植物叶绿素测定方法
测定叶绿素含量实验报告
测定叶绿素含量实验报告测定叶绿素含量实验报告引言：叶绿素是植物中最重要的色素之一，它在光合作用中起着至关重要的作用。
测定叶绿素含量可以帮助我们了解植物的生理状态和光合效率。
本实验旨在通过分光光度法测定叶绿素含量，并探讨影响叶绿素含量的因素。
材料与方法：1. 实验材料：新鲜的植物叶片、乙醇、丙酮、二氯甲烷、石英比色皿、量筒、离心机、紫外可见分光光度计等。
2. 实验步骤：a. 将适量的新鲜叶片切碎，并加入适量的乙醇中，用离心机离心10分钟，使叶绿素溶解于乙醇中。
b. 取适量的叶绿素提取液，加入丙酮和二氯甲烷，混合均匀。
c. 用量筒将混合液转移到石英比色皿中，放入紫外可见分光光度计，设置波长为665nm和649nm，测定吸光度。
d. 计算叶绿素含量。
结果与讨论：通过实验测定，我们可以得到不同植物叶片的叶绿素含量。
在实验中，我们发现不同植物叶片的叶绿素含量有所差异。
这是因为不同植物对光合作用的需求和适应能力不同，导致叶绿素合成的数量和比例不同。
此外，我们还发现在同一植物的不同部位，叶绿素含量也存在差异。
例如，在一棵树上，树叶的叶绿素含量可能比树干或树枝的含量高。
这是因为树叶是进行光合作用的主要部位，需要更多的叶绿素来吸收光能。
除了植物本身的因素外，环境条件也会对叶绿素含量产生影响。
光照强度、温度、水分等因素都会对叶绿素合成和降解产生影响。
例如，充足的光照和适宜的温度可以促进叶绿素的合成，而干旱和寒冷的环境则可能导致叶绿素的降解。
在实验中，我们使用了分光光度法来测定叶绿素含量。
这种方法基于叶绿素对特定波长光的吸收特性，通过测量吸光度来间接测定叶绿素的含量。
分光光度法具有操作简便、结果准确等优点，因此被广泛应用于叶绿素含量的测定。
然而，分光光度法也存在一些局限性。
首先，该方法只能测定总叶绿素含量，无法区分不同类型的叶绿素。
其次，该方法对样品的处理要求较高，需要保证样品中的叶绿素完全释放并溶解于提取液中。
因此，在实际应用中，我们需要根据具体情况选择适合的方法来测定叶绿素含量。
叶绿素测定的原理
叶绿素测定的原理
叶绿素是植物体内最为重要的一种色素，它参与了光合作用中太
阳能的吸收和传递过程。
因此，叶绿素测定是研究植物光合作用的基
础实验之一。
叶绿素的测定原理基于溶液中叶绿素对光的吸收特性，即在一定
波长范围内，吸收与溶液中叶绿素的浓度成正比的光量。
常用的叶绿
素测定方法有分光光度法和荧光法。
分光光度法中，首先需要将样品离心沉淀，然后用乙醇或乙醚提
取叶绿素，最后将提取的液体悬浮于乙醇或乙醚中，测量反射或透射
光的强度。
根据比色法原理，溶液中每单位叶绿素吸收的光量与浓度
成正比，通过标准曲线计算出样品中叶绿素的浓度。
荧光法则是利用叶绿素在激发光的作用下会发出荧光现象，荧光
的强度与叶绿素的浓度成正比关系。
在荧光法中，首先需要将样品加
入荧光素，搅拌均匀后，测量样品中荧光素的荧光强度与标准曲线计
算出样品中叶绿素的浓度。
总之，叶绿素测定原理基于叶绿素对光的特性，通过分光光度法
或荧光法测量样品中叶绿素吸收或发出的光的强度来计算叶绿素的浓度。
在科研和实际工作中，叶绿素测定是十分常用和重要的实验方法。
叶绿素的测定
叶绿素的测定
叶绿素是植物中的重要色素，用于光合作用中的光能捕捉和转化。
测定叶绿素的含量可以评估植物的光合活性和健康状况。
常用的叶绿素测定方法包括：
1. 酸醇提取法：将植物组织置于酸醇混合液中，利用酸溶解细胞膜，醇提取叶绿素。
然后用光度计测定提取液的吸光度，根据吸光度与叶绿素浓度的关系计算出叶绿素的含量。
2. 高效液相色谱法(HPLC)：通过将植物样品制备成溶液，在高效液相色谱仪中进行分离和检测。
根据标准曲线或内标法，确定叶绿素的浓度。
3. 光谱分析法：通过测量叶绿素在可见光区域的吸收光谱，计算叶绿素的浓度。
常用仪器包括光度计或分光光度计。
4. 荧光光谱法：通过测量样品在激发光下发射的荧光光谱，间接推测出叶绿素的浓度。
这种方法可以通过测量不同波长下激发光和荧光信号的比值来评估叶绿素的含量。
5. 无损测定法：利用近红外光谱或其他无损技术，通过样品材料的光学特性来推测叶绿素的含量。
这种方法适用于大范围的植物样本测定。
叶绿素测定方法的选择取决于实验条件、设备和样品特性。
根据需求，可以选用适当的方法来测定叶绿素的含量。
叶绿素含量的测定方法
叶绿素含量的测定叶片叶绿素含量与光合作用密切相关，叶绿素含量的测定无论是在生理上，还是在选育品种以及抗性研究等方面都很有必要。
叶绿素含量的经典测定方法是光电比色法，即用光电比色计以无机有色溶液为标准进行比色测定。
该方法不仅要配制无机标准溶液，而且不能对溶液中不同色素分子进行定量测定；分光光度法则不需配制标准溶液，又可对溶液中不同色素分子进行定量测定，已得到广泛应用。
一、原理分光光度法测定叶绿素含量，就是利用叶绿素 a和叶绿素b吸收光谱的不同，测定各特定峰值波长下的光密度，再根据色素分子在该波长下的消光系数，计算出浓度。
叶绿素 a、叶绿素b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别位于 663nm、 645nm处，同时已知叶绿素a和叶绿素b在663nm处的消光系数分别为82.04和9.27；在645nm处的消光系数分别为16.75和45.60。
这样叶绿素a和叶绿素b的浓度与他们在663nm、645nm处的光吸光密度的关系可用下式表示：D663=82.04C a+9.27C bD645=16.75C a+45.60C b式中D663和D645分别为叶绿素溶液在波长663nm、645nm处的光密度；C a、C b分别为叶绿素a和叶绿素b的浓度，单位g.·L-1。
解方程可得到：计算：C a=12.7D663-2.59D645C b=22.9D645-4.67D663C a+b=20.3D645+8.04D663C a ,C b分别为叶a和叶b的浓度，C a+b为叶a和叶b的总浓度，单位为mg·L-1所测材料单位重量或单位面积的叶绿素含量可按下式进一步计算：叶绿素含量（mg·L-1或mg·dm-2）= C*VA*1000式中C：叶绿素浓度（mg·L-1）；V：提取液总体积（ml）；A：叶片鲜重（g）或面积（dm2）二、丙酮乙醇混合液法提取叶绿素：药品：丙酮：乙醇按1：1体积混合成浸提液仪器：分光光度计-1-1-1方法：丙酮乙醇混合液法1．将丙酮、无水乙醇按1：1比例配成混合浸提液。
叶绿素含量测定方法
叶绿素含量测定方法叶绿素是植物体内含量较高的绿色色素，它在光合作用中起着重要的作用。
因此，测定叶绿素含量对于研究植物的生理过程和生态体系具有重要意义。
本文将介绍几种常用的测定叶绿素含量的方法。
1. 直接萃取法：直接萃取法是最常用的测定叶绿素含量的方法之一。
具体步骤如下：(1) 取新鲜叶片，将其切碎并放入含有乙醇或丙酮的试管中。
(2) 在测定之前，将试管置于黑暗中，以避免光照对叶绿素的破坏。
(3) 将试管加热至60-80摄氏度，使用超声波震荡器震荡一段时间，以使叶绿素从叶片中完全溶解到溶液中。
(4) 将溶液离心，收集上层液体，并使用分光光度计测定其吸光度。
(5) 根据吸光度测定值和标准曲线来计算叶绿素的含量。
2. 酸碱法：酸碱法是测定叶绿素含量的一种简便方法。
具体步骤如下：(1) 取新鲜叶片，用醋酸乙酯将其完全浸泡。
(2) 在测定之前，将其放在黑暗中保护叶绿素不受光照。
(3) 将浸泡叶片的醋酸乙酯溶液转移到一个离心管中，再添加一些酸性乙醇（如95%乙酸）。
(4) 离心一段时间，使叶绿素溶于酸性乙醇中。
(5) 将上清液转移到一个试管中，并用乙醚稀释，使其适合测定。
(6) 使用分光光度计测定溶液的吸光度，并根据标准曲线计算叶绿素的含量。
3. 间接法（叶绿素含量的计算）：间接法是一种根据叶片在不同波长下吸光度的差异来推测叶绿素含量的方法。
具体步骤如下：(1) 使用分光光度计测定叶片在不同波长下的吸光度，包括440 nm、645 nm和663 nm。
(2) 根据以下公式计算：非光合色素 Chl (a+b) = 0.0073 A663 + 0.036 A645叶绿素 a = 0.0127 A663 - 0.00269 A645叶绿素 b = 0.0205 A645 - 0.00488 A663叶绿素 a/b = (0.0127 A663 - 0.00269 A645) / (0.0205 A645 - 0.00488 A663)(3) 使用所得结果进行各种关于叶绿素含量的统计分析。
叶绿素的提取与分析测定
叶绿素的提取与分析测定叶绿素的提取与分析测定是一项重要的生物技术实验，主要用于研究植物光合作用中的重要色素——叶绿素。
下面将详细介绍实验的步骤、方法和数据分析。
一、实验目的本实验旨在提取和分析测定叶绿素，了解其在植物光合作用中的重要作用，并为进一步研究植物生长和发育提供基础数据。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的主要色素，它能够吸收太阳光能，并将其转化为化学能，为植物的生长和发育提供能量。
叶绿素广泛存在于植物的绿色组织中，尤其在叶片中含量最为丰富。
本实验将采用有机溶剂（如乙醇、丙酮等）从植物组织中提取叶绿素。
提取后的叶绿素可通过分光光度法进行定量分析。
三、实验步骤1.样品准备：选取新鲜植物组织（如叶片），用蒸馏水冲洗干净，滤纸吸干表面水分，称取一定质量（m）的样品备用。
2.叶绿素提取：将样品放入研钵中，加入适量有机溶剂（如乙醇-丙酮混合液），研磨成匀浆。
将匀浆转入离心管中，于低温下离心（如4℃、10000 r/min），收集上清液备用。
3.叶绿素定量分析：取一定体积（V）的上清液，加入适量蒸馏水稀释，用分光光度计在663nm和646nm波长下测定吸光度（A）。
根据朗伯-比尔定律，叶绿素的浓度（C）可由吸光度计算得出。
公式如下：C = (11.77A663 -2.59A646) / m / V4.数据记录：记录每个样品在各波长下的吸光度，并计算出叶绿素浓度。
5.数据分析：对所得数据进行统计分析，比较不同样品间的叶绿素含量差异，并绘制柱状图或饼图等图形表示结果。
四、实验结果与数据分析假设我们选取了三种不同植物的叶片进行实验，以下是实验所得的数据：1.三种植物叶片中叶绿素的含量存在差异，其中样品1的叶绿素含量最高，样品3的含量最低。
这可能与不同植物的生物学特性有关。
2.根据所得数据绘制柱状图或饼图等图形，可以直观地展示不同样品间的叶绿素含量差异。
这有助于我们进一步了解植物间的差异以及叶绿素在植物生长和发育中的作用。
叶绿素测定实验方法
叶绿素测定实验方法引言：叶绿素是一种存在于植物和藻类细胞中的绿色色素，它在光合作用中起着至关重要的作用。
因此，测定叶绿素含量对于研究光合作用的过程和效率具有重要意义。
本文将介绍一种常用的叶绿素测定实验方法，通过该方法可以准确快速地测定叶绿素的含量。
实验材料：1. 叶绿素提取液：含有乙醇和醋酸的混合液；2. 磷酸盐缓冲液：用于稀释样品和调整pH值；3. 丙酮：用于去除样品中的类胡萝卜素；4. 乙醇：用于去除样品中的脂类物质；5. 乙酸镁溶液：用于稀释样品和调整pH值；6. 纯水：用于稀释样品和制备试剂。
实验步骤：1. 取一片新鲜的叶片，用研钵将其研磨成细碎的叶浆。
添加适量的磷酸盐缓冲液，使叶浆与缓冲液的体积比为1:10，并搅拌均匀。
2. 将混合物过滤，收集滤液，滤液即为叶绿素提取液。
3. 将叶绿素提取液分装到两个试管中，分别标记为A和B。
4. 在试管A中加入适量的丙酮，用于去除样品中的类胡萝卜素。
搅拌均匀后，使其静置5分钟。
5. 在试管B中加入适量的乙醇，用于去除样品中的脂类物质。
搅拌均匀后，使其静置5分钟。
6. 分别离心试管A和B，将上清液转移到两个新的试管中。
7. 在试管A中加入适量的乙酸镁溶液，用于稀释样品和调整pH值。
搅拌均匀后，使其静置5分钟。
8. 在试管B中加入适量的纯水，用于稀释样品和制备试剂。
搅拌均匀后，使其静置5分钟。
9. 分别使用分光光度计测量试管A和B中溶液的吸光度。
选择适当的波长（通常为665nm和649nm），分别记录吸光度值为A665和A649。
10. 根据公式A = (A665 - A649) × V / M，计算叶绿素的含量。
其中，V为取样体积，M为叶绿素的摩尔吸光系数。
结果分析：通过测量试管A和B中溶液的吸光度，可以计算出叶绿素的含量。
试管A中的溶液经过丙酮处理，去除了类胡萝卜素的干扰；试管B 中的溶液经过乙醇处理，去除了脂类物质的干扰。
因此，通过计算两个试管中溶液的吸光度差，可以准确测定叶绿素的含量。
叶绿素含量测定方法
叶绿素含量测定方法一、引言叶绿素是植物体内的一种重要的生物色素，对于植物的光合作用和生长发育有着至关重要的作用。
因此，测定叶绿素含量对于研究植物生理生态学、环境保护等领域具有重要意义。
本文将介绍几种常用的叶绿素含量测定方法。
二、材料与仪器1. 乙醇：纯度为95%。
2. 醋酸：纯度为99%。
3. 氯仿：纯度为99%。
4. 石油醚：纯度为95%。
5. 甲醛：纯度为37%。
6. 碳酸钠：分析纯。
7. NaOH溶液：浓度为0.1mol/L。
8. 蒸馏水：去离子水或超纯水均可。
9. 离心管、比色皿、移液管等实验器具。
三、方法1. 乙醇法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入95%乙醇中，放置在室温下静置20-24小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的95%乙醇；（5）用分光光度计在663nm和645nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
2. 醋酸法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入80%醋酸中，放置在室温下静置24小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的80%醋酸；（5）用分光光度计在652nm和665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
3. 氯仿-甲醛法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入95%甲醛中，在水浴中加热至90℃保持10分钟；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的氯仿，并振荡混合均匀后静置10分钟；（5）用分光光度计在649nm和665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
4. 石油醚-乙醇法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入石油醚中，放置在室温下静置2-3小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的95%乙醇；（5）用分光光度计在663nm和645nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
5. NaHCO3-NaOH法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入NaHCO3-NaOH缓冲液中，在冰箱中保持暗处理2小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，并用蒸馏水稀释至一定浓度；（5）用分光光度计在665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
叶绿素的测定
叶绿素的测定（分光光度计法）
1.样品的选取
在测定叶片光和作用的枝条上，随机选取3~5片叶子，用水洗净并用滤纸吸干，取其中脉两侧的叶肉组织，取其鲜重0.1g，剪碎放于试管中。
2.叶绿素的提取
在试管中加入10毫升二甲基甲酰氨，加塞，放于阴暗处提取，待样品为白色透明时即表明叶绿素提取完毕。
3.测定
把提取的上清液注入比色杯中，以二甲基甲酰氨为对照，用72G型分光光度计测定在645nm和663nm时的光密度。
4.计算
（1）叶绿素浓度的计算：以Amon公式计算
参考文献：丁圣彦编著的《常绿阔叶林演替系列比较生态学》河南大学出版社.1999年
熊庆娥编著的《植物生理学实验教程》四川科学技术出版社2003年
呼吸速率的测定
卞勇主编的《植物与植物生理》中国农业大学出版社2007。
叶绿素含量的测定及计算
叶绿素含量的测定及计算叶绿素含量的测定及计算方法如下：1. 原理：根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
2. 计算公式：根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即：A=acl。
式中：a为比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，a 为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。
3. 测定波长的选择：在测定叶绿素a、b时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a、h的80%丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663 nm 和645 nm，又知在波长663 nm下，叶绿素a、b在该溶液中的吸光系数分别为82.04和9.27，在波长645 nm下分别为16.75和45.60。
4. 计算：叶绿素a（Ca）、叶绿素b（Cb）和类胡萝卜素（Cx）的浓度可以根据测定的波长吸光度计算得出。
计算公式如下：Ca=（13.95*A665-6.88*A649）；Cb=（24.96*A649-7.32*A665）；Cx=（1000*A470-2.05*Ca-114.8*Cb）/245。
5. 叶绿素含量计算：根据求得的色素浓度（mg/L），再计算出各色素含量（mg/g鲜重表示）。
叶绿素含量（mg/g）=（色素浓度mg/L * 提取液体积ml * 稀释倍数）/(1000 * 样品鲜重g)。
上述信息仅供参考，如果想要获取更多关于叶绿素含量测定的专业指导，可以查阅相关的学术文献或者咨询专业科研人员。
叶绿素含量测定方法
叶绿素含量测定方法
1.酒精提取法
这是一种简单、常用的叶绿素含量测定方法。
首先，将待测样品中的叶绿素溶解到酒精中，然后通过分光光度计测定酒精溶液的吸光度。
根据已知浓度的叶绿素标准溶液的吸光度与浓度之间的关系，可以计算出待测样品中叶绿素的含量。
2.乙醚提取法
这是一种更精确的叶绿素含量测定方法。
首先，将待测样品中的叶绿素溶解到乙醚中，然后通过离心将悬浮液分离成上层乙醚相和下层水相。
接下来，测定乙醚相的吸光度，并根据已知浓度的叶绿素标准溶液的吸光度与浓度之间的关系，计算出待测样品中叶绿素的含量。
3.高效液相色谱法
这是一种更为准确的叶绿素含量测定方法。
首先，将待测样品中的叶绿素提取出来，并经过预处理后注入到高效液相色谱仪中进行分析。
高效液相色谱法可以准确地分离出叶绿素及其衍生物，并通过检测器测定它们的吸光度，从而计算出叶绿素的含量。
4.气相色谱法
这是一种用于测定叶绿素含量的高灵敏度方法。
首先，将待测样品中的叶绿素提取出来，并经过预处理后注入到气相色谱仪中进行分析。
气相色谱法可以准确地分离出叶绿素及其衍生物，并通过检测器测定它们的吸光度，从而计算出叶绿素的含量。
需要注意的是，不同的测定方法在操作和结果上可能存在差异，因此在进行叶绿素含量测定时应选择合适的方法，并根据具体情况进行校正和修正。
总之，准确测定叶绿素含量对于研究植物的生长和光合作用具有重要意义。
通过选择合适的方法并进行准确的操作，可以获得可靠的叶绿素含量数据，为相关研究提供有力的支持。
大学植物生物学实验——叶绿素含量的测定
植物生物学实验(二) 植物生理学基础与综合实验
实验五、 实验五、叶绿体含量的 测定（分光光度法） 测定（分光光度法）
一，实验目的与要求
三、实验步骤
• 提取：叶片洗净、吸干、称重 称重后于研钵中加入 5mL 95%乙醇、少许石英砂和碳酸钙，研磨匀 浆后过滤，再用5mL 95%乙醇冲洗滤渣，定容 混匀； 到10mL，混匀 • 测定：充分过滤后，以95%乙醇调零，测定叶 绿素提取液在649 649nm和664 664nm处的光吸收值。 • 计算： 叶绿素a：C=13.95A664-6.88A649 叶绿素b：C=24.96A649-7.32A665
• 掌握叶绿素a、b含量测定的方法； • 了解不同生境下植物的叶绿素含量和叶 绿素a、b比值。
二、实验材料与试剂
• 95%乙醇。 • 不同生境下的植物叶片。
三、实验原理
• 叶绿素a、b的吸收光谱
• 叶绿素a、b乙醇提取液的光吸收总 和在649nm 665nm处各有一峰值。 649nm和665nm •Lambert-Bear定律： A=nCL n=摩尔消光系数； C=溶液浓度； L=比色杯内径。 •吸光度的相加性 吸光度的相加性： 吸光度的相加性 混合液在某一波长下的吸光度等于各组分 在相应波长下吸光度的总和。
•计算叶绿素含量
叶绿素a（mg/gFW)=? 叶绿素b（mg/gFW)=? 叶绿素a：叶绿素b=?
四、数据分析
• 统计植物生境与叶绿素含量、叶绿素a： b值之间的关系，并分析其生理意义；
பைடு நூலகம்
植物叶绿素测定方法(精)
叶绿素含量的测定一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。
这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：新鲜（或烘干）的植物叶片。
（二）仪器设备：1）分光光度计；2）电子顶载天平（感量0.01g）；3）研钵；4）棕色容量瓶； 5）小漏斗；6）定量滤纸；7）吸水纸；8）擦境纸；9）滴管。
（三）试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮）（v丙酮：v乙醇=2：1的95%水溶液）；2）石英砂；3）碳酸钙粉。
暗中2h，0.5g，25ml三、实验步骤1）取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。
2）称取剪碎的新鲜样品 0.2g ，共3份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml 95%乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白。
静置3～5min。
3）取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
4）用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。
叶片叶绿素的测定
植物叶片叶绿素的测定2014-12-121、目的：测定植物材料叶绿素的含量与组成2、操作2.1（快速）：取叶片0.5g左右与研钵中，加入少许碳酸钙、石英砂，研磨，加入少许80%丙酮或95%酒精，过滤，冲洗，定容50ml。
或者，将叶片放入试管中，加入80%丙酮或95%酒精完全浸没叶片，加胶塞，室温放置24小时，将浸提液转入50ml容量瓶，以溶剂冲洗叶片和试管后收集浸提液，最后定容。
2.2 （简单）：取叶片0.4g左右，记录重量，剪成2-5cm段，放入50ml带盖塑料瓶中，加提取液（80%丙酮或95%乙醇）40ml，使叶片完全浸入液体中，盖严，放入黑暗处，1天后 一次，48小时后，检查叶片是否完全褪绿。
未完全褪绿的，要继续浸泡，已经褪绿的，以分光光度计比色测定。
3、测定，以相应提取剂为对照。
3.1、80%丙酮提取：测定663、645nm下的吸光值Ca（mg/L）=12.72*D663-2.59*D645Cb（mg/L）=22.88*D645-4.68*D663含量mg/g=mg/L*0.05L/0.5g3.2、95%乙醇提取：测定665nm、649nm、470nm下的吸收值Ca（mg/L）=13.95*D665-6.88*D649Cb（mg/L）=24.96*D649-7.32*D665类胡萝卜素Cx =（1000*D470-2.05*Ca-114.8*Cb）/245类胡萝卜素、叶绿素含量mg/g=mg/L*0.04L/0.4g4、注意：一定要有Ca的保护，才能使测定稳定。
附：面粉胡萝卜素（黄色素）的测定：胡萝卜素以水饱和1-butanol室温震荡提取15分钟，14000离心后上清液435nm比色(1 mg of this pigment in 100 mL of watersaturated 1-butanol has an optical density of 1.6632 in a 1-cm)，以β-胡萝卜素表示。
测定植物叶绿素含量的方法
测定植物叶绿素含量的方法
植物叶绿素是一种广泛存在于植物、藻类和一些细菌中的绿色色素，能够在吸收光子的过程中将光能转化为化学能。
因此，测定植物叶绿素含量是衡量植物光合作用效率的重要指标之一。
1. 乙醇提取法
将待测叶片粉碎后加入适量的95%乙醇中，放置于暗处浸泡数小时或过夜，然后离心收集上清液。
测定上清液吸光度，通过比较不同波长下的吸光度值，可计算出叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的含量。
将待测叶片粉碎后加入1.5mL 80%乙醇和0.5mL 1mol/L HCl的混合液中，振荡10分钟后加入玻璃珠摇匀，含有叶绿素的乙醇溶液将变为红褐色。
用0.22µm微孔滤纸过滤，取上清液，用分光光度计测定吸光度值后计算叶绿素含量。
3. 醋酸铜法
将待测叶片加入0.05%醋酸铜溶液中，用滚轴摇匀10分钟后过滤，取上清液后测定吸光度并计算叶绿素含量。
4. 液相色谱法
将待测叶片加入甲醇或乙腈中，使用高效液相色谱仪分析样品中的叶绿素和类胡萝卜素含量。
这种方法需要更为精确的仪器和技术，但可以同时测定多种色素。
无论使用哪种方法测定植物叶绿素含量，都需要注意以下几点：
1. 样品采集应在相同的时间、地点和光照条件下进行，以保证结果可比性。
2. 需要控制乙醇、醋酸铜等试剂用量、摇匀时间和过滤条件等因素，以获得准确的结果。
3. 对于不同种类和部位的植物，可能需要针对性地选择不同的测定方法，并对结果进行修正和比较。
叶绿素等的测定方法
叶绿素等的测定方法叶绿素是存在于植物和藻类细胞中的一种绿色色素，它在光合作用中起着关键作用。
因此，测定叶绿素及其相关的测定方法对于研究植物生理学、光合作用机理以及环境生态学等方面具有重要意义。
下面将介绍几种常用的叶绿素测定方法。
1.全光谱扫描法全光谱扫描法可以用于测定叶绿素a、叶绿素b以及类胡萝卜素的含量。
该方法基于不同波长下叶绿素和类胡萝卜素的吸光度差异，通过测量样品在300-800nm范围内的吸光度来确定其含量。
全光谱扫描法准确度较高，但需要较贵的设备。
2.分光光度法分光光度法是一种常用的测定叶绿素含量的方法。
该方法基于叶绿素和类胡萝卜素在不同波长下的吸光度差异，通过选择波长进行测定。
常用的波长包括470nm、645nm和663nm等。
该方法简单、快速，并且可以用于高通量样品测定。
3.乙醇提取法乙醇提取法是一种常用的叶绿素提取和测定方法。
该方法将叶样品放入乙醇等有机溶剂中，通过溶剂提取叶绿素并使其溶于溶剂中，然后使用分光光度法或高效液相色谱法等测定溶液中叶绿素的含量。
乙醇提取法可以快速提取样品中的叶绿素，适用于大量样品的测定。
4.高效液相色谱法高效液相色谱法是一种高精度的叶绿素测定方法。
该方法基于叶绿素在特定条件下在高效液相色谱柱中的分离和检测，通过测定样品中叶绿素的峰面积或峰高来确定其含量。
高效液相色谱法准确度高，但需要较为复杂的仪器和操作技术。
除了以上介绍的常用方法外，还有一些新兴的测定方法不断涌现，例如荧光光谱法、激光诱导荧光法、红外反射法等。
这些新方法在提高测定精度、扩展测定范围和降低测定成本方面具有优势，正在逐渐得到广泛应用。
综上所述，叶绿素测定方法多种多样，每一种方法都有其特点和适用范围。
在选择合适的测定方法时，需要考虑实验目的、样品种类、所需精度、设备条件和实验操作难易程度等因素，以确定最适合的测定方法。
植物叶绿素测定方法
植物叶绿素测定方法引言：叶绿素是植物叶片中的主要色素，它在光合作用过程中起到了至关重要的作用。
因此，测定叶绿素含量对于研究植物光合作用和生长发育具有重要意义。
本文将介绍一些常用的植物叶绿素测定方法。
一、光谱测定法光谱测定法是通过测量叶片在不同波长下的吸收光谱来间接测定叶绿素含量的方法。
该方法不需要破坏叶片结构，无需显微镜，操作简单，适用于大规模测量。
1.1超级连续光谱仪测定法该方法使用超级连续光谱仪，可以在380-780 nm范围内连续测量光谱，并通过计算吸收峰的面积或最大吸收波长的吸光度来间接测定叶绿素含量。
该方法的优点是快速、准确，并且可以同时测量多个样品。
1.2激光共振散射光谱法该方法使用激光共振散射光谱仪，通过测量散射光在不同波长下的强度，利用散射光和吸收光的关系来计算叶绿素含量。
该方法的优点是高灵敏度、高分辨率，适用于低浓度叶绿素的测定。
1.3荧光光谱法该方法通过测量叶片在受光照射下发出的荧光光谱来间接测定叶绿素含量。
荧光光谱主要包括叶绿素a的激发峰和荧光峰，通过计算两者的比值来推测叶绿素含量。
该方法的优点是快速、非破坏性，适用于大规模测量。
二、色素提取法色素提取法是将叶片中的叶绿素溶解出来，通过分光光度计测量溶液的吸光度来直接测定叶绿素含量的方法。
2.1乙醇提取法该方法将叶片粉碎并浸泡在乙醇中，使叶绿素从叶片中溶解出来，然后通过分光光度计测量乙醇溶液的吸光度。
该方法的优点是简单、易操作，并且适用于多种植物样品。
2.2丙酮提取法该方法将叶片粉碎并浸泡在丙酮中，丙酮具有更高的叶绿素提取效率，然后通过分光光度计测量丙酮溶液的吸光度。
该方法的优点是提取效率高，适用于含有较少叶绿素的样品。
2.3异丙醇提取法该方法将叶片粉碎并浸泡在异丙醇中，使叶绿素从叶片中溶解出来，然后通过分光光度计测量异丙醇溶液的吸光度。
该方法的优点是提取效率高，适用于含有较高叶绿素浓度的样品。
三、色谱测定法色谱测定法是通过将叶片样品中的叶绿素提取出来，并通过高效液相色谱仪进行分析来测定叶绿素含量的方法。
叶片叶绿素含量测定方法
叶片叶绿素含量测定方法
嘿，你问叶片叶绿素含量测定方法啊？那咱就来好好说说。
这叶片叶绿素含量的测定呢，办法有好几种。
一种常见的方法是分光光度法。
首先呢，得把叶片弄碎，弄成小碎片或者粉末状。
就像把饼干掰碎一样，这样才能让后面的操作更容易。
然后呢，用一些溶剂把叶片里的叶绿素提取出来。
一般用丙酮或者乙醇啥的。
这些溶剂就像小魔法师，能把叶绿素从叶片里“变”出来。
接着，把提取出来的叶绿素溶液倒进一个小瓶子里，放到分光光度计里面去测量。
分光光度计就像一个很厉害的眼睛，能看出叶绿素溶液的各种特点。
它会根据叶绿素对不同波长的光的吸收情况，来算出叶绿素的含量。
还有一种方法是叶绿素仪测定法。
这个就比较简单快捷啦。
拿着叶绿素仪，对着叶片一按，就像给叶片拍个照一样，仪器就能显示出叶绿素的相对含量。
不过呢，这个方法不是特别准确，只能大概知道个范围。
打个比方吧，测定叶片叶绿素含量就像找宝藏。
不同的方法就是不同的寻宝路线。
分光光度法就像是仔细地挖
掘，能找到比较准确的宝藏；叶绿素仪测定法就像随便找一找，能知道个大概的位置。
我给你讲个例子哈。
我有个朋友是学植物学的，他要测定一些植物叶片的叶绿素含量。
他先用分光光度法做了一遍，发现好麻烦啊，要准备好多东西，还得等好久。
后来他又用叶绿素仪试了试，很快就得到了结果，虽然不是很准确，但是也能给他一个参考。
从那以后，他就根据不同的情况选择不同的方法来测定叶片叶绿素含量。
所以啊，叶片叶绿素含量的测定方法有很多，要根据自己的需求来选择哦。
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叶绿素含量的测定
一、原理
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。
这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
二、材料、仪器设备及试剂
（一）材料：新鲜（或烘干）的植物叶片。
（二）仪器设备：1）分光光度计；2）电子顶载天平（感量0.01g）；3）研钵；4）棕色容量瓶； 5）小漏斗；6）定量滤纸；7）吸水纸； 8）擦境纸；9）滴管。
（三）试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮）（v丙酮：v乙醇=2：1的95%水溶液）；2）石英砂；3）碳酸钙粉。
暗中2h，0.5g，25ml
三、实验步骤
1）取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。
2）称取剪碎的新鲜样品 0.2g ，共3份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml 95%乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白。
静置3～5m
3）取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
4）用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。
直至滤纸和残渣中无绿色为止。
最后用乙醇定容至25ml，摇匀。
5）把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内，以95%乙醇为空白，在波长663nm 和645nm下测定吸光度。
在波长663nm、645nm下或652nm测定吸光度。
四、实验结果计算
叶绿素a的含量 = 12.7 ⨯ OD
663 – 2.69 ⨯ OD
645
叶绿素a的含量 = 22.9 ⨯ OD
645 – 4.86 ⨯ OD
663
叶绿素a、b的总含量 = 8.02 ⨯ OD
663 + 20.20 ⨯ OD
645。