大葱花蕾总蛋白双向电泳体系的建立

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双向电泳技术流程

双向电泳技术流程
7cm 11cm 17cm
Analytical Load (silver staining)
10~100ug/125ul 50~200ug/185ul 100~300ug/300ul
Preparative Load (Coom staining)
200~500ug/125ul 250~1000ug/185ul
样品制备
• 样品的纯化
蛋白样品的纯化
样品进行纯化的试剂盒 ReadyPrep 2D Clean-up Kit:去除盐分及其他杂质 ReadyPrep Reduction-Alkylation Kit:显著提高碱性蛋白分辨率
ReadyPrep 2-D Kits
样品中DNA的去除
• DNA/RNA等可以同蛋白质形成超大分子量 的复合物,从而影响蛋白质的电泳分离。 • 一般在用40mM Tris溶液裂解细胞时,加入 DNA消化酶,即可有效去除DNA。 • 量:1ml溶解液中加入150~300U的内切核酸 酶,室温反应20min即可。
高不溶性蛋白的分离:主要还是要增加蛋白质 的溶解度,采用顺序抽提法进行。
亚蛋白质组样品的制备
主要是应用超速离心技术和顺序抽提法将总蛋白质 组分成不同的蛋白质组亚群,再用适当的蛋白溶解 液溶解,以降低样品的复杂性、提高分辨率。常用 方法为: 1、用超离心技术分离出细胞器、质膜和细胞核等成 分,再用适当的蛋白质溶解液进行溶解,这不仅大 大减少样品的复杂性,而且展示出的蛋白质可确定 其亚细胞定位。该法需要专业仪器,有时会出现假 阳性。
ddH2O
Suggested Bio-lyte ampholyte composition for IPG use
IPG pH Range 3-10 4-7 3-6 5-8 7-10 Bio-Lyte Ampholyte (stock) range 3/10 4/6 5/7 3/5 4/6 5/8 7/9 8/10 Bio-Lyte Ampholyte (stock) Conc.(w/v) 40% 40% 40% 40% 40% 40% 40% 20% Sample Solution Volume Per 5ml 25ul 12.5ul 12.5ul 25ul 12.5ul 25ul 12.5ul 25ul Sample Solution Volume Per 50ml 250ul 125ul 125ul 250ul 125ul 250ul 125ul 250ul

Westernblot蛋白质双向电泳的原理方法及在医学中的应用最终版

Westernblot蛋白质双向电泳的原理方法及在医学中的应用最终版
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31
技术流程
提出 生物学问题
实验组和对照组样品制备
双向电泳(2DE/DIGE)
凝胶图像分析
差异蛋白点选取 蛋白酶解及质谱分析 差异蛋白点的成功鉴定
Western blot 、蛋白质双向电泳的 原理、方法及在医学中的应用
湘雅医学院精神医学 1301班
CONTENTS
1
Western blot 原理及方法
2
蛋白质双向电 泳的原理
4
应用
3
蛋白质 双向电 泳的方

2
Western blot 原理及方法
蛋白质印迹法
3
Western blotting
? 做免疫印迹时选择抗体主要应考虑两个问题,一是所选抗体是否能识别 凝胶电泳后转印至膜上的变性蛋白,另一个是所选抗体是否会引起交叉 反应条带 。
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化学显色法
方便、便宜、灵敏 度较低、费抗体、 反应慢、线性窄、 不易保存、不能重 新剥离检测
Western blotting !!
4
什么是蛋白质印迹法 ?
Westernblot法 是凝胶电泳技术、固定化技术及分 子亲和技术三者融为一体的综合性技术,其核心在 于把凝胶已分离的区带并印迹于固化纸上,可分为 电泳、转印、酶免疫测定3个阶段。Westernblot法 结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和 特异性,是一种能用于分析样本组分的免疫学测定 的方法。
Western Blotting 间接法操作流程
Western Blotting 设计标准
分子量 标准
膜的选择
抗体
显色结果

双向电泳

双向电泳

双向电泳的应用及研究进展摘要:双向电泳是蛋白质组学研究中最常用的技术,具有简便、快速、高分辨率和重复性等优点。

本文重点介绍了双向电泳的基本原理及其应用。

同时对当前双向电泳技术面临的挑战和发展前景进行了讨论。

关键词: 双向电泳,应用,前景1.1双向电泳技术概述双向电泳(two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE)是蛋白分离的黄金标准,由此可以分析生物样品的显著差别,产生的结果用于诊断疾病、发现新的药物靶标和分析潜在的环境和药物的毒性。

双向电泳分离技术利用复杂蛋白混合物中单个组分的电泳迁移,第一向通过电荷的不同分离,另一向通过质量的不同分离。

双向电泳协同质谱技术是正在出现的蛋白组学领域的中心技术。

双向电泳是一种分析从细胞、组织或其他生物样本中提取的蛋白质混合物的有力手段,是目前唯一能将数千种蛋白质同时分离与展示的分离技术,其高分辨率、高重复性和兼具微量制备的性能是其他分离方法所无与伦比的。

双向电泳技术、计算机图像分析与大规模数据处理技术以及质谱技术被称为蛋白质组研究的三大基本支撑技术。

可见双向电泳在蛋白质组学研究中的重要性。

就像Fey和Larsen在他们的综述中提到:“尽管人们都想有新技术取代它,可是如果希望对细胞活动有全面的认识,其他技术无法在分辨率和灵敏度上与双向电泳相媲美”。

1.2双向电泳基本原理1975年,意大利生化学家O’Farrell发明了双向电泳技术[1],双向电泳是指利用蛋白质的带电性和分子量大小的差异,通过两次凝胶电泳达到分离蛋白质群的技术。

双向电泳技术依据两个不同的物理化学原理分离蛋白质。

第一向电泳依据蛋白质的等电点不同,通过等电聚焦将带不同净电荷的蛋白质进行分离。

在此基础上进行第二向的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,它依据蛋白质分子量的不同将之分离。

双向电泳所得结果的斑点序列都对应着样品中的单一蛋白。

因此,上千种蛋白质均能被分离开来,并且各种蛋白质的等电点,分子量和含量的信息都能得到。

简述双向电泳技术分离蛋白质的基本技术流程

简述双向电泳技术分离蛋白质的基本技术流程

简述双向电泳技术分离蛋白质的基本技术流程下载提示:该文档是本店铺精心编制而成的,希望大家下载后,能够帮助大家解决实际问题。

文档下载后可定制修改,请根据实际需要进行调整和使用,谢谢!本店铺为大家提供各种类型的实用资料,如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等,想了解不同资料格式和写法,敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you! In addition, this shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!双向电泳技术分离蛋白质双向电泳技术是一种常用于分离复杂蛋白质混合物的方法。

双向电泳在植物蛋白质组中的应用

双向电泳在植物蛋白质组中的应用

2018 年第 3 期(下半月)农民致富之友 Nong Min Zhi Fu Zhi You34科研◎农业科学随着人类基因组计划与10余种模式生物基因组全序列测定的完成, 基因组计划的重心已逐渐由结构基因组研究转移到功能基因组研究,生命科学随之开始了一个新的纪元—后基因组时代, 蛋白质组研究则应运而生。

1975年,O ’Farrell 和Klose 首先建立了等电聚焦/SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(IEF/SDS-PAGE )分离和分析蛋白质组分的技术。

该技术的应用,使得多组分,低浓度蛋白的分离成为现实。

1 双向电泳样品制备技术样品制备是双向凝胶电泳成功的关键, 直接影响到蛋白质组研究结果。

其一般过程是:对细胞、组织等样品进行破碎、溶解、失活和还原, 断开蛋白质之间的连接键, 提取全部蛋白质, 除去非蛋白质部分。

但溶解度差的蛋白质, 如膜蛋白、与膜相连的蛋白质以及来自具有高抗性组织的蛋白质, 需要添加离析剂、表面活性剂、两性电解质和还原剂等以增加蛋白质的溶解度, 提高蛋白质的提取率。

目前常用的离析剂有尿素和硫脉, 尿素是双向电泳制备时最常用的变性剂, 硫脉则可以帮助许多难溶的蛋白质进行溶解;表面活性剂可消除蛋白质疏水基团之间的相互作用,增强蛋白质在其pI 值处的溶解性,常用的非离子型去垢剂有CHAPS 、CHAPSO 、SB3-10和ASB-14等。

在变性剂和表面活性剂联用条件下,再加用还原剂可使已变性的蛋白质展开更完全,溶解更彻底,常用还原剂为含自由巯基的DTT 以及不带电荷的TBP 。

王丽娟分别采用TCA-丙酮沉淀法和尿素一硫脲法提取菜籽种子蛋白,用Bradford 法对所获得的样品进行蛋白定量后,发现尿素一硫脲法提取的蛋白质所得2-DE 图谱较模糊,低丰度蛋白质点数较少,横竖纹干扰较大,分辨率较低;而TCA.丙酮沉淀法提取的蛋白质所得2-DE 图谱蛋白质点聚合较好,低丰度蛋白分离较好,蛋白点数显著多于尿素一硫脲法,且蛋白点分布均匀,图谱质量较好。

适合双向电泳的大白菜花蕾蛋白提取及浓度测定方法

适合双向电泳的大白菜花蕾蛋白提取及浓度测定方法

Co r r e s p o n d i n g a u t h o r , r u i q i n j i @y a h o o . C O I T I . c r l
DOI : 1 0. 39 6 9 / mpb . Ol 1 . 00 0 2 49
Ab s t r a c t Ex t r a c t i n g h i g h - q u a l i t y lo f we r b u d p r o t e i n s i s t h e p r e r e q u i s i t e i n s t u d y i n g o f t h e l f o r a l - ・ o r g a n P r o t e o me
技术主题
Te c h no l o g y F e a t u r e
适合双 向电泳 的大 白菜花蕾蛋 白提取及浓度测定方法
周雪 冯辉 冀 瑞琴
沈阳农业大学 园艺学院, 沈阳, 1 1 0 8 6 6
通讯作者, r u i q i n j i @y a h o o . C O I n . c r l
me ho t d ) . T h e 2 - D E ma p s we r e g e n e r a t e d b y t h e t wo — d i me n s i o n a l e l e c t r o p h o r e s i s a p p r o a c h a s we l l 。 T h e b e s t
分子植物育种, 2 0 1 3 年, 第 l 1 卷, 第 2期 , 第2 4 9 — 2 5 4页
Mo l e c u l a r P l a n t Br e e d i n g , 2 0 1 3 , Vo 1 . 1 1 , No . 2 , 2 4 9 — 2 5 4

双向电泳--郭吉星PPT教学课件

双向电泳--郭吉星PPT教学课件

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利用双向电泳可以分辩出5000—10000个蛋白质组 分
分离得到的蛋白质组分纯度达到90%以上,可以 稳定地保存在凝胶上
2020/12/09
6
注意
双向电泳分离的结果使蛋白质点而不是条带。 根据
Cartesin坐标系统,从左到右是pI的增加,从下到上是分子
质量的增加。
PI增加
分 子 质 量 增 加
2020/12/09
7
PPT精品课件
谢谢观看
Thank You For Watching
8
蛋白质双向电泳技术
—— 基本原理
2020/12/09
姓 名:郭吉星 学 号:2010103024 任课老师:祝建波 教授

双向电泳 技术
双向电泳(two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE) 是一种分析从细胞、组织或其他生物样本中提取 的蛋白质混合物的有力手段,是目前唯一能将数 千种蛋白质同时分离与展示的分离技术,其高分 辨率、高重复性和兼具微量制备的性能是其他分 离方法所无与伦比的。双向电泳技术、计算机图 像分析与大规模数据处理技术以及质谱技术被称 为蛋白质组研究的三大基本支撑技术。
2020/12/09
4
第二向SDS-PAGE
SDS-PAGE是利用SDS使蛋白质变性,多肽链 变成长棒状,不同长短肽链间短轴基本相等,长 轴长度与肽链长度成正比。SDS与蛋白质形成复 合物,并且按1.4gSDS与1g蛋白质等比例结合(相 当于两个氨基酸残基结合一分子的SDS)使之带 上大量负电荷
2020/12/09
2020/12/09
2
双向电泳技术
第一向按蛋白质等电点的不同,每个蛋白质分子 沿pH梯度迁移至与其等电点相等的位置

大豆花瓣蛋白双向电泳分析技术体系的优化

大豆花瓣蛋白双向电泳分析技术体系的优化
调 整豆科 植 物 花 器 的形 状 和 大 小 是 完 全 有 可 能
的 .
收 稿 日期 :0 0一o 21 9—2 8
来越 受关 注 引. 向 电泳 技 术 体系 的优 化是 蛋 双
白质 组学 研究 的前 提 和 基 础 , 文 针 对 大豆 花瓣 本 含有 大量 色 素和 酚 等 干 扰 物质 的现 象 , 比较 6种 蛋 白提取 方法 和 2种 蛋 白裂解 液 配 方 , 化 蛋胶 优 条 范 围和 等 电聚 焦 程序 , 步 建 立 了 一套 适 合 大 初
裂 解液 配方 , 化胶 条 范 围和 等 电聚 焦程序 . 果表 明 :H 为 4~ P 优 结 p 7 IG胶 条 适 于 大
豆全 花蛋 白分 离; C / T A 丙酮 +2 la p试 剂盒 法去 除 杂质 充 分 , 取 的蛋 白含 量 D CenU 提
高、 纯度 好 、 离效 果 佳 、 时 短 ; 白裂 解 液 采 用 5 mo L尿 素 , 硫 脲 , % 分 耗 蛋 l / 2M 2
第2 6卷
第 6期
哈尔滨师范大学 自然科学学报
NA RAL S I C OURN TU C EN ES J AL OF HARBI N NOR MAL UNI RS TY VE I
V 1 6 N . 0 0 o 2 . o62 1 .
大 豆 花 瓣 蛋 白双 向 电泳 分 析 技 术 体 系 的 优 化 水
CHAP 2 S 3—1 5 mmo/ E 2 S, % B 0, l L TC P,0 mmo/ TF 0 5 I G f r为 好 ; 加 l L D , . % P Bu e 增
离心转速 、 间和 丙酮 清洗 次数 能促进 蛋 白溶 解 , 时 增加 蛋 白纯 度 , 步 建 立 了一套 适 初

《蛋白质双向电泳》课件

《蛋白质双向电泳》课件
《蛋白质双向电泳》ppt课件
目录 Contents
• 蛋白质双向电泳概述 • 实验流程与技术 • 双向电泳的优缺点 • 双向电泳的应用实例 • 未来展望与研究方向
01
蛋白质双向电泳概述
定义与原理
定义
蛋白质双向电泳是一种分离和鉴定蛋白质混合物的技术,通过两次不同pH值 的电泳分离蛋白质。
原理
利用蛋白质的电荷和分子量差异,在电场中实现分离。在第一向电泳中,蛋白 质根据等电点不同被分离;在第二向电泳中,蛋白质根据分子量被分离。
蛋白质组学与其他技术的结合
与质谱技术联用
01
将蛋白质双向电泳技术与质谱技术联用,实现蛋白质
的精准鉴定和定量分析。
与基因组学、代谢组学等多学科交叉
02 将蛋白质双Hale Waihona Puke 电泳技术与基因组学、代谢组学等多学
科交叉,全面解析生命活动的调控机制。
与单细胞技术结合
03
将蛋白质双向电泳技术与单细胞技术结合,揭示单个
蛋白质定量
选择合适的蛋白质定量方法:如BCA 法、Lowry法等,确保准确性。
按照定量方法操作步骤进行定量,记 录数据并进行分析。
蛋白质溶解与分离
溶解蛋白质
将蛋白质样品溶解于适当的缓冲液中 ,以便进行电泳分离。
电泳分离
将溶解的蛋白质样品进行等电聚焦电 泳和SDS-PAGE电泳,实现蛋白质的 分离。
凝胶染色与图像分析
凝胶染色
采用银染、考马斯亮蓝染色等方法对凝胶上的蛋白质进行染 色。
图像分析
对染色后的凝胶进行拍照,并利用相关软件进行蛋白质点的 检测、匹配和比较分析。
03
双向电泳的优缺点
优点
高分辨率
双向电泳可以根据蛋白质的等电 点和分子量进行分离,具有较高 的分辨率,能够分离出更多的蛋 白质。

陆地棉花药蛋白质组分析中双向电泳技术体系的建立与优化

陆地棉花药蛋白质组分析中双向电泳技术体系的建立与优化

t n i ee ti f c s g ee to h r ssa d t e v lm eo e s mp e I i e p c e a h n l x r ci n m eh n l mmo i i , s lc r o u i lc r p o e i n h o u f h a l . t s x e t d t t e o ta t — t a o/ o o c n t h p e o a n—
( . 京农 业大 学 农 学 院 , 京 2 0 9 ; . 家 海 洋 局 海 洋 三所 , 门 3 1 0 ) 1南 南 10 5 2国 厦 605
ห้องสมุดไป่ตู้
摘 要 : 立 了适 用 于 陆 地 棉 花 药 蛋 白质 组研 究 的双 向 电泳 技 术 。以 陆地 棉 花 药 为材 料 , 用液 氮研 磨 的方 法 破 建 采
ln o o ( o spu h s tm L) a dC t nG s y i t m i uu . r
R N a Z NG Xi —o, u-e, A a — n E Y n, HA a b wU S i i T NG C nmig o j。
(. go o o ee Naj gA r ut a U iesy N nig2 0 9 , hn; . hr stt o O en gah , t e0 1 A rn myC lg , ni gi l rl nvr t, aj 10 5 C ia 2 T i I tue f ca orp y Sa - l n c u i n dni t
u a eae p e i tt n meh d c u d b n ft e o to sf r r t i x r cin fo c  ̄ n a t e s a d t eio l crcDa — m c t t r cpi i t o o l e o e o p i n o o en e t t m o o n h r , n s ee t - l ao h p a o r h i

2013.12.12 实验 蛋白质组学实验技术相关理论介绍(一)双向电泳(2DE)实验技术

2013.12.12 实验 蛋白质组学实验技术相关理论介绍(一)双向电泳(2DE)实验技术

第二向SDS-PAGE 垂直电泳
第二向SDS-PAGE 垂直电泳步骤
配制凝胶及准备第二向电泳系统 在SDS 平衡缓冲液中平衡固相pH干胶条 将平衡好的固相pH 干胶条放置在SDS 凝胶 上 进行电泳 染色、显影

平衡固相pH干胶条

平衡缓冲液(75 mM Tris-HCl, pH 8.8): 使固相pH 干胶条的pH 值维持在电泳适合 的范围内;由缓冲液、尿素、甘油、还原 剂、SDS 和染料组成。

稳定的同位素虽然其化学性质相同,但质 量数却存在差异。 ITRAQ就是利用这一原 理,用稳定同位素分别标记不同的样品, 将标记和未标记的样品以等量混合,酶解 后再用质谱技术检测它们的相对丰度。作 为一种新的蛋白质绝对和相对定量技术, 具有很好的精确性和重复性。
二维凝胶差异电泳技术DIGE

DIGE技术中将样品和对照品的蛋白质用激发波长 不同而化学性质类似的两种荧光染料标记,混合
二维凝胶差异电泳技术digedige技术中将样品和对照品的蛋白质用激发波长不同而化学性质类似的两种荧光染料标记混合二维电泳分离然后采用不同波长扫描通过观察一个蛋白质点两种荧光密度的差异变化得特定蛋白质点的差异表达信息
双向电泳(2DE) 实验技术
中国医学科学院 北京协和医学院 医学生物学研究所 病毒免疫室 赵婷 2013.12.12
IEF注意事项:
Ettan IPGphor Ⅲ系统是高压设备,如果安 全装置失效,可能引起致命电休克。因此, 操作开始前必须锁上安全盖,否则就不会加 电。 每个IPG 胶条的电流限度建议值为50μA, 如超过可能会烧毁胶条并损坏仪器。 常规胶条槽和Manifold 胶条槽采用陶瓷制成, 应小心操作。
基质辅助激光解析质谱成像技术 MALDI MSI

双向电泳培训课程PPT课件

双向电泳培训课程PPT课件

优化电泳条件
优化电泳参数,如电流、电压和 时间,以获得更好的分离效果。
提高检测灵敏度
采用荧光标记技术
利用荧光标记技术对蛋白质进行染色,提高检测 灵敏度和分辨率。
优化染色方法
改进染色步骤和条件,降低背景噪声,提高检测 灵敏度。
开发新型检测器
研发更灵敏的检测器,提高检测下限,降低检测 误差。
自动化与智能化发展
设置参数
根据实验需求设置电泳参 数,如电流、电压、时间 等。
开始电泳
接通电源,启动电泳程序, 开始电泳分离。
染色与检测
固定
电泳结束后,将凝胶固定在染色 架上,用脱色摇床进行固定。
染色
根据实验需求选择合适的染色方法, 如银染、考马斯亮蓝染色等。
检测
通过凝胶成像系统或数码相机对染 色后的凝胶进行拍照和记录,以便 后续分析。
03
比较不同物种间蛋白质的差异,揭示生物进化的奥秘。
临床应用前景
个体化医疗
通过对个体蛋白质组的分析,为个体化医疗提供依据。
精准诊断
利用蛋白质组学技术对疾病进行精准诊断,提高诊断的准确性和 可靠性。
药物疗效评估
通过监测药物治疗前后蛋白质组的变化,评估药物疗效和安全性。
THANKS FOR WATCHING
高分辨率和高灵敏度检测技术
提高蛋白质的检测灵敏度和分辨率,有助于发现 更多蛋白质。
3
生物信息学
对蛋白质组学数据进行深入分析,挖掘更多生物 学意义。
蛋白质组学研究
疾病标志物研究
01
寻找与疾病相关的蛋白质标志物,为疾病的诊断和治疗提供依
据。
药物靶点研究
02
发现潜在的药物靶点,为新药研发提供支持。

华根霉细胞总蛋白及膜蛋白双向电泳优化体系的建立

华根霉细胞总蛋白及膜蛋白双向电泳优化体系的建立

华根霉细胞总蛋白及膜蛋白双向电泳优化体系的建立郭月;王栋;徐岩【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2015(041)006【摘要】分别针对丝状真菌华根霉细胞总蛋白和膜蛋白,比较了不同蛋白样品的提取方法及IPG胶条的pH梯度对2-DE结果的影响,获得了较优的双向电泳图谱,通过重复实验及蛋白点匹配分析,确定了不同方法的适用性.分别采用ReadyPrepTMProtein Extraction Kit试剂盒和Triton X-100提取细胞总蛋白和膜蛋白,利用pH 3 ~10非线性IPG胶条,可获得相应蛋白点数较多、分辨度高、较清晰、重复性好的华根霉细胞总蛋白和膜蛋白2-DE图谱.利用PDQuest 8.0.1软件分析,细胞总蛋白重复样品间和膜蛋白重复样品间的蛋白斑点匹配度分别达到87%和94%.该研究为华根霉及其他相关微生物蛋白质组学研究奠定了技术基础.【总页数】7页(P8-14)【作者】郭月;王栋;徐岩【作者单位】江南大学工业生物技术教育部重点实验室,食品安全与营养协同创新中心,江南大学生物工程学院酿造微生物及应用酶学研究室,江苏无锡,214122;江南大学工业生物技术教育部重点实验室,食品安全与营养协同创新中心,江南大学生物工程学院酿造微生物及应用酶学研究室,江苏无锡,214122;江南大学工业生物技术教育部重点实验室,食品安全与营养协同创新中心,江南大学生物工程学院酿造微生物及应用酶学研究室,江苏无锡,214122【正文语种】中文【相关文献】1.桃果实总蛋白质双向电泳优化体系的建立 [J], 张丽;姜丽;石韵;康若祎;王利斌;郁志芳2.适于番茄叶片蛋白质组分析的双向电泳优化体系的建立 [J], 王强;王娟;李宁;唐亚萍;杨涛;王柏柯;杨生保;帕提古丽;余庆辉3.人源性表皮黑素细胞膜蛋白双向电泳技术初步建立及优化设计 [J], 李强;焦彬;高天文;于晓云;阮禹松;李春英;王刚;田艳丽;刘玲4.华根霉蛋白质组双向电泳体系的建立及优化 [J], 郑礼月;王栋;徐岩5.薄皮甜瓜果实总蛋白质双向电泳优化体系的建立 [J], 黄雅芳;杨瑞;王志忠;王建立;季玉杰;王璐;赵珈锐;潘高扬;李维根;王嘉兴;刘竹慧;盛鹏飞;郝敬虹因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

大白菜根系蛋白质双向电泳体系优化

大白菜根系蛋白质双向电泳体系优化
Te c h n o l o g y F e a t u r e
大 白菜 根 系蛋 白质 双 向 电泳体 系优 化
赵 玲玲 毕青 周雪ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ冀瑞 琴 冯辉
沈 阳农业大学园艺学院, 辽宁省十字花科蔬菜遗传育种重 点实验室, 沈阳, 1 1 0 8 6 6
通讯作者, j i r u i q i n 8 8 8 @1 6 3 . c o m; f e n g h u i a  ̄@2 , 6 3 , n e t
C o r r e s p o n d i n g a u t h o r s , j i r u i q i n 8 8 8 @1 6 3 . c o m; f e n g h u i a a a @2 6 3 . n e t
DO I : 1 0 . 1 3 2 7 1  ̄ . mp b . 0 1 3 . 0 0 0 1 7 8


双 向电泳 技术 是蛋 白质 实验 室最常 用 的手 段之 一 , 已被广 泛应 用于 蛋 白质 组学研 究 中 。 为建立适 合
大 白菜根 部 蛋 白质 组 分析 的双 向 电泳体 系 ,得到 比较 完美 的 电泳 图谱 ,本研 究着 重 从等 电聚 焦 参数 设 置 、 I P G 胶条 p H范围、 上样 量 , 胶 体浓 度 条 件 进行 了优 化 。结果 表 明 : 选择 1 7 c m p H 4 - p H 7的 I P G胶 条 , 上 样量为 1 2 0 0 I z g , 聚焦 时 间 为 8 5 0 0 0 V h , 胶体 浓 度 为 1 2 . 5 %进 行 双 向电泳 , 考 马斯 亮 蓝 染色 可 得 到 背 景清
A b s t r a c t As o n e o f t h e mo s t p o p u l a r p r o t e i n a p p r o a c h e s i n l a b o r a t o r y , t w o — d i me n s i o n a l e l e c t r o p h o r e s i s ( 2 - DE )

一种大葱花蕾培养获得多种倍性再生植株的方法[发明专利]

一种大葱花蕾培养获得多种倍性再生植株的方法[发明专利]

专利名称:一种大葱花蕾培养获得多种倍性再生植株的方法专利类型:发明专利
发明人:赵泓,王永勤,王贤
申请号:CN201410806368.7
申请日:20141222
公开号:CN104488717A
公开日:
20150408
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:本发明属于用组织培养技术获得再生植株领域,提供一种大葱花蕾培养获得多种倍性再生植株的方法。

本发明将大葱的花蕾作为外植体进行不定芽诱导培养,再将不定芽进行成苗培养得到多种倍性的再生植株。

所述不定芽诱导培养又包括热激、暗培养、光照培养三个步骤。

本发明采用大葱的花蕾作为外植体,可以通过不定芽获得多种倍性再生植株;采用适当的不定芽诱导培养基,提高不定芽的诱导效率;操作简便,培养基成分价格低廉,应用价值高。

申请人:北京市农林科学院
地址:100097 北京市海淀区板井彰化路50号2443信箱
国籍:CN
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双向电泳原理及实验步骤

双向电泳原理及实验步骤

两性载体电解质:即便在离液剂和去垢剂存在的情 况下,某些蛋白质也需要在盐离子的作用下才能保 持其处于溶解状态,否则这些蛋白质在其处于PI点 时会发生沉淀。 两性载体电解质的作用在于补充样品中少量的盐分 ,从而保证蛋白质的溶解性。应用时,两性电解质 的浓度应小于0.2%(w/v)。浓度过高会使IEF的升 压困难、速度降低。另外,为了保证实验的精确性 ,在选择不同pH范围的IPG胶条时,也应使两性电解 质的pH值与之相符合。

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样品制备基本原则
• 使所有待分析的蛋白样品全部处于溶解状态(包 括多数疏水性蛋白),制备方法应具有可重现性。 • 防止样品在聚焦时发生蛋白的聚集和沉淀。 • 防止在样品制备过程中发生样品抽提后的化学修 饰(如酶性或化学性降解等)。 • 完全去除样品中的核酸和某些干扰蛋白。 • 尽量去除起干扰作用的高丰度或无关蛋白,从而 保证待研究蛋白的可检测性。
1°: 150 g sample, 80 kV-hr 2°: 18.3 x 19.3 cm, 5.5 hr 1,724 spots
聚丙烯酰胺凝胶和转印到膜上 的蛋白质的检测
• • • • • • • 理想显色剂的7S 安全(safety): 灵敏(sensitivity): 简单(simplicity): 特异性(specificity): 快速(speed): 稳定(stability): 兼容性(synergy):
pH 7 - 10
56 cm 44 cm 40 cm 26 cm 16 cm
pH 3 - 6
pH 5 - 8
pH 3- 6
pH 5- 8
pH 7-10
聚焦时间的优化
• 要获得高质量的图谱以及很好的试验重复性,所 需的最佳时间即为等电聚焦达到稳定态所需的时 间。 • 聚焦最佳时间由不同蛋白样品、上样量、pH范围 和胶条长度通过经验来确定。 • 聚焦时间太短,会导致水平和垂直条纹的出现。 • 过度聚焦虽然不会导致蛋白质向阴极漂移,但会 因为活性水转运而导致过多水在IPG胶表面渗出 (电渗)而造成蛋白图谱变性,在胶条碱性端产 生水平条纹以及蛋白丢失。

双向电泳蛋白样品的制备

双向电泳蛋白样品的制备
〔3〕参加与酚一样体积的提取液,充分振荡后放置于冰上,每隔5min振荡一 次,总共6次,4℃,5000r/min,离心30min,吸出上层酚相,转移至新的 15mL离心管中。重复一次苯酚抽提。
〔4〕参加最后得到的酚的5倍体积的醋酸铵甲醇溶液对蛋白进展沉淀,充分 振荡后置于冰上保温每隔5min振荡一次,总共6次,于-20℃沉淀过夜。
双向电泳样本制备
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双向电泳样品制备:
一、蛋白质提取原那么:
二、样本裂解方式:
三、2D蛋白裂解液组成及作用: 1:裂解液组成及作用 2:常见裂解液
四、蛋白质提取步骤:
五、蛋白质样本制备实例: 1:动物组织样本制备 2:植物组织样本制备
醋酸铵甲醇溶液Ammonium acetate in methanol
用甲醇配制0.1M的醋酸铵
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以外,从而使某些蛋白质的二硫键重新配对,使溶解度降低而重新沉 淀下来。使用浓度范围10~100 mmol/L.
b: 采用非离子复原剂三丁基膦TBP可以大大增加蛋白质的溶 解性,并利于蛋白从第一向转移到第二向。但是TBP在水溶液中的不稳 定性和不溶性,使其在第一向IEF中维持蛋白质复原状态是相对无效的。 因此在IEF时建议最好使用巯基复原剂。
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三、双向电泳样本制备裂解液组成及作用
2、去垢剂: (1) 作用:破坏蛋白质分子间的疏水相互作用。
(2) 种类: a: 非离子去垢剂:triton X-100, NP-40 b: 两性离子去垢剂: CHAPS,CHAPSO SB3-10(不溶于浓度高于5mol/L的脲中〕 ASB(具有比CHAPS更强的膜蛋白溶解力〕 c: 阴离子去垢剂:SDS〔小于0.25%,同时确保其他去垢剂与

《双向电泳》PPT课件

《双向电泳》PPT课件

Analytical Load (silver staining)
Preparative Load (Coom staining)
7cm 10~100 g /125 l 200~500ug/125 l
11cm 17cm
50~200 g /185 l 250~1000ug/185 l
100~300 g/300 l 1~3mg/300 l
pH 10
Second Dimension:
SDS Polyacrylamide Gel Electrophoresis in discontinuous gradient gel
pH 3
pH 10
pH 3
Separation acc. to Isoelectric Points (charge)
Separation acc. to Molecular Weight (mass)
IPG IEF 中pH梯度的选择
常用方法: • 先宽后窄 • 先线性后非线性 • 先短后长
凝胶的图像处理分析和典型流程
• 凝胶图像的扫描: • 图像加工: • 斑点检测和定量: • 凝胶配比: • 数据分析: • 数据呈递和解释: • 2-DE数据库的建立:
LCM-DIGE (cy3-Lgreen, cy5-Kred)
固相pH梯度
为拥有CH2=CH-CO-NH-R结构的8种丙烯 酰胺衍生物系列,其中R包含羧基或叔氨基团, 它们构成了分布在pH3~10不同值的缓冲体系。
不产生阴极漂移、PH梯度稳定、分辨率高、重复性好。
第二向:SDS-PAGE
• 同普通SDS-PAGE类似。 • 一般在垂直电泳系统中无需浓缩胶,因为在
• 2. 对于某ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ抗体而言,其质量衡量指标主要有_______、______ _和________。
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K: O: 1 6 -8 - 1 8 的缓 控释 氮肥产 量和 经济 效益 均为最 高 ,与复混肥 相 比分 别提高 8 . 4 3 %、9 . 6 3 %;干物 质 和 氮 积 累量 最 低,与 复混 肥 相 比分 别 降低 1 3 . 3 3 %、 5 . 5 0 %;配 比为 N- P , O 一 K, O: 1 6 -8 -1 8的缓 控释 氮 肥氮素利用效率表现优 良。缓 控释氮肥对错季蔬菜 白
萝 卜 品质的影响符 合出 口标 准 ,聚类分析结果显示配 比为 N— P , O ~ K, O: 1 6 - 8 -1 8的缓控释 氮肥为优 质肥
料 ,故 推荐 当地 种植 白萝 卜 时施 用配 比为 N~ P O 一
K , O: 1 6 - 8 -1 8的 缓 控 释 氮 肥 。【 刊 】 /王 倩 倩 ( 河
由未处理时的 6 1 . 7 5 %提 升到 7 7 . 3 8 %。研究结论为实 现胡萝 卜 微粉高效加 工提供理论参考 。[ 刊】 /宫元娟 ( 沈阳农业大学工程学院 ) ,邓国淼 ,秦军伟 … / /农 业工程 学报 . - 2 0 1 5 , ( 1 0 ) . - 2 8 3 - 2 8 8
铅胁 迫下萝 卜 基 因组 D NA甲基化分析
利用 甲基化敏感扩 增多态性 ( Ms A P ) 技术 ,分析 不 同 浓 度铅 ( P b ) 处 理 下萝 卜 基 因组 D NA 甲基化 水 平 的变 化 ,探 讨 DN A 甲基化在 植株 对 P b胁迫 反应 中的 作 用 。结 果 表 明 ,经 1 0 0 、4 0 0和 8 0 0 mg・ L e b ( NO ) 2 处理 后 ,MS AP比率分 别为 1 2 . 7 %、1 4 . 2 %
实验 室 ) ,沈虹 ,王燕 … / /核农学报 . - 2 0 1 5 , ( 7 ) . ~
1 27 8 -1 2 8 4
血 红素加氧酶 一 1促进萝 卜 芽苗菜下胚 轴
花 青 苷 积 累
以萝 卜( R a p h a n u s s a t i v u s L. ) 芽苗菜 为材料 ,在 白光 下外 源 添加 与血 红 素加 氧 酶 ~l ( HO~1 ) 相 关的 试 剂 为处理 ,以加水 为 对 照,探 究 HO一1 对 花 青பைடு நூலகம் 合成 的影 响。结果表 明,各个处理 均不影 响芽苗的鲜 质 量 。与对 照相 比,添加 H O一1 诱导 剂 ( He mi n ) 后 下胚轴 中花青苷含量 显著升高 , HO-1 抑制剂 ( Z n P P ) 及血红 素降解产 物 ( B R、C O、F e ) 处 理下花 青苷 含 量均有 所下 降 ,其 中抑 制剂 Z n P P处 理后下 降最 多 ;
和1 7 . 0 %,均 高 于 对 照 ;全 甲基 化率 分 别 为 9 . 7 %、
1 0 . 2 %和 1 2 . 8 %,而 其对 照 为 9 . 5 %,表 明重 金属 铅 胁迫后 ,某 些位点发生 了重新 甲基化 。萝 卜 肉质根中
总 甲基化水平 随 P b处理浓 度上升而提 高 。甲基化 变
北 农业 大 学 资 源 与环 境 科 学 学 院 ) ,刘树 庆 ,宁 国 辉 … / /北方 园艺 . - 2 0 1 5 , ( 1 6 ) . 一1 6 1 ~ 1 6 5
异可分为重新 甲基化 、去 甲基化 、不定 类型以及与对
照相 同等 甲基化 类 型。萝 卜P b胁迫处理 引起的植 株
基 因组 甲基 化程 度 的提 高主 要是 重 新 甲基 化。研 究 为从 D NA水平揭示 重金属 P b毒害机 理及植物对 P b 胁 迫 的响应机制提 供 了理 论依据 。[ 刊】 /何玲莉 ( 南 京 农业大学 园艺学 院 /作物遗传与种质 创新 国家重点
基 于高 压 电场 的胡 萝 卜 微粉 抗 团聚分 散
性 试验
为 了提高 胡萝 卜 微粉加工效 率 ,改善粉碎过程 中 粉体 团聚问题。该文通过对胡萝 卜 干式 高速 剪切粉 碎 试验 ,研 究粉碎过程 中胡萝 卜 粉体粒径 、温度 、含水 率 以及类 胡萝 卜 素含量的变化情况 。结果表 明 ,随 着 粉体粒径 的减 小 ,其比表面积增大 、温度升高 、含水 率增加 ,颗粒 间范德华 力 、静 电力 、液桥力作用增 强 导 致粉体 颗粒 团聚 ,产生 了“ 逆粉碎 ”现象 。高压 电 场 能够 克服 粉 体颗粒 间的作 用 力,使粉 体具 有抗 团 聚 ,相互分散 的性能 。研 究中利 用针 板 电极原理 ,设
颗粒分散效果明显 ,粒径 <1 2 5 “m 粉体质量百分比
经诱 导 剂 He mi n处 理后 HO一 及花 青苷 合成途 径 中
的调控 基 因 P A P 1 和关 键结构 基 因 P A L 、C H S 、C H I 、 F 3 H、D F R的表达 量以 及 P AL酶 活性 与对 照相 比都 有 显 著提 高 。 由此 表 明,血 红 素加 氧 酶 一I ( HO 一1 ) 通 过上调花青苷 合成途 径关键基 因表达量促进花 青苷 积累。[ 刊1 /刘媛 媛 ( 南京农业大学 生命科学学 院 ) , 陈沁 ,李娜 … / /园艺学 报 . - 2 0 1 6 , ( 3 ) . - 5 0 7 -5 1 4
中 国园艺文摘
2 0 1 7 年第1 1 期
不 同缓 控释 氮肥对 坝上错季 白萝 卜 产 量、
品质及氮素利用效率的影响
以 白萝 卜 为试 材 ,通过 田 间小 区试 验研 究 了不
同缓 控 释 氮 肥 对 坝 上 错 季 白萝 卜 产 量 、 品 质和 氮 素利 用效率 的影响。结果表 明 : 配 比 为 N- P O 一
计 出高压 电场粉 体处理 装置。以处理 电压和处理时 间
为试验 因素 ,以粒径 <1 2 5 u m 粉体 质量百分 比为评
价指标 ,通过正交试验建立 回归方程 ,优化求解并验 证 ,得到胡萝 卜 粉体抗 团聚分散处理 的最优工艺参数 为 : 处理 电压 4 5 k V,处理 时间 6 0 mi n ,此时粉 体
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