实时荧光定量RT-PCR、细胞培养法和鸡胚培养法在流感检测中的对比分析
采用PCR和细胞培养方法比较流感样病例不同标本的流感病毒检出观察
采用PCR和细胞培养方法比较流感样病例不同标本的流感病毒检出观察作者：陈丽萍来源：《中国医药科学》2015年第15期[摘要] 目的探讨采用PCR和细胞培养方法比较流感样病例不同标本的流感病毒检出情况。
方法分析我中心2013年12月～2014年3月收集的流感指征患者193例作为研究对象，分别采集鼻拭子和咽拭子各1份，分别通过荧光PCR、细胞培养对流感病毒进行检测。
结果鼻拭子对B亚型流感病毒敏感性较高，通过PCR和MDCK细胞接种中阳性率高于咽拭子（P0.05）。
结论流感病毒监测过程中，根据当地流行主要流感病毒亚型来选择鼻拭子和咽拭子，对于提高流感病毒检出率具有很重要的意义。
[关键词] 荧光PCR；细胞培养；流感病毒；检出[中图分类号] R511.7 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2015）15-147-03[Abstract] Objective To explore influenza virus detection of different specimen for influenza-like cases by polymerase chain reaction （PCR） and cell culture. Methods 193 patients with influenza indications who were admitted to our center from December 2013 to March 2014 were selected as research objects. One nose swab and one throat swab were respectively collected and influenza virus was respectively detected by fluorescent PCR and cell culture. Results Nose swab was more sensitive to B subtype influenza virus and positive rate of nose swab by PCR and Madin Darby canine kidney （MDCK） cell culture was higher than that of the throat swab（P0.05）. Conclusion In influenza virus detection process， choosing nose swab or throat swab according to local prevalent influenza virus subtype has important significance in improving detection rate of influenza virus.[Key words] Fluorescent PCR； Cell culture； Influenza virus； Detection流感是目前常见的传染性疾病，每年在全世界范围内有大量的流行性感冒发生，其也会造成一定数量的死亡[1-2]。
流感病毒RNA荧光RT-PCR检测技术
流感病毒RNA荧光RT-PCR检测技术实时荧光定量PCR是在常规PCR基础上发展起来的定量PCR技术，通过在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积，实时监测整个PCR进程，最后根据ct值和标准曲线，对未知模版进行定量分析。
常用的实时荧光定量PCR又分为非特异性荧光标记的SYBR Green 法和特异性荧光标记的TaqMan法和分子信标法。
一、实时荧光定量PCR原理：1、SYBR Green法：SYBR Green是一种双链DNA结合染料，游离状态下不发光，非特意地掺入到双链DNA中后发出荧光信号，其强度与双链DNA的数量相关，随着扩增产物量的增加，检测到的荧光信号增强。
2、TaqMan法：在扩增反应液中，加入一特异性探针，该探针5‘端和3’端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团，探针完整时，两基团位置靠近，5‘端报告基团的荧光能量被3’端淬灭基团吸收，此时检测不到荧光信号，在扩增过程中，探针与模板结合形成Taq 酶的5‘→3’外切活性底物，当Taq酶沿模板向前延伸到探针结合处时，发生链的置换，Taq酶的5’→3’外切活切将探针5‘端连接的报告基团从探针上切割下来，5’端报告基团的荧光能量脱离3’端荧光淬灭基团的吸收，可检测到荧光信号，每经过一个PCR循环，荧光信号也和扩增产物一样，有一个同步增长的过程。
3、分子信标法：探针设计成茎环结构的发夹状，环部核苷酸序列与扩增产物序列互补，两端核苷酸序列互补形成茎部，且一端标记有报告基团，另一端标记有淬灭基团，探针未与模板结合时，报告基团和淬灭基团空间位置靠近，报告基团的荧光能量被淬灭基团吸收，此时，检测不到荧光信号，与模板结合后，探针的构象由发夹状改变为链状，报告基团和淬灭基团分离，可检测到荧光信号。
核酸检测是一种鉴定流感病毒基因组的有力方法，即使基因组含量很低或死病毒也可以检测到。
本章将介绍检测流感病毒的聚合酶链式反应（PCR）。
流感病毒的基因组是负链RNA，在进行PCR扩增前必须合成与病毒RNA 互补的DNA，即为cDNA。
流感病毒检测中细胞培养法与实时荧光定量PCR法效果比较-
流感病毒检测中细胞培养法与实时荧光定量PCR法效果比较- 摘要】目的：研讨流感病毒检测中细胞培养法与实时荧光定量PCR法效果比较。
方法：选取2018-1至2020-1某医院518份流感季节符合流感病例定义的流感标本，采用数字随机表将其分为2个小组。
对照组：应用细胞培养法：实验组：应用实时荧光定量PCR法。
结果：实验组A/B型阳性率50.97%，B型阳性率3.86%，A型H3亚型阳性率17.76%，A型H1亚型阳性率34.75%高于对照组A/B型阳性率23.94%，B型阳性率1.16%，A型H3亚型阳性率6.18%，A型H1亚型阳性率12.74%，互比，存在差异性，（P＜0.05）。
结论：实时荧光定量PCR法与细胞培养流感病毒检测有一定价值，前者检测方法优势性更强，若有需要，还可将以上方法联合应用，更可提高检测价值。
【关键词】细胞培养法；流感病毒；检测；实时荧光定量PCR法;效果比较;流感病毒易诱发机体出现呼吸道感染等疾病，流感病毒不断演变，易增加流行性感冒，这对人们群众的机体健康非常不利。
近年来，医学研究者加强对流感病毒的研究，进一步分析与观察流感病毒流行株构成、抗原性以及基因特异性等，从而做好相关预防流感措施，确保我国人们群众身心健康[1]。
因此，本文针对流感病毒应用细胞培养法与实时荧光定量PCR法实施检测，观察检测效果。
1资料与方法1.1 一般资料选取2018-1至2020-1我某医院518份流感季节符合流感病例定义的流感标本，采用数字随机表将其分为2个小组。
对照组259例：女性119份，男140份，平均年龄（29.83±1.48）岁；实验组259例：女性122份，男137份，平均年龄（29.90±1.49）岁；两组在资料方面互比，差距小，（P＞0.05）。
将所有标本放置在-70°C环境中存放，在24h检测完毕。
1.2方法核酸提取：根据全自动核酸提取仪相关说明书与配套试剂进行相关操作。
禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立
禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立王楷宬;王素春;朱琳;仲焕香;黄保续【摘要】为满足禽流感病毒高通量快速检测的需要,建立了一种能够检测各亚型禽流感病毒的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性和灵敏度进行评估,使用该方法与农业行业标准NY/T772-2013中的禽流感病毒RT-PCR方法同时进行临床样品检测.结果显示,该方法检测耗时短、特异性好,检测下限达10-4ng/μL,与传统的RT-PCR方法阳性符合率为100％.结果表明,本方法能实现对禽流感病毒的安全、特异、快速、灵敏、简单、高通量检测,从而弥补了现有传统检测技术的不足.【期刊名称】《中国动物检疫》【年(卷),期】2019(036)004【总页数】6页(P64-69)【关键词】禽流感病毒;实时荧光定量RT-PCR;检测【作者】王楷宬;王素春;朱琳;仲焕香;黄保续【作者单位】中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛266032;中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛266032;中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛266032;南京农业大学,江苏南京210095;中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛266032【正文语种】中文【中图分类】S852.65禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）为单股负链RNA病毒，由 8个独立的RNA节段组成。
该病毒的显著生物学特征之一是亚型众多、变异频繁。
迄今为止从禽类体内已经分离到上千种毒力各异的毒株，根据病毒粒子表面的血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的抗原性差异，将其分为18种HA亚型（H1～H18）和11种 NA 亚型（N1～N11）[1-3]。
禽流感分布很广，世界各地均有分离出该病病原的报道。
其病原致病性有高致病性和低致病性之分。
禽流感的发生给养禽业造成严重危害。
据联合国粮农组织（FAO）报告，2003—2004年禽流感在越南暴发导致的损失预计为该国GDP的0.3%～1.8%[4]。
实时荧光RT-PCR法快速检测流感病毒的效果分析
综上所述，实时荧光RT-PCR法快速检测流感病毒的特异性与灵敏度均较高，而且操作方便，效率高，可以作为公共卫生应急疫情的实验室快速诊断方法。
1.2.2检查方法
采用实时荧光RT-PCR法对本组所有样本进行流感病毒核酸检测分型，每次试验均设置阳性对照和阴性对照，保证Ct值符合试剂说明书的要求[3]。
2.结果
本组1355份咽拭子标本中共检测出流感病毒核酸阳性573份，总阳性率为42.29%；其中甲型H1N1流感352份，占流感阳性标本总数的61.43%；B型76份，占流感阳性标本总数的13.26%；季节性流感H1亚型21份，占流感阳性标本总数的3.66%；季节性流感H3亚型124份，占流感阳性标本总数的21.64%。
表1本组实时荧光RT-PCR检测情况分析
组别检测样本数阳性率（n/%）病毒型别
甲型H1N1 B型季节性流感H1季节性流感H3
0～岁组41 9/21.95 5 2 0 2
5～岁组135 108/80 73 15 11 9
15～岁组237 153/64.59 62 46 33 12
25～岁组118 63/53.39 42 31 24 21
摘要】目的：探讨实时荧光（RT-PCR）法快速检测流感病毒在临床中的应用效果，为今后的流行病学监测提供思路。方法：以我中心2014年1月至2014年12月期间采集的1355份流感样病例（ILI）及暴发疫点现患病例的咽拭子标本作为本组研究的观察对象，采用实时荧光RT-PCR方法对流感病毒核酸进行检测分型。结果：本组1355份咽拭子标本中共检测出流感病毒核酸阳性573份，总阳性率为42.29%；其中甲型H1N1流感352份，B型76份，季节性流感H1亚型21份，季节性流感H3亚型124份。结论：实时荧光RT-PCR法快速检测流感病毒的特异性与灵敏度均较高，而且操作方便，效率高，可以作为公共卫生应急疫情的实验室快速诊断方法。
荧光RT—PCR检测活禽和禽组织中禽流感病毒的研究
荧光RT—PCR检测活禽和禽组织中禽流感病毒的研究摘要：实时的荧光RT—PCR检测技术，是在常规PCR平台上发展出来的量化PCR工艺技术，通过在PCR的反应系统中添加了大量荧光反应基团，之后再经过大量荧光数据的积累，就可以即时的监控了整个PCR流程，之后又利用x射线断层成像数据的标准曲线，对所有未知模型都实现了定性分析。
关键词：RT—PCR；活禽和禽组织；禽流感病毒；研究目前中国国内对禽流感的鉴别与检测，大多采取病原分离方法和血清学检测.虽然病原分离方法是一个比较准确的检测方式，但由于具有费时太远、操作程序复杂等弊端，因此无法广泛应用在对禽流感的快速监测上.而血清学方法大多用于测定抗体水平，而目前正在大量应用疫苗的状况下，也制约着这种方式的广泛应用.所以，寻求一个迅速、灵敏的检测技术用于测定动物及产品中的禽流感病毒，已成为当前中国禽流感检测工作的主要当务之急.荧光RT-PCR技术是指使用由A型流感病毒共有基因组特异序列所制备的一个特异性引物，与一个特殊的荧光双标探测器发生PCR反应，再利用检测器所吸收的荧光值来确定结果.该技术具备迅速、灵敏、特异、精确、安全和使用简便等优势，已成为当前检验禽流感的重要标准，由国家市场监督管理局按照规定在全国所有的大中型家禽产品出口公司所在地的政府直属部门试行.但因为该种技术所用的仪器设备和试剂都比较价格昂贵，所以目前普及使用还有相当难度.为了如何衡量该种技术和常规方法之间的相互关系及其它们技术上的相似性，本试验所分别使用了俩种禽流感的通用RT-PCR方式，对禽流感H9亚型病毒及实际样品开展了检验，以期在快速、敏感度、特殊和实用性等领域开展了对比，为禽流感检验办法的制定提出了理论依据。
1.禽流感病毒分型及病原结构和特点禽流感,是由A型流感病毒所导致的一个禽类病毒性综合征。
因为它从1878年开始在德国蔓延,当时被人们称为“鸡瘟”。
禽流感病毒一般根据其致病性分成高致病性禽流感病毒、低致病性禽流感病毒和不致病性禽流感病毒。
实时荧光RT-PCR与细胞培养法在流感病毒检测中的应用效果观察
实时荧光RT-PCR与细胞培养法在流感病毒检测中的应用效果观察姚秀林【摘要】目的：分析研究实时荧光逆转录聚合酶链式反应RT-P CR和细胞培养法两种检测方法在流感病毒检测中的应用、及适合的领域。
方法采集2014年10月至2015年3月国家级流感检测哨点医院抚顺市中心医院内科和儿科门诊病例咽拭子样本500份，同时采用实时荧光RT-PCR检测流感病毒核酸，以及采用MDCK 进行阳性标本培养，分离流感病毒，比较两种方法的灵敏度以及差异性。
结果在500份样本中，通过荧光RT-PCR检测阳性84份；通过MDCK细胞培养法阳性35份。
二者之间的差异具有统计学意义（P<0.05）。
结论实施荧光RT-P CR在检测流感病毒时快速有效，更适合应急疫情的快速诊断。
细胞培养法更适合核实疫情的实验室诊断，通过病毒抗原性和基因特性进行分析，是流感病原学检测的基础。
【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2016(000)004【总页数】2页(P47-48)【关键词】实时荧光RT-PCR;细胞培养法;病毒核酸;MDCK【作者】姚秀林【作者单位】辽宁省抚顺市疾病预防控制中心，辽宁抚顺113006【正文语种】中文【中图分类】R511.7流感病毒可引起急性呼吸道疾病，具有传染性，俗称流行性感冒。
目前流感已经做到了全球监测，但是却仍然无法完全控制，所以，有效的鉴定流感病毒，进行有效分离是监测和临床诊断的基础。
本文通过实时荧光RT-PCR［1-2］、MDCK细胞培养法来对流感病毒的检测分离进行分析探讨。
1.1 标本来源：2014年10月1日至2015年3月31日在国家级流感监测哨点医院抚顺市中心医院内科和儿科门诊就诊患者，每周采集20份流感样病例（体温≥38 ℃，伴咳嗽或咽痛之一者）咽拭子样本，置于MEM采样液中，低温运送至实验室。
样本数量：500份。
1.2 器材和试剂：仪器采用采用AB 7500 Fast荧光定量扩增仪、倒置显微镜、二氧化碳培养箱。
禽流感病毒三种病原学检测方法的比较研究
禽流感病毒（AIV ）为正粘病毒科甲型流感病毒属，单股负链RNA 病毒。
依据其外膜血凝素（H ）和神经氨酸酶（N ）蛋白可分为H 亚型和N 亚型，目前已发现18个HA 和11个NA 亚型［1］。
已报道能感染人类的禽流感病毒有H5［2］、H7［3］、H9［4］等亚型。
其中H5、H7为高致病性亚型，潜伏期短，大多无临床症状而突然死亡，发病率和致死率极高［5-6］；H9为中低致病性亚型，几乎所有的养禽场均存在［7］，各型禽流感还可与其他病原混合感染，导致禽病复杂化。
禽流感不仅危害养禽业，也严重威胁人类健康，影响国际贸易。
因此，研发、筛选和使用快速准确的临床检测方法对于禽流感的防控具有重要意义［8］。
目前，禽流感诊断方法较多，国标方法有鸡胚培养分离法、血凝和血凝抑制试验、琼脂凝胶免疫扩散试验、酶联免疫吸附试验、RT-PCR 、荧光定量RT-PCR ，以及农业农村部推荐的免疫酶渗滤（Dot-ELISA ）法和胶体金免疫层析试纸条法［9］，这些方法各有优缺点和适用范围。
本试验主要选用了目前已商品化的禽流感病原高敏快速荧光免疫法、胶体金免疫层析纸条法和实时荧光RT-PCR 法进行研究，对比这三种方法在临床快速诊断中的实用性，为禽流感病毒检测提供指导。
1材料与方法1.1材料1.1.1禽流感病毒H5、H7和H9亚型血凝抑制试验抗原，均购自哈尔滨兽医研究所。
1.1.2试剂禽流感病毒高敏快速荧光免疫检测试剂盒由成都微瑞生物科技有限公司提供；禽流感病毒荧光RT-PCR 检测试剂盒（通用型）购自哈尔滨国生生物科技股份有限公司；国产禽流感病毒抗原检测卡购自国内某生物股份有限公陈弟诗1，陈斌1，章健2，邱明双1，邓飞1，王泽洲1（1.四川省动物疫病预防控制中心，四川成都610041；2.成都微瑞生物科技有限公司，四川郫都611731）中图分类号：S854.43文献标识码：B文章编号：1001-8964（2019）04-0027-04收稿日期：2018-12-18作者简介：陈弟诗（1981-），男，四川雅安市人，预防兽医博士，高级兽医师，主要从事动物疫病防控工作以及动物传染病病原分子生物学研究。
常用流感病毒实验室检测方法的比较
常用流感病毒实验室检测方法的比较摘要目的通过对四种常用流感病毒检测方法的比较，确定适用于常规监测及疫情暴发时的检测方法。
方法用四种方法对随机抽取的50份样品进行检测，对结果进行对比分析。
结果胶体金法虽简单快速，但漏检率较高（20.00%）；RT-PCR法灵敏快捷，准确度高（34.00%）；细胞培养法费用适中，检出率较高（14.00%）；鸡胚培养法检出率最低（2.00%）。
结论胶体金法适合疫情现场检测，RT-PCR法适合实验室内快速检测，组织培养法适合常规监测，鸡胚培养法适合流感疫苗生产。
关键词组织培养；鸡胚培养；病毒分离；RT-PCR；流感病毒现在实验室对流感病毒的检测手段有很多种，在本科室常用的方法有胶体金法、细胞培养法、鸡胚培养法、RT-PCR法四种。
为实际工作中找到最适合的检测方法，更及时准确的提供检测结果，对实验室常用的四种流感病毒检测方法进行比较。
现报告如下。
1 资料与方法1. 1 检测样品2014年1～4月份本院对就诊的流感样病例（发热，体温≥38℃，伴咳嗽或咽痛之一者，未服用过抗病毒药物[1]）采集的鼻咽拭子，随机抽取50份。
流感病毒采样管由北京友康恒业科技有限公司购买。
1. 2 实验方法1. 2. 1 胶体金法美国QUIDEL公司，QuickVue Influenza A+B Test，按照试剂盒说明书操作。
1. 2. 2 细胞培养法MDCK细胞由辽宁省疾病预防控制中心提供。
样品前处理：将采样管漩涡震荡10 s，反复挤压拭子头后弃去拭子，加入青霉素、链霉素、制霉菌素，4℃静置2 h。
细胞传代及病毒接种按照郭元吉等所著的《流行性感冒病毒及其实验技术》操作[2]。
样品接种MDCK细胞培养出的第一代病毒培养液用1%豚鼠血红血球进行微量血凝实验（haemagglutination assay，HA），HA≥1：8的第一代病毒培养液用血凝抑制法（hemagglutination inhibition，HI）进行流感病毒分型鉴定（鉴定试剂盒由国家流感中心提供）。
实时荧光RT-PCR与细胞培养法在流感病毒检测中的应用
实时荧光RT-PCR与细胞培养法在流感病毒检测中的应用【摘要】目的：探究实时荧光RT-PCR与细胞培养法在流感病毒检测中的应用价值。
方法：从本中心2012年7月至2015年10月接收的流感样病例收集的咽拭子样本中，随机抽取采集时间在发病3天内的标本300份，采用实时荧光RT-PCR进行流感病毒核酸检测，并进行比较两种方法对于流感病毒检测差异。
结果：在本次选取的300份标本中，实时荧光RT-PCR阳性检出共84份，阳性检出率为28.00%，通过MDCK细胞培养阳性检出共35份，阳性检出率为11.67%，组间统计学分析具有显著性差异（P＜0.05）。
结论：研究表明，实时荧光RT-PCR与细胞培养法对于流感病毒的检测均具有一定的特异性，且前者可以作为流感病毒核酸检测的一种快速有效的手段，并且适用于公共卫生疫情监测实验室诊断，而细胞培养法可以作为流感病毒监测的基础。
【关键词】实时荧光RT-PCR；细胞培养法；流感病毒检测；应用价值流行性感冒病毒（influenza virus）简称流感病毒，可引起急性呼吸道传染病-流行性感冒（简称流感）。
流感为我国法定的乙类传染病，是国际上第一个实现全球监测的、并且至今无法完全加以控制的一种病毒性急性呼吸道传染病，所以能够有效地分离和鉴定流感病毒已成为流感病毒的监测和临床诊断的前提[1]。
临床常采用细胞培养法以及实时荧光RT-PCR对流感病毒进行分离、检测，为进一步探究实时荧光RT-PCR与细胞培养法在流感病毒检测中的应用价值，特进行如下研究：1 资料与方法1.1样本来源从本中心2012年7月至2015年10月接收的流感样病例收集的咽拭子样本中，随机抽取采集时间在发病3天内的标本300份，其中男性164例，女性136例，年龄在3—67岁不等，平均年龄为（43.34±3.43）岁。
1.2器械和试剂采用的器械主要包括ABI 7500荧光定量扩增仪、二氧化碳培养箱以及倒置显微镜。
流感病毒检测中细胞培养法与实时荧光定量PCR法效果比较
流感病毒检测中细胞培养法与实时荧光定量PCR法效果比较发表时间：2019-11-14T08:53:45.650Z 来源：《航空军医》2019年11期作者：叶招兴杨兴斌[导读] 评价采用细胞培养法以及实时荧光定量PCR法在流感病毒检测中的临床价值。
（南安市疾病预防控制中心 362300）摘要：目的评价采用细胞培养法以及实时荧光定量PCR法在流感病毒检测中的临床价值。
方法选择我中心于2018年6月-2019年8月收集采集到的流感样病例的350份咽拭子样本为研究对象，对其分别采取细胞培养法以及实时荧光定量PCR法进行检测，比较两种检验方式的阳性检出率。
结果实时荧光定量PCR法阳性检出率为11.43%高于细胞培养法的2.86%，差异具有统计学意义（P<0.05）。
结论实时荧光定量PCR法在临床检测中具有简单快捷、简单快捷以及灵敏度高等优势，可应用于流感爆发初期大面积快速筛查。
关键词：细胞培养法；实时荧光定量PCR法；流感病毒检测；阳性检出率流感病毒也可称之为流行性感冒，具有一定的传染性，可能导致急性呼吸道疾病。
尽管现阶段临床上可有效监测流感病毒，但仍旧无法对流感病毒予以完全控制，因而需临床加强对流感病毒准确鉴定及分离，以提高检出率[1]。
基于此，本文选择我中心于2018年6月-2019年8月收集采集到的流感样病例的350份咽拭子样本为研究对象，对其分别采取细胞培养法以及实时荧光定量PCR法进行检测，比较两种检验方式的阳性检出率。
现分析如下：1 资料与方法1.1基线资料选择我中心于2018年6月-2019年8月收集采集到的流感样病例的350份咽拭子样本为研究对象。
男性217例，女性133例；年龄3-59岁，平均年龄（32.07±7.22）岁。
纳入标准：体温＞38℃，发热症状在3d内，同时伴有咳嗽或咽痛症状。
将所收集到的咽拭子样本置于MEM采样液中，并于2-4℃保存运送至实验室。
1.2方法对咽拭子样本采取细胞培养法与实时荧光定量PCR法检测，具体方式如下：①细胞培养法：取1.5mLEDTA胰酶加入至细胞培养瓶中，摇动1min后倒掉EDTA胰酶，加入1.5mL EDTA胰酶，并于37℃下行4min温浴后将EDTA胰酶倒掉。
荧光实时定量RT-PCR和普通RT-PCR的区别
荧光实时定量RT-PCR和普通RT-PCR的区别
实时荧光定量PCR原理
所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
1．内标在传统定量中的作用
由于传统定量方法都是终点检测，即PCR到达平台期后进行检测，而PCR经过对数期扩增到达平台期时，检测重现性极差。
同一个模板在96孔PCR仪上做96次重复实验，所得结果有很大差异,因此无法直接从终点产物量推算出起始模板量。
加入内标后，可部分消除终产物定量所造成的不准确性。
但即使如此，传统的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法。
2．实时荧光定量PCR无需内标
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。
因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：1）Ct值的重现性
PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系
由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
实时荧光定量PCR仪用于流感病毒检测的效果分析
实时荧光定量PCR仪用于流感病毒检测的效果分析【摘要】本研究旨在分析实时荧光定量PCR仪在流感病毒检测中的效果。
首先介绍了实时荧光定量PCR仪的原理和流感病毒检测方法，然后详细阐述了实验设计和结果分析。
通过对实验数据的分析和讨论，揭示了实时荧光定量PCR仪在流感病毒检测中的优势和局限性。
对实时荧光定量PCR仪在流感病毒检测中的应用前景进行了展望，并总结了研究结论。
本研究为提高流感病毒检测的准确性和效率提供了重要参考，对进一步的研究具有重要意义。
【关键词】实时荧光定量PCR仪、流感病毒、检测、效果分析、研究背景、研究目的、研究意义、原理、方法、实验设计、结果分析、讨论、应用前景、研究总结、展望。
1. 引言1.1 研究背景流感病毒是一种广泛传播的呼吸道病毒，可以引起流感病毒感染。
流感病毒感染严重影响了人们的生活和健康，尤其是在流感季节，容易导致疫情暴发。
及时准确地检测流感病毒对于预防和控制疫情至关重要。
本研究旨在探讨实时荧光定量PCR仪在流感病毒检测中的应用效果，并比较其与传统检测方法的优劣势，为提高流感病毒检测的准确性和效率提供参考。
通过本研究，希望能够为流感病毒的预防和控制提供科学依据，减少疫情对人们生活和健康的影响。
1.2 研究目的本研究的目的是通过实时荧光定量PCR仪对流感病毒进行检测，分析其检测效果和准确性。
具体目标包括：1.验证实时荧光定量PCR 仪在流感病毒检测中的灵敏度和特异性，比较其与传统PCR方法的检测效果；2.评估实时荧光定量PCR仪在临床样本中的应用价值，探讨其在流感病毒监测与诊断中的潜在优势；3.研究实时荧光定量PCR仪在流感病毒检测中的快速性和稳定性，为其在临床实践中的推广提供理论支持和技术参考。
通过以上研究目的的实现，我们旨在为流感病毒检测技术的改进和提升提供科学依据和技术支持，为促进流感病毒的早期诊断和有效防控提供有力保障。
1.3 研究意义流感病毒是一种高传染性的呼吸道病毒，造成严重的全球公共卫生问题。
实时荧光定量PCR在检测流感病毒中的应用
实时荧光定量PCR在检测流感病毒中的应用发表时间：2016-04-12T13:53:29.383Z 来源：《健康世界》2015年28期供稿作者：龚靖丹[导读] 义乌国际旅行卫生保健中心流行性感冒病毒（Influenza virus）是正黏病毒科的代表种，简称流感病毒。
龚靖丹义乌国际旅行卫生保健中心 322000摘要：目的：探讨荧光定量PCR的检测流感病毒中的应用。
方法：采用实时荧光定量PCR法对60份经胶体金快速检测法筛查检测的标本进行检测，进行统计分析，评估不同方法灵敏度和特异性差异。
结果：实时荧光定量PCR法和胶体金快速检测法的阳性率分别为78.33%和58.33%，胶体金快速检测法较于实时荧光定量PCR的灵敏度和特异性分别为74.47%和53.85%。
结论：实时荧光定量PCR检测技术可作为流感防控的病原快速检测技术。
关键词：流感病毒；胶体金快速检测；实时荧光RT-PCR流行性感冒病毒（Influenza virus）是正黏病毒科的代表种，简称流感病毒，是单负链分节段的RNA病毒，易引起人群的上呼吸道感染。
人流感病毒分为甲（A）、乙（B）、丙（C）三型，是流行性感冒的病原体。
病毒的表面抗原血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）易发生变异，是导致其引起世界大流行的原因。
甲型流感病毒可感染多种动物，也是人类感染的主要病原。
甲型流感病毒根据其H和N抗原的不同，又可分为多个亚型。
其中H抗原有15个亚型，N抗原有8个亚型。
人类容易感染和传播的主要有H1N1、H2N2、H3N2这三种亚型。
流感病毒的临床症状容易和普通感冒相混淆，传统的实验室确诊方法耗时长而且技术要求高，无法及时对暴发疫情做出诊断。
实时荧光定量PCR（Real-Time Quantitative PCR）技术，利用PCR对核酸的高度扩增，探针技术的高特异性的特点，实现了PCR从定性到定量的飞跃，不仅克服了常规PCR检测易污染与假阳性率高的缺点，而且具有特异性强、灵敏度高和自动化操作等优点，利用RT-PCR方法可快速检测流感病毒。
实时荧光定量PCR仪用于流感病毒检测的效果分析探讨
实时荧光定量PCR仪用于流感病毒检测的效果分析探讨摘要：目的：探讨在流感病毒检测中采用实时荧光定量PCR仪进行检验的临床效果。
方法：选择我院2018年1月至2018年12月收治180例流感病样病例为研究对象，使用咽拭子采集标本，使用实时荧光定量PCR法进行流感病毒核酸的测定，如果为阳性则执行MDCK培养同时进行分离，评估检验结果特异性、灵敏度的差异。
结果：实时荧光定量PCR仪检出阳性64例，阳性率为35.56%（64/180），细胞培养法分离出流感病毒35例，阳性率为19.44%（35/180），PCR仪检验阳性率高于细胞培养法，P<0.05。
细胞分离培养法对实时荧光PCR法的灵敏度、特异性分别为54.69%（35/64）、100.00%（116/116）。
结论：对流感病毒检测采用实时荧光定量PCR仪效果更为理想，值得推广。
关键词：实时荧光定量PCR仪；流感病毒；细胞培养法目前随着国内抗生素滥用问题的不断提出，流感病毒的耐药性也不断增加，并呈现出了变异高度化的特征，各种新型、亚型流感病毒不断出现，导致流感病毒防控的形势空前严峻，一旦出现疫情，如果未实现有效的检测与控制，很容易带来严重的危害。
为实现对流感病毒的有效预防与控制，及时进行检出的非常有必要的[1]。
为此探讨检验流感病毒的有效方法，本次研究以我院收治流感病样病例为研究对象，评估了实时荧光定量PCR仪检验的应用效果，结果显示采用实时荧光定量PCR仪检测效果更为理想，故现报告如下。
1.资料与方法1.1临床资料选择我院2018年1月至2018年12月收治180例流感病样病例为研究对象，使用咽拭子采集标本。
该180例患者中包括男86例，女94例，年龄18~72岁，均数（38.52±4.67）岁。
所有患者体温均大于38℃，同时存在咳嗽、咽痛等症状。
对所采集的标本，均存储于3ml的标本试管之中，后在24h内送检。
1.2方法1.2.1实时荧光定量PCR仪检验：对所采集的所有标本，均进行病毒核酸检测，按照试剂盒说明进行RNA提取与反应体系，并利用SDS软件进行PCR系统的操控，完成阳性、阴性对照组的设立。
荧光定量RT-PCR检测流感病毒的应用
荧光定量RT-PCR检测流感病毒的应用摘要：随着时代的进步，社会的发展，大多数疾病已经可以得到很好的治愈，但是大规模的流感病毒的爆发，仍然困扰着我们，特别是甲型H1N1流感。
流感病毒传染性强，变异性强传播速度快，爆发后难以控制，极大的危害了社会的安定和谐，，影响了人们的生活质量。
所以及早点了检测发现流感病毒是抑制病毒传播，控制流感病毒爆发程度的最为关键的步骤。
现在国内外常用的检测流感病毒的方法主要有：血清学检测、核酸扩增法检测、细胞培养法、流感病毒抗原检测法等。
但是这些常用的方法耗费大量时间和精力，不适用于流感病毒的快速检查。
相反，荧光定量RT-PCR是各种检测方法中最灵敏、最有效、最准确的。
所以对于荧光定量RT-PCR检测流感病毒的应用的研究是有很大医学价值。
关键词：荧光定量RT-PCR、检测、流感病毒、应用1.引言为了使荧光定量RT-PCR对于流感病毒的检测结果更为准确，我们需要运用两组探针同时对流感病毒进行检测，优化PCR检测系统，实现双重保障。
在流感病毒爆发时可大量使用来快速检测流感病毒，控制其传播。
同时为了方便使用，已经将荧光PCR技术做成了可以方便快速检测流感病毒的试剂盒，经大量实验研究证实，此试剂盒效果优良，适合社会的多种需求。
2.概述2.1流感及流感病毒概述流感病毒是流行性感冒病毒的简称。
近几年，流感病毒主要被分为甲、乙、丙、丁（A、B、C、D）四型，其中丁型流感病毒主要指的是牛流感病毒。
流感病毒的致病范围广，致病性强，可导致人、鸡、鸭、鹅、狗、猪、牛、羊等多种动物及人类的发病，是各种人流感、猪流感、禽流感、牛流感的致病原。
人类的流感主要是甲型流感病毒和乙型流感病毒，其中甲型流感病毒的变异型强，且变异快，已经变异出了H1N1、H7N9、H3N2、H5N1等多种病毒亚型，流感病毒的变异仍未停止。
主要临床症状为全身肌肉酸痛、全身高人乏力、急性呼吸系统疾病等。
传染源为鸡、鸭、鹅等禽类，猪、牛、羊等畜类和人与人之间的相互传染。
实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应 (RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的比较
实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应 (RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的比较引言流行性感冒是一种通过细菌或病毒传播的高度传染性疾病，导致全球范围内经济和健康问题的一个主要贡献者。
流行性感冒病毒在人口中分布广泛，属于冠状病毒科，表面的刺突蛋白上有两种抗原，H（hemagglutinin）和N （neuraminidase），其中H1、H2、H3、N1、N2五个亚型可以在人类中引起大规模爆发。
即使由于疫苗和药物的广泛应用，流行性感冒病毒仍然是一个严重的威胁。
对于流行性感冒病毒的检测，现如今有不同的方法，其中最常用的方法是细胞培养法和实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）法。
这篇文档将介绍这两种方法，比较它们的优点和缺点。
细胞培养法细胞培养法是一种早期用于检测病毒的方法。
这种方法需要从患者体内或其他来源中获得病毒并将其接种到细胞培养基中，然后通过观察细胞的形态和功能来诊断病毒感染。
细胞培养法需要耗费大量的时间和劳动力，可能需要数天或数周才能得出结果。
此外，在某些病毒无法感染细胞甚至会在细胞培养基中失活的情况下，细胞培养法可能会导致错误的诊断结果。
虽然长时间的培养方法可能会增加准确性，但是细胞培养法作为一种早期检测病毒感染的方法已经不再普遍使用。
实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应法（RT-PCR）实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应法是一种现代且广泛使用的病毒检测方法。
该方法包含以下几个步骤：1.提取病毒核酸2.将RNA转录为cDNA3.在PCR反应中放大cDNA4.通过实时荧光检测PCR反应，以测量PCR产生的特定DNA片段的浓度。
RT-PCR法的价格较超出细胞培养法，但是它具有极高的敏感性和特异性。
这种方法只需要几个小时就可以得到结果，并且可以同时检测多个样品，因此它非常适合大规模筛查。
此外，在某些情况下，RT-PCR法可以用于检测喘息病毒、RSV、诺如病毒等细菌性病原体，这表明它具有灵活性和多功能性，可广泛用于不同的病原体检测中。
实时定量PCR与传统培养方法在血流感染病原体检测中的应用分析
实时定量PCR与传统培养方法在血流感染病原体检测中的应用分析目的：探讨实时定量PCR与传统培养在血流感染病原体检测中的临床应用价值。
方法：收集医院各科室血流感染患者血液标本106份，同时进行实时定量PCR和血培养，检测和计算实时定量PCR的特异性、敏感性，以及与血培养的一致性。
结果：106份样本中检测出10中病原体，实时定量PCR检测出24份阳性，82份阴性，其中阳性与血培养一致的有8份，阴性与血培养一致的有77例，两种检测方法一致性为80.2%；实时定量PCR的NPV为93.9%，敏感度为61.5%，特异性为82.8%；5例为PCR阴性血培养阳性，16例为PCR阳性而血培养阴性；此外有1个样本超出PCR检测范围，而血培养为阳性。
结论：实时定量PCR检测血流感染患者病原体，具有速度快、敏感性好、特异性好的优势，但在临床应用中仍需将常规细菌培养作为重要补充。
标签：实时定量PCR；血流感染；病原体血流感染是菌血症和败血症的统称，近年来由于诊疗技术的提高和激素、抗生素的廣泛运用，血流感染的发生率不断升高[1]。
血流感染患者病死率较高，住院时间也相对较长，不仅增加患者经济负担，也给患者造成较大危害。
因此，快速、准确的检测出血流病原体，并及时给予患者针对性的抗生素治疗，对于降低病死率有重要意义。
传统的培养方法主要是血培养，但培养结果需要等待较长时间，尤其是某些营养需求复杂、生长缓慢的病原体，培养时间甚至超过48小时。
此外患者接受抗生素治疗后，其血培养的阳性率也会明显降低[2]。
为了提高血流感染诊断的敏感性、特异性和速度，本文利用实时定量PCR检测血流感染病原体，取得较满意的结果，现将详细情况做如下汇报。
1.资料与方法1.1一般资料选取我院各个科室收治的血流感染患者82例，总共取得106份样本。
其中男性48例，女性34例，年龄29～56岁，平均年龄（42.8±12.4）岁。
其中有55例患者来自肿瘤科、麻醉科和ICU，其余来自血液科与内科。
实时荧光定量PCR与细胞培养法在流感病毒检测中的比较
实时荧光定量PCR与细胞培养法在流感病毒检测中的比较修敏;任妍妍【摘要】目的探讨实时荧光定量PCR与细胞培养法在流感病毒检测中的应用效果.方法将我中心流感高峰季节接收的流感样病例样本726例分别采用实时荧光定量PCR和细胞培养检测方法进行检测,分析2种检测方法的阳性检出率和实时荧光定量PCR方法的灵敏度和特异度.结果 726例流感样病例样本中,细胞培养阳性89例,阳性率12.26％;实时荧光定量PCR阳性189例,阳性率26.03％.以细胞培养法为金标准,计算实时荧光定量PCR检测法灵敏度为91.01％,特异度为83.05％.结论实时荧光定量PCR具有灵敏度高、检出速度快等特点,可广泛应用于临床诊断、常规监测以及流感疫情应急检测等.【期刊名称】《传染病信息》【年(卷),期】2019(032)004【总页数】3页(P336-337,340)【关键词】流感病毒检测;细胞培养;实时荧光定量PCR【作者】修敏;任妍妍【作者单位】123000,阜新市卫生健康服务中心(阜新市疾病预防控制中心)检验检测部;123000,阜新市卫生健康服务中心(阜新市疾病预防控制中心)检验检测部【正文语种】中文【中图分类】R248.4流行性感冒（流感）是由流感病毒引起的急性呼吸道传染性疾病。
为进一步了解流感病毒流行株构成、基因特异性以及抗原性，避免流感大面积扩散，各地均实施了有效的监测[1-2]，国际上第一个实现全球监测的疾病是流感，对有效控制和预防流感起到很大作用[3]。
本研究针对实时荧光定量PCR、细胞培养法在流感病毒检测中的应用效果进行分析，现报告如下。
1 材料与方法1.1 材料研究样本来源于阜新市卫生健康服务中心2016年12月—2017年5月流感高峰季节接收的流感样本726例，所选样本均在24 h内送至检测实验室进行检查，对于无法在24 h内送检的样本，应置于-70 ℃的环境中保存。
1.2 仪器与试剂本次研究中所用的仪器：Ⅱ级生物安全柜（济南鑫贝西生物技术有限公司，型号BSC-1500ⅡA2-X）；高速离心机（美国贝克曼Microfuge公司，型号18）；全自动实时荧光定量PCR仪（美国ABI公司，型号7500fast）；旋涡振荡器（德国Heidolph公司）；全自动核酸提取仪（德国GIAGEN公司，型号QIAcube）；核酸提取试剂盒（德国GIAGEN公司，型号RNeasy Mini Kit）；无核酸离心管；CIBIO公司DMEM培养液；甲型/乙型流感病毒核酸RNA检测试剂盒（江苏硕世生物科技有限公司）。
浅析实时荧光PCR用于流感病毒检测的效果
浅析实时荧光PCR用于流感病毒检测的效果摘要：目的探讨和研究实时荧光逆转录聚合酶链式反应在流感病毒检测中的应用效果。
方法采用实时荧光PCR对617例流感样病例患者的咽拭子标本进行流感病毒核酸的测定，对检测出的阳性标本采用MDCK进行培养并分离，对两种方法的检测结果进行分析，对比特异性及灵敏度。
结果本组617例标本中实时荧光PCR共检测出阳性标本152例，阳性率24.6%；细胞培养法在此152例阳性标本中共分离出流感病毒79例，阳性率12.8%，实时荧光PCR检测阳性率显著高于细胞培养法，差异具有统计学意义（P<0.05）。
结论实时荧光PCR能够快速有效的检测出流感病毒核酸，是实验室快速诊断的有效手段。
关键词：实时荧光PCR；细胞培养法；；流感病毒[Abstract] Objective To explore and study the application effect of real-time fluorescent reverse transcription polymerase chain reaction in influenza virus detection.Methods Real-time fluorescent PCR was used to detect influenza virus nucleic acid in throat swabs of 617 patients with influenza-like illness.The positive samples were cultured and separated by MDCK.The results of the two methods were analyzed，and the specificity and sensitivity were compared.Results A total of 152 positive samples were detected by real-time fluorescent PCR，with a positive rate of 24.6%.79 influenza viruses were isolated from the 152 positive samples by cell culture method，with a positive rate of 12.8%.The positive rate of real-time fluorescent PCR was significantly higher than that of cell culture method（P < 0.05）.Conclusion Real-time fluorescent PCR can detect influenza virus nucleic acid quickly and effectively，and it is an effective means for rapid laboratory diagnosis.[Key words] Real-time fluorescent PCR；Cell culture method；Influenza virus 流行性感冒是临床上最为常见的急性呼吸道传染病，主要是由A、B、C三种流感病毒所引起，其中A、B型病毒存在变异大、危害强的特点，对患者的健康造成了很大的威胁[1]。