咪达唑仑对人肝癌细胞增殖能力的影响
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ＨＣＣ ｃｅｌｌｓ． Ｍｉｄａｚｏｌａｍ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｅｒｅ ｇｉｖｅｎ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ２０，４０，６０，８０ ａｎｄ １００ ￣ｍｏｌ／Ｌ，ａｎｄ
ｆ０ｒ ２４ ｈ．４８ ｈ ａｎｄ ７２ ｈ．Ｔｈｅ ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｏｆ ＨＣＣ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｆ ｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ｗ ｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｗａｓ ａ— ｄｏｐｔｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｍｉｄａｚｏｌａｍ ｏｎ ＥＲＫ ｐａｔｈｗａｙｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｉｅｓ ｏｆ ｈｕｈ７ ｃｅｌｌｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ Ｍｉ—
广东医学 ２０１８年 ｌＯ月 第 ３９卷第 ｌ９期 Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｃｔ．２０１８，Ｖｏ１．３９，Ｎｏ．１９
· ２８６１ ·
基 础 研 究
咪 达 唑仑 对 人 肝 癌 细 胞 增 殖 能 力 的影 响 爿：
Hale Waihona Puke Baidu
潘 家浩 ，李强 ，陈 东秦 ，邢 蔚 ，曾维安
中山大 学肿瘤 防治中心 、华南肿瘤 学国家重点实验室 、肿瘤 医学协 同创新 中心 手术麻 醉科（广东广 州 ５１００６０）
【摘要】 目的 探讨静脉麻醉药咪达唑仑对人肝癌细胞增殖能力的影响。方法 首先通过 ＣＣＫ一８增 殖 实验观 察递 增浓 度 ２０、４０、６Ｏ、８０和 １００ ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ的咪 达唑 仑分 别各 自作 用 ２４、４８和 ７２ ｈ后 对人肝 癌 细胞 的 影 响 ；通过 流 式细胞仪 检测 浓度 为 ５０ Ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ（ＭｉｄａＳ０组 ）和 １００ ｉ．ｚｍｏｌ／Ｌ（Ｍｉｄａｌ００组 ）的咪 达唑 仑 以及 ＰＢＳ对 照 组 （Ｃｏｎｔｒｏｌ组 ）作 用 于人肝 癌 细胞发 生的 凋亡 和细胞 周 期 的 变化 ；通 过 免疫 印迹 方 法观 察 咪 达唑 仑 对 ＥＲＫ 通路 的影响 。结果 咪 达唑 仑浓度 为 ２０￣ｍｏＬ／Ｌ递增 至 １００ ｉｘｍｏｌ／Ｌ作 用 ２４ ｈ时 ，人肝 癌 细胞株 Ｈｕｈ７细胞增 殖 生存 率 由（８８．５５±５．６４）％ 下降 至（４７．７１±４．４５）％ ，差异 有统 计 学 意 义（Ｐ＜０．０５），且 浓 度 为 １００ ｍ（１Ｌ／Ｌ 的咪达 唑 仑 作 用 ２４、４８和 ７２ ｈ的 增 殖 生存 率 分 别 为 （４７．７１±４．４５）％ 、（２５．６９±６．５２）％ 和 （１８．１０± ２．９５）％ ，差异有 统计 学 意义（Ｐ＜０．０５）。流 式细胞 实验 显 示 ＭｉｄａＳ０和 Ｍｉｄａｌ００组 的早期 凋亡 和晚 期 凋亡 比 率 分别 为 （７．０７±０．４１）％ 和（８．３６±０．４８）％ 以及 （７．５８±０．４７）％ 和 （１３．４４±０．６７）％ 。 细胞 周期 示 Ｃｏｎｔｒｏｌ 组 、ＭｉｄａＬ５０组 、Ｍｉｄａｌ００组 Ｓ期 比例 分别 为 （２２．１９±１．０７）％ 、（２７．５７±２．１５）％ 和 （３８．１１±１．２５）％ 。免 疫 印 迹 结果 显 示咪达唑 仑作 用 于人肝癌 细胞 会使 Ｐ—ＥＲＫ下 调 。结论 咪 达唑 仑在 体 外 细胞 实验 中能抑 制 人 肝 癌 细胞 株 Ｈｕｈ７细胞 的增 殖并呈 浓度相 关和 时 间相 关 ，其 中可能 与咪 达 唑仑促 进 其 凋亡 和 细胞 周期 ｓ期 停 滞 相 关 ，相 关 机 制 可 能是 通 过 ＥＲＫ 通 路 实 现 的 。
ｄａｚｏｌａｍ ｗｉｔｈ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ２０ ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ ａｎｄ １００￣ｍｏｌ／Ｌ ｗｅｒｅ（８８．５５±５ ６４）％ ａｎｄ（４７．７１±４．４５）％ ｉｎ ａ ｃｏｎｃｅｎ— ｔｒａｔｉｏｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒ，ａｎｄ ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ（４７．７１±４．４５）％ ，（２５．６９±６．５２）％ ａｎｄ（１８．１０±２．９５）％ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ Ｍｉｄａｚｏｌａｍ ｏｆ １００ ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ ｆｏｒ ２４ ｈ，４８ ｈ ａｎｄ ７２ ｈ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ （Ｐ ＜０．０５）．Ｍｉｄａｚｏｌａｍ ｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ａｎｄ ｓｕｐ—
【关键词】 咪达唑仑；肝细胞癌 ；增殖；凋亡
Ｍｉｄａｚｏｌａｍ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ＨＣＣ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｖｉａ ＥＲＫ ｐａｔｈｗａｙ． Ⅳ Ｊｉａ—ｈａｏ，ＬＩ Ｑｉａｎｇ，ＣＨＥＮ Ｄｏｎｇ —ｔａｉ， ＸＩＮＧ Ｗｅｉ，ＺＥＮＧ Ｗｅｉ—ａｎ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＡｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ，Ｓｕｎ ｒａｔ—Ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓｔａｔｅ ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏ ｆ Ｏｎｅｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ，Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１００６０，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ
ｐｒｅｓｓｅｄ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｕｈ７ ｃｅｌｌｓ． Ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ ｏｆ ｅａｒｌｙ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｇｒｏｕｐ Ｍ ｉｄａＳ０ ａｎｄ ＭｉｄａｌＯ０ ｗｅｒｅ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＺＥＮＧ Ｗｅｉ—ａｎ．Ｅ —ｍａｉｌ：ｚｅｎｇｗａ＠ ｍａｉｌ．ｓｙｓｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｉｄａｚｏｌａｍ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉ— ｎｏｍａ（ＨＣＣ）ｃｅｉｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＣＣＫ８ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ａｎｔｉ—ｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｉｄａｚｏｌａｍ ｏｎ
ｆ０ｒ ２４ ｈ．４８ ｈ ａｎｄ ７２ ｈ．Ｔｈｅ ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｏｆ ＨＣＣ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｆ ｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ｗ ｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｗａｓ ａ— ｄｏｐｔｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｍｉｄａｚｏｌａｍ ｏｎ ＥＲＫ ｐａｔｈｗａｙｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｉｅｓ ｏｆ ｈｕｈ７ ｃｅｌｌｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ Ｍｉ—
广东医学 ２０１８年 ｌＯ月 第 ３９卷第 ｌ９期 Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｃｔ．２０１８，Ｖｏ１．３９，Ｎｏ．１９
· ２８６１ ·
基 础 研 究
咪 达 唑仑 对 人 肝 癌 细 胞 增 殖 能 力 的影 响 爿：
Hale Waihona Puke Baidu
潘 家浩 ，李强 ，陈 东秦 ，邢 蔚 ，曾维安
中山大 学肿瘤 防治中心 、华南肿瘤 学国家重点实验室 、肿瘤 医学协 同创新 中心 手术麻 醉科（广东广 州 ５１００６０）
【摘要】 目的 探讨静脉麻醉药咪达唑仑对人肝癌细胞增殖能力的影响。方法 首先通过 ＣＣＫ一８增 殖 实验观 察递 增浓 度 ２０、４０、６Ｏ、８０和 １００ ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ的咪 达唑 仑分 别各 自作 用 ２４、４８和 ７２ ｈ后 对人肝 癌 细胞 的 影 响 ；通过 流 式细胞仪 检测 浓度 为 ５０ Ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ（ＭｉｄａＳ０组 ）和 １００ ｉ．ｚｍｏｌ／Ｌ（Ｍｉｄａｌ００组 ）的咪 达唑 仑 以及 ＰＢＳ对 照 组 （Ｃｏｎｔｒｏｌ组 ）作 用 于人肝 癌 细胞发 生的 凋亡 和细胞 周 期 的 变化 ；通 过 免疫 印迹 方 法观 察 咪 达唑 仑 对 ＥＲＫ 通路 的影响 。结果 咪 达唑 仑浓度 为 ２０￣ｍｏＬ／Ｌ递增 至 １００ ｉｘｍｏｌ／Ｌ作 用 ２４ ｈ时 ，人肝 癌 细胞株 Ｈｕｈ７细胞增 殖 生存 率 由（８８．５５±５．６４）％ 下降 至（４７．７１±４．４５）％ ，差异 有统 计 学 意 义（Ｐ＜０．０５），且 浓 度 为 １００ ｍ（１Ｌ／Ｌ 的咪达 唑 仑 作 用 ２４、４８和 ７２ ｈ的 增 殖 生存 率 分 别 为 （４７．７１±４．４５）％ 、（２５．６９±６．５２）％ 和 （１８．１０± ２．９５）％ ，差异有 统计 学 意义（Ｐ＜０．０５）。流 式细胞 实验 显 示 ＭｉｄａＳ０和 Ｍｉｄａｌ００组 的早期 凋亡 和晚 期 凋亡 比 率 分别 为 （７．０７±０．４１）％ 和（８．３６±０．４８）％ 以及 （７．５８±０．４７）％ 和 （１３．４４±０．６７）％ 。 细胞 周期 示 Ｃｏｎｔｒｏｌ 组 、ＭｉｄａＬ５０组 、Ｍｉｄａｌ００组 Ｓ期 比例 分别 为 （２２．１９±１．０７）％ 、（２７．５７±２．１５）％ 和 （３８．１１±１．２５）％ 。免 疫 印 迹 结果 显 示咪达唑 仑作 用 于人肝癌 细胞 会使 Ｐ—ＥＲＫ下 调 。结论 咪 达唑 仑在 体 外 细胞 实验 中能抑 制 人 肝 癌 细胞 株 Ｈｕｈ７细胞 的增 殖并呈 浓度相 关和 时 间相 关 ，其 中可能 与咪 达 唑仑促 进 其 凋亡 和 细胞 周期 ｓ期 停 滞 相 关 ，相 关 机 制 可 能是 通 过 ＥＲＫ 通 路 实 现 的 。
ｄａｚｏｌａｍ ｗｉｔｈ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ２０ ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ ａｎｄ １００￣ｍｏｌ／Ｌ ｗｅｒｅ（８８．５５±５ ６４）％ ａｎｄ（４７．７１±４．４５）％ ｉｎ ａ ｃｏｎｃｅｎ— ｔｒａｔｉｏｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒ，ａｎｄ ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ（４７．７１±４．４５）％ ，（２５．６９±６．５２）％ ａｎｄ（１８．１０±２．９５）％ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ Ｍｉｄａｚｏｌａｍ ｏｆ １００ ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ ｆｏｒ ２４ ｈ，４８ ｈ ａｎｄ ７２ ｈ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ （Ｐ ＜０．０５）．Ｍｉｄａｚｏｌａｍ ｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ａｎｄ ｓｕｐ—
【关键词】 咪达唑仑；肝细胞癌 ；增殖；凋亡
Ｍｉｄａｚｏｌａｍ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ＨＣＣ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｖｉａ ＥＲＫ ｐａｔｈｗａｙ． Ⅳ Ｊｉａ—ｈａｏ，ＬＩ Ｑｉａｎｇ，ＣＨＥＮ Ｄｏｎｇ —ｔａｉ， ＸＩＮＧ Ｗｅｉ，ＺＥＮＧ Ｗｅｉ—ａｎ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＡｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ，Ｓｕｎ ｒａｔ—Ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓｔａｔｅ ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏ ｆ Ｏｎｅｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ，Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１００６０，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ
ｐｒｅｓｓｅｄ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｕｈ７ ｃｅｌｌｓ． Ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ ｏｆ ｅａｒｌｙ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｇｒｏｕｐ Ｍ ｉｄａＳ０ ａｎｄ ＭｉｄａｌＯ０ ｗｅｒｅ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＺＥＮＧ Ｗｅｉ—ａｎ．Ｅ —ｍａｉｌ：ｚｅｎｇｗａ＠ ｍａｉｌ．ｓｙｓｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｉｄａｚｏｌａｍ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉ— ｎｏｍａ（ＨＣＣ）ｃｅｉｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＣＣＫ８ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ａｎｔｉ—ｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｉｄａｚｏｌａｍ ｏｎ