Ehrlich苏木素染色液
苏木素染色原理
苏木素-伊红染色液(H-E)说明书
【产品名称】
苏木素-伊红染色液(H-E)
【型号】
苏木素染色液分别为:Mayer型、改良Harris型、型改良Lillie-Mayer型;
伊红染色液分别为:水溶型、醇溶型。
【包装规格】
货号:DH0006
单瓶包装规格分别为:100ml、250ml、500ml、5000ml;
每套/盒包装规格分别为:2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。
【预期用途】
主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】
苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合主要用于对细胞组织进行染色,简称HE染色,是病理学常规制片中最基本的染色方法,应用极其广泛,苏木素-伊红染色是生物学、组织学、病理学及细胞学等学科必不可少的最基本的染色方法,在病理诊断、教学与科研中广泛应用,具有重要价值,细胞中的细胞核是由酸性物质组成,它与碱性染料(苏木素)的亲和力较强;细胞浆则相反,它所含的碱性物质与酸性染料(伊红)的亲和力较大。因此细胞或组织切片经苏木素-伊红染色液染色后,细胞核被苏木素染成鲜明的蓝紫色,细胞浆、肌纤维、胶元纤维等呈不同程度的红色,红细胞则呈橙红色。
【主要组成成分】
试剂组成主要成分苏木素染色液(改良Lillie-Mayer)或苏木素染色液(改良Harris)或木素染色液(Mayer) 苏木色精伊红染色液(水溶)或伊红染色液(醇溶) 伊红
【储存条件及有效期】
5℃~35℃保存,原包装未开封染色液的有效期为18个月,在有效期内的已开封染色建议在开封后6个月内使用完,每次用后及时拧紧瓶盖,以免挥发或变质。
苏木素伊红染色
苏木素-伊红染色液(H-E)说明书
【产品名称】
苏木素-伊红染色液(H-E)
【型号】
混合型
【包装规格】
货号:DH0003
单瓶包装规格分别为:50ml、100ml、250ml、500ml、5000ml。
【预期用途】
主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】
苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合主要用于对细胞组织进行染色,简称HE染色,是病理学常规制片中最基本的染色方法,应用极其广泛,苏木素-伊红染色是生物学、组织学、病理学及细胞学等学科必不可少的最基本的染色方法,在病理诊断、教学与科研中广泛应用,具有重要价值,细胞中的细胞核是由酸性物质组成,它与碱性染料(苏木素)的亲和力较强;细胞浆则相反,它所含的碱性物质与酸性染料(伊红)的亲和力较大。因此细胞或组织切片经苏木素-伊红染色液染色后,细胞核被苏木素染成鲜明的蓝紫色,细胞浆、肌纤维、胶元纤维等呈不同程度的红色,红细胞则呈橙红色,本染色液系将苏木素和伊红混合成一种溶液,染色后可不分化即可达到常规HE染色效果。
【主要组成成分】
试剂组成主要成分
苏木素-伊红染色液(H-E)混合型苏木色精伊红
【储存条件及有效期】
5℃~35℃保存,原包装未开封染色液的有效期为18个月,在有效期内的已开封染色建议在开封后6个月内使用完,每次用后及时拧紧瓶盖,以免挥发或变质。
【样本要求】
涂片和切片必须充分固定,石蜡切片要充分脱蜡。
【检验方法】
l、石蜡切片于二甲苯I、II中各脱蜡若干分钟;
2、经无水乙醇和95%乙醇各约若干分钟,经80%乙醇若干分钟,自来水冲洗若干分钟;
苏木素染色液配制流程
苏木素染色液配制流程
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苏木素配制
(1)明矾苏木素
1.Harris氏苏木素(1990)
∙苏木素 2.5g
无水酒精 25ml
硫酸铝钾(钾明矾) 50g
或硫酸铝铵(铵明矾)
蒸馏水 500ml
黄*色氧化汞 1.25g
冰醋酸 20ml
该溶液为当前最广泛使用的染液,由于它染色时间短,效果好,很受使用者的欢迎。
配制时,先将苏木素溶于酒精(平时也可将苏木素以10%的浓度溶解好,贮存备用),取一2000ml的三角烧瓶,倾入钾明矾,加入蒸馏水,于电炉上加热,熔解钾明矾,完全熔解后,待温度至90℃左右时,加入预先溶解好的酒精苏木素,继续加热至沸腾,延续3-5min,此时溶液逐渐加深,变为紫红色,拔离电源,加入黄*色氧化汞,当充分氧化后,重新插上电源继续加热3-5min,此时溶液变深紫色,拔去电源,直接将三角烧瓶插入预先备好的冰水里,放于暗处,第二天过滤后加入冰醋酸,即可使用三个月,但据我们的实践及多年的经验认为,只要掌握好切片的“无水化”,该染液可反复使用达一年之久(天天使用)。
注意事项:
∙①苏木素一定要预先溶解,否则较难彻底溶解。
②加入黄*色氧化汞后,可产生大量的气泡,因此,配制500ml的溶液,一定要选择
2000ml以上的容器,否则液体便会溢出。
③当溶液变为深紫色后,应终止氧化,烧瓶应直接插入冰水中,不要担心玻璃瓶会
爆裂,因三角烧瓶经特殊处理的,不会有爆裂的危险,如果有,那是属于产品质量
问题。迅速冷却的主要目的是不让溶液过度氧化,以免缩短溶液的使用寿命。
④溶液过滤后方加入冰醋酸,不要颠倒过来。如果加入冰醋酸后再过滤,过滤速度
将非常慢,这是因为醋酸会使滤纸中的纤维膨胀,增加了密度,使溶液不易通过,
(仅供参考)苏木素伊红染色液说明书
苏木素-伊红染色液(H-E)说明书
【产品名称】苏木素-伊红染色液(H-E)H&E Staining System
【产品编号】HE-500ml,HE-1000ml,HE-2500ml
【包装规格】苏木素染色液500ml、1000ml2500ml;伊红染色液500ml、1000ml 2500ml;返蓝染色液500ml、1000ml2500ml。
【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】苏木素-伊红染色液(H-E)由3部分组成:苏木素染色液、伊红染色液和返蓝染色液。
苏木素氧化后与金属媒染剂作用,可形成不可替代的细胞核颜料。带有正电荷的苏木素-金属媒染剂复合体,易与细胞核内DNA上带负电荷的磷酸基团结合,因而使细胞核染色形成特定的蓝色。
伊红染色液是一种广泛用于组织学染色中与苏木素染色形成对比的染料(HE染色法)。此染色法可观察到清晰的细胞结构。样本中细胞核可经苏木素染色呈蓝色,细胞质经伊红染色呈粉红色。伊红是一种阴离子染料,可将红细胞染成亮红色,同样也可对其他基本的细胞组分(细胞质,胶原及肌纤维)进行染色。
返蓝染色液为组织学染色试剂,可替代水洗,快速使核染色质和核膜显现蓝色。由于其坚硬度和碱性,水冲洗后改变苏木素染核后的颜色。使用BioGnost 返蓝染色液,粘附在玻片上的样本不会发生像使用其他返蓝染色液时发生降解。【主要组成成分】苏木素:乙二醇、苏木素、碘酸钠、硫酸铝;伊红:伊红、乙醇;返蓝染色液:碳酸锂。
【储存条件及有效期】保证产品包装完整的情况下,储存温度在+15°C和+25°C 之间。保持储存环境干燥,不要放置于寒冷的环境中,不要冷冻产品,避免直接阳光直射。产品使用效期为2年,具体效期见标签。
he染色苏木素
苏木素-伊红染色液(H-E)说明书
【产品名称】
苏木素-伊红染色液(H-E)
【型号】
苏木素染色液分别为:Mayer型、改良Harris型、型改良Lillie-Mayer型;
伊红染色液分别为:水溶型、醇溶型。
【包装规格】
货号:DH0006
单瓶包装规格分别为:100ml、250ml、500ml、5000ml;
每套/盒包装规格分别为:2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。
【预期用途】
主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】
苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合主要用于对细胞组织进行染色,简称HE染色,是病理学常规制片中最基本的染色方法,应用极其广泛,苏木素-伊红染色是生物学、组织学、病理学及细胞学等学科必不可少的最基本的染色方法,在病理诊断、教学与科研中广泛应用,具有重要价值,细胞中的细胞核是由酸性物质组成,它与碱性染料(苏木素)的亲和力较强;细胞浆则相反,它所含的碱性物质与酸性染料(伊红)的亲和力较大。因此细胞或组织切片经苏木素-伊红染色液染色后,细胞核被苏木素染成鲜明的蓝紫色,细胞浆、肌纤维、胶元纤维等呈不同程度的红色,红细胞则呈橙红色。
【主要组成成分】
试剂组成主要成分苏木素染色液(改良Lillie-Mayer)或苏木素染色液(改良Harris)或木素染色液(Mayer) 苏木色精伊红染色液(水溶)或伊红染色液(醇溶) 伊红
【储存条件及有效期】
5℃~35℃保存,原包装未开封染色液的有效期为18个月,在有效期内的已开封染色建议在开封后6个月内使用完,每次用后及时拧紧瓶盖,以免挥发或变质。
苏木精、苏木素染色液溶液配制方法
华越洋苏木素(苏木精)
染色液的配制
各类溶液的配制方法如下:
华越洋苏木素染色液:500ml
1) Harry`s苏木素苏木素1g 无水酒精10ml
硫酸铝钾20g蒸馏水200ml氧化汞0.5g冰醋酸8ml分别用无水酒精溶解苏木素,蒸馏水加热溶解硫酸铝钾,然后两液混合并煮沸,加入氧化汞,继续加热和搅拌至溶液为深紫色,立即冷却,恢复至室温后过滤备用。
(2) 改良Lillie-Mayer`s苏木素苏木素 2.5g无水酒精20ml硫酸铝钾5g蒸馏水
330ml碘酸钠250mg甘油150ml冰醋酸10ml
分别用无水酒精溶解苏木素,蒸馏水溶解硫酸铝钾,然后两液混合后,依次加入碘酸钠、甘油和冰醋酸。
(3) Mayer`s苏木素苏木素100mg
蒸馏水100ml碘酸钠20mg硫酸铝铵5g柠檬酸100ml水合氯醛5g用蒸馏水溶解苏木素后,依次加入碘酸钠、硫酸铝铵和水合氯醛,过滤后备
(4)Ehrlich氏苏木素(1886)
苏木素1g
无水酒精50ml
甘油50ml
硫酸铝钾7.5g
蒸馏水50ml
冰醋酸5ml
将苏木素溶于无水酒精里,硫酸铝钾溶于蒸馏水中,然后所有的试剂都加在一起,充分搅拌均匀后,放于窗台上阳光充足的地,让其慢慢氧化成熟,大约需四个星期,才可使用。该液量种很好的细胞核染色液,用它染后,细胞核染色清晰,不易过染。对于用酸脱钙组织细胞核的染色,该试剂优于其它各种苏木素。这种自然氧化成熟的苏木素,可长期使用,不会变质。但染色时间较长,需要20分钟以上。
如需急用而苏木素又未成熟时,该液可加入20-30mg的碘酸钠,以促使其迅速氧化成熟,但这试剂配成后,就不是原来的苏木素,不能长期使用,但起码可用半年左右。
病理切片的结果分析方法
病理切片的结果分析方法
HE染色:又称苏木素-伊红染色法,其中苏木素是Hematoxylin,简称H,伊红是Eosin,简称E,这是是普通光学显微镜观察与鉴别细胞凋亡与细胞坏死的一种染色方法。这种方法适用范围广泛,对组织细胞的各种成分都可着色,便于全面观察组织构造,而且适用于各种固定液固定的材料,染色后不易褪色可长期保存。经过HE染色,细胞核被苏木素染成蓝紫色,细胞质被伊红染色呈粉红色。
检验原理:
* 苏木素是碱性染料,蓝紫色,可以使细胞核等着色。被苏木素着色的结构本身为酸性,具有嗜碱性(Basophilic)。
* 伊红是酸性染料,粉红色。可以将大多数细胞的细胞质染成红色。被伊红着色的结构本身为碱性,具有嗜酸性(Acidophilic)。
* 不易被苏木素和伊红着色的结构具有嗜中性(Neutrophilic)。
结果:细胞核呈蓝色,细胞质,肌纤维,胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色。钙盐和细菌可呈蓝色或紫蓝色。
Masson三色染色:主要用于胶原纤维和肌纤维的鉴别染色。Masson染色是最为常用的结缔组织染色法,此法多用于观察病变组织中纤维结缔组织的增生和分布,纤维性肿瘤与肌源性肿瘤的鉴别。对酒精性肝硬化/坏死后性肝硬化及各型肝炎导致的小叶汇管区纤维组织增生程度的差别具有重要价值。
Masson染色在肾穿刺活检中可以用于判别在肾小球毛细血管网的系膜氏和上皮下是否存在嗜复红蛋白的沉积,对于肾脏疾病的病理诊断有重要意义。
检验原理:
利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色,与阴离子染料分子大小和组织的渗透性有关。根据组织不同的渗透性能,选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色,便可把不同组织成份显示出来
苏木素配制
(1)明矾苏木素
1.Harris氏苏木素(1990)
∙苏木素 2.5g
无水酒精 25ml
硫酸铝钾(钾明矾) 50g
或硫酸铝铵(铵明矾)
蒸馏水 500ml
黄*色氧化汞 1.25g
冰醋酸 20ml
该溶液为当前最广泛使用的染液,由于它染色时间短,效果好,很受使用者的欢迎。
配制时,先将苏木素溶于酒精(平时也可将苏木素以10%的浓度溶解好,贮存备用),取一2000ml的三角烧瓶,倾入钾明矾,加入蒸馏水,于电炉上加热,熔解钾明矾,完全熔解后,待温度至90℃左右时,加入预先溶解好的酒精苏木素,继续加热至沸腾,延续3-5min,此时溶液逐渐加深,变为紫红色,拔离电源,加入黄*色氧化汞,当充分氧化后,重新插上电源继续加热3-5min,此时溶液变深紫色,拔去电源,直接将三角烧瓶插入预先备好的冰水里,放于暗处,第二天过滤后加入冰醋酸,即可使用三个月,但据我们的实践及多年的经验认为,只要掌握好切片的“无水化”,该染液可反复使用达一年之久(天天使用)。
注意事项:
∙①苏木素一定要预先溶解,否则较难彻底溶解。
②加入黄*色氧化汞后,可产生大量的气泡,因此,配制500ml的溶液,一定要选择
2000ml以上的容器,否则液体便会溢出。
③当溶液变为深紫色后,应终止氧化,烧瓶应直接插入冰水中,不要担心玻璃瓶会
爆裂,因三角烧瓶经特殊处理的,不会有爆裂的危险,如果有,那是属于产品质量
问题。迅速冷却的主要目的是不让溶液过度氧化,以免缩短溶液的使用寿命。
④溶液过滤后方加入冰醋酸,不要颠倒过来。如果加入冰醋酸后再过滤,过滤速度
将非常慢,这是因为醋酸会使滤纸中的纤维膨胀,增加了密度,使溶液不易通过,
形态学技能-苏木素-伊红染色
1.分化作用:苏木素染色后,用水洗去为结合在切片中染液,但是对细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料必须用酸性分化液脱去,保证细胞核和细胞浆染色分明。
2.返兰作用:分化之后苏木精在酸性条件下处红色离子状态,呈红色,若在碱性条件下处于蓝色离子状态,呈蓝色,所以在酸性溶液中分化之后用水洗去酸而中止分化,后用弱碱水(稀氨水)使细胞核中苏木素呈蓝色,呈返兰作用。
关于盐酸乙醇导致脱片的思考
盐酸乙醇的分化作用主要依靠盐酸在水中容易电离出氢离子,用来改变组织的电荷性质,使过染和吸附在组织表面的染料从组织中及表面脱落下来,从而达到分化的目的。根据盐酸的性质,盐酸在水中电离出的氢离子要比在乙醇中电离出的氢离子多,我们认为传统的盐酸乙醇用于分化乙醇在这里并不起作用,相反,由于乙醇的存在致使切片更易脱落,因为乙醇具有脱水及使组织收缩的作用,分化后水洗时组织又发生吸水、膨胀,而造成脱片。为此,改用盐酸水溶液进行分化,可避免脱片现象的发生。
苏木素-伊红(HE)染色操作
【试剂和材料】
已烤片的石蜡切片、二甲苯、无水乙醇、90%乙醇、70%乙醇、Ehrlich苏木素颜色液、0.5%盐酸70%酒精分色液、稀氨水返兰液、1%伊红染色液、中性树胶、自来水、蒸馏水
【耗材和设备】
染缸、盖玻片、玻璃棒、显微镜
【具体步骤】
1.实验准备:按步骤顺序摆放好染缸,准备计时器。
HE染色中(Harris)苏木素液的配制
HE染色中(Harris)苏木素液的配制
摘要】目的讨论HE染色(Harris)改良苏木素液配制。方法用改良的苏木素配置液(B液)与市场买来的苏木素液(A液)在染色切片量和使用时间以及成本作比较。结果B液在染色切片用量和使用时间以及成本均优于A液。结论
B液值得在病理学技术中值得推广。
【关键词】石蜡切片苏木色精硫酸铝钾氧化汞
在病理学技术工作中,石蜡切片HE染色仍是临床病理诊断中最为实用、简便的方法。苏木素染液是HE染色(Harris)中较关键的组成。细胞中的细胞核带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷苏木素碱性染料的结合而染色,经苏木素染成鲜明蓝色。[1]染色效果的好坏与使用的切片量和染液使用时间相关外,关键取决于染色液的配制。我科经过多年摸索实验,对HE染色中苏木素染液进行改良,在染色切片量与使用时间以及降低成本方面均优于市场买来的染液,现将工作体会与同行分享。
1. 材料与方法
1.1材料
甲液:苏木色精4克无水乙醇40ml
乙液:硫酸铝钾80克蒸馏水800ml
黄色氧化汞2克
1.2方法
甲乙两液分别溶解后混合,加热煮沸后,徐徐加入氧化汞,(此时有大量气泡生成,故容器宜大,以防液体溢出),继续煮沸1~2分钟。然后置冰块缸中使溶液迅速冷却,过夜后过滤就可。使用时,每100ml加冰醋酸2~4ml。
2. 结果
组织细胞中的细胞核经苏木素染成鲜明的蓝色。当溶液呈暗红色,如遇水即变蓝时,说明失效,不可再用。
改良苏木素染液(Harris)B液与市场买来苏木素染液(Harris)A液对比。
2组染色液的切片使用量与使用时间及价格作比较
Harris苏木素染液的新配制
Harris苏木素染液的新配制苏木素染液,是病理实验室常规的细胞核染色剂。现用的苏木素染液配方很多,但仍以Harris配方最经典,最常用。而且,经过改良,解决了该液实际工作中的不尽如意之处。1.材料与方法1.1 按500mlHarris苏木素液用量计算,取:苏木素2.5g、无水乙醇25ml、硫酸铝钾22g、蒸馏水500ml、氧化汞1.25g、柠檬酸2g、摄氏温度计1支。1.2 将2.5g苏木素放入25ml无水乙醇中,搅拌至完全溶解。1.3 将22g硫酸铝钾加入500ml蒸馏水内,加热溶解,然后加入苏木素无水乙醇液,使溶液尽快沸腾后,移离开火焰。1.4 搅拌溶液,待温度下降至91℃左右时,将氧化汞缓缓加入。此时,烧瓶内液体变成紫红色,但不会沸腾溅出。继续搅拌至看不到氧化汞的黄颜色为止,迅速将烧瓶放置于冷水中,用纱布置于瓶口处盖之。注意,瓶口不能用橡皮塞,否则会有氢氧化铝凝胶形成。1.5 次日晨,将配制的苏木素液进行过滤。加入2g柠檬酸搅匀,此时的 Harris液为绛红色。2.结果配制好的染液即可使用。切片染1′—3′,涂片30″—1′,然后入水、分化、蓝化,胞核呈鲜蓝色。3.讨论3.1 Harris苏木素染液,有很多优点,所用试剂较少,操作步骤简单。但在实际运用中也有些缺点,如染色周期短,有沉淀现象和氧化膜等。我们根据文献报道反复摸索,对Harris苏木素染液进行了一些调整。3.2 氧化剂添加要适时。Harris苏木素染色周期短,我们发现与氧化剂的添加时间有关。Harris苏木素原配方是在近100℃时加入氧化汞后,继续用小火加温。而实际工作中,根据观察配制过程,当苏木素染液温度在91℃左右时,添加氧化汞,即能使氧化汞完全分解于苏木素液中,又不会很快完全氧化,使染液一直处于染色力最强的三氧化苏木素状态,达到Harris苏木素染液长期最佳使用效果。3.3 媒染剂剂量减少。苏木红要对细胞具有强的亲和力,必须加入媒染剂——硫酸铝钾。从苏木精分子的结构式来看不可能结合很多的铝离子,故Harris苏木素原配方常用1g苏木素配20g硫酸铝钾为媒染液,在实际应用中,当冷却和久置后有大量沉淀生成,甚至有明矾结晶析出。以上不良现象主要是因为媒染剂用量过大。我们根据文献报道,用1g苏木素配8.8g硫酸铝钾,不但节约试剂,而且减轻了媒染剂副作用的影响。3.4 促染剂用柠檬酸代替冰醋酸。Harris苏木素原配方用冰醋酸作促染剂有效期短,柠檬酸对胞核选择性着色能力强,背景清晰。3.5 经过以上几个步骤的调整,使Harris染液存在的不良现象大为改观,取得很好的效果。
苏木素染色原理
苏木素染色原理:
苏木素溶液能够把细胞核染成半透明的浅蓝色,在酸性环境下会迅速变成红色。作为媒染剂使用的钾铝硫酸盐在碱性溶液通常结合与氢氧根形成不能溶解的氢氧化铝。在过量的酸中,氢氧化铝由于缺乏OH-离子而溶解,因此,铝苏木素溶液的酸性溶液变成红色。在铝苏木素溶液染色时,被染色的部分通常转移到一种碱性溶液中,中和酸并释放氢氧根,形成一个不溶的蓝色铝苏木精复合物。
苏木素:
苏木素是从洋苏木中提取的一种染色剂,它在被氧化后生成苏木精,同媒染剂(常用的是三价的铁或铝的盐)一起使用,能够使细胞核染色。苏木素是一种碱性染料。
苏木素和伊红在组织学上被经常使用,与碘液不同,这是一种永久染色剂。其他常用的含有苏木素的染色剂有磷钨酸苏木素染色剂,也就是磷钨酸与苏木素的混合物。
苏木素染色剂经常为组织的研究使用。明矾和三价铁盐常常被用作媒染剂,展示核和细胞质结构。这些媒染剂的原理都是形成媒染剂-染料-组织复合体,从而显示颜色。使用的盐不同颜色也不同:当用铁盐呈现深蓝色颜色沉淀,用铝盐通常显示蓝白色。下面分别介绍铝苏木素溶液和铁苏木素溶液。
历史:
在20世纪70年代,由于巴西热带雨林被大量砍伐,洋苏木大量减少,苏木素的产量随即大量减少。苏木素的价格上升惊人,因而
大大提高了组织病理学诊断的成本,引起了寻找苏木素替代品的高潮。不过,在各种苏木素的替代品的地位真正确立之前,苏木素又重返市场,又在组织病理学诊断中发挥其重要作用。到2013年为止,几种推荐使用的替代染剂有铬天青、焙花青、茜素紫(又名焦没食子酚酞、棓因)。这些染料都用三价铁离子作为媒染剂。焙花青还可以用铬矾作媒染剂。
改良Ehrlich苏木精染液在HE染色中的应用
作者单 位 : 广东省佛 山市第一人 民医院病理科 , 佛山 5 8 0 200 作者简介 : 罗小平 , , 女 副主任技师。T :0 5 ) 36 4 7 E m i l e ( 7 7 8 12 0 , — a : . lx
p n @ f y y e m ig sy . o
较
将两种透 明剂 的性 质 、 特征及病理组织透 明效果 等对 比
染液使用一段时间后 就会逐 渐失效 。本 研究在 改 良的苏木
[] 马 奎, 3 马恒辉 , 石群立 , 等.病理制 片质量控 制[ ] J.临床
与实验病理学杂志 , 0 ,7 5 :3 — 0 2 11 ()49 4 . 0
精染 液中加入 过量的苏木精和硫 酸铝钾 , 一方 面保证媒 染剂 硫酸铝钾 中的铝离子与足够 的苏木红结合形成 色淀 , 分与 充 组织结合 ; 另一方面 , 和的硫酸铝钾溶液呈 弱酸性 , 饱 可稳 定
固定 、 脱水 、 明和浸蜡 。每组各设 2缸透 明剂 , 透 作用 时间相
同, 每缸 为 3 i, 总共 为 6 i, 0r n 2缸 a 0 rn 2组组织 分别 进行 石 a 蜡包埋 , 4 m厚 切 片 , 3~ 常规 H E染 色 、 特殊 染色 、 疫 组 免 化学染色和封片 。
红与细胞核 的结合力 ; 当切片离开苏木精染液时还会带走 一
[ ] 李 志娟 , 2 王 欣.延 长 H rs a i 苏木 素 染液 使用 寿 命 的研 究 r
Ehrlich苏木素染色液
Ehrlich苏木素染色液
产品简介:
苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色简称HE染色,是病理学和组织学最常用的一种染色方法。苏木精为碱性天然染料,可使细胞核着色。细胞核内染色质的主要成分是DNA,在DNA的双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外,使DNA双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。
苏木素成熟的方法有自然氧化法、化学氧化法。自然氧化是指暴露于光和空气中,这个过程比较缓慢,约需3-6个月不等, 但生成物染色能力可维持很长时间。Ehrlich和Delafield苏木素就属于这种。Ehrlich苏木素作为一种良好的核染色剂,也可用于黏蛋白染色,如软骨的黏液多糖。骨和软骨的染色也推荐使用Ehrlich苏木素。
Ehrlich苏木素染液非常稳定,成熟后密封可保存2年。对核染色质染得很清晰细致,染色时间也稍长,约15~20min。适用于教学和科研上的制片染色,用此液制作冷冻切片染色则不理想。
染色原理:
1、细胞核染色的原理:
苏木素为碱性天然染料,可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA,在DNA 双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外,使DNA双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。
2、细胞浆染色的原理:
伊红是一种化学合成的酸性染料,在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质,为两性化合物,细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。当染液的pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7~5.0)以下时,胞浆蛋白质以碱式电离,则细胞浆带正电荷,就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子,与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合,使细胞浆着色,呈现红色。
苏木素-伊红染色试剂盒使用说明书
实验流程 冰冻切片后,各种步骤(干燥,乙醇或甲醇固定,热固定,使用带电的或有粘性的盖片)保 证组织切片在染色过程中不脱落。 1. 95%乙醇:在 HE 染色开始前,组织切片需要固定并水化。将切片置于 95%乙醇中约 2min, 开始水化并固定组织。 注意:跳过使用 95%乙醇对组织进行水化和固定,并不影响形态学上的细节。合理的解释为 第二步将为水化提供足够的水。 2. 水化:进一步对组织切片进行水化 3~5min,并冲掉前一步残留的乙醇。 注意:与第一步相似,跳过水化对于组织染色的质量非常小。 3. 苏木素:水化后,组织切片用苏木素染色 1~3min,可根据染色结果和要求调整染色时间。 苏木素是一种基本染料,可以对细胞的酸性成分进行染色,包括核酸、粘多糖、酸性糖蛋白, 将他们染成蓝-紫色。 注意:没有苏木素,伊红会将组织染成亮粉红色;显而易见的是缺乏细胞核。组织结构很难 区分,细胞内成分几乎都不存在,难以辨别。而上述问题,可以通过使用苏木素进行复染。
注意:当跳过此步骤时,不使用二甲苯透明,酒精将会保存于组织切片上,导致伊红从切片 上流出。
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13 封片:中性树胶封片,自然风干或烤干,显微镜观察。
注意事项 HE 染色是一个对经验要求非常高的染色,上述实验流程中所提供的染色时间都是参考时间, 要根据实验原理,结合具体情况而定。
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Ehrlich苏木素染色液
产品简介:
苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色简称HE染色,是病理学和组织学最常用的一种染色方法。苏木精为碱性天然染料,可使细胞核着色。细胞核内染色质的主要成分是DNA,在DNA的双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外,使DNA双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素成熟的方法有自然氧化法、化学氧化法。自然氧化是指暴露于光和空气中,这个过程比较缓慢,约需3~6个月不等,但生成物染色能力可维持很长时间。EhrlichE和Delafield苏木素就属于这种。Ehrlich苏木素作为一种良好的核染色液,也可用于黏蛋白染色如软骨的黏液多糖,骨和软骨的染色也推荐使用Ehrlich苏木素染液。
Jimei Ehrlich苏木素染液非常稳定,成熟后密封可保存2年。对核染色质染得很清晰细致,染色时间也稍长,约15~20min。适用于教学和科研上的制片染色,用此染色液对冷冻切片染色则不理想。
染色原理
1、细胞核染色的原理:
苏木素为碱性天然染料,可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA,在DNA 双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外,使DNA双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。
2、细胞浆染色的原理:
伊红是一种化学合成的酸性染料,在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质,为两性化合物,细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7~5.0)以下时,胞浆蛋白质以碱式电离,则细胞浆带正电荷,就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子,与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合,使细胞浆着色,呈现红色。
3、分化作用:
染色后,用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去,这个过程称为分化作用,所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用1%盐酸乙醇作为分化液,因酸能破坏苏木素的醌型结构,使组织与色素分离而退色。大多数组织经苏木素染色后,必须用1%盐酸乙醇分化,使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去,再进行伊红染色,才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。
4、返蓝作用:
分化之后,苏木素在酸性条件下处于红色离子状态,呈红色;在碱性条件下处于蓝色离子状态,呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色,立即用水除去组织切片上的酸而中止分化,再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色,这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来不浸洗也可使细胞核返蓝,但所需时间较长。
1、酸性乙醇分化液
2、蓝化液,如稀氨水、碳酸锂溶液等
3、系列乙醇
4、伊红染色液
5、4%多聚甲醛
操作步骤(仅供参考)
(一)石蜡切片染色
1、切片脱蜡至水
①二甲苯作用2次,每次5~10min。
②(可选)无水乙醇作用2次,每次3~5 min。
③95%的乙醇3~5 min。
④90%的乙醇3~5 min。
⑤80%的乙醇3~5 min。
⑥自来水或蒸馏水冲洗1~3min。
2、染色
①Ehrlich苏木素染色液染色15~20 min。
②自来水或蒸馏水冲洗5~10s。
③(可选)盐酸乙醇分化2~5s。
④自来水冲洗20~30 s。
⑤(可选)蓝化液返蓝20~40 s。
⑥自来水冲洗30~60 s。
⑦伊红染色液染色3~5 min。
⑧自来水冲洗1~5 s。
3、脱水、透明、封固
①80%乙醇10~20 s。
②90%乙醇10~20 s。
③95%乙醇作用2次,每次1~2min。
④无水乙醇作用2次,每次2~3 min。
⑤二甲苯透明3次,每次2~3 min。
⑥中性树脂封片。
染色结果:细胞核呈蓝色;细胞质、肌纤维、胶原纤维等呈深浅不一的红色;
角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。
(二)细胞染色
1、4%多聚甲醛固定10~20min。
2、自来水冲洗2次,每次2min。
3、蒸馏水冲洗2次,每次2min。
4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤,作用时间应相应缩
短。
染色结果:细胞核呈蓝色;细胞质、纤维呈红色。
注意事项:
1、切片脱蜡应尽量干净。系列乙醇应经常更换新液。
2、盐酸乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织类别以及新旧而定,另外分化后自来水
冲洗时间应该足够,以便彻底清洗酸。
3、蓝化液常使用0.2~1%氨水或Scott促蓝液或0.1~1%碳酸埋溶液。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:24个月有效。
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