，以使其渗透并得到支撑。

选择适当的石蜡类型和温度很重要。

通常使用低熔点石蜡（例如58℃石蜡），在60至65℃的恒温水浴中加热并溶解石蜡。

5.渗透：将组织样品从酒精中转移到融化的石蜡中，通常需要经历多个步骤的渗透过程。

首先将样品浸泡在75％酒精中，然后再依次转移到浓缩的酒精溶液中（例如85％、95％和100％）和石蜡中，每次浸泡时间约为1小时。

6.包埋：当样品完成渗透后，需要进行包埋，即将渗透后的组织样品放置在切片模型中，并用石蜡封住。

将切片模型倒置，将溶解的石蜡缓慢倒入模型直到完全覆盖组织样品。

然后将切片模型固定在冷却装置中，等待石蜡冷却和固化。

7.切片：当石蜡块完全固化后，可以将其切割成所需的薄片。

通常使用旋转切片机或手动切片机进行切片。

将切片机的刀片调整到所需厚度（通常为3至5微米），将石蜡块放置在切片机上，并逐渐将刀片与石蜡块接触，以制备薄片。

8.制片：将切好的石蜡薄片静置在温水中，让其自然展开，并将其转移到预涂有胶水的载玻片上。

轻轻将玻片压在石蜡薄片上，以确保两者之间有良好的接触。

然后将载片放置在恒温台上，以便胶水干燥。

石蜡切片的主要制备程序

石蜡切片的主要制备程序石蜡切片是一种常见的制备生物样品的工艺，广泛应用于医学、生物学、病理学等领域。

石蜡切片的主要制备程序包括固定、脱水、浸渍和切片等过程。

本文将从深度和广度两个角度对石蜡切片的主要制备程序进行全面评估，并探讨其在实际应用中的价值。

一、固定固定是石蜡切片制备的第一步，其目的是使生物样品中的细胞和组织结构固定在原位，防止其在后续处理过程中变形或失去形态。

常见的固定剂包括福尔马林、乙醛等。

固定的方法主要有浸渍法、注射法和灌注法等。

浸渍法将固定剂直接浸泡在样品中；注射法将固定剂注入样品内部；灌注法则使用压力灌注固定剂进入样品组织。

选择合适的固定方法取决于样品的性质和研究目的。

二、脱水固定后的样品中仍存在大量的水分，需要通过脱水处理将水分逐渐替换成有机溶剂，如乙醇或异丙醇。

脱水的目的是使样品适应后续的浸渍和渗透操作。

脱水可以采用逐步脱水法或直接脱水法。

逐步脱水法是将样品从低浓度有机溶剂逐渐过渡到高浓度有机溶剂；直接脱水法则是使用高浓度的有机溶剂直接将水分蒸发掉。

在脱水过程中，要注意控制处理时间和控制脱水剂的对样品的渗透力，以避免破坏样品结构。

三、浸渍脱水后的样品中已经没有水分，需要进一步进行浸渍处理，使组织结构与石蜡亲和力增强，以便在后续切片过程中组织块的稳定性。

浸渍的目的是用石蜡浸透样品，并使样品与石蜡变得相容。

浸渍可以采用逐渐浸渍法或直接浸渍法。

逐渐浸渍法是将样品从低熔点的石蜡逐渐过渡到高熔点的石蜡；直接浸渍法则是使用高熔点的石蜡直接浸渍样品。

在浸渍过程中，要注意控制温度和时间，以保证样品完全浸透。

四、切片浸渍后的样品已经与石蜡融为一体，可以进行切片操作。

切片是将浸渍的样品切割成薄片的过程，以便于后续的染色和显微观察。

切片可以采用手工切片法或机械切片法。

手工切片法是使用手持刀片将样品切割成薄片；机械切片法则是使用专用的切片机进行切片。

在切片过程中，要注意操作的轻重和刀片的锋利度，以保证切割的质量和样品的完整性。

石蜡切片步骤

⽯蜡切⽚步骤⽯蜡切⽚基本步骤（⼀）取材和固定根据实验⽬的选择材料。

将整个⾍体或⾍体的内部器官（如肠道、马⽒管、唾液腺等）取出后，⽴即投⼊固定液。

取材⼤⼩：0.5cm×0.5 cm×0.2或者1.0 cm×1.0 cm×0.2，厚度不宜超过3mm。

固定液：2.5%的戊⼆醛固定液，Bouin⽒液，10%甲醛等。

固定时间：4oC固定24⼩时。

注意事项：取材：1．勿使组织块受挤压切取组织块所⽤⼑、剪要锋利，切割时不可来回切割。

夹取组织时，镊⼦要轻，切勿挤压，以免损伤组织。

取材时，组织块可稍⼤⼀点，以便在固定后，将组织块的不平整部分修去。

2.选好组织块的切⾯应熟悉器官组织的组成，并根据观察⽬的来确定纵切或横切。

3．保持材料的清洁组织块上如有⾎液、污物、粘液、⾷物等，先⽤⽣理盐⽔冲洗⼲净，再⼊固定液。

4．切除（清除）不需要的部分特别是组织周围的脂肪等，应尽可能清除掉，以免影响以后的程序和观察。

固定：1．材料新鲜取出组织后须⽴即固定。

否则时间相隔过久，体积就要收缩变形或发⽣⾃溶现象。

2．抽⽓⽣物组织常有⽓体的存在，使材料不能沉⼊固定液中，抽⽓使得固定液有效渗⼊。

真空泵抽⽓或者⽤空针管抽⽓。

昆⾍整体固定，固定前⽤解剖针刺数个⼩孔，以利⽤固定液渗透。

3．固定剂⽤量⼀般为组织体积的10~20倍。

勿使组织贴于瓶底或瓶壁，以免影响固定剂的渗⼊。

4．避免阳光尽可能避免接触阳光以免失去固定作⽤。

5．加速固定轻轻摇动盛器使组织移动有利于固定液渗⼊，对长期固定的标本可经常更换固定液。

（⼆）洗涤2.5%戊⼆醛固定液固定的组织：0.2M, pH7.2磷酸缓冲液漂洗三次，每次10minBouin⽒固定液固定的组织：直接⼊70%酒精更换数次即可脱⽔，注意苦味酸。

甲醛固定的组织：直接投⼊50%或70%酒精脱⽔，不经⽔洗。

但如果在甲醛中时间过长，则仍应当⽤流⽔冲洗。

陈旧性标本和混合性固定液应及时洗涤，有利于脱⽔、切⽚和染⾊。

石蜡切片的基本操作流程

石蜡切片的基本操作流程一、取材选取目的组织块，修剪到合适的大小；二、固定将组织块放入福尔马林固定液（10%甲醛溶液），固定时间由组织块大小而定，一般不少于24h；体积1cm3的组织块，一般为3-7天；三、冲水自来水洗几下，泡1小时；四、系列酒精脱水50%酒精，1h；70%酒精，1h；80%酒精，1h；90%酒精，1h；100%酒精（I），1h；100%酒精（II），1h；五、透明酒精：二甲苯=1：1溶液，过夜；二甲苯，1h；六、包埋二甲苯：石蜡=1：1，65-70 ℃，2h；新鲜石蜡（I），65-70 ℃，1h；新鲜石蜡（II），65-70 ℃，4h；新鲜石蜡包埋；七、切片切片厚度为5-7um；八、展片温水（40-42 ℃）展片；九、捞片将展好的片子贴于载玻片上；十、烘片42 ℃将片子上的水烘干；十一、烤片60 ℃烤片12-24h；十二、脱腊二甲苯（I）：2min；酒精：二甲苯=1：1溶液：2min；十三、水化100%酒精（I）：1min；100%酒精（II）：1min；95%酒精：1.5min；80%酒精：1.5min；70%酒精：1.5min；50%酒精：1.5min；自来水洗：2min十四、H&E染色Hematoxylin染色3-5min(2.5min时取出观察染色效果)，自来水洗3次，盐酸分化（2/3杯玻璃缸+3滴1N盐酸），10s；自来水洗蓝化，镜下观察染色效果；（伊红）Eosin染色30-50s，直接脱水（90%酒精-----100%酒精I，100%酒精II各1分------酒精：二甲苯=1：1溶液：1-1.5min）；十五、脱水90%酒精-100%酒精-100%酒精，各1min；十六、透明二甲苯：酒精：1-1.5min；二甲苯：2min；十七、封片中性树胶封片；十八、镜下观察并拍照。

石蜡切片的步骤2021.7.21

石蜡切片的步骤2021.7.21(1)取材：选取生长良好、有代表性的目标材料，洗净。

用锋利的双面刀片截取材料，动作要迅速。

材料的大小不超过0.5~lcm。

(2)固定：将选取的材料放人固定液中，固定液的体积大约是材料的20倍。

固定剂有FAA固定液。

FAA既是良好的固定剂，也是保存剂，材料可以在其中长久保存。

而卡诺固定液和纳瓦兴固定液则不能长久保留材料，固定后，使用70%的乙醇尽快清洗2~3次，转人70%乙醇中保存。

若材料含有空气，固定时需要抽气。

(3)脱水：固定好的材料经各级乙醇脱水至纯乙醇。

各级乙醇的浓度为：30%、50%、70%、85%、95%和l0O%、l0O%，每次脱水40min，材料可浸泡二甲苯保存在4℃冰箱 (4)透明：。

由于石蜡溶于二甲苯而不溶于乙醇，因此透明的作用除了使材料变得透明外，另一方面是将材料中的乙醇除去。

采用3/4乙醇+1/4二甲苯, 2/4乙醇+2/4二甲苯, 1/4乙醇+3/4二甲苯,纯二甲苯两次，每次透明时间为40min，透明完成后材料可浸泡纯乙醇保存在4℃冰箱。

(5)浸蜡：使石蜡慢慢溶于透明剂中，然后完全取代透明剂进人植物组织中。

一般将透明好的材料换入新的二甲苯中，然后加入等体积的碎蜡，置于65℃左右的温箱中。

随着碎蜡的溶解，不断加入碎蜡使石蜡饱和为止，时间大约l~2天。

(6)包埋：浸蜡后，在60℃的温箱中浸蜡后，在60℃的温箱中，换两次已溶解的纯蜡，每次约2h，新石蜡然后将材料和石蜡一起倒应先融一次增加密度，凝固后再融才能使用，小纸盒中，用加热的镊子迅速把材料按需要的切面和一定的间隔排列整齐，再将小纸盒平放于冷水中，使其很快凝固。

(7)修块：将包埋好的材料切割成小块，每个小块包含一个材料。

然后按需要的切面将蜡块切成梯形，切面在梯形的上部，注意上部矩形的对边平行。

梯形的底部用烧热的蜡铲将其固定在木块上。

(8)切片：用手摇切片机将蜡块切成连续的蜡带。

切片时，把切片刀夹在刀架上，再把木块夹在固定装置上，调整固着位置，使材料的切与面刀口平行。

石蜡切片制备基本步骤

石蜡切片制备基本步骤一、准备工作（一）（一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗）1、用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷2、将器皿在自来水下冲洗干净3、将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗1~3次烘干备用。

（二）配制：硫酸洗液的配制清洁液（洗液）的配制：成分强酸液次强酸液弱酸液浓硫酸（ml）1000200100重铬酸钾（mg）63120100蒸馏水（ml）2002001000重铬酸钾1200g蒸馏水2000ml将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中，边倒边用木棒轻轻搅拌（三）载玻片与盖玻片的处理1.将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时2.流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍3.95%~100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。

二、准备工作（二）常用液体的配制（一）缓冲溶液：1．磷酸盐缓冲液A液：0.1mol/L磷酸二氢钠B液：0.1mol/L磷酸氢二钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（3：7≈PH7.0）2．枸椽酸缓冲溶液A液：0.1mol/L枸椽酸B液：0.1mol/L枸椽酸钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（6.2：42.8≈PH6.2）（二）固定剂：1．甲醛：10%甲醛福尔马林100ml蒸馏水900ml注：实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。

2．10％中性福尔马林钙固定液甲醛液10ml蒸馏水90ml加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。

3．4%多聚甲醛：8%多聚甲醛多聚甲醛8g蒸馏水100ml加温至60℃左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。

滴加1N NaOH，并不停搅动至液体清明。

石蜡切片制作流程

石蜡切片制作流程石蜡切片制作流程表一. 取材1，样品要求：长，宽各1cm左右，厚不超过5mm2，固定液：10%福尔马林固定液或4%多聚甲醛：组织块=20:1为宜3，固定时间：依大小而定，一般3-5h即可，如24h或更长，应密封瓶口，封前换液4, 修块二.脱水1，水洗：将固定组织块放入广口瓶，瓶口用纱布包好，置流水下水洗，水洗时间依固定时间而定，一般12h以上，固定时间越长水洗时间越长。

2，脱水1）75%酒精1h2) 80%酒精1h3）95%酒精Ⅰ1h4) 95%酒精Ⅱ1h5) 100%酒精Ⅰ1h6) 100%酒精Ⅱ1h组织块在进入下一阶段梯度酒精前要用吸水纸吸干水，尤其在95%酒精（Ⅱ）中进入100%酒精（Ⅰ）中，切记防止带入水分，所有过程要在瓶口加盖，防止水分进入。

三．透明1)酒精（100%）：二甲苯=1：1 10min2)二甲苯Ⅰ透明10min3二甲苯Ⅱ10min四．浸蜡1）二甲苯：石蜡=1：1 30min 温箱56—58℃2）石蜡Ⅰ1h 温箱56—58℃3) 石蜡Ⅱ1h 温箱56—58℃4) 石蜡Ⅲ1h 温箱56—58℃温度保持在56—58℃，温度太高会烧坏组织块，太低石蜡会凝固。

五．包埋首先在金属框架上涂抹凡士林，以保证石蜡到入后不会外溢。

将包埋用石蜡及浸蜡组织块放在有石棉网的电炉上保温。

在框架中先倒入少许包埋用石蜡，再用镊子将组织块迅速移入框架，再倒入石蜡，待完全凝固后取出待用。

六．切片和烘片（烘片温度38℃）七．附贴（45℃）；烤片（一）附贴（45℃）附贴液的配制：新鲜蛋白20ml,麝香草酚少许，用玻璃棒混匀，再加入甘油20ml,继续混匀。

若有多聚懒氨酸处理的切片则直接用之。

（二）烤片：温箱内的温度应保持在40-45℃之间，烤片时间至少1小时。

八．H．E染色（一）脱蜡1 二甲苯Ⅰ（脱蜡） 10min2 二甲苯Ⅱ（脱蜡） 10min3 100%酒精Ⅰ（脱二甲苯） 10min4 100%酒精Ⅱ（脱二甲苯） 10min5 95%酒精Ⅰ（脱二甲苯） 5 min6 95%酒精Ⅱ（脱二甲苯） 5 min7 80%酒精（脱二甲苯） 5 min8 自来水或蒸馏水洗（去酒精）5 min （二）染色1 苏木素染液 6 min2 冲洗清水（兰化）15 min3 酸水分化视情况而定 10-20S4 冲洗淡蓝色即可 20 min5 伊红染液视情况而定6 min （三）脱水，透明13 80%酒精颜色淡化14 95%酒精Ⅰ 5min15 95%酒精Ⅱ 5 min16 100%酒精Ⅰ 5min17 100%酒精Ⅱ 10min18 二甲苯Ⅰ（透明） 5min19 二甲苯Ⅱ（透明） 10 min 九．封片：用中性树胶将切片标本封固。

石蜡切片的制作程序

石蜡切片的制作程序1、病料的采集：采集病料要及时，以防组织变质发生自溶。

病理组织材料要采取病变典型突出的部分，最好选病变与健康组织的交界处，以识别和探讨病变的发生和发展。

组织块一般不宜过大，以3～5mm×3～5mm×10～15mm为宜。

过大过厚的组织块容易影响固定和浸蜡的质量，不易切出较好的切片。

采取病料时应保持器官组织的原来形状，用锋利的刀剪切取，切勿挤压，损伤或扭折，以免造成人为的损伤。

2、固定：固定的目的是使组织和细胞的较粗大的结构尽量保持正常状态，避免发生形态学结构变化，使细胞保持一定的硬度，以利于切片。

采取的病料组织块应及时投入固定液内进行固定，以防腐败。

并做好标记，便于识别。

固定液用量一般为组织块体积的10～20倍。

固定剂的种类很多，一般能凝固或沉淀蛋白质及脂肪等成分的药品都可以做固定剂。

如：酒精、甲醛、冰醋酸、苦味酸、升汞等等。

可以按照不同的目的来选择使用固定剂，常用的固定剂主要是福尔马林(formalin 37～40%的甲醛)，最适合固定的浓度为10%福尔马林(3.7%～4%甲醛)，固定和保存时所用的溶液是指福尔马林的百分比，而不是甲醛，例10%福尔马林溶液是10毫升的福尔马林加上90毫升的水配成。

所以10%的福尔马林，实际上仅含3.7～4%的甲醛。

福尔马林易被氧化为甲酸，故常带酸性，为得到中性福尔马林可加吡啶、碳酸钙或碳酸镁的方法使之中和。

例如在100毫升的25%福尔林中加5毫升的吡啶；可使它的pH 上升到7.0；10%的福尔马林可被过量的碳酸钙中和为pH6.4；如果用碳酸镁则为pH7.6。

冲淡的福尔马林(10%)更易氧化，为了保持它的中性，可于其中放入几小块大理石。

福尔马林必须为无色透明，若贮藏时间较长或存放在温度太低会变混浊，呈絮状物。

为防止该现象的发生可提前加少许甘油以阻滞其聚合，沉淀物则可加热溶解，如加热仍不能溶解，则可加等量热的0.8%碳酸钠或0.4%氢氧化钠(约60～70℃)溶液，在室温放置2～3天，沉淀物就会消失。

石蜡切片步骤

石蜡切片-paraffin section 制备—苏木精-伊红对染法实验原理：石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。

苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。

这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。

经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。

实验用品：（一）器材切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。

（二）试剂卡诺（Carnoy）固定液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。

试剂配法：1、卡诺氏固定液：100%酒精3份冰醋酸 1份或：100%酒精6份氯仿 3份冰醋酸 1份2、埃利希苏木精染液的配法：苏木精 1g纯酒精 50ml冰醋酸 5 ml甘油 50 ml钾矾（硫酸铝钾）约5g（饱和量）蒸馏水 50 ml配法：ⅰ、将苏木精溶于约15 ml的纯酒精中，再加冰醋酸后搅拌。

ⅱ、当苏木精溶解后即将甘油倒入并摇动容器，同时加入其余的酒精。

ⅲ、将钾矾在研钵中研碎并加热，然后将它溶解于水中。

ⅳ、将温热的钾矾溶液一滴一滴地加入上述染液中，并随时搅动。

ⅴ、此液混合完毕，将瓶口用一层纱布包着小块棉花塞起来，放在暗处通风的地方，并经常摇动以促进它的成熟。

成熟时间约3~4周。

若加入0.2g碘酸钠，可立刻成熟。

此液稳定而染色均匀，染核效果良好，不会发生沉淀，长期贮备无妨。

此液可分别与伊红等进行二重染色。

3、1%伊红酒精溶液：伊红1g溶于100 ml95%酒精溶液。

4、1%盐酸乙醇液盐酸 1份70%酒精 100份5、甘油蛋白贴片剂：蛋白 50 ml甘油 50 ml水杨酸钠（防腐剂） 1g配制时将鸡蛋一个打破入碗或杯中，去蛋黄留下蛋白，用玻棒调打成雪花状泡沫，然后用粗纸或双层纱布过滤到量筒中，经数小时或一夜，即可滤出透明蛋白液。

石蜡切片的制作

• • • •
½叔丁醇+ ½石蜡（讲预热的叔丁醇加入事先融解的石蜡里） 40℃恒温加盖约12h， 60℃将叔丁醇挥发干净换三次新蜡（每次间隔两小时）
包埋
• 1.各种器具的预热 • 2.包埋盒较好用（培养皿冷水） • 切片 • 植物组织切片的厚度（8——20um） • 粘片 • 现在使用的粘剂应先用水展片，40℃过夜
• 因为乙醇的密度小于水的，可以利用这点判断脱水程度 •
透明
(注意叔丁醇的熔点，在转移至纯的叔丁醇时注意镊子的温度）
1 无水乙醇叔丁醇 2/3 1/3 1h
2
4 0 1 1/2h
5 0 1 1/2h
6 0 1 1/2h
浸蜡
（在浸蜡前注意蜡的处理）
石蜡切片的制作
实验步骤
• • • • • • • • • • • • 1.取材 2.固定 3.冲洗 4.脱水 5.透明 6.浸蜡 7.包埋 8.切片 9.粘片 10.脱蜡 11.染色 12.透明
脱水
• 乙醇作为脱水剂
• 50%（1h） 70%（1:30h） 80%（1：10h） • 90%（1h） • • • 95%（40min） 100%（30min） 100%(20min) 100%（20min）
染色
• TBO（38-40℃,10-20min） • • • 水冲洗去浮色二甲苯脱蜡（8-15min）甘油封片（重要）
改进前后照片

石蜡切片的制作过程

石蜡切片的制作过程（一）花药切片制片法1．取材2．固定：FAA液中固定24h，并保存在其中。

3．脱水：经70％乙醇、85%乙醇，每级3~4h，含1%伊红的95％乙醇中3~4h（可以过夜），无水乙醇2次，每次1~2h。

4．透明、加蜡：5级氯仿透明，每级3~4h，纯氯仿2次，每次2h，加碎蜡，然后置36℃温箱中1~2d5．浸渗、包埋：50%、70%蜡各3h，再经纯蜡A、纯蜡B、纯蜡C三杯，每杯1h，包埋。

6．修蜡块、切片：粘蜡块时组织块直立于台木上，并用单面刀片切除先端石蜡，浸水软化后放在切片机上坐横切片，切片厚12μm。

7．展片、粘片、烘片：蜡片先镜检，每张载玻片上放2个蜡片，展片后将材料平放在摊片盘上，放置36℃温箱中烘干。

8．脱蜡、透明：二甲苯脱蜡、透明各1次。

9．染色（番红-固绿双重染色）：在已脱蜡的材料上滴注无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、70%乙醇、50%乙醇、30%乙醇、蒸馏水各4~5s，苯胺番红染色5~10min，用蒸馏水洗去浮色。

10．脱水、透明：各级乙醇脱水（30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、85%乙醇、95%乙醇），苯胺固绿复染30~40s，再经95%乙醇，无水乙醇，1/2无水乙醇+1/2二甲苯、二甲苯2次，各约4~5s，最后置二甲苯缸中。

11．封片、烘片：加拿大树胶封片。

封片后将材料平放在摊片盘上，放置36℃左右的温箱内烤数天即可烤干。

最后，将干燥好的切片上的浮色擦净，并在玻片的左端粘上标签，注明组织切片的名称、染色方法、固定方法、年月日。

制片日程（二）花芽纵切片制片法1．取材2．固定：FAA液中固定24h，并保存在其中。

3．整染：经70％乙醇、50%乙醇各2~4h，转入爱氏苏木精稀释液（爱氏苏木精原液1份，加入50%乙醇及乙醇各半的混合液1份）中整染2~3d。

4．水洗、反蓝：蒸馏水浸洗，勤换水至无浮色渗出，再转入自来水中，换1~2次水，至样品由紫色变深蓝色为止，共需时约1d。

石蜡切片的制作

石蜡切片的制作石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。

石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，它有很多优点，例如，比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片，能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存等。

缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆，制片时间太长。

一、石蜡切片的制作过程石蜡切片的制作过程主要是：取材→水洗→固定→水洗→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→染色。

（一）取材及水洗根据实验要求选取材料来源及部位，取要求部位的小块组织成为组织块，组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。

切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。

由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时，因此一般情况下，将动物处死后立即取需要的材料。

组织块取下后，先用相应的生理盐水漂洗以洗去血液、污渍以及粘液等。

如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。

（二）固定材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定以保持其原有的结构。

不同的组织应选用适当的固定液。

固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1，不应使组织块贴于容器壁上。

材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。

固定的时间长短依据材料大小而定。

固定液有许多种，在固定的过程中应该根据需要选取合适的固定液，一般固定液都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化而失去固定作用。

有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早固定时就没有作用了。

（三）水洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。

，主要目的是洗去固定液的颜色以便后续的染色。

石蜡切片具体过程及操作步骤精心整理

石蜡切片具体过程及操作步骤固定：组织块大小：1.5×1.5×0.2 CM固定液>4倍组织体积福尔马林固定市售为40%甲醛水溶液，应放入小量碳酸钠放置一段时间福尔马林固定液：40%甲醛溶液1份，水9份固定数小时后用水洗24小时优点：克服了乙醇固定的缺点脱水（组织块）70%乙醇片刻80%乙醇2-4小时95%乙醇2-4小时95%乙醇2-4小时100%乙醇2-4小时100%乙醇2-4小时注：为保证100%乙醇无水，可在容器中放入无水硫酸铜吸收水分，变蓝后更换。

最好能将100%乙醇中取出来的组织浸入香柏油后再经二甲苯后浸石蜡。

透明（组织块）100%乙醇：二甲苯（1：1）15分钟二甲苯15分钟二甲苯15分钟注意：时间太长变脆浸蜡（组织块）石蜡熔点52—56℃温箱：56℃二甲苯：石蜡（1：1）1-2小时石蜡1-2小时石蜡1-2小时包埋将熔化了的石蜡倾入包埋框内，随即迅速将组织块用加温了的镊子送置于框内，平置底面。

注意组织切面，放入冷水，冷固后将蜡块修齐，固定于木块上。

石蜡切片切片机：调整好。

刀：磨刀时一个方向，液体石蜡。

切下的片子，右手用弯镊子轻轻钳牢石蜡切片，左手用干燥毛笔将切片取下，放入盛温水（约30℃）的玻璃皿内，将切片摊于温水面上，光亮的切面向下，用弯镊子细心张开皱纹。

然后将水温加到40℃，使切片更平均地展开于水面上，再用弯镊子细心分开各蜡片，将涂过少许蛋白甘油的载玻片沉至切片下面，然后将切片从水面取出。

最后将切片置于56℃保温箱内烘干，需时2小时。

刀的倾角：20—30°冬天石蜡52-54℃，夏天56-58℃HE染色法石蜡切片Ⅰ二甲苯2-5分钟（冬季56℃温箱）Ⅱ二甲苯2-5分钟（冬季56℃温箱）100%乙醇1min95%乙醇1min80%乙醇1min70%乙醇1min先用自来水而后用蒸馏水洗0.5minHarris氏苏木紫液5min。

苏木紫为盐基性染料可染细胞核。

石蜡切片的流程及注意事项

石蜡切片的流程及注意事项Working with paraffin sections can be both challenging and rewarding in histology and pathology laboratories. 石蜡切片在组织学和病理学实验室中的应用既具有挑战性，也有收获感。

It is crucial to follow proper procedures and precautions to ensure the quality and accuracy of the results. 遵循正确的程序和预防措施对于确保结果的质量和准确性至关重要。

Here, we will discuss the process of paraffin sectioning and highlight some important considerations to keep in mind. 在这里，我们将讨论石蜡切片的过程，并强调一些需要牢记的重要事项。

The first step in the paraffin sectioning process is tissue fixation, which involves preserving the tissue structure and preventing degradation. 石蜡切片过程中的第一步是组织固定，这涉及保留组织结构并防止降解。

Proper fixation is essential for maintaining the integrity of cellular and tissue structures for accurate histological examination. 适当的固定对于维持细胞和组织结构的完整性以进行准确的组织学检查至关重要。

Common fixatives used include formalin, paraformaldehyde, and glutaraldehyde, each with its advantages and limitations. 常用的固定剂包括甲醛、对甲醛和戊二醛，每种固定剂都有其优点和局限性。

石蜡切片制作流程表及相关注意事项

石蜡切片制作流程表及相关注意事项一、取财1．样品要求：长宽1cm左右，厚度不超过5mm。

2．固定液：10％福尔马林固定液︰组织块=20︰1为宜。

3．固定时间：依大小而定，一般3-5h即可，如果24h或更长，应密封瓶口，封前换液。

4．修理组织块：将切面修平。

5．每个组织块都应编号，并做好记录。

6．用纱布包好组织块，并包上小纸条，注明编号、组织块数量等信息。

注：（1）对于肺部组织，在取材后必须用玻璃注射器抽掉肺泡腔中的气体，否则会影响脱水，透明和浸蜡等效果。

抽气具体方法：A．将组织块置入空玻璃注射器内，塞上推助器。

B．.向注射器内吸入约1/2的自来水，就会发现肺组织漂浮在水面。

C．排掉注射器内的空气。

D．将注射器倒置(头部向上)，用左手拇指赌上注射器头部,用右手用力拉推肋器。

E．反复C、D两步骤，直到肺组织沉到注射器底部即可。

（2）对于气管、支气管等含钙量较高的组织，必须有脱水前用5％和硝酸溶液软化，直到可用大头针扎透为止（一般需一天一夜）。

二、脱水过程1．水洗：将固定组织块放入广口瓶，瓶口用纱布包好，置流水下洗水，水洗时间依固定时间而定，一般12h以上，固定时间越长水洗时间越长。

2．脱水（1）75％2h（2）80％酒精1h（3）95％酒精Ⅰ 1 h（4）95％酒精Ⅱ 1 h（5）95％酒精Ⅲ过一夜（6）100％酒精Ⅰ 1 h（7）100％酒精Ⅱ 1 h组织块在进入下一阶段梯度酒精前要用吸水纸吸干水，尤其从95％洒精（Ⅲ）进入100％酒精（Ⅰ）时，切记防止带入水分，所有过程要在瓶口加盖，防止水分子进入。

（其他注意项见下文）三、透明（1）酒精（100％）︰二甲苯=1︰1 过度20min（2）二甲苯Ⅰ透明15min（3）二甲苯Ⅱ透明15min四、浸蜡（1）二甲苯︰石蜡=1︰:1软蜡（熔点52℃～54℃） 1h 温箱56～58℃(2) 石蜡Ⅰ（熔点54℃～56℃） 1h 温箱56～58℃（3）石蜡Ⅱ软硬混合（熔点更高） 1h 温箱56～58℃浸蜡温度保持在56～58℃，温度太高会烧坏组织块，太低石蜡会凝固。