蓝莓果实总RNA提取方法比较

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蓝莓组织 RNA 提取方法的研究

蓝莓组织 RNA 提取方法的研究余柯达;叶美娟;陈文荣;朱凯丽;张常晶;郭卫东【摘要】为建立蓝莓组织RNA提取方法，以蓝莓幼果为材料，比较了5种RNA提取方法，建立了改良的十六烷基三甲基溴化铵-乙酸钾（CTAB-KAc）提取方法，并比较了CTAB-KAc法对蓝莓根、成熟叶、幼茎、花、幼果和成熟果实组织RNA 的提取效果．结果表明：CTAB-KAc法提取RNA的过程只需3 h，蓝莓幼果RNA 的A260／A280和A260／A230值分别达到2．02和2．46，且无基因组DNA 污染，RNA产量达到143．37μg· g－1；用CTAB-KAc法成功提取了蓝莓成熟叶、幼茎、花、幼果和成熟果实组织的RNA，但是根的RNA提取方法还需优化．把上述RNA反转录成cDNA后进行PCR，扩增出预期大小的目的片段，可满足后续分子生物学实验的要求．%Tissues of blueberry were generally rich in polysaccharides, proteins, and polyphenols, resulting in the difficulties of RNA isolation with both high quantity and quality.To optimize the technology of RNA isola-tion from blueberry tissues, five methods for RNA extraction from immature fruit of blueberry were evaluated. The results showed that the most efficient technique for RNA isolation from blueberry fruits was the optimized CTAB-KAc-based method.A subsequent experiment showed that the optimized CTAB-KAc-based technique was also efficient in successful RNA isolation from full-expanded leaf, green stem, flower, immature fruit and mature fruit of blueberry, although protocol for roots still needed to be optimized.The method yielded143.37μg· g-1 high-quality RNA without DNA contamination within 3 h.The ratios of A260/A280 and A260/A230 of the total RNA from immature fruitof blueberry were 2.02 and 2.46, respectively.Reverse transcription-PCRcon-firmed that the isolated RNA was of appropriate quality and integrity for subsequent molecular biology studies.【期刊名称】《浙江师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(000)001【总页数】5页(P60-64)【关键词】蓝莓;RNA提取;十六烷基三甲基溴化铵-乙酸钾法;多糖;逆转录PCR【作者】余柯达;叶美娟;陈文荣;朱凯丽;张常晶;郭卫东【作者单位】浙江师范大学化学与生命科学学院，浙江金华 321004;浙江师范大学化学与生命科学学院，浙江金华 321004;浙江师范大学化学与生命科学学院，浙江金华 321004;浙江师范大学化学与生命科学学院，浙江金华 321004;浙江师范大学化学与生命科学学院，浙江金华 321004;浙江师范大学化学与生命科学学院，浙江金华 321004【正文语种】中文【中图分类】S663.9高质量RNA的提取是进行蓝莓转录组、基因芯片及Northern分析等分子生物学研究的关键前提．由于多年生木本植物含有较多的多糖和多酚、单宁等次生代谢物，其中:多酚会与蛋白质和核酸形成高分子量复合物，减少总RNA的得率[1-3];在醇沉步骤中,多糖会与RNA共沉淀干扰后续的逆转录等反应[3-4].因此,一些常见的RNA提取方法(如Trizol法与十二烷基硫酸钠(SDS)法)和用于提取植物RNA的试剂盒提取的总RNA的含量低且质量差[5-6]．目前,越橘属的蓝莓和黑果越桔主要使用LiCl沉淀RNA以分离多糖和DNA，以得到品质较高的总RNA[6-8].但是,LiCl沉淀RNA需要过夜，极其耗时，且不能沉淀小分子RNA，残留的Li+还会抑制RNA的反转录．在提取云杉[9]和酸模[10]等核酸时用醋酸盐可有效去除多糖.Lewinsohn等[11]认为在提取裸子植物RNA时在上清液中加入低浓度的乙醇可有效沉淀多糖；而在提取芒果[12]、铁皮石斛[13]、云杉和白杨[14]RNA时醋酸盐和乙醇结合使用效果更佳．本研究以蓝莓幼果为实验材料，综合比较了5种不同的RNA提取方法，并用其中效果最佳的十六烷基三甲基溴化铵-乙酸钾(CTAB-KAc)法提取了蓝莓根、成熟叶、幼茎、花、幼果和成熟果实中的RNA，逆转录成cDNA进行PCR，以期为蓝莓不同组织RNA的提取提供有效方法，并为其他木本植物RNA的提取提供借鉴．蓝莓样品于2013年3-6月在浙江师范大学试验基地3年生蓝莓“比洛克西”上取样，田间采集后立即放入冰盒，回实验室后用液氮速冻，置-80 ℃超低温冰箱中备用．本研究以蓝莓根、成熟叶、幼茎、花、幼果和成熟果实为实验材料．本研究所有试剂和离心管等耗材经0.1%焦碳酸二乙酯(DEPC)水处理24 h，灭菌烘干后使用；研钵、药匙等经180 ℃烘烤6 h．取蓝莓幼果材料0.1～0.2 g于研钵中，用液氮研磨成粉末状并快速转移至65 ℃预热的2 mL离心管(含有0.9 mL CTAB提取液：20 g/L CTAB，20 g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，100 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)，25 mmol/L EDTA，2 mol/LNaCl+30 μL β-巯基乙醇)中，用涡旋震荡仪震荡均匀,于65 ℃水浴中加热10 min，期间颠倒混匀3次；水浴后7 000 r/min离心5 min；取上清液，加入1/3体积的5 mol/L KAc溶液(pH 4.8)，混匀后冰浴30 min，再加入700 μL V氯仿∶V异戊醇=24∶1混合试剂，涡旋混匀，4 ℃下12 000 r/min离心5 min；取上清液，加入500 μL水饱和酚溶液(pH 5.2),混匀后再加入500 μL V氯仿∶V异戊醇=24∶1混合试剂，涡旋混匀，4 ℃下12 000 r/min离心5 min；取上清液，加入等体积的V氯仿∶V异戊醇=24∶1混合试剂，涡旋混匀，4 ℃ 12 000 r/min离心5 min；取上清液，加入等体积的异丙醇,混匀后冰浴沉淀30 min,4 ℃ 12 000 r/min离心10 min；去上清，加入1 mL 75%乙醇溶液洗涤沉淀2次，4 ℃ 10 000 r/min离心5 min,室温自然干燥10 min，适量DEPC水溶解，-80 ℃保存备用．将“加入1/3体积的5 mol/L KAc溶液(pH 4.8)”改为“加入1/5体积的无水乙醇”，其他操作按照CTAB-KAc法进行．将“加入1/3体积的5 mol/L KAc溶液(pH 4.8)”改为“加入1/5体积的无水乙醇和1/10体积的5 mol/L KAc溶液(pH 4.8)”，其他操作按照CTAB-KAc法进行．取蓝莓幼果材料0.1～0.2 g于研钵中，用液氮研磨成粉末状并快速转移至65 ℃预热的2 mL离心管中(含有0.9 mL SDS提取液：5 g/L SDS，20 g/L PVP，100 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)，25 mmol/L EDTA，0.2 mol/L NaCl+30 μL β-巯基乙醇)，用涡旋震荡仪震荡均匀，室温放置5 min,然后7 000 r/min离心5 min；其他操作按照CTAB-KAc法,从“取上清液，加入1/3体积的5 mol/L KAc溶液(pH 4.8)”这步开始进行．根据Life Technologies公司提供的操作说明进行并适当改良:取蓝莓幼果材料0.1～0.2 g于研钵中，用液氮研磨成粉末状并快速转移至含有1 mL Trizol试剂的2 mL离心管中，充分混匀，室温放置5 min；加入200 μL氯仿，剧烈振荡15 s，室温放置3 min，4 ℃ 12 000 r/min离心15 min；取上清液，加入1/3体积的5 mol/L KAc溶液(pH 4.8)，混匀后冰浴30 min，再加入500 μL V氯仿∶V异戊醇=24∶1混合试剂，剧烈混匀，4 ℃ 12 000 r/min离心15 min；取上清液，加入等体积的异丙醇，轻轻混匀后室温放置10 min，4 ℃ 12 000 r/min离心10 min；去上清，加入1 mL 75%乙醇溶液洗涤沉淀2次，4 ℃ 10 000 r/min离心5 min，自然干燥10 min，适量DEPC水溶解，-80 ℃保存备用．用CTAB-KAc法提取蓝莓根、成熟叶、幼茎、花、幼果和成熟果实6种不同器官的RNA．用1%琼脂糖凝胶电泳法检测蓝莓总RNA的完整度.RNA的含量和纯度采用NanoDrop2000C测定，记录其浓度、A260/A280和A260/A230的值．以蓝莓根、成熟叶、幼茎、花、幼果和成熟果实6种不同器官的RNA为模板，按TaKaRa公司PrimeScriptTM 1st Strand cDNA Synthesis Kit操作手册进行cDNA的合成．以上述6种cDNA和蓝莓幼果RNA为模板，并用ddH2O为阴性对照．根据蓝莓过氧化氢酶(CAT)基因序列设计PCR检测所需引物(由上海生工生物工程有限公司合成)，上游引物CAT-F：5′-ATGGTGGTTGTTGTGATG-3′，下游引物CAT-R：5′-TGATTTCCTTCGTGCC-3′．PCR反应程序为：94 ℃变性4 min；94 ℃ 30 s，50 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，扩增30个循环；最后72 ℃保温10 min．扩增结束后用1%琼脂糖凝胶电泳检测．5种方法对蓝莓幼果RNA的提取在耗时方面均为3 h以内．除Trizol-KAc法外，其他4种方法从蓝莓果实中提取的总RNA在异丙醇沉淀离心后为白色沉淀，干燥后为无色沉淀；而Trizol-KAc法在异丙醇沉淀离心后为无色胶状沉淀．电泳结果(见图1)表明：CTAB-KAc法、CTAB-EtOH法、CTAB-KAc-EtOH法和SDS-KAc 法均能看到蓝莓果实RNA的28S，18S和5S rRNA条带，而Trizol-KAc法几乎看不到rRNA条带；CTAB-EtOH法、CTAB-KAc-EtOH法和SDS-KAc法所提RNA中还存在基因组DNA污染，尤其以CTAB-KAc-EtOH法和SDS-KAc法所提RNA中基因组DNA含量最高；RNA含量和质量方面，以CTAB-KAc法和SDS- KAc法为最佳，尤其是CTAB-KAc法提取的RNA的28S rRNA条带亮度约为18S rRNA条带的2倍，表明所提RNA无降解且较完整．用NanoDrop2000C测定5种提取方法所得RNA的产量、A260/A280和A260/A230，结果见表1．Trizol-KAc法无法从蓝莓果实中提取出RNA．其他4种方法在RNA产量方面,以CTAB-KAc法和SDS-KAc法最高，均在100 μg·g-1以上．4种方法的A260/A280均为1.90～2.10，A260/A230都在2.0以上，表明无蛋白质、酚类和多糖等污染．结合电泳结果(见图1)进行综合分析，提取蓝莓果实RNA以CTAB-KAc法为最佳．用CTAB-KAc法提取了不同蓝莓组织的RNA.由表2可知：CTAB-KAc法在提取蓝莓成熟叶、绿茎和幼果组织RNA时，RNA产量达到100 μg·g-1以上，花的RNA产量也在80 μg·g-1以上，且A260/A280为2.00～2.10，A260/A230都在2.30以上，说明无蛋白质、酚类和多糖等污染；成熟果的RNA产量仅为18.95 μg·g-1，A260/A280为1.98，A260/A230仅为1.64，可能所得RNA含有多糖等杂质；根的RNA产量最低，只有9.36 μg·g-1，且A260/A280和A260/A230仅为1.77和1.44，A260/A280为1.70～2.00，在cDNA合成的可用范围内，但A260/A230过低，说明存在大量的蛋白质、酚类和多糖等杂质．电泳结果(见图2)也与上述结论一致．以CTAB-KAc法提取的6种不同蓝莓组织RNA反转录成的cDNA、蓝莓幼果RNA和ddH2O为模板，用蓝莓CAT基因特异引物CAT-F和CAT-R进行PCR，幼果RNA和ddH2O为模板的对照中没有扩增出条带，6种不同蓝莓组织的cDNA中，成熟叶、绿茎、花、幼果和成熟果扩增出了预期的约850 bp的CAT基因片段，根没有扩增出任何条带(见图3)．由此进一步说明CTAB-KAc法对蓝莓叶、茎、花和不同成熟度果实提取的RNA质量较好，且不存在基因组DNA污染，可以直接用于后续研究，但对根的RNA提取有难度．综上所述，本实验的5种RNA提取方法中，以CTAB-KAc法为最佳．本实验室目前已将CTAB-KAc法成功地应用于番茄、烟草、佛手和香橼的叶片、花瓣、雌蕊、雄蕊及樱桃花芽的RNA提取，用该方法提取的各种植物的RNA样品可用于RT-PCR和荧光定量PCR(结果未列)．完整性好、纯度高的RNA是进行分子生物学研究的基础．本实验采用5种方法提取蓝莓幼果RNA，通过比较发现，将以CTAB为主要成分的RNA提取液和多糖沉淀试剂KAc结合的CTAB-KAc法是提取蓝莓幼果RNA的最佳方案．多糖是影响蓝莓RNA提取的主要干扰因素.多糖的许多理化性质与RNA极其相似，用一般方法很难将它们分开，去除多糖的同时RNA也会被部分带走，造成RNA产量降低[15];且RNA中残余的多糖还会抑制后续基因操作过程中的多种酶反应[16]．本实验分别对KAc，EtOH和KAc-EtOH进行了比较，以探求最佳的蓝莓多糖去除试剂．结果显示：3种试剂获得RNA的A260/A230值相近，表明在多糖去除能力上3种试剂效果相近；但利用EtOH和KAc-EtOH得到的RNA产量远低于KAc(见表1)，且EtOH和KAc-EtOH去除多糖后获得的RNA中存在基因组DNA 污染(见图1).因此，KAc去除多糖的效果优于EtOH和KAc-EtOH．本实验还分别对CTAB提取液、SDS提取液和Trizol试剂进行了比较，以寻求最佳的RNA提取液．Trizol试剂无法从蓝莓幼果中提出RNA，可能与Trizol试剂所含的酚和异硫腈酸胍等组分的缓冲能力较差有关[17-18].CTAB提取液比SDS提取液在RNA产量上略优，且不存在基因组DNA污染.因此，CTAB提取液是提取蓝莓RNA的最佳提取液.其他植物RNA提取多以SDS等试剂与KAc，EtOH或KAc-EtOH组合的方法所得RNA质量较好[9-14]，说明不同植物材料RNA提取的干扰因素不同，使用的RNA提取方法也可能不同[19]．本实验从5种方法中筛选出蓝莓RNA提取的最佳方法——CTAB-KAc法，并用该方法对蓝莓根、成熟叶、幼茎、花、幼果和成熟果实的RNA进行了提取，其中：对成熟叶、绿茎、花和幼果组织RNA的提取效果最佳，而成熟果RNA的A260/A280为1.98，A260/A230仅为1.64，可能有多糖等杂质污染，5种蓝莓组织的RNA可用于RT-PCR及其他后续研究；对根RNA的提取效果最差，不能用于后续实验．表明CTAB-KAc法并不适于所有蓝莓组织RNA的提取.这与Ainsworth[10]的观点一致,即：同一种植物不同组织的RNA提取方法会有很大的差异，主要原因是不同组织中的主要干扰物不同，对其高质量RNA的提取方法需进一步优化．孙莹等[6]和Vashisth等[8]用LiCl沉淀RNA的方法对蓝莓幼果提取得到的总RNA产量约为25 μg·g-1，而本实验CTAB-KAc法的RNA产量比之高出约110 μg·g-1，在成熟叶、幼茎和成熟果的RNA产量上也比文献[8]略高或相近．蓝莓等多年生木本植物在分子生物学方面的研究目前仍处于起步阶段，且尚无高效的RNA提取方法的报道．使用目前较通用的LiCl法对木本植物材料进行RNA提取，不仅实验周期长达20 h，且会造成小分子RNA的丢失[6,8]．本研究建立的CTAB-KAc法只需0.1～0.2 g实验材料，用时3 h，且可同时对多个样品进行RNA提取；此外，CTAB-KAc法中用异丙醇沉淀RNA，预计还可以用于小分子RNA的提取．CTAB-KAc法适用于蓝莓叶、幼茎、花、果实等各种组织RNA的提取，可为深入进行蓝莓分子生物学研究奠定基础．。

植物组织RNA提取的难点及对策

植物组织RNA提取的难点及对策从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。

要进行Northern 杂交分析，纯化mRNA以用于体外翻译或建立cDNA文库，RT-PCR及差示分析等分子生物学研究，都需要高质量的RNA。

因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。

从文献报道上看，有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA，而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。

一般认为在这些植物组织中，或富含酚类化合物，或富含多糖，或含有某些尚无法确定的次级代谢产物，或RNase的活性较高。

在完整的细胞内这些物质在空间上与核酸是分离的，但当组织被研磨，细胞破碎后，这些物质就会与RNA 相互作用。

酚类化合物被氧化后会与RNA不可逆地结合，导致RNA活性丧失及在用苯酚、氯仿抽提时RNA的丢失，或形成不溶性复合物；而多糖会形成难溶的胶状物，与RNA共沉淀下来；萜类化合物和RNase会分别造成RNA的化学降解和酶解。

对于这些植物材料，用常规的RNA提取方法（如胍法、苯酚法和十六烷基三甲基溴化胺法等）难以提取出其RNA。

如Lбpez-Gбmez等在用常规的方法提取芒果果实的RNA时未能成功，他们的结果分为三种情况：提出的RNA已被降解；RNA的得率很低；得到的RNA不能进行体外翻译。

他们认为在果实成熟时各种酶的活性增强，其中也包含RNase，不溶性的淀粉转化为可溶性的多糖，芒果果实细胞壁中特殊的成份，以及果实中高含量的多酚化合物都是干扰RNA 提取的因素。

Tesniere等在用苯酚法和胍法提取葡萄果实的RNA时，发现RNA与某种未知化合物凝聚成不溶性的复合物，并且这种未知化合物在230nm和270nm处有强的光吸收，从而干扰了RNA紫外吸收的测定。

因此能否有效地去除多糖、酚类化合物、RNase和干扰RNA提取的其它代谢产物是提取高质量植物RNA成败的关键。

本文根据文献综述了解决上述植物RNA提取过程中难点的相应对策。

总RNA的提取（Trizol法自我总结）

总RNA的提取（Trizol法自我总结）Trizol法提取总RNA（改进的一步法）1.先取1.5ml RNA专用离心管加入1ml Trizol后编号称重；2.研钵清洗干净后用燃烧法燃烧15min左右，然后-20度预冷，在加入植物材料前先加入液氮再次冷冻研钵（同时将药匙预冷），将植物材料50-100mg置于研钵中，加入液氮充分研磨成面粉状，用预冷的药匙小头部位转至1.5ml RNA专用EP管中，立即震荡混匀，裂解5分钟,裂解过程中称重。

注：样品量一定要少于100mg，用药匙的小头加入4次就差不多了；研磨时尽量多加几次液氮，多研磨几次，保证样品研磨得足够细（呈面粉状），不能吸水变潮；研磨加入EP管中后，必须立即摇匀，不能等到样品变潮；用药匙转移样品时，每次少加点，不能将样品粘到管口，加完一个样品后立即用纸擦干净，加下一个样品时药匙必须重新用液氮冷冻。

总之，整个过程中必须保证样品和与样品接触物品的温度足够低，直到样品与Trizol接触为止，以免RNase将RNA降解。

3.离心（4℃，12000×g）10分钟，取上清至一新的EP管中。

4.分相：①加0.2ml的氯仿，用手剧烈摇晃15秒钟，15-30℃静置3分钟；②离心（4℃，12000×g，勿超过12000×g）15分钟。

5.沉淀，并去除多糖：①用200ul的枪取无色相（大约300ul）至一新的EP管中，切勿吸到中间层；②加入等体积异丙醇颠倒混匀（动作缓和），15-30℃静置10min；③离心（4℃，12000×g，勿超过12000×g）10分钟，倾去上清。

6.清洗（2次）：①用200ul的枪吸除多余上清，加1ml冰预冷的75%乙醇，旋涡震荡；②离心（4℃，7500×g）5分钟。

7.用真空泵吸除乙醇，37℃干燥10分钟。

切勿干燥彻底，否则极难溶解。

8.加适量的DEPC?H2O（一般40ul），枪打数次，使沉淀溶解。

rna提取方法

rna提取方法RNA提取方法。

RNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，其质量和纯度直接影响后续实验结果的准确性和可靠性。

在进行RNA提取时，我们需要选择合适的提取方法，并严格按照操作规程进行操作，以确保提取到高质量的RNA样品。

本文将介绍常用的RNA提取方法及其操作步骤，希望能对您的实验工作有所帮助。

1. 常用的RNA提取方法。

（1）酚/氯仿法，这是最常用的RNA提取方法之一，通过酚和氯仿的相分离，将RNA从细胞裂解液中提取出来。

该方法操作简单，适用于大多数样品类型，但需要注意的是酚/氯仿对操作者和环境有一定的危害性，需要在安全通风下进行操作。

（2）硅基柱法，该方法利用硅基柱上的硅胶膜吸附RNA，通过洗脱的方式提取RNA。

该方法操作简便，提取效率高，且对DNA和蛋白质有较好的去除效果，适用于高质量RNA的提取。

（3）磁珠法，磁珠法利用磁珠载体对RNA进行特异性结合，通过磁场的作用实现RNA的分离和提取。

该方法操作简单，易于自动化，且对样品量要求较低，适用于高通量样品的提取。

2. RNA提取操作步骤。

（1）样品裂解，将待提取RNA的样品进行裂解，一般使用细胞裂解液或组织裂解液进行细胞破碎，释放RNA。

（2）酚/氯仿提取，将裂解液与酚/氯仿按比例混合，离心分离出上清液中的RNA。

（3）酒精沉淀，向上清液中加入等体积的异丙醇或乙醇，使RNA沉淀出来，再经过洗涤和干燥步骤得到RNA沉淀物。

（4）溶解RNA，用无DEPC的水或TE缓冲液溶解RNA沉淀物，得到可用于后续实验的RNA样品。

3. 注意事项。

（1）操作环境，在进行RNA提取时，需要在RNase-free的环境下进行操作，避免RNA受到RNase的污染。

（2）样品保存，裂解后的样品需要在-80℃的环境下保存，以避免RNA的降解。

（3）避免污染，在操作过程中需要避免外源RNA的污染，使用RNase-free的试剂和耗材，并注意操作规范。

（4）质量检测，提取得到的RNA样品需要进行质量检测，包括浓度、纯度和完整性的检测，以确保提取到高质量的RNA。

不同组织总rna提取

不同组织总rna提取
总RNA是一种包含所有转录本的RNA样品，对于许多生物学研究非常重要。

不同组织中的总RNA提取方法可能略有不同，以下是一些常见的总RNA提取方法：
1. 经典酚/氯仿法：该方法适用于多种组织，包括动物和植物组织。

它利用酚和氯仿的不同溶解度将RNA从DNA和蛋白质中提取出来。

它需要耗时且冗长的样品制备步骤，但可以获得高质量的RNA。

2. Trizol法：该方法是一种常用的RNA提取方法，适用于多种组织和细胞类型。

它使用一种酚-胍-氯仿混合物将RNA从细胞和组织中提取出来。

这种方法比经典酚/氯仿法更快，也可以获得高质量的RNA。

3. 氯化锂法：该方法适用于小型样品和细胞类型，例如酵母细胞。

它使用氯化锂和酒精的不同溶解度来提取RNA。

这种方法需要较短的制备时间，但可能会影响RNA的质量。

4. 柱式RNA提取法：该方法使用酚/氯仿或Trizol提取RNA，
并通过硅胶柱纯化步骤来去除杂质。

这种方法可以获得高质量的RNA，并且适用于各种组织类型。

总之，不同组织中的总RNA提取方法略有不同，但通常都可以使用上述方法之一。

选择合适的方法取决于实验的具体需求和样品类型。

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rna提取方法

rna提取方法RNA提取方法。

RNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，它能够从细胞或组织中分离出RNA，并为后续的实验和分析提供可靠的样本。

在实验室中，有多种方法可以用来提取RNA，每种方法都有其特点和适用范围。

本文将针对常用的RNA提取方法进行介绍和比较，希望能为科研工作者提供一些参考和帮助。

一、酚/氯仿提取法。

酚/氯仿提取法是一种经典的RNA提取方法，它通过酚和氯仿的相分离特性来分离RNA。

首先，细胞或组织样本被加入到酚中，然后加入氯仿和异丙醇，最后进行离心分离。

这种方法简单易行，适用于大多数样本类型，但对RNA的纯度要求较高，且操作过程中需要注意避免RNA的降解。

二、硅基柱法。

硅基柱法是一种基于硅基质的RNA提取方法，它通过硅基柱的亲和吸附作用来富集RNA。

样本经过细胞裂解后，加入硅基柱柱子进行离心，然后通过洗脱步骤得到纯净的RNA。

这种方法操作简便，适用于高通量提取，但对样本量和纯度要求较高。

三、磁珠法。

磁珠法是一种利用磁珠颗粒来富集RNA的提取方法，它具有操作简便、高效快速的特点。

样本经过裂解后，加入磁珠颗粒进行混合，然后通过磁场分离得到RNA。

这种方法适用于多样本处理和自动化操作，但对磁珠颗粒的选择和配比要求较高。

四、酶法。

酶法是一种利用酶来选择性降解DNA而保留RNA的提取方法，它适用于需要高纯度RNA的实验。

通过加入DNA酶和蛋白酶K来去除DNA和蛋白质，最终得到纯净的RNA。

这种方法操作简便，适用于小样本和特定实验要求，但需要注意酶的活性和浓度控制。

五、TRIzol法。

TRIzol法是一种利用TRIzol试剂来提取RNA的方法，它通过酚-醇混合物和氯仿的相分离特性来富集RNA。

样本经过混合后，加入氯仿进行离心分离，最后得到RNA。

这种方法适用于多种样本类型，但需要注意操作过程中的酚和氯仿的使用安全。

综上所述，不同的RNA提取方法各有特点，科研工作者可以根据实验需求和样本特性选择合适的方法。

rna提取方法

rna提取方法RNA提取方法。

RNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，它能够从细胞或组织中提取出RNA，为后续的实验分析和研究奠定基础。

本文将介绍几种常用的RNA提取方法，希望能够为实验工作者提供一些参考和帮助。

1. Trizol法。

Trizol法是一种常用的RNA提取方法，它利用Trizol试剂将细胞或组织中的RNA溶解，然后通过酚-氯仿提取的方式分离RNA。

该方法操作简单，提取效果好，适用于各种类型的样品。

但需要注意的是，在操作过程中要避免RNA的降解，尽量减少搅拌和离心的时间，以保证提取的RNA质量。

2. 氯仿-异丙醇法。

氯仿-异丙醇法是另一种常用的RNA提取方法，它通过氯仿和异丙醇的相分离作用，将RNA从其他细胞成分中提取出来。

该方法提取的RNA纯度高，适用于大规模的样品处理。

但需要注意的是，在操作过程中要避免氯仿的挥发和异丙醇的残留，以免对后续实验造成影响。

3. 磁珠法。

磁珠法是近年来发展起来的一种RNA提取方法，它利用表面修饰的磁珠与RNA特异性结合，通过磁场的作用将RNA分离出来。

该方法操作简便，提取效果稳定，适用于高通量的样品处理。

但需要注意的是，在操作过程中要避免磁珠的污染和RNA的降解，以保证提取的RNA质量。

4. 硅胶柱法。

硅胶柱法是一种经典的RNA提取方法，它利用硅胶柱的吸附作用将RNA从细胞或组织中提取出来。

该方法提取的RNA质量好，适用于对RNA纯度要求较高的实验。

但需要注意的是，在操作过程中要避免硅胶柱的交叉污染和RNA的降解，以保证提取的RNA质量。

总结。

以上介绍了几种常用的RNA提取方法，每种方法都有其特点和适用范围。

在选择合适的RNA提取方法时，需要根据样品的特性和实验的要求进行综合考虑。

同时，在操作过程中要严格控制各项操作条件，以保证提取的RNA质量。

希望本文能够对实验工作者有所帮助，谢谢阅读！。

几种植物组织总RNA提取方法的特点及疑难对策

(1) Promega公司的 Promega S V Total RNA Isolation Sys2 tem。其特点是快速、高效 ,用高浓度的亚硫氰胍稀释细胞 , 使 Rnase失活 ,并沉淀蛋白 ,乙醇沉淀核酸 , DNA 酶消化残留的 DNA,去除杂质 ,并将 RNA 吸附到硅化膜上 ,用 DEPC2 H2 O 洗脱膜上的 RNA 即可。
[3 ] WAN C Y,W ILKINS T A. A modified hot borate method significantly en2 hance the yield of high2quality RNA from cotton ( Gossyp ium hirsutum l) [ J ]. Anal B iochem, 1994, 223: 7 - 12.
Character istics of Severa l Extraction M ethods on Tota l RNA in Plan t T issues and Stra teg ies to Problem s YANG Zhan2jun et a l (B iology Department of Huaiyin Normal College, Huai′an, J iangsu 223300) Abstract There were many extraction methods on total RNA in p lant tissues and more p roblem s in extraction p rocess, such as the interfer2 ence of phenolic compounds, polysaccharides and p rotein and the pollution of RNase. The author briefly introduced the characteristics of sev2 eral extraction methods on total RNA in p lant tissues, the p roblem s in extraction p rocess and the strategies to p roblem s. Key words Plant tissues; RNA; Extraction methods

不同方法在南果梨果实总RNA提取应用中的比较

·51·南果梨（Pyrus ussriensis）是鞍山主要的经济园艺作物，对其的研究利用长期以来一直广受社会关注。

该品种口味香甜多汁，石细胞少。

但由于梨果易氧化褐变，不耐储藏，严重影响了其经济效益及在国内外市场的发展前景。

近些年来，随着分子生物学的发展，褐化机制的研究逐渐受到了众多学者的重视。

目前，普遍认为褐化机制与多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）的含量及其代谢具有密切的关系。

为了研究南果梨果实中多酚氧化酶基因的表达式样，揭示其褐化作用的分子机制，有效改进南果梨的储存方法，极其有必要首先建立适用于南果梨果实总RNA 提取的最佳方案，以为后续的分子生物学研究提供完善的实验基础。

南果梨果实组织中含有较多的酚类物质和多糖物质，是干扰RNA 提取的主要因素[1]。

目前，针对富含酚类和多糖物质的组织提取的方法，主要有Trizol 法、热硼酸法和十六烷基三甲基溴化铵法（cetyltrimethyl amonium bromide，CTAB 法）和适合多糖多酚植物RNA 提取试剂盒法四种方法。

Trizol 法即异硫氰酸胍-苯酚法，其原理是内含的异硫氰酸胍能迅速破碎细胞，同时使核蛋白复合体中的蛋白质变性并释放出核酸，此法适用于黄瓜幼果以及柿果总RNA 的提取[2-3]。

热硼酸法的原理是把硼酸盐缓冲液体系、蛋白酶K 消和LiCl 选择性沉淀RNA 步骤等相结合，此法适用于苹果果实总RNA 的提取[4]。

CTAB 法的原理是利用CTAB 作为离子型表面活性剂，使细胞膜和核膜蛋白溶解，使核蛋白解聚，从而使RNA 得以游离出来，此法适用于猕猴桃、梨、甜瓜、桃等果实RNA 提取[5-8]。

本研究通过比较分析上述四种方法在南果梨果实总RNA 提取中的提取效率以及所得RNA 的完整性，最终确定可用于南果梨果实总RNA 提取的方法。

1.材料与方法1.1材料与试剂。

南果梨成熟果实，采摘于鞍山市某果园，保存于-80℃超低温冰箱内备用。

HPLC法对比分析不同的蓝莓提取物

52 食品安全导刊 2018年10月蓝莓因富含丰富的花青素，对保护视力、缓解眼睛疲劳等具有良好效果，被誉为“美瞳之果”。

现代药理学研究表明，花青素具有抗氧化、抗肿瘤、防治心脑血管疾病、促进视力等作用[1]，在临床上广泛应用于治疗高血压性视网膜病变等疾病，是眼科药物的主要活性成分[2]。

蓝莓提取物是一种略带酸味的深紫色粉末，其由新鲜或冷冻的蓝莓果经提取精制而成。

目前，蓝莓提取物在欧洲作为药物使用，在美国和日本则作为保健食品使用。

蓝莓果实中存在的花青素种类主要有5种——矢车菊素（Cy）、飞燕草素（Dp）、芍药素（Pn）、牵牛花素（Pt）和锦葵素（Mv），他们以单糖苷形式（阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖）存在[3]，其中3-糖苷在自然界中最丰富，而高效液相色谱（HPLC）法测定花青素以矢车菊素-3-O-葡萄糖苷为对照品居多。

随着人们生活水平的提高和对视力保护意识的增强，蓝莓提取物日益受到消费者的关注和青睐，也引起了不少生产企业的聚焦。

本研究采用高效液相色谱法，以矢车菊素-3-O-葡萄糖苷作为对照品，对两个不同厂家的蓝莓提取物与蓝莓鲜果中花青素的含量和种类进行了对比研究，为选购蓝莓提取物提供了有力的质量依据。

1 材料与方法1.1 材料与试剂新鲜蓝莓：贵州麻江产地；蓝莓提取物：厂家提供（分别编号A、B）；矢车菊素-3-O-葡萄糖苷标准品（≥99%）：成都曼思特生物科技有限公司；甲醇：国产色谱纯；甲酸、盐酸等为国产分析纯。

1.2 仪器与设备A g i l e n t 1260型高效液相色谱仪：A g i l e n t公司；H H -2型数显恒温水浴锅：国华电器有限公司；A B 204-N 型电子天平：M E T T L E RT O L E D O 公司；320p H 计：M e t e r M E T T L E RHPLC 法对比分析不同的蓝莓提取物□ 谢有发马晓娟熊艳霞杨凌宇吕毅斌（通讯作者）江中药业股份有限公司摘　要：采用高效液相色谱法对两个不同厂家的蓝莓提取物和新鲜蓝莓中花青素的含量和种类进行对比，结果显示，A 蓝莓提取物的花色苷种类单一，以矢车菊素-3-O-葡萄糖苷为主，花青素含量40.96%；B 蓝莓提取物的花色苷种类丰富，花青素含量43.15%；新鲜蓝莓花青素含量4.45mg/g。

蓝莓提取物标准

蓝莓提取物标准
蓝莓提取物的标准通常涉及其纯度、花青素含量以及是否有其他酚类化合物的存在。

蓝莓提取物是一种富含花青素的天然物质，常用于食品补充剂和营养品中。

以下是一些关于蓝莓提取物标准的关键点：
1.提取物来源：优质的蓝莓提取物通常来源于野生蓝莓，这些蓝莓因
其生长环境的特殊性，往往含有更丰富的营养成分。

2.花青素含量：花青素是蓝莓中的主要生物活性成分，具有强大的抗
氧化作用。

高纯度的花青素提取物通常被认为质量更高。

3.纯度要求：标准的蓝莓提取物应该具有高纯度，不含其他不必要的
酚类化合物，以确保其安全性和有效性。

4.提取方法：提取方法也会影响最终产品的质量。

例如，冷冻新鲜野
生蓝莓提取物（Mirtoselect®）是一种通过特定方法提取的高纯度
花青素产品。

5.临床测试：对蓝莓提取物进行临床测试，如对干眼症状的人群进行
眼科检查和临床试验，可以帮助评估其效果和安全性。

6.标准化剂量：在研究中，蓝莓提取物的剂量应该是标准化的，以便
于在不同研究中比较效果。

7.质量控制：在整个生产过程中，应该有严格的质量控制措施，以确
保每批产品的一致性和符合标准。

综上所述，蓝莓提取物的标准包括了提取物的来源、花青素含量、纯度、提取方法、临床测试、标准化剂量以及质量控制等多个方面。

在选择蓝莓提取物产品时，应考虑这些因素，确保所选产品符合相关的质量和安全标准。

蓝莓提取物提取流程

蓝莓提取物提取流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classicarticles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!蓝莓提取物是一种具有丰富抗氧化和抗炎作用的天然植物提取物，其制备过程需要经过以下几个步骤：1. 原料准备：首先需要准备新鲜的蓝莓作为提取原料，选择新鲜成熟的蓝莓能够保证提取物的质量和效果。

蓝莓果实总RNA提取方法比较

蓝莓果实总RNA提取方法比较
孙莹;侯智霞
【期刊名称】《黑龙江农业科学》
【年(卷),期】2012(000)010
【摘要】为了在蓝莓果实中提取出高质量RNA,比较了改良CTAB法、TRIzol法、试剂盒法和SDS法4种方法.结果表明:改良CTAB大量法能有效地去除果实中的
多糖和酚类物质,获得的总RNA质量较好,纯度较高.28s∶18s的亮度约为
2∶1,OD260/OD280在1.8～2.0,OD260/OD230的比值都大于2.0,且得率也较高,幼果期为23.978 μg·g-1,完熟期为30.817 μg·g-1.完全能适用于RT-PCR、转
录组测序等分子生物学实验.
【总页数】4页(P114-117)
【作者】孙莹;侯智霞
【作者单位】北京林业大学省部共建森林培育与保护教育部重点实验室,北京100083;北京林业大学省部共建森林培育与保护教育部重点实验室,北京100083【正文语种】中文
【中图分类】S663.9
【相关文献】
1.罗汉果果实总RNA提取方法的比较研究 [J], 韦荣昌;马小军;白隆华;吴庆华;施力军;潘丽梅;冯世鑫;莫长明
2.橄榄果实总RNA提取方法的比较 [J], 李安玉;佘文琴
3.不同方法在南果梨果实总RNA提取应用中的比较 [J], 张吉斯;冯淼;张博
4.番茄叶片及果实总RNA提取方法的比较 [J], 郭荔雯;摆福红;沙晓东;张风琴;王林;王晓敏
5.草莓果实总RNA提取方法的比较 [J], 张卿;刘帅;邢宇;曹庆芹;秦岭
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蓝莓果实总DNA的提取

蓝莓果实总DNA的提取
赵丽丽;李东涛;刘洪蕾;毕晓燕
【期刊名称】《科技信息》
【年(卷),期】2009(000)036
【摘要】本文介绍一种提取蓝莓果实基因组DNA的有效方法,即在传统的CTAB 法的基础上,加入一定量的PVP.所提取的DNA经0.8%的琼脂糖凝胶电泳,结果证明,提取的DNA片段长度整齐,符合分子生物学后续操作的要求,并且DNA没有被降解.
【总页数】1页(P413)
【作者】赵丽丽;李东涛;刘洪蕾;毕晓燕
【作者单位】鲁东大学生命科学学院;鲁东大学生命科学学院;鲁东大学生命科学学院;鲁东大学生命科学学院
【正文语种】中文
【相关文献】
1.一种从番茄果实中提取总RNA用于cDNA-AFLP分析的方法 [J], 王天奎;尚增振;邹志荣;王孝宣;杜永臣
2.笃斯越桔果实总DNA提取方法的比较研究 [J], 王程;罗军;田志杰;姜艳霞;李妍;许娜;芦晓晶;吕士杰
3.连翘生晒果实和干燥叶片总DNA提取方法比较 [J], 王嘉荟;王琳;王金胜;王文斌
4.金柑叶片和果实总DNA提取方法比较 [J], 张宇;唐志鹏;秦荣耀;孙宁静;徐石兰;焦丁华
5.改良CTAB法提取红肉火龙果果实不同组织总DNA及质量检测 [J], 杨运良;李建勋;丁宵;郭创业;董少鹏;段国琪;武宗信
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草莓不同组织RNA提取方法的改良研究

草莓不同组织RNA提取方法的改良研究刘建;沈元月【摘要】探讨一种适于草莓不同组织的RNA提取的改良方法.通过增加裂解液震荡强度、离心柱多次吸附、增加去蛋白液温育次数及漂洗次数等步骤对EASYspin RNA提取总RNA操作方法进行改进.结果表明,改良方法提取的草莓根、茎、叶、果实、花中的总RNA,电泳检测都出现清晰的28 S和18 S两条明显的条带,表明总RNA完整性较好;紫外分光计分析其OD260/OD280值在1.88至2.06之间,OD260/OD230值均大于2.0,RNA浓度含量为310～500 μg/mL,表明提取的总RNA纯度好、含量高;基于RNA中mRNA反转录的RT-PCR扩增Actin基因分析结果表明,改良方法提取的草莓不同组织的总RNA质量高.总之,经过电泳、紫外、反转录分析结果证实,改良EASYspin适于草莓果实等不同组织总RNA的提取,是草莓类似果树种类总RNA提取的首选借鉴方法.【期刊名称】《北京农学院学报》【年(卷),期】2014(029)002【总页数】3页(P9-11)【关键词】草莓;总RNA;果实;RNA提取;RT-PCR【作者】刘建;沈元月【作者单位】农业应用新技术北京市重点实验室,北京农学院植物科学技术学院,北京102206;农业应用新技术北京市重点实验室,北京农学院植物科学技术学院,北京102206【正文语种】中文【中图分类】S668.4草莓作为非呼吸跃变型果实的模式植物，从分子水平揭示其发育及成熟机制已成为目前果树学领域研究的热点和发展趋势［1］。

基于mRNA的生物基因功能分析已成为现代分子生物学研究的基础，因此高质量总RNA提取对于生命科学研究显得十分重要。

草莓不同组织中尤其果实含有较多的多酚、多糖和醌等次生代谢物，在提取高质量核酸过程中很难除去，制约高质量RNA的提取［2－3］。

目前植物材料中总RNA提取的常用方法有异硫氰酸胍法、苯酚法、SDS法、CTAB法及Trizol试剂盒法［4－8］。

提植物总RNA及去DNA和反转录标准方法(会给实验室一大笔提取试剂盒的经费)

Trizol法提取植物总的RNA及反转录可用于RT-PCR【中文版】一、植物总RNA 的提取抽提RNA 所用的研钵酒精灼烧5-10min或灭菌.，器皿均高温高压灭菌，以去除RNA 酶，所有试剂都保证没有RNA 酶污染。

1) 1.5ml 离心管,取0.1g 组织在液氮中研磨至粉末, 立即加入1ml Trizol，涡旋充分混匀后放置2min。

2) 加0.2体积（氯仿Chloroform），剧烈振荡15s（vortex），室温放置3min（或不放置，直接离心）。

3) 4℃，12000rpm 离心5min，样品会分成3 层，取上层水相，取上清。

4) 加等体积的异丙醇，混匀，4℃放置10min以上。

或可以-80℃过夜。

5) 4℃，12000rpm 离心20min，4℃弃上清，管底管侧形成胶状沉淀（可看到白色沉淀）。

6) 加1ml 75%乙醇，充分溶解沉淀。

4℃，12000rpm 离心5min。

倒掉上清，用移液器吸干。

7) 晾干约10 min。

(不要晾太长时间，看不到水就可以加灭菌水)8) 加50μl灭菌的超纯水，65℃溶解，-20℃（最好-80℃）保存。

（注：要是处理DNase就不能加这么多水。

可以加5μl）整个提取步骤最好咋在4℃或冰上完成二、DNase I 处理消化植物总RNA 中的基因组DNA1) 将上述全部提取的植物总RNA 5μl，然后顺序加入1μl 10×缓冲液，1μl DNase，3μl RNase-free水，总体积10μl，充分混匀后，37℃温育30 min。

2）加入300ul 灭菌水提高体积，然后加入300ul PCI，vortex；4℃，12000rpm 离心5min；3) 加入1/10 体积3M 醋酸钠(autoclaved) pH 5.2, 和2倍体积的100% EtOH；（-20℃，10-30min或可以-80℃过夜）4) 4℃，12000rpm 离心15min，6)75% EtOH, 300ul, 12000 rpm 5min7) dry （10-15min）and add 30-50 ul of ddH2O三、反转录cDNA1) 在上述总体积为11μl 反应液中加入1μl Oligo(dT)18 引物4μl 5×缓冲液，2 μl dNTP，1μl 反转录酶，1μl RNase 抑制剂，总体积20μl，充分混匀后，42℃温育1-1.5hr。