白细胞介素_6_572基因多态性与慢性牙周炎和2型糖尿病的相关性_肖立民
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* “十一五” 国家科技攻关计划项目（ 编号： 2007BAI18B02 ） △通信作者。E － mail： zhangjincai@ live． cn
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广东医学 2012 年 6 月 第 33 卷第 12 期
Guangdong Medical Journal
Jun． 2012 ，Vol． 33 ，No． 12
2 P = 0. 030 ） ， 差异有统计学意义（ = 8. 95 ， 进一步两 CP + T2DM 组间的多重比较发现， 组与健康对照组之 2 P = 0. 006 ） ， 间差异有统计学意义（ = 7. 657 ， 其他两 2
。 简言
之， 中重度牙周炎的诊断标准是临床附着丧失（ CAL ） 在 30% 以上（ 含 30% ） 的位点大于或等于 3 mm。 健康 对照和无慢性牙周炎的 2 型糖尿病患者则要求没有牙 龈炎 、 牙周炎的临床表现， 包括没有临床附着丧失和探 诊出血（ BOP） 位点， 以及探诊牙周袋深度（ PD ） 大于 3 mm 的位点 。 1． 3 方法 每位受试者取颊黏膜脱离细胞棉拭子， 在 10% 的受试者中取了第 2 支棉拭子， 单独编号， 以用来 实验质量检测； 最后， 由 1 名调查人员对每位受试者作 牙周检查， 另 1 名调查人员作记录， 检查 6 个指数牙以 及每个指数牙 6 个位点的临床参数来评估受试者牙周 CAL 及 BOP， 内容包括 PD、 使用 Williams 探针。 状况， CP 组 159 例， 40 ～ 85 岁； T2DM 组 男 83 例， 女 76 例， 88 例， 40 ～ 85 岁； CP + T2DM 组 110 男 24 例， 女 64 例， 40 ～ 87 岁； 健康对照组 135 例， 例， 男 46 例， 女 64 例， 42 93 40 ～ 男 例， 女 例， 82 岁。 本研究被南方医科大学伦理委员会所批准， 所有 受试者签署知情同意书， 知情同意书符合 Helsinki 宣 言要求 。 1． 4 基因组 DNA 抽提和基因型测定 采用 CHELEX － 100 法从棉拭子中抽提基因组 DNA， 分光光度计检测 DNA 浓度 。 采用多聚酶链反应 － 限制性片段长度多 态性（ PCR － RFLP） 法测定 IL － 6 启动子区 － 572 单核 苷酸多态性位点的基因型 。 引物按参考文献设计
［6 ］
组之间差异无统计学意义（ P ＞ 0. 05 ） 。4 组之间的等 2 P= 位基因频率比较差异有统计学意义 （ = 10. 78 ， 0. 013 ） 。进一步作两组间的多重比较发现， CP + T2DM
2 组与健康对照组之间差异有统计学意义（ = 9. 152 ，
，
P = 0. 002 ） ， 其他两组之间差异无统计学意义 （ P ＞ 0. 05 ） 。可见 IL － 6 － 572 位点的 CC 基因型和 C 等位 基因可能是慢性牙周炎伴 2 型糖尿病的一个保护因 素。见表 1 。 当我们把 50 个用于质量检测的样本的每个基因 型与实验结果相对照时， 发现完全一致； 而且， 我们所 有送去测序的结果都与 PCR － RFLP 法的结果一致 。
［3 ］
。
。2 型糖
尿病是一种复杂性疾病， 发病机制是胰岛素抵抗， 而且 伴有机体不能产生足够的胰岛素去平衡这种抵抗 。 已 有证据显示， 糖尿病患者患牙周病的风险明显高于普 通人 。其中的机制还不清楚， 可能的途径有： 机体细胞 的反应， 高血糖以及微生物的作用
［2 ］
广东省口腔医院及南方医科大学珠江医院和 腔医院 、 广州医学院附属第二医院在 2007 年 8 月至 2008 年 9 月期间的门诊患者或住院患者， 以及在 2008 年 8 月由 南方医科大学附属口腔医院 、 广东省口腔医院主持的 一次口腔健康调查中的志愿者 。每位受试者均符合以 下条件： 40 岁 及 以 上 年 龄 、 至 少 有 14 颗 可 评 估 的 牙 （ 其中有 4 颗磨牙） 、 中国汉族和没有亲缘关系的个体 。 受试者的排除标准是： （ 1 ） 除了 2 型糖尿病外已知的其 他系 统 性 疾 病 （ 如 冠 心 病 、 肝 炎、 肾 炎、 血液性疾病 等） ； （ 2 ） 3 个月内服用过抗生素； （ 3 ） 1 年内接受过牙 周治疗； （ 4 ） 怀孕的女性； （ 5 ） 哺乳期的女性 。 1． 2 所有受试者被分成 4 组 单纯慢性牙周炎（ CP ）
fluorouracil － based adjuvant therapy for stage Ⅱ and Ⅲ colon cancer： who benefits and by how much？ ［J］． J Clin Oncol， 2004 ， 22 （ 10 ） ： 1797 － 1806． ［ 15］ KRAVARUSIC D， ELAD F，ELENA D，et al． Colorectal carcinoma in childhood： a retrospective multicenter study［J］． J Pediatr Gastroenterol Nutr， 2007 ， 44 （ 2 ） ： 209 － 211． ［ 16］ HOERNER M T． Carcinoma of colon and rectum in persons under twenty years of age［ J］ ． Am J Surg， 1958 ， 96 （ 1 ） ： 47 － 53． （ 收稿日期： 2012 － 02 － 23 编辑： 庄晓文）
白细胞介素 － 6 － 572 基因多态性与慢性牙周炎和 2 型糖尿病的相关性 *
肖立民，谢成婕，罗维，陈珊丽，张雄，章锦才 △
南方医科大学附属口腔医院 、 广东省口腔医院牙周病科 （ 广州 510280 ） 【摘要】 目的 的相关性。方法 2 型糖尿病和牙周炎三者之间 在中国汉族人群中研究白细胞介素 － 6 （ IL － 6 ） 基因多态性、
通过病例对照模式， 所有受试者被分成 4 组： 单纯慢性牙周炎组（ 159 例） 、 单纯 2 型糖尿病组
（ 88 例） 、 慢性牙周炎伴 2 型糖尿病组（ 110 例） 以及健康对照组（ 135 例） 。 采用多聚酶链反应 － 限制性片段长度
2 多态性（ PCR － RFLP） 法测定 IL － 6 － 572 单核苷酸多态性位点的基因型， 并作质量检测。 用 检验检验等位基
。 调控细胞因子
的基因变异能解释复杂疾病进程中一些个体间的差 异。因此， 近年一些有关细胞因子的基因多态性研究 已聚焦在患有牙周病和糖尿病的人群 。 白细胞介素 － 6 （ IL － 6 ） 是一种多功能细胞因子， 它可调节免疫应答 、 调节造血系统、 诱导急性期蛋白合成 、 参与骨代谢等， 尤其在宿主免疫防御反应中有着重要的作用 。 IL － 6
［1 ］
启动子区 3 个常见的单核苷酸多态性（ SNPs） ， 即 － 174 （ rs 1800795 ） ， － 572 （ rs 1800796 ） 和 － 597 （ rs 1800797 ） ， 可能导致个体间 IL － 6 转录 、 表达的差异 。 有证据显示， 这些 SNPs 与牙周病或糖尿病相关 。 但因 为 IL － 6 － 174 和 － 597 位点在中国人群中无多态性， 因此， 我们初步假定 IL － 6 － 572 单核苷酸多态性可能 在牙周炎伴发 2 型糖尿病的进程中起某些作用 1 1． 1 资料与方法 受试者 所有受试者来自南方医科大学附属口
组、 单纯 2 型糖尿病（ T2DM ） 组 、 慢性牙周炎伴 2 型糖 尿病（ CP + T2DM ） 组以及健康对照组 。 所有 2 型糖尿 病患者由糖尿病专科医生诊断， 诊断标准与 1999 年世 界卫生组织推荐的标准一致 。这些 2 型糖尿病患者都 在医院里接受糖尿病治疗， 他们被随后的牙周检查分 成 T2DM 组或 CP + T2DM 组。慢性牙周炎患者的诊断 采用 1999 年牙周病分类国际研讨会及第 5 届欧洲牙 周病学研讨会决议报告所推荐的临床标准
牙周炎是一种常见的炎症性疾病， 它由口腔细菌 引起， 导致不可修复的牙周附着丧失 、 牙槽骨破坏， 最 终结局是失牙 。虽然细菌是牙周炎发病必不可少的因 素， 但细菌的种类和数量的不同不足以解释疾病严重 程度的差异 。最近， 越来越多证据表明某些危险因素 可以不直接导致疾病发病， 而是修饰疾病的进程和严 重程度。糖尿病和基因因素就是这样的危险因素， 从 而使某些个体患牙周病时比其他人更严重
广东医学 2012 年 6 月 第 33 卷第 12 期
Guangdong Medical Journal
Jun． 2012 ，Vol． 33 ，No． 12
Βιβλιοθήκη Baidu
· 1749·
review of the literature［ J］． J Pediatr Surg，1976 ， 11 （ 6 ） ： 967 － 971． ［ 12］ GOLDTHRON J F，POWARS D，HAYS D M． Adenocarcinoma of the colon and rectum in the adolescent［J］． Surgery，1983 ，93 （ 3 ） ： 409 － 414． ［ 13］ SIQUEIRA M A，HAYASHI T，YOSHINAGA K，et al． Colon cancer in a 14 － year － old female with Turner syndrome： report of a case［J］ ． Dis Colon Rectum， 2003 ， 46 （ 11 ） ： 1560 － 1562． ［ 14］ GILL S， LOPRINZI C L， SARGENT D J， et al． Pooled analysis of
因频率、 基因型分布的差异。结果
在 CC vs GC + GG 模式的多重比较中发现， 慢性牙周炎伴 2 型糖尿病组与健 IL － 6 － 572 位点的 CC 基因型和 C 等位基因可能是慢性牙周炎
康对照组之间差异有统计学意义（ P = 0． 006 ） 。等位基因频率多重比较， 在慢性牙周炎伴 2 型糖尿病组与健康对 照组之间差异有统计学意义（ P = 0． 002 ） 。结论 伴 2 型糖尿病的一个保护因素 。 【关键词】 慢性牙周炎； 2 型糖尿病； 多态性； 白细胞介素 － 6
［4 － 5 ］
Ipswich， MA， USA） 0. 25 μL， 10 × NEB 缓 性内切酶（ NEB， 用无菌去离子水补足总体积至 10 μL， 混匀， 冲液 1 μL， 37℃ 水浴过夜。酶切产物经聚丙烯酰胺凝胶（ PAGE ） 垂 直电泳， 硝酸银染色后读取结果
［7 ］
。
为了验证 PCR － RFLP 法 的 正 确 性， 采用两种方 从不同角度加以验证 。 第一， 在大约 10% 的 受试 法， 2 者中， 取第 支棉拭子， 这些棉拭子被单独编号， 用同 样的方法来测定 IL － 6 － 572 单核苷酸多态性位点的 基因型， 以评估 PCR － RFLP 法的结果是否可重复 。 第 二， 我们在第 1 支棉拭子的 PCR 产物中， 每个位点每 去直接测序， 以 个基因型随机抽取 2 个或以上的样本， 验证 PCR － RFLP 法是否正确 。 1． 5 统计学方法 采用 SPSS 13. 0 统计软件， 用 检 验检验 IL － 6 － 572 基 因 型 的 哈 － 温 平 衡 （ Hardy － Weinberg equilibrium） ， 检验等位基因频率 、 基因型分布 的差异性， 其中等位基因频率和基因型分布的两组间 2 的多重比较也采用 检验 。 P ＜ 0. 05 被认为差异有 统计学意义， 为控制假阳性结果， 多重比较的结果则使 用一个经 Bonferroni 校正的 P 值来评估， 即 P ＜ 0. 008 （ 0. 05 /6 ） 被认为差异有统计学意义 。 2 结果 IL － 6 － 572 的基因型符合哈 － 温平衡 。4 组之间 在 CC vs GC + GG 模式中 4 组之间 的基因型分布比较，
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广东医学 2012 年 6 月 第 33 卷第 12 期
Guangdong Medical Journal
Jun． 2012 ，Vol． 33 ，No． 12
2 P = 0. 030 ） ， 差异有统计学意义（ = 8. 95 ， 进一步两 CP + T2DM 组间的多重比较发现， 组与健康对照组之 2 P = 0. 006 ） ， 间差异有统计学意义（ = 7. 657 ， 其他两 2
。 简言
之， 中重度牙周炎的诊断标准是临床附着丧失（ CAL ） 在 30% 以上（ 含 30% ） 的位点大于或等于 3 mm。 健康 对照和无慢性牙周炎的 2 型糖尿病患者则要求没有牙 龈炎 、 牙周炎的临床表现， 包括没有临床附着丧失和探 诊出血（ BOP） 位点， 以及探诊牙周袋深度（ PD ） 大于 3 mm 的位点 。 1． 3 方法 每位受试者取颊黏膜脱离细胞棉拭子， 在 10% 的受试者中取了第 2 支棉拭子， 单独编号， 以用来 实验质量检测； 最后， 由 1 名调查人员对每位受试者作 牙周检查， 另 1 名调查人员作记录， 检查 6 个指数牙以 及每个指数牙 6 个位点的临床参数来评估受试者牙周 CAL 及 BOP， 内容包括 PD、 使用 Williams 探针。 状况， CP 组 159 例， 40 ～ 85 岁； T2DM 组 男 83 例， 女 76 例， 88 例， 40 ～ 85 岁； CP + T2DM 组 110 男 24 例， 女 64 例， 40 ～ 87 岁； 健康对照组 135 例， 例， 男 46 例， 女 64 例， 42 93 40 ～ 男 例， 女 例， 82 岁。 本研究被南方医科大学伦理委员会所批准， 所有 受试者签署知情同意书， 知情同意书符合 Helsinki 宣 言要求 。 1． 4 基因组 DNA 抽提和基因型测定 采用 CHELEX － 100 法从棉拭子中抽提基因组 DNA， 分光光度计检测 DNA 浓度 。 采用多聚酶链反应 － 限制性片段长度多 态性（ PCR － RFLP） 法测定 IL － 6 启动子区 － 572 单核 苷酸多态性位点的基因型 。 引物按参考文献设计
［6 ］
组之间差异无统计学意义（ P ＞ 0. 05 ） 。4 组之间的等 2 P= 位基因频率比较差异有统计学意义 （ = 10. 78 ， 0. 013 ） 。进一步作两组间的多重比较发现， CP + T2DM
2 组与健康对照组之间差异有统计学意义（ = 9. 152 ，
，
P = 0. 002 ） ， 其他两组之间差异无统计学意义 （ P ＞ 0. 05 ） 。可见 IL － 6 － 572 位点的 CC 基因型和 C 等位 基因可能是慢性牙周炎伴 2 型糖尿病的一个保护因 素。见表 1 。 当我们把 50 个用于质量检测的样本的每个基因 型与实验结果相对照时， 发现完全一致； 而且， 我们所 有送去测序的结果都与 PCR － RFLP 法的结果一致 。
［3 ］
。
。2 型糖
尿病是一种复杂性疾病， 发病机制是胰岛素抵抗， 而且 伴有机体不能产生足够的胰岛素去平衡这种抵抗 。 已 有证据显示， 糖尿病患者患牙周病的风险明显高于普 通人 。其中的机制还不清楚， 可能的途径有： 机体细胞 的反应， 高血糖以及微生物的作用
［2 ］
广东省口腔医院及南方医科大学珠江医院和 腔医院 、 广州医学院附属第二医院在 2007 年 8 月至 2008 年 9 月期间的门诊患者或住院患者， 以及在 2008 年 8 月由 南方医科大学附属口腔医院 、 广东省口腔医院主持的 一次口腔健康调查中的志愿者 。每位受试者均符合以 下条件： 40 岁 及 以 上 年 龄 、 至 少 有 14 颗 可 评 估 的 牙 （ 其中有 4 颗磨牙） 、 中国汉族和没有亲缘关系的个体 。 受试者的排除标准是： （ 1 ） 除了 2 型糖尿病外已知的其 他系 统 性 疾 病 （ 如 冠 心 病 、 肝 炎、 肾 炎、 血液性疾病 等） ； （ 2 ） 3 个月内服用过抗生素； （ 3 ） 1 年内接受过牙 周治疗； （ 4 ） 怀孕的女性； （ 5 ） 哺乳期的女性 。 1． 2 所有受试者被分成 4 组 单纯慢性牙周炎（ CP ）
fluorouracil － based adjuvant therapy for stage Ⅱ and Ⅲ colon cancer： who benefits and by how much？ ［J］． J Clin Oncol， 2004 ， 22 （ 10 ） ： 1797 － 1806． ［ 15］ KRAVARUSIC D， ELAD F，ELENA D，et al． Colorectal carcinoma in childhood： a retrospective multicenter study［J］． J Pediatr Gastroenterol Nutr， 2007 ， 44 （ 2 ） ： 209 － 211． ［ 16］ HOERNER M T． Carcinoma of colon and rectum in persons under twenty years of age［ J］ ． Am J Surg， 1958 ， 96 （ 1 ） ： 47 － 53． （ 收稿日期： 2012 － 02 － 23 编辑： 庄晓文）
白细胞介素 － 6 － 572 基因多态性与慢性牙周炎和 2 型糖尿病的相关性 *
肖立民，谢成婕，罗维，陈珊丽，张雄，章锦才 △
南方医科大学附属口腔医院 、 广东省口腔医院牙周病科 （ 广州 510280 ） 【摘要】 目的 的相关性。方法 2 型糖尿病和牙周炎三者之间 在中国汉族人群中研究白细胞介素 － 6 （ IL － 6 ） 基因多态性、
通过病例对照模式， 所有受试者被分成 4 组： 单纯慢性牙周炎组（ 159 例） 、 单纯 2 型糖尿病组
（ 88 例） 、 慢性牙周炎伴 2 型糖尿病组（ 110 例） 以及健康对照组（ 135 例） 。 采用多聚酶链反应 － 限制性片段长度
2 多态性（ PCR － RFLP） 法测定 IL － 6 － 572 单核苷酸多态性位点的基因型， 并作质量检测。 用 检验检验等位基
。 调控细胞因子
的基因变异能解释复杂疾病进程中一些个体间的差 异。因此， 近年一些有关细胞因子的基因多态性研究 已聚焦在患有牙周病和糖尿病的人群 。 白细胞介素 － 6 （ IL － 6 ） 是一种多功能细胞因子， 它可调节免疫应答 、 调节造血系统、 诱导急性期蛋白合成 、 参与骨代谢等， 尤其在宿主免疫防御反应中有着重要的作用 。 IL － 6
［1 ］
启动子区 3 个常见的单核苷酸多态性（ SNPs） ， 即 － 174 （ rs 1800795 ） ， － 572 （ rs 1800796 ） 和 － 597 （ rs 1800797 ） ， 可能导致个体间 IL － 6 转录 、 表达的差异 。 有证据显示， 这些 SNPs 与牙周病或糖尿病相关 。 但因 为 IL － 6 － 174 和 － 597 位点在中国人群中无多态性， 因此， 我们初步假定 IL － 6 － 572 单核苷酸多态性可能 在牙周炎伴发 2 型糖尿病的进程中起某些作用 1 1． 1 资料与方法 受试者 所有受试者来自南方医科大学附属口
组、 单纯 2 型糖尿病（ T2DM ） 组 、 慢性牙周炎伴 2 型糖 尿病（ CP + T2DM ） 组以及健康对照组 。 所有 2 型糖尿 病患者由糖尿病专科医生诊断， 诊断标准与 1999 年世 界卫生组织推荐的标准一致 。这些 2 型糖尿病患者都 在医院里接受糖尿病治疗， 他们被随后的牙周检查分 成 T2DM 组或 CP + T2DM 组。慢性牙周炎患者的诊断 采用 1999 年牙周病分类国际研讨会及第 5 届欧洲牙 周病学研讨会决议报告所推荐的临床标准
牙周炎是一种常见的炎症性疾病， 它由口腔细菌 引起， 导致不可修复的牙周附着丧失 、 牙槽骨破坏， 最 终结局是失牙 。虽然细菌是牙周炎发病必不可少的因 素， 但细菌的种类和数量的不同不足以解释疾病严重 程度的差异 。最近， 越来越多证据表明某些危险因素 可以不直接导致疾病发病， 而是修饰疾病的进程和严 重程度。糖尿病和基因因素就是这样的危险因素， 从 而使某些个体患牙周病时比其他人更严重
广东医学 2012 年 6 月 第 33 卷第 12 期
Guangdong Medical Journal
Jun． 2012 ，Vol． 33 ，No． 12
Βιβλιοθήκη Baidu
· 1749·
review of the literature［ J］． J Pediatr Surg，1976 ， 11 （ 6 ） ： 967 － 971． ［ 12］ GOLDTHRON J F，POWARS D，HAYS D M． Adenocarcinoma of the colon and rectum in the adolescent［J］． Surgery，1983 ，93 （ 3 ） ： 409 － 414． ［ 13］ SIQUEIRA M A，HAYASHI T，YOSHINAGA K，et al． Colon cancer in a 14 － year － old female with Turner syndrome： report of a case［J］ ． Dis Colon Rectum， 2003 ， 46 （ 11 ） ： 1560 － 1562． ［ 14］ GILL S， LOPRINZI C L， SARGENT D J， et al． Pooled analysis of
因频率、 基因型分布的差异。结果
在 CC vs GC + GG 模式的多重比较中发现， 慢性牙周炎伴 2 型糖尿病组与健 IL － 6 － 572 位点的 CC 基因型和 C 等位基因可能是慢性牙周炎
康对照组之间差异有统计学意义（ P = 0． 006 ） 。等位基因频率多重比较， 在慢性牙周炎伴 2 型糖尿病组与健康对 照组之间差异有统计学意义（ P = 0． 002 ） 。结论 伴 2 型糖尿病的一个保护因素 。 【关键词】 慢性牙周炎； 2 型糖尿病； 多态性； 白细胞介素 － 6
［4 － 5 ］
Ipswich， MA， USA） 0. 25 μL， 10 × NEB 缓 性内切酶（ NEB， 用无菌去离子水补足总体积至 10 μL， 混匀， 冲液 1 μL， 37℃ 水浴过夜。酶切产物经聚丙烯酰胺凝胶（ PAGE ） 垂 直电泳， 硝酸银染色后读取结果
［7 ］
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为了验证 PCR － RFLP 法 的 正 确 性， 采用两种方 从不同角度加以验证 。 第一， 在大约 10% 的 受试 法， 2 者中， 取第 支棉拭子， 这些棉拭子被单独编号， 用同 样的方法来测定 IL － 6 － 572 单核苷酸多态性位点的 基因型， 以评估 PCR － RFLP 法的结果是否可重复 。 第 二， 我们在第 1 支棉拭子的 PCR 产物中， 每个位点每 去直接测序， 以 个基因型随机抽取 2 个或以上的样本， 验证 PCR － RFLP 法是否正确 。 1． 5 统计学方法 采用 SPSS 13. 0 统计软件， 用 检 验检验 IL － 6 － 572 基 因 型 的 哈 － 温 平 衡 （ Hardy － Weinberg equilibrium） ， 检验等位基因频率 、 基因型分布 的差异性， 其中等位基因频率和基因型分布的两组间 2 的多重比较也采用 检验 。 P ＜ 0. 05 被认为差异有 统计学意义， 为控制假阳性结果， 多重比较的结果则使 用一个经 Bonferroni 校正的 P 值来评估， 即 P ＜ 0. 008 （ 0. 05 /6 ） 被认为差异有统计学意义 。 2 结果 IL － 6 － 572 的基因型符合哈 － 温平衡 。4 组之间 在 CC vs GC + GG 模式中 4 组之间 的基因型分布比较，