淋巴细胞培养

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淋巴细胞刺激实验

1、将抗凝血5 mL 加入离心管中，20℃，200g，20 min。（应把离心机上下加

速度为4，减少对淋巴细胞的损害）

2、用吸管吸出上层血浆，再用枪吸出中间层的白细胞（可带有少量红细胞），加

入到事先放有5 mL 无血清1640液的10 mL 离心管中混匀。然后将混匀的白细胞悬液沿管壁轻轻加入到事先放有5 mL 的淋巴细胞分离液的另一个新的离心管中（注意：此步骤为关键步骤，试管一定要倾斜45°，缓慢加入，使其分层清晰，而后再轻轻竖立离心管）。

3、20℃，2000 rpm，离心10 min。

4、弃上清，去中间层，再与5 mL的无血清1640液混匀，取出少量计算个数。

5、20℃，1000 rpm，离心10 min。

6、倒掉上清，轻轻敲动离心管底，使白细胞松动，吸出置新的离心管中（含5

mL1640液）。

7、按步骤5 离心。

8、弃上清用培养液混匀铺板。（6孔板，1.2×107/孔）

9、每孔加1微升商品化ConA，使终浓度为10微克/mL，留两孔不加作为对照。

混合淋巴细胞培养步骤

混合淋巴细胞培养步骤如下：

1. 准备工作：消毒培养器具，清洁实验台面。

2. 预先培养细胞：将混合淋巴细胞从其来源（例如血液）中分离出来，然后进行预先培养。预先培养通常在含有适宜培养基的培养皿中进行。

3. 细胞计数：使用显微镜和计数室将预先培养的细胞计数，以确定细

胞的浓度和数量。

4. 调整细胞浓度：根据下一步骤的需求，通过加入合适的培养基来调

整细胞的浓度。通常将细胞悬浮液转移至离心管中，并用培养基进行

稀释或浓缩。

5. 稀释培养：取一定数量的细胞悬浮液和合适的培养基，混合后加入

培养皿中。确保细胞悬浮液和培养基的充分混合。

6. 培养条件设置：将培养皿放入恒温培养箱中，设置适当的温度、湿

度和气体条件。根据需要，可能需要添加适当的生长因子或药物。

7. 细胞观察与处理：根据实验或应用的需要，定期观察和记录细胞培

养的情况。可以选择在特定时间点收集细胞进行后续实验。

8. 细胞传代：如果需要持续进行细胞培养，可以通过细胞传代的方式

将细胞转移至新的培养皿中。在传代过程中，需要注意细菌和真菌的

污染，保持无菌操作。

9. 存储和保留：如果需要长期保留细胞，可以选择冷冻保存或通过其

他方法进行细胞库的建立。

请注意，在进行混合淋巴细胞培养前，应严格遵守实验室安全规范，

并且在实验室专业人员的指导下进行操作。

人的外周血淋巴细胞培养

摘要：正常情况下哺乳动物的外周血中没有分裂相，这是由于外周血中的小淋巴细胞大多处于G0期。但在一定条件下，外周血中的小淋巴细胞受刺激转化成淋巴母细胞，随后进入有丝分裂。本实验介绍人外周血淋巴细胞的培养方法，染色体标本的制备和正常人染色体的组型分析。[1]

关键词：外周血淋巴细胞低渗处理空气干燥法染色体组型分析

前言：人体外周血细胞培养是制备染色体标本的常用方法。此方法取材方便，用血量少，操作简便。

1960年Nowell和Morhead验证，使红细胞凝集从而能分离出白细胞的植物凝集素（phytohaemagglutinin，PHA）是人和其他动物淋巴细胞的有丝分裂的刺激剂。在PHA的作用下，原来处于G0期的淋巴细胞转换为淋巴母细胞，进而进行有丝分裂。这样经过短期培养，以秋水仙素或其衍生物秋水仙胺进行处理，经过低渗和固定，就可获得大量的处于有丝分裂时期的细胞[2]，因为秋水仙素(或秋水酰胺)可通过干扰微管组装而抑制纺锤丝形成，使细胞分裂顺利进入后期而停滞于中期，从而可在短期积累大量最适于进行染色体分中期分裂相。此外，秋水仙素还能使染色单体缩短、分开，使染色体呈现明显形而利于辨认。

淋巴细胞经过培养以后，形成了体外活跃生长的细胞群体，经过空气干燥法制片。所谓空气干燥法，实际上是将细胞经过秋水仙素—低渗处理—充分的固定—滴片等步骤之后再载玻片上得到染色体制片的技术。有时，有人把滴片的步骤叫做染色体分散，也有人把这一步和随后的干燥称为空气干燥法。“空气干燥”就是滴片后，不加热或任何处理，使载玻片在室温中自然干燥的方法。[3]

小鼠淋巴细胞增殖测定步骤

小鼠淋巴细胞增殖测定是用来评估免疫功能和细胞毒性的常用方法。以下是一般的小鼠淋巴细胞增殖测定的步骤：

1. 准备小鼠：选择合适的小鼠品系和年龄，并确保小鼠健康。

2. 分离淋巴细胞：采集小鼠淋巴组织（例如脾脏或淋巴结）并进行细胞分离。常用的方法包括机械破碎和离心分离。

3. 细胞计数与稀释：用血细胞计数器或显微镜计数细胞数目，并进行适当的稀释以获得合适的细胞密度。

4. 细胞悬液制备：将分离的淋巴细胞与培养基混合，使细胞悬浮于培养基中。

5. 细胞培养：将细胞悬液移至培养皿中，并在37°C、5% CO2

的条件下培养一段时间。一般培养24-72小时。

6. 刺激因子处理：在培养皿中添加适当的刺激因子（如细胞激动剂或抗原），以刺激细胞增殖。

7. 溶菌酶处理：在培养结束后，加入溶菌酶等溶解剂，使未被细胞内的放射性同位素取代的DNA释放到培养基中。

8. 获得DNA：收集并离心细胞上清液，将其中的DNA沉淀。

9. 放射性测定：使用放射性技术，如液体闪烁计数器，测量

DNA中的放射性同位素含量。

10. 统计分析：根据放射性同位素的计数，计算细胞增殖水平，并进行统计分析。

这些步骤可以根据具体实验目的和方法的需求进行适当的调整和修改。

人外周血淋巴细胞培养

淋巴细胞分为T细胞、B细胞和NK细胞等多种类型，每种细胞类型具有不同的功能和特点。
淋巴细胞在人体健康和疾病发生中起着至关重要的作用，因此研究淋巴细胞对于了解疾病机制和开发治疗手段具有重要意义。
淋巴细胞培养技术
淋巴细胞分离技术
淋巴细胞功能检测方法
通过密度梯度离心法和免疫磁珠分离法等手段从外周血中分离出淋巴细胞。
通过免疫学、分子生物学等技术手段检测淋巴细胞的增殖、分化、凋亡和功能等方面的变化。
淋巴细胞培养方法
将分离出的淋巴细胞接种到培养基中，在适宜的温度、湿度和气体条件下进行培养。
培养条件和影响因素
培养基
淋巴细胞培养需要适当的培养基，包括胎牛血清、氨基酸、维生素和葡萄糖等成分，以提供细胞生长所需的营养物质。
03
人外周血淋巴细胞培养方法和步骤
采集外周血
01
02
03
采集前准备
确保受试者处于健康状态，无感染或炎症，并避免在采血前24小时内进行剧烈运动。
采血过程
使用无菌技术采集外周血，通常从肘静脉或股静脉采血。
ຫໍສະໝຸດ Baidu血液处理
将采集的血液转移至无菌试管中，加入适量的抗凝剂，如肝素或柠檬酸钠。
淋巴细胞分离
促进生物医学工程发展
人外周血淋巴细胞培养在生物医学工程领域也有着广泛的应用，例如组织工程和再生医学。通过体外培养淋巴细胞，可以构建具有特定功能的生物材料和组织，为器官移植和损伤修复提供新的解决方案。

OCI-LY3细胞培养注意事项

尚恩生物| OCI-LY3细胞(人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞)培养教程

细胞名称: OCI-LY3(人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞)

细胞别称: OCI-LY3; OCI-ly3; OCI-LY-3; Oci-Ly-3; OCI-Ly 3; OCILY-3; OCI-Ly03; OCI Ly3; OCILY3; Ly3; LY3

细胞货号: SNL-226

生长特性: 悬浮

培养条件: 1640+20% FBS+1% P/S

培养环境: 空气，95%；二氧化碳(CO2)，5%；37℃

细胞简介: OCI-LY3细胞于1983年从一名复发时患有B细胞非霍奇金淋巴瘤

（B-NHL，弥漫性大B细胞淋巴瘤，DLBCL，4B期）的52岁男性骨髓样本中建立，是一种激活型的B淋巴细胞。OCI-LY3细胞在文献中描述为EBV阴性，缺乏典型的t（8；14）易位。OCI-LY3细胞HBV、HCV、HIV-1、HIV-2、MLV均呈阴性。

▲细胞正常生长形态照片

OCI-LY3细胞培养注意事项

●OCI-LY3细胞大部分聚集成葡萄串状悬浮生长，细胞团较大时需要吹打成小团，防止团块中间的细胞因营养不足而死亡，小团块无需处理。除非实验需要，不建议将细胞吹散成单个细胞。

●OCI-LY3细胞对血清要求高，应该使用优质血清进行培养，血清比例为20%；

●随着培养时间增加，会有部分细胞贴壁伸展的情况，传代时可以轻轻吹打细胞贴壁面，吹下的细胞可以正常传代，未吹下的细胞无需收集。

●该细胞培养过程存在密度依赖的情况，细胞接种密度不宜过低；

小鼠淋巴细胞的分离培养

一、血液中淋巴细胞的分离：

1在1.5ML离心管中加入淋巴细胞分离液0.7ML；

2眼部采集小鼠的抗凝血，抗凝剂20%.。

3轻轻将血液加入淋巴细胞分离液的表面，立即以2000—2500转/分离心10MIN。

4小心吸取上层细胞，转移至另一1.5ML离心管中,再用HANK’S 悬浮至1.5ML，再离心，去上清，再悬浮，等待分型用。

二、鼠脾脏中淋巴细胞的分离：

1无菌采集鼠的脾脏，且灭菌注射器的弯针头轻轻扎取，尽可能使单个细胞分离，再分别用4层灭菌纱布过滤2次。

2将滤液小心加入淋巴细胞分离液中。离心。

3 吸取上层淋巴细胞，HANK‘S液洗涤2次（尽可能去除淋巴

细胞分离液）。

4加入1640培养液进行培养。、

*淋巴细胞分离液不低于全部液体的50%

淋巴细胞分离与培养

三永生淋巴细胞株的建立为保留遗传病标本用继代培养或病毒转化方法可使很多类型的细胞数量倍增如皮肤成纤维细胞脐静脉内皮淋巴细胞是分子与细胞遗传学研究中常用的材料但由于其寿命很短而且由于许多原因难以再次获得病人或有重要研究价值个体的血液标本给临床诊断和进一步的深入研究带来一定困难
淋巴细胞分离与培养技术
• 淋巴细胞作为血液中白血胞的主要组成成分，是动物机体完成细胞免疫和体液免疫的重要基础，为抵抗外来侵害提供了完善的免疫防护机制。同时，淋巴细胞还具有寿命长，激活后可分裂、增殖的特性，因此很适合于离体培养，为免疫学研究带来极大的方便。另外，利用体外培养的淋巴细胞进行抗癌研究、爱滋病治疗、新药研制已屡见不鲜。
三、永生淋巴细胞株的建立
• 为保留遗传病标本，用继代培养或病毒转化方法可使很多类型的细胞数量倍增，如皮肤成纤维细胞、脐静脉内皮淋巴细胞是分子与细胞遗传学研究中常用的材料,但由于其寿命很短,而且由于许多原因难以再次获得病人或有重要研究价值个体的血液标本,给临床诊断和进一步的深入研究带来一定困难。并且随着这些个体的死亡,这些宝贵的材料就会永远丢失。细胞、干细胞、胶质细胞、肿瘤细胞如宫颈癌上皮细胞等。其中EBV转化淋巴细胞所建立的永生培养细胞库是最为成熟和标准化的。
• EBV、HPV等人疱疹病毒并不携带一整套诱导宿主细胞性状发生巨大变化的基因，它们只是启动与细胞转化有关的一系列事件的发生，而这些事件的发生需要细胞内蛋白质来实现。从某种意义上来说，这些病毒只是扳动了改变靶细胞生长特性的调控开关。它们的转化活性来源于病毒基因组中的某些特殊基因，就是癌基因。这些癌基因在病毒早期的裂解循环中，参与病毒颗粒的复制；当转化发生时，它们整合进入淋巴细胞的基因组中，持续表达癌蛋引起细胞无限制分裂等肿瘤样改变，遂形成淋巴母细胞系。

淋巴细胞增殖实验细胞形态法

淋巴细胞增殖实验是一种常用的细胞生物学实验方法，用于研究淋巴细胞的增殖能力。其中，细胞形态法是一种直接观察和描述细胞形态变化的方法。下面是该实验的步骤：

1. 细胞准备：收集需要进行实验的淋巴细胞，并将其分散在培养基中。

2. 细胞培养：将淋巴细胞悬浮液加入培养皿中，放置在恒温培养箱中，使其在适宜的温度、湿度和氧气条件下培养。

3. 处理因子添加：根据实验设计的要求，可以在培养期间添加不同的诱导因子或抑制因子，以刺激或抑制淋巴细胞的增殖。

4. 细胞观察：在特定时间点（例如24小时、48小时等）取出培养皿中的细胞，使用显微镜观察细胞形态的变化。

5. 形态描述：通过观察细胞的大小、形状、颜色、胞质和核的结构等特征，描述细胞在不同处理条件下的形态变

化。

6. 数据分析：根据形态观察结果，结合其他实验数据（如细胞计数、代谢活性等），进行统计分析和结果解释。

通过淋巴细胞增殖实验细胞形态法，可以评估淋巴细胞的增殖能力，并揭示不同因子对细胞形态的影响，有助于进一步研究淋巴细胞的生物学特性和相关疾病的发生机制。

Takara GT-T551 淋巴细胞、DC 细胞、NK 细胞培养基说明书

V2016.1

TAKARA BIO INC. 沃卡威（北京）生物技术有限公司

TaKaRa Code：GT-T551

淋巴细胞、DC 细胞、

NK 细胞培养基

产品描述

■ TAKARA 淋巴细胞、DC 细胞及NK 细胞培养基GT-T551 产品特点：

日本原装进口无血清培养基，适用于人体淋巴细胞及DC 细胞培养

支持淋巴细胞的高密度细胞培养，已经加入人血白蛋白组分

ex-vivo 级别，已经在日本水町综合医院，New City 大崎医院及多家大型医院临床应用配制用水符合国家药监局《人体细胞治疗研究和制剂质量控制指导原则》中注射用水标准

■ 日本TAKARA 淋巴细胞、DC 细胞及NK 细胞培养基GT-T551 H3产品特点： GT-T551 升级版培养基。

采用全新的缓冲系统。

可用于无血浆培养，CD3+CD56+比例高。

如果培养时添加病人自体血浆，效果更为显著。

GT-T551 H3

淋巴细胞、DC 细胞、NK 细胞培养基 1000 ml GT-T551 H2

淋巴细胞、DC 细胞、NK 细胞培养基 1000 ml GT-T551 淋巴细胞培养基 1000 ml

◆保存: 4℃,避免冻结产品

◆产品形态: 透明液体

说明书

淋巴细胞培养条件及常见失败原因探讨

・诊断技术・

淋巴细胞培养条件及常见失败原因探讨

遵义医学院附属医院肾病风湿科(563003)　刘春梅　赵士启　张克非　陈忠霞　刘　永

淋巴细胞培养是实验研究常用的一项技术,对于培养器皿,可以选用培养板,培养瓶,培养皿,三角烧瓶,试管,青、链霉素小瓶等[1,2]。目前,关于淋巴细胞分离方法的文献资料较多,论述较详细,而对淋巴细胞培养则论述较少,较简单。细胞培养工作十分繁琐,环节较多,探讨细胞培养的条件,对于成功培养细胞具有十分重要的意义。本文选用1.5ml离心管培养淋巴细胞,观察了淋巴细胞培养前后的变化,探讨了淋巴细胞培养的条件及失败的常见原因。现报道如下。

1　材料与方法

1.1　主要材料和设备　淋巴细胞分离液(上海试剂二厂):RPMI1640培养液(G ibco,华美生物工程公司进口分装);血清(各实验对象的自身血清);肝素溶液(250U/m1),D’—Hanks液,lm ol/L盐酸,516%氢氧化钠溶液,2%台盼蓝染液,均为本实验室自配; pH试纸(上海三爱思试剂有限公司);1.5ml离心管(Axygen);10ml、15ml、50ml刻度离心管;毛细吸管;移液枪,1～200μl、1000μlT ip(枪头);洁净工作台(月坛牌,北京冠鹏净化设备有限公司);HC—TPⅡ-5架盘药物天平(上海第二天平仪器厂);水平式低速离心机(北京医用离心机厂);kx—21N血细胞自动分析仪(Sysmex,日本):O LY MPUS倒置显微镜;Shel LABC O2恒温培养箱(37℃,5%C O2)(Shelton manufac2 turing,inc,US A);BC D—218冰箱(澳柯玛);202-2型电热恒温干燥箱(上海实验仪器厂有限公司)。

人外周血淋巴细胞染色体标本制作

wk.baidu.com外周血淋巴细胞染色体标本制作
［目的与要求］ 1、掌握外周细胞培养物收获方法; 2、掌握外周血细胞染色体标本制备； 3、熟悉相关试剂的配制。
人外周血淋巴细胞染色体标本制作
［原理］经低渗处理，细胞膨胀，然后用固定液使细胞膜蛋白变性，保持细胞处于膨胀状态；调节上述收获细胞的浓度，制成细胞悬液，滴片，即可得到有丝分裂中期的染色体标本。
［收获］ 3、预固定
低渗处理后，在离心管中加入固定液[甲醇 : 冰乙酸=3:1，新配备]2ml或至10ml刻度，混匀。以 1500r/min离心10min，弃上清液，留下约0.5ml液体盖着沉淀物，轻柔重悬细胞。
4、第1次固定预固定后，往离心管加入新鲜因定液至10ml刻度，
充分混匀细胞，在室温中固定30min。以1500r/min离心10min，弃上清液，留下沉淀。
人外周血淋巴细胞染色体标本制作
［收获］ 5、重复固定
重复如同第1次固定操作2次。留下最后所得沉淀物，加入少许固定液（加至 0.4ml~1.0ml刻度），轻轻吹散打匀，制成细胞悬液。
人外周血淋巴细胞染色体标本制作
［滴片］
用气干法滴片：用吸管吸取细胞悬液，滴2滴~3 滴于事先用冰水浸泡的洁净载玻片上，用嘴吹散并在酒精灯火焰上通过3~5次，作好标记放于标本盒老化一周（或56℃烤箱过夜），留待做G显带标本。

淋巴细胞培养与分离

抗CD3磁球
加入B和T 细胞中
磁球结合T 细胞
磁架进行分离
正向选择
单克隆抗体CD3
负向选择
直接法对细胞进行分类
羊抗鼠修饰磁球 Biomag
间接法对T细胞进行分离
免疫磁珠法细胞分选过程
免疫磁珠细胞分选装置
（5）亲和板结合分离法
原理：各种淋巴细胞亚群具有不同的抗性。
① 分离CD4+或CD8+细胞，可用抗CD4或 CD8单克隆抗体吸附。 ②分离B细胞用抗Ig抗体。 ③分离有C3受体的细胞用活化的C3包被。
2、细胞活力的检测
常用方法是台盼蓝染色法。这种染料不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色，死亡细胞的细胞膜通透性增高，可使染料进入细胞而使细胞着色（蓝色）。
淋巴细胞的培养
• 正常情况下，人外周血中是没有分裂相细胞的，只有在异常情况下才能发现。外周血淋巴细胞一般情况下处于增殖期中的G1期，未经培养的外周血中很难找到正在分裂的淋巴细胞。植物血细胞凝集素(PHA)是人类淋巴细胞有丝分裂的刺激剂，在PHA作用下，能使处于G1期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞，进而进行有丝分裂。利用PHA这一特性，淋巴细胞经过含有PHA培养液培养，在体外便可获得丰富的含有丝分裂的生长活跃的细胞群体，加之，淋巴细胞遍及全身，并在所有器官组织中不断循环，能反映个体整体水平情况而不象体细胞那样具有局限性。

细胞培养法淋巴细胞微核标本的制作过程及注意事项

二、论文

细胞培养法淋巴细胞微核标本的制作过程及注意事项

北京市预防医学研究中心于贵新

1材料与方法

1．1人员：接触放射性工作的岗前、在岗及离岗人员。

1．2接种：消毒1640培养基，抽静脉血接种于1640培养基内，混匀，浓度适当。瓶上写清楚受检者姓名或者实验室自行编号。

1．3培养：接种后将培养基放于(37±0．5)℃恒温培养箱内培养72h。

1．4收获：

1．4．1收集细胞：将细胞悬液混匀倒人编好号的离心管中，离心1000rpm，6min，弃上清液。

1．4．2低渗：加入0．075mol／L氯化钾低渗液5ml，用滴管轻打混匀，低渗6—8min。

1．4．3预固定：加入lml固定液，轻轻混匀后1000rpm离心6min。固定液为甲醇：冰醋酸(3：1)。

1．4．4固定：弃上清液，加入5ml固定液，轻轻混匀，静置10min。

1000rpm 离心6min，弃上清液。重复操作固定步骤2—3次，直至固定液透

明为止。 1．4．5制悬液：弃上清液后，视细胞数量多少加入适量固定液打

匀。

1．5滴片：吸取细胞悬液滴在一张洁净的4℃湿的载玻片上，轻吹散，风干，及时正确编号。

1．6染色：Giemsa染液染色20min左右，细水冲洗多余染液，风干。

1．7镜检：光学显微镜下计数1000个胞体完整、已转化的淋巴细胞，计数淋巴细胞微核，以千分率(‰)表示。

1．8微核判定标准：微核应位于完整的淋巴细胞胞浆内，与主核完全分开(如有重叠或相切，必须看到各自的完整核膜)，呈圆形或椭圆形，结构与主核相同，着色与主核一致或略浅，不折光，大小为主核的1／3以下的小核姑3。

淋巴细胞培养方法

引言：

淋巴细胞是机体中重要的免疫细胞，其培养方法对于研究免疫功能、疾病发生机制以及药物筛选具有重要意义。本文将介绍一种常用的淋巴细胞培养方法，帮助研究者进行淋巴细胞的体外培养。

一、材料和试剂准备

1. 血液样品：采集新鲜、无菌的血液样品，尽量避免使用已保存的血液。

2. 培养基：常用的淋巴细胞培养基包括RPMI 1640培养基、DMEM培养基等，可根据实验需要选择合适的培养基。

3. 补充物：培养基中可添加的补充物包括胎牛血清(FBS)、人血清(HS)、重组细胞因子等。

4. 抗生素：培养过程中可添加适量的抗生素，如青霉素和链霉素等，以抑制细菌和真菌的污染。

二、淋巴细胞分离

1. 密度梯度离心法：将新鲜血液样品稀释后，加入离心管中，缓慢加入等体积的淋巴细胞分离液，离心后淋巴细胞会沉积在离心管底部，可用无菌移液器吸取上清液。

2. 磁珠分离法：利用磁珠表面特异性抗体与淋巴细胞表面标志物结合，通过磁力将淋巴细胞与其他细胞分离。

三、淋巴细胞培养

1. 细胞计数和调整：将分离得到的淋巴细胞进行细胞计数，根据需要调整细胞密度，通常为1-2×10^6个细胞/mL。

2. 培养基配置：根据实验需要配置相应的培养基，通常包括培养基、补充物和抗生素。

3. 培养条件：将淋巴细胞悬浮液均匀地加入含有培养基的培养皿中，置于37℃恒温培养箱中，通常采用5% CO2气氛。

4. 细胞增殖：培养过程中，淋巴细胞会进行增殖，可根据需要进行细胞传代。

5. 培养液更换：一般情况下，每2-3天更换一次培养液，以保持培养环境的稳定。

淋巴细胞的制备与检测

MTT法测脾淋巴细胞增殖

实验主要原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫结晶物Formazan，并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。

1.小鼠淋巴细胞制备

材料：

1.5mg/mL MTT(四甲基偶氮盐，Sino-American Biotechnology Co)溶液:称取50mgMTT（Sigma）

粉末溶解于10mL0.01mol/LpH7.4 PBS中，配成浓度为5mg/mL的溶液，0.22 µm过滤除菌后置4℃避光保存（MTT有毒，配制时戴手套避光）。

2.RPMI1640培养液：RPMI1640干粉一袋，NaHCO3 1.5 g，HEPES 2.7 g溶于800 mL dddH2O，

磁力搅拌器搅拌30 min，定容至1000 mL，无菌超净台内0.22 μm滤膜过滤除菌，分装，室温保存。临用前加10％的小牛血清（杭州四季青生物制品厂），青霉素、链霉素各100 IU/mL。

3.0.14MNH4Cl：称取NH4Cl7.21g，ddH2O 1000.0mL，充分溶解后0.22µm 滤膜过滤除菌，4℃保

存。

4.0.017MTris-HCl：称取Tris-HCl2.68g，ddH2O 1000.0mL，充分溶解后0.22µm 滤膜过滤除菌，

4℃保存。

5.刀豆素球蛋白（ConA）：将ConA溶解于RPMI1640培养液，配制成50µg/mL，0.22 μm微孔滤膜

过滤除菌，分装成小管，置于-20℃备用。

6.十二烷基硫酸钠(SDS):SDS溶于0.01mol/L盐酸溶液,终浓度为100g/L。