有机物分离与纯化的方法、柱层析的一些技巧_图文
柱层析分离的实验方法和技巧
柱层析分离的实验方法和技巧常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
一：柱子可以分为：加压，常压，减压压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
二：关于柱子的尺寸应该是粗长的最好。
柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。
如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm ×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。
柱层析的实验方法和技巧
柱层析的实验方法和技巧柱层析分离技术及其实验技巧一、胶柱层析（正、反相柱层析）——根据物质的极性不同进行分离根据固定相和流动相之间的极性不同，硅胶柱层析可以分为：正相柱层析、反相柱层析。
通常把固定相极性大于流动相极性的柱色谱方法称为正相柱层析，常用的流动相为有机溶剂，如石油醚、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇等。
较适宜分离化合物为低级性、中等极性化合物。
而把固定相极性小于流动相极性的柱色谱方法称为反相柱层析，常用的流动相为甲醇、水等极性溶剂。
较适宜分离极性较高的化合物。
二、凝胶层析——根据物质的分子大小进行分离凝胶层析又称为凝胶过滤、分子筛层析等，是以具有网状结构的凝胶颗粒作为固定相，根据物质的分子大小进行分离的一种层析技术。
常用的凝胶是葡聚糖凝胶（Sephadex)，如Sephadex LH-20。
三、柱层析实验操作3. 1层析柱的选择这与样品的处理量、分离难度、所用的基质和分离目的有关。
以基质是硅胶为例，当样品量较多，分离难度较大（相邻组分的△R较小，相差不到0.1）时，需选用较粗大的柱子以填充较多的硅胶。
柱子长，相应的塔板数就高；柱子粗，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对地减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米，而样品就有两厘米，那么分离的难度可想而知，而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么。
如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分Rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子。
3. 2流动相的选择在柱层析分离中流动相（淋洗剂）的选择尤为关键，直接影响到柱层析的分离效果，如果选择不当常常导致几十毫克样品，用了几百毫升淋洗剂都还没有完全分离，甚至不能分离。
以硅胶柱为例，具体选择哪种流动相以及流动相的极性，多是通过薄层色谱（TLC）来确定。
柱层析分离净化的实验技巧和方法
柱层析分离净化的实验技巧和方法柱层析技术也称柱色谱技术。
一根柱子里先填充不溶性基质形成固定相，将样品加到柱子上后用特别的溶剂洗脱，溶剂组成流动相。
在样品从柱子上洗脱下来的过程中，根据混合物中各组分在固定向和流动相中的分配系数不同经过多次反复分配，将不同组分逐一分离。
硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。
根据填充基质和样品分配交换原理不同，离子交换层析，凝胶过滤层析和亲和层析是三种分离混合物的经典层析技术。
1、柱层析操作方法的选择目前，柱色谱分离的操作方式，主要包括常压分离、减压分离和加压分离3种模式。
加压柱：适合小于100-200g产品的纯化。
大尺寸的加)柱难以制作，用起来危险性大。
建议使用双链球加压。
减压柱：适合任何量的过柱，比加压柱快，需要减小流动相极性过柱(比加压柱小一倍)，不然会导致分离效果差。
常压柱：适合大于50-100g的产品。
常压柱是分离效果最好的，但是时间也最长。
常压分离是最简单的分离模式方便、简单，但是洗脱时间长。
减压分离尽管能节省填料的使用量，但是由于大量的空气通过填料会使溶剂挥发，并且有时在柱子外面会有水汽凝结，以及有些易分解的化合物也难以得到，而且还必须同时使用水泵或真空泵抽气。
加压分离可以加快淋洗剂的流动速度，缩短样品的洗脱时间，是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗液更快洗脱。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵等。
2、柱子规格的选择市场上有各种规格的柱层析分离柱。
柱子长了，相应的塔板数就高，分离就好。
目前市场上的柱子，其径高比一般在1: 5～10范围，在实际使用时，填料量一般是样品量的30～70倍，具体的选择要根据样品的性质和含量进行具体分析。
如果所需组分和杂质的分离度较大，就可以减少填料量，使用内径相对较小的柱子(如 2 cm × 20 cm的柱子) ；如果Rf相差不到0.1，就要加大柱子，增加填料量，比如用3 cm内径的柱子。
柱层析法的原理和方法ppt课件
实验案例讨论与经验分享
案例介绍
介绍几个典型的柱层析法应用案例，包括实验设 计、操作过程、结果分析等。
经验分享
分享实验过程中积累的操作技巧、注意事项、故 障排除等方面的经验。
互动交流
鼓励与会者提问、分享自己的实验经验和心得， 进行深入的讨论和交流。
总结与展望
06
柱层析法原理与方法的总结回顾
柱层析法原理
方法 调整流动相的组成和pH值
优化柱温和流速
参数优化的方法和原则
• 选择合适的色谱柱和填料
参数优化的方法和原则
原则 通过实验确定最佳参数组合
根据目标物质的性质和分离要求进行参数优化 注意避免参数变化过大，以免对分离效果造成不利影响
结果分析方法和技术
方法 峰面积和峰高比较法
标准曲线法
结果分析方法和技术
离、纯化和鉴定。
生物样品分析
柱层析法可用于生物样品中痕量 物质的分离和分析，如生物碱、 氨基酸等，提高分析的灵敏度和
准确性。
柱层析法在食品安全检测中的应用实例
01
农药残留检测
柱层析法可用于食品中农药残留的分离和检测，通过合适的填料和洗脱
条件，将农药与食品中的其他成分分离，提高检测的准确性和可靠性。
发展历程
自20世纪初开始，柱层析法逐渐从基础的实验室技术发展为高效、自动化的现 代分离分析方法。
柱层析法的重要性和应用
重要性
柱层析法在化学、生物、医药、环境等领域发挥着重要作用 ，为复杂混合物的分离和纯化提供了有效手段。
应用
药物研发、天然产物提取、环境监测、食品安全等领域广泛 应用柱层析法。
柱层析法的基本原理
实验操作和案例分
05
析
柱层析详解PPT.
❖ 影响分离的参数
层析法是分离混合物的常用方法, 许多可以改变的因素使层析法 成为一种多方面适用的方法. 这些因素包括: ➢ 1. 选定的吸附剂 ➢ 2. 选定的溶剂极性 ➢ 3. 相对于需待分离的物料量的柱子尺寸(长度和直径) ➢ 4. 洗脱(或流动) 的速率
A.吸附剂
•
(3)
针吸灸人附中穴剂位的。 选择通常要根据需待分离的化合物的类型而定.
行人。只有服从交通警察的指挥，才会有良好的交通秩序，才能保证车辆和行人的安全。
（4）怎样把我们今天认识的交通标志和交通法规让更多的人都知道？
制定硅开发酸潜在镁客:户分的方离案 乙酰化的糖类, 甾体化合物和香精油.
小提示96：需要与应聘者谈论确认书的细节。
广告的载体和内容决定了申请者的类型、数量以及能否招到合适的人选。对于要求特殊技能的招聘广告应登在行业出版物上，一般的
柱层析详解
CONFIDENTIAL
Column Chromatogra的参数 ❖ 装柱 ❖ 上样 ❖ 洗脱技术 ❖ 柱的监控
❖原理
➢ 有机化学家能用的最现代化和尖端的方法全部包括某种类型的层析法. 层析 法的定义是, 通过在两相之间的分配, 使一个由两种或多种不同化合物(有时 是离子) 组成的混合物得到分离, 这两相中一相是固定的, 另一相则是移动的. 根据所包括的两个相的性质, 可有各种可能形式的层析法; 供普通使用的有 固-液(柱, 薄层和纸), 液-液和气-液(蒸气相) 层析法.
1.7.2核实细节
广泛适用于种种官能团—烃, 醇, 酮, 酯, 羧酸, 偶氮化合物, 胺.
吸附剂
氧化铝: 分为酸性(PH=4), 中性, 碱性(PH=10). 这种吸附剂特别适用于分离象羧
酸和氨基酸之类的酸性物质. 碱性氧化铝的PH约为10, 故适用于分离胺. 中性
有机合成纯化硅胶柱层析PPT课件
（a）倾（斜a上 ）倾行斜法上展行开法展开
（（b）b）直直立立式式展展开开
1—色谱缸1—（色2a谱—）缸薄倾层2斜—板薄上层行3板—法展3展开—剂开展开剂 1—1色—谱色缸谱缸2—2—薄薄层层板板 33—（展展b开开）剂剂直立4—4式—展展展开开剂开蒸剂气蒸气
两个套圈的厚度和距离，便是薄层的厚度和宽度。
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图 3—26 薄层干铺法
1—玻板 2—玻棒 3—厚层套圈 4—导轨套圈 5—薄层
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湿铺法 概念：将溶剂或含粘合剂的溶剂和吸附剂按一定的比例， [一般硅胶为30g/(75～90) ml，氧化铝为25g/50ml]，加 到一起，调成糊状，然后再将糊状物均匀的铺在薄板上 的方法。
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分配色谱 ❖支持剂：硅胶、硅藻土、纤维素等。 ❖固定相：水、甲酰胺、石蜡油等。 薄层粘合剂及其他添加剂 ❖石膏（10—15%）、羧甲基纤维素钠（CMC）（0.5— 1%）、淀粉（5%）、聚乙烯醇（0.5—1%）等。 ❖添加1.5%的硅酸锌锰（Zn2SiO4∶Mn），制成荧光板。 ❖加入硝酸银可制成硝酸银薄板，用于分离含π键的顺、反异 构体。 ❖添加硼酸制成的薄层板则可以分离单糖类化合物异构体。
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Rf的特性和应用： 在固定条件下，特定化合物的Rf值是一个常数。 因此，在条件完全相同的情况下，Rf值可以作 为该化合物定性检定的物理指标，就像测定熔 点或其它物理常数一样。为了获得相同的色谱 条件，通常是把未知样和标准样同时滴加在同 一块薄板上。
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（二）、吸附剂
柱层析的实验方法和技巧
此外在采用TLC选择洗脱剂时还应注意：
第一，某种样品在这种展开剂中只显示一个点，并不等于在别的展开剂中也只显示一个点。因此在寻找展开剂时，多尝试几种比例不同，成分不同的展开剂。展开剂的极性太小，点分不开；极性太大，也分不开。
第二，点不能点得太浓，否则容易重叠，不易判断，因为如果两个点相近的话，一浓就变成一个点了。但也不能太淡，否则含量较少的成分可能斑点模糊或不显出斑点。点样时还应避免损伤薄层。
干法装柱是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实（抽真空时间不要太长，以免柱子装的过实，流速过慢而导致扩散），接着是用淋洗剂“走柱子”。干法装柱较方便、快速且溶剂耗量少，但是其分辨率低、柱效差，故适于大量样品的粗步分离。在干发装柱时应注意：不要过分剧烈地震动和敲打侧壁，过分剧烈地震动和敲打侧壁会使得硅胶因自身粒径的不均匀性而产生柱子整体的不均匀。
而把固定相极性小于流动相极性的柱色谱方法称为反相柱层析，常用的流动相为甲醇、水等极性溶剂。较适宜分离极性较高的化合物。
二、凝胶层析——根据物质的分子大小进行分离
凝胶层析又称为凝胶过滤、分子筛层析等，是以具有网状结构的凝胶颗粒作为固定相，根据物质的分子大小进行分离的一种层析技术。常用的凝胶是葡聚糖凝胶（Sephadex)，如Sephadex LH-20。
柱层析的几个技巧
柱层析的几个技巧柱层析就是通常所说的过柱子，又叫柱色谱，属于色谱法中使用最广泛的一种方法。
对于含有多种有机物的混合样品，用重结晶无法提纯时，柱层析法可以说是有机实验中最有效的分离手段。
实验室中常用的是以硅胶和氧化铝做固定相的吸附柱。
硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。
虽然很多化学实验书中都叙述了柱层析的实验方法，但大多数都是比较雷同地泛泛地描述，而且有些描述在实验室中并不适用。
例如，很多书中都提到装柱时先在底层铺一层石英砂，倒入固定相后再在顶部铺一层石英砂。
比较繁琐，而且效果也不是很好，在实验室中不适用。
根据多年来使用柱层析的操作经验，本文总结了在使用柱层析时的几个技巧：1、硅胶的使用初做柱层析很容易把柱子装得长了或短了，有时还会有大量的硅胶剩余，浪费硅胶，这主要是对硅胶等固定相的使用的量没有掌握。
柱层析用的硅胶一般是100-200 目，100 毫升硅胶的质量在47 克左右，如果装一个直径是2.8 厘米的柱子，可以装18 厘高。
为了避免浪费硅胶和溶剂，最初学习装柱时最好对实验室中各种不同规格的柱子摸摸底。
方法很简单：用量筒量出100 毫升干硅胶，直接倒入各种规格的柱子中，敲实，用刻度尺量出硅胶在柱子中的高度，这样就可以做到心中有数了。
一般在装柱的时候可以根据实验所需柱子的高度来调整硅胶的使用量，这样就可以大大地节省硅胶的使用，避免造成没有必要的浪费。
称量硅胶时一般称30~70倍于上样量，如果极难分，也可以用100 倍量以上的硅胶。
2、洗脱剂的使用洗脱剂的极性可用薄层层析来确定，一般以待分离样品Rf 值为0.2-0.3 为宜。
选择的洗脱剂应该使两相邻物质Rf 值之差最大化。
不要认为在板上爬得高分离的效果就比较好，如果Rf 在0.6，即使相差0.2 也不容易在柱子上分开，因为柱子是一个多次爬板的过程，可以通过公式的比较：0.6/0.8 一次的分离度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。
柱层析的操作步骤和注意事项
柱层析的操作步骤和注意事项(总5页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除柱层析技术常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
柱子可以分为：加压，常压，减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝聚），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。
非凡是在轻易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好。
柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想假如柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而假如样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较轻易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。
有机物分离与纯化的方法、柱层析的一些技巧_图文
凝胶渗透柱层析法：用凝胶sephadex LH-20 作有机磷有机化合物.分离净化。
被纯化物质的分子量范围：有机磷200-400 ；色素500-900。用118g葡聚糖LH-20装柱。 乙醇或丙酮淋洗；淋洗速度V=4.5ml/h。
册或者化工手册查阅）
４）减压蒸馏装置
仪器装置 带橡皮套的毛细管、容积
=1/2V、不用平底接受器 减压泵 （水泵7-20mmHg）机械
泵（油泵） 0.1mmHg （要 连接吸收装置）
注意：负压与正压 操作一样要带护目镜防爆！减压蒸馏装置图
５）减压蒸馏操作步骤
A、查蒸馏系统可否达应有真空度 开始：关安全瓶活塞，紧毛细管螺丝夹，开抽气泵，
为保持柱上有平整表面，最上层可加石英砂 。
２）湿装：先装洗脱剂于柱内，用淋洗剂 调 成糊状的吸附剂慢慢加入，慢慢沉降 。最后 应使吸附剂上有一薄层溶剂。亦应边加边敲
5、吸附剂的分类
吸附剂种类：氧化铝、硅胶、弗罗里硅土、纤 维素、氧化镁、碳酸钙、活性碳等。
吸附剂的要求：对被吸附物有一定的作用，与 被吸附物，淋洗剂无化学反应。
破坏。
４）淋洗曲线
分段收集标准品洗脱液进行含量分析，绘成 的淋洗剂体积—样品含量曲线。
用途 使要收集的组分尽可能收集完全，无色化合
物用标准品进行实验。分段收集洗脱液进行 含量分析，绘成曲线。 确定淋洗过程应收集的 洗脱液体积。 可以确定淋洗所需溶剂 。
淋洗剂体积
含量％
11、分配柱与凝胶渗透柱层析法
3、柱层析原理与分类
１）原理：混合物被束缚在色谱柱的固定相 上，流动相自上而下流经固定相，带动被分 离组分向下移动。与固定相作用力大的组分 在流动过程中留在了后面，与固定相作用力 小的组分在流动过程中跑在了前面（略），
柱层析纯化
柱层析纯化一、概述柱层析纯化是分离、纯化和富集生物大分子的一种常用技术。
它是利用各种不同的化学和物理性质来分离、提纯和富集混合物中的目标分子，如蛋白质、核酸等。
柱层析纯化技术已经成为生物制药工业中最常用的方法之一，因为它可以高效地从复杂混合物中提取目标分子，并且能够在较短时间内得到高度纯净的产物。
二、柱层析原理柱层析是基于不同组分在固定相上的不同亲和力而进行分离的。
固定相通常是填充在管柱中的小颗粒，这些颗粒可以根据表面化学性质进行选择性修饰。
样品通过固定相时，会与其表面发生相互作用，使其在固定相上停留时间不同，从而实现了对样品组分的分离。
三、柱层析步骤1. 选择填料：根据需要分离的目标分子特异性选择填料；2. 制备填料：将填料与特异性结合剂进行反应；3. 装填柱子：将填料装入柱子中；4. 平衡柱子：在样品加入之前，用适当的缓冲液平衡柱子；5. 加入样品：加入经过前处理的样品；6. 洗脱杂质：用缓冲液洗脱非特异性结合的杂质；7. 洗脱目标分子：用特定条件洗脱目标分子；8. 收集纯化产物：收集纯化后的产物。
四、柱层析类型1. 亲和层析：利用特异性结合剂选择性地捕捉目标分子。
2. 尺寸排除层析：根据分子大小进行分离。
3. 离子交换层析：通过离子交换基团对带电荷的生物大分子进行选择性捕捉。
4. 逆相层析：根据生物大分子在水相和有机相之间的亲和力差异进行分离。
五、优点与局限优点：1. 可以高效地从复杂混合物中提取目标分子，并且能够在较短时间内得到高度纯净的产物。
2. 操作简单，容易掌握，可以快速实现自动化操作。
3. 适用于各种生物大分子的分离纯化，具有广泛的应用前景。
局限：1. 填料选择和柱子操作需要一定的专业知识和经验。
2. 操作过程中可能会引入杂质，影响纯化效果。
3. 操作过程中需要严格控制条件，如温度、pH值等，否则可能会影响纯化效果。
六、应用柱层析技术广泛应用于生物制药工业、生命科学研究领域以及食品和环境监测等领域。
有机物分离与纯化的方法柱层析的一些技巧48页PPT
56、书不仅是生活，而且是现在、过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次，但许多人连一 次也不 善于度 过。— —吕凯 特 58、问渠哪得清如许，为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处， 只不过 是愈来 愈发觉 自己的 无知。 ——笛 卡儿
拉
60、生活的道路一旦选定，就要勇敢地 走到底 ，决不 回头。 ——左
柱层析方法和技巧
常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
一：柱子可以分为：加压，常压，减压压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
二：关于柱子的尺寸应该是粗长的最好。
柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。
如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。
详细柱层析技巧
详细柱层析技巧常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱.我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
柱子可以分为：加压，常压，减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候,常压柱是效率最高的，但是时间也最长,比如天然化合物的分离,一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结)，以及有些比较易分解的东西可能得不到,而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵(给鱼缸供气的就行）。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好。
柱子长了,相应的塔板数就高.柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有0。
5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说,不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
现在见到的柱子径高比一般在1：5~10，书中写硅胶量是样品量的30~40倍，具体择要具体分析.如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2~0。
4，杂质相差0。
1以上），就可以少用硅胶，用小柱子(例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子)；如果相差不到0。
柱层析方法和技巧
常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
一：柱子可以分为：加压，常压，减压压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
二：关于柱子的尺寸应该是粗长的最好。
柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。
如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。
柱层析的方法与技巧
柱层析操作柱层析操作方法与技巧方法与技巧方法与技巧摘要：本文主要论述的是柱层析的试验方法和技巧。
关键词：柱层析 方法 技巧1.1.柱层析的介绍与原理柱层析的介绍与原理柱层析的介绍与原理：：常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
见图1图1硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离， 一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，所以流动较慢，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，所以流动较快。
从而达到分离的效果。
整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。
整个简单流程示意图如图2图22.2.柱层析的操作方法与技巧柱层析的操作方法与技巧柱层析的操作方法与技巧：：1、柱子可以分为：加压，常压，减压压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
2、关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。
详细柱层析技巧
详细柱层析技巧常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
柱子可以分为：加压，常压，减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好。
柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体择要具体分析。
如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。
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３、旋转浓缩蒸馏法
一般用于提取液浓缩 １）浓缩原理 使溶剂在瓶壁形成一层薄膜，扩大蒸馏
面积，提高蒸馏速度。 ２）应用条件 压力400～600mmHg 转速50～160转/分。
４、水蒸汽蒸馏
１）主要用途 沸点比较高，容易热分解，或者糊状混合物中的成
脱水力强。 Na2 SO4 多数溶剂可用，脱水能力不强。 K2 CO3 碱性化合物、醇、酯 脱水力较强。 P2 O5 卤烃、烃（醇、酸不可用），脱水力强。 NaOH 饱和烃、肼、胺（酸性物质不可用） 分子筛 多数可用，脱水力强。
２、减压蒸馏
１）减压蒸馏的原理
液体的沸点随液面压强降低而降低。
对沸点和压强进行估算。
压强小
过如下途径进行估算。
２）查T-P关系图
A线标减压沸点数据，
B线正常压强沸点
沸点低
C线压强刻度（mmHg). A B
压强大
C
３）用 近似公式估算
用 近似公式 lgP=A+B/T P 蒸汽压; T 绝对温度; A 、B为常数（可以通过化合物物理性质手
活 有性机碳磷有—机中化性合氧物化。铝，CHCl3淋洗由于提纯
9、淋洗剂选择
１）极性递增顺序： R-X < C=C <R-OCH3 < <R-CO2R < R2C=O < R-CHO <R-SH<R-NH2 < R-OH<R-CO 2H ２）吸附力与淋洗剂性质有关。 选淋洗剂时应考虑被洗脱物质的极性与溶解度。 极性大的化合物用极性大的淋洗剂洗脱； 极性小的化合物用小极性淋洗剂洗脱； 几种极性差别大的混合物用几种不同极性的淋洗剂分
分配柱层析法：把有机氯有机化合物从极性 小的有机化合物样品中分配到极性大的溶剂 中去。主要分离含脂肪、蜡质试样的有机氯 。
凝胶渗透柱层析法：用凝胶sephadex LH-20 作有机磷有机化合物.分离净化。
被纯化物质的分子量范围：有机磷200-400 ；色素500-900。用118g葡聚糖LH-20装柱。 乙醇或丙酮淋洗；淋洗速度V=4.5ml/h。
有机物分离与纯化的方法、柱层析的一些技巧 _图文.ppt
一、固体有机物分离提纯方法
二、液体有机物分离提纯方法
液体有机化合物蒸馏法 蒸馏法原理：依液体混合物中各组分沸点不同而
分离。 关键：控制温度缓慢上升，收集不同温度范的围馏
份。 蒸馏方法分类： 常压蒸馏适用于b.p较低，在b.p时不分解的物质。 减压蒸馏适用于b.p较高，或在b.p发生分解的物质。 水蒸气蒸馏适用于不与水反应，b.p较高的物质。
a、装好仪器 b、调热浴温度高于b.p10℃以上 c、冷却水接蛇形冷凝管（低于b.p20℃
） d、接真空泵（不低于300mmHg） e、加热、开自动加液旋塞， f、开动电机使旋转，收集馏出液。 g、关电机、除热源、关加液旋塞、压
力平衡停抽气
４）水蒸气蒸馏操作
水蒸气蒸馏操作与常压蒸馏操作类似，其装置比常 压蒸馏装置多一个水蒸气发生器。
8、影响Rf的因素
薄层厚度 吸附剂种类、活度、展开剂极性、展层的饱和度 展开方法：一般不加黏合剂，薄板水平展开。 单向上行一次展开，倾角70-80° R开f值剂接，近也的可物不质同要的多展次开单剂向。展开。每次可用同一展 双向展开法：用正方形薄板，展开剂一次走到上沿
后取出风干，旋转90°后再展开 边使色缘斑效大应小：及溶形剂状前不沿规线则一般朝下弯造成Rf不准，且 显色是配合薄层进行鉴别。
压力达要求。 停止：慢慢打开安全瓶活塞 ，压力与外界平衡， 可旋转多用接头
松毛细管螺丝夹，关抽气泵。 B、加液料、关活塞、开抽气、调毛细（气泡与线）、达到 压力
后（平衡、稳定）再 加热。 C、热源温高于b.p20-30℃，压力不稳调热源。
馏出速度0.5～1D/S
D、多组分蒸馏：馏出温度上升时转换接收器（使用多头接 受器）。
。 B、分配色谱柱：惰性载体表面涂高沸点液体
，被分离物在淋洗剂与高沸点液体之间溶解 分配。 C、凝胶色谱柱：多凝胶填粒、淋洗，凝胶
4、吸附柱的装填要求
吸附剂要装填均实，淋洗剂等速水平下降， 分离效果好。
１）干装：先装洗脱剂于柱内，吸附剂通过 漏斗直接装入盛有洗脱剂的色谱柱（边装边 敲），最后应使吸附剂上有一薄层溶剂。
安全管 T形管
水蒸气发生器
三、柱层析分离（固／液）有机物
1、柱层析技术用途 架设一个带活塞的玻璃柱，填入吸附剂，可
以用于分离混合物是分离混合物的重要方法 。 2、柱色谱的几种技术指标 直径与长度比：1：10~1：40 短而粗的柱子，分离快，分离效果差 长而细的柱子，分离慢，分离效果好 色谱柱的分离效果还与吸附剂和洗脱剂的选择 、柱子的装填质量有关。
批洗脱。 亦可以用混合淋洗剂。
10、淋洗剂洗脱能力与洗脱要点
１）常用淋洗剂洗脱能力： 正 〈 〈己CC3H烷HC7〈lO3〈CHCE〈tl42M〈OeC〈O6HCHH5〈-C3CHHO23O〈2CC2H6H5〈6〈MCeH2C2COl2 ２）淋洗要点：连续不断，不快不慢，吸
附剂不露出液面。 ３）淋洗速度 V=1～２滴/S为宜。 洗脱快则交换不平衡； 洗脱慢则具有大表面的吸附剂使某些成分
多数有机磷（.水平0.05—0.005ppm）淋洗 体积在305—428ml；回收率可达66-98%。
六）薄层色谱分离提纯
比柱色谱更加应用广泛的分离分析手段。 用于分离提纯具有简单快速的特点。分离
容量不及柱色谱大，效果也不及柱色谱好 。 薄层分类：吸附与分配色谱， 分配色谱又分正相色谱与反相色谱。 正相：含水吸附剂（固定相），弱极性流 动相，极性小的移动快。 反相：钝化吸附剂（固定相），强极性流 动相，极性强的移动快。
四、化学提纯法
化学净化法是使杂质与某种试剂发生化 学反应除掉或者消除干扰。
有机化合物提取液干扰分析成分很大程 度是脂肪与色素。
最常用的化学净化法是用酸处理对酸稳 定的有机化合物或用碱处理对碱稳定的 有机化合物来除杂。
1烟、硫酸酸净（化1： ：用1）浓混H合2S液O在4或分浓液H漏2S斗O4中与处发 理萃取液，可以除脂肪、色素。
册或者化工手册查阅）
４）减压蒸馏装置
仪器装置 带橡皮套的毛细管、容积
=1/2V、不用平底接受器 减压泵 （水泵7-20mmHg）机械
泵（油泵） 0.1mmHg （要 连接吸收装置）
注意：负压与正压 操作一样要带护目
镜防爆！
减压蒸馏装置图
５）减压蒸馏操作步骤
A、查蒸馏系统可否达应有真空度 开始：关安全瓶活塞，紧毛细管螺丝夹，开抽气泵，
相容的展开剂混合，以调节展开剂极性。
7、一般薄层色谱实验操作
点样—展开—显色—计算Rf值 点样：在距薄板下沿1cm处的水平线上，毛细
管口液滴与薄层表面相切，切忌玻璃管戳破薄 层，可以重复点样。 展开：薄层板下沿水平插入层析缸，展开剂不 能淹没样点，缸内充满展开剂蒸汽，要盖上盖 子，展开剂水平线上升，接近薄层上沿时为止 。 显色：大多物质要进行物理或者化学方法显色 。 薄层板从层析缸取出，在展开剂前沿作一记号 ，待展开剂挥发干后显色。 物理方法：紫外灯照射；碘蒸汽熏蒸等。
硅胶：水玻璃加盐酸，沉淀脱水得无定形多 孔物质。表面Si-OH称硅醇，与不饱和化合物 或极性基形成氢键而吸附；Si-O-Si氧桥可水 解，称溶解度，pH = ９以上显著，故不可用 强碱性淋洗液；
硅胶层析性能与多孔骨架及坑穴体系密切相 关，加热有变。活化温度不超过２００℃。 130℃活化２h备用。用于有机氯有机化合物 分离。
薄层吸附色谱
1、固定相：硅胶、氧化铝活化。 a加石膏为G型，不加为H型，加荧光剂为GF或HF b正相分配色谱：纤维素或用缓冲水溶液处理过的
硅胶、或用极性有机溶剂处理过的硅胶。 C、反相分配色谱固定相：用硅酮、石蜡等非极性
溶剂处理过的硅胶或纤维素。 D、薄层涂层：薄层自然晾干后进行活化。 E、活化温度与时间： 硅胶板105-120℃，1h； 氧化铝板：70℃，40mi温度计水银球位置 ３）加沸石 ４）容器中液体体积 ５）热源选择 ６）馏出速度
v = 2～３ D/S
７）液体的干燥
液体含水：干燥剂脱水后蒸馏（干燥剂不可进入蒸 馏体系）（容量与速度）
干燥剂种类及性能： CaO 中、碱性化合物可用，脱水力强。 CaCl2 卤烃、烃、酯、醚可用（醇、酸不可用）
吸附能力：与颗粒粗细有关，粗则流速快，分 离效果差；粗则流速慢，分离效果好。
氧化铝分类：酸性、中性、碱性三种 酸性：１％HCl浸泡，蒸馏水洗pH4～４.５，
用于分离酸性物质 中性：pH为７.５左右，用于分离中性物质 碱性：pH９～１０，用于分离碱性物质或烃类
。
6、吸附剂的活性
⑴含水量越低活性越高。 氧化铝依含水量分为五级，含水量分别为０
2、吸附剂选择
吸附剂
用途
吸附剂
用途
硅胶
吸附，分配 氧化铝 吸附，分配
硅藻土
分配 纤维素 分配
氢氧化钙
吸附
聚酰胺
吸附
离子交换树脂 离子交换 氧化镁 吸附，分配
吸附剂粒度的要求：5-50μm。 粒度太大推进快，影响分离；
。 粒度太小则展开慢，出现拖尾或横向扩散过度
3、展开剂选择
与淋洗剂标准一致。官能团极性如下： RH＜RCl＜—CH=CH2＜ROCH3＜RNO2 ＜RNMe2＜RCOCH3＜RCO2R＜R2C=O ＜RCHO＜RSH＜RNH2＜RNHCOR ＜ROH＜RCONH2＜RCO2H 一般单一展开剂没有很适合的极性，多用