香肠中亚硝酸盐的测定(原始)

腊肠中亚硝酸盐的测定
组员：董德源 黄海超 李智远 植美昌 林春盛 凌志勇 陈耀 陆霖杰
1实验目的
1.1掌握分光光度法测定香肠中亚硝酸盐的基本原理 1.2 掌握香肠的前处理及严格规范亚硝酸盐样品的提取 1.3 比较不同品牌的香肠中亚硝酸盐的含量 1.4 熟悉可见光分光光度计的使用及测定原理
2 实验原理
试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，生成重氮化合物，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，在538nm 波长下测定其吸光度，根据朗伯-比耳定律，用标准曲线法测定亚硝酸盐含量。

该方法最低检出限为0.0001g ∕kg 。

A==abc （朗伯-比耳定律)
2HCl .H 2NH 2CH 2
+-
-N
-Cl
3H
偶合
CHN 2CH 2NH 2H .2HCl -N -H 3SO
N +HCl
盐酸萘乙二胺
紫红色
2HCl+NaNO 2+H 2
3H
重氮化
H 3SO
-Cl ---
+NaCl 2H +2O
3 实验试剂及设备
3.1 实验试剂：
亚铁氰化钾溶液(106 g/L)：称取5.30 g 亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至50 mL。

乙酸锌溶液(220 g/L)：称取11.0 g 乙酸锌，先加1.5mL 冰醋酸溶解，用水稀释至50 mL。

饱和硼砂溶液(50 g/L)：称取2.5g 硼酸钠，溶于50 mL 热水中，冷却后备用
盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L）：称取0.2 g 盐酸萘乙二胺，溶于100 mL 水中, 混匀后，置棕色瓶中，避光保存。

对氨基苯磺酸溶液（4 g/L）：称取 0.8 ｇ对氨基苯磺酸，溶于200 mL 20 %（V/V）盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。

亚硝酸钠标准溶液（1250μg /mL）：准确称取0.1250ｇ于110℃～120℃干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解移入100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。

亚硝酸钠标准使用液（5.0μg/mL）：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液 1.00 mL，置于250 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度。

3.2 仪器与设备
天平：感量为0.1 mg 和1 mg ，组织捣碎机，超声波清洗器，可见光分光光度计
4实验步骤
4.1 提取
称取5ｇ（精确至0.0001 g）制成匀浆的试样（如制备过程中加水，应按加水量折算），置于50 mL烧杯中，加6.3mL 饱和硼砂溶液，搅拌均匀，以100mL70 ℃左右的水将试样洗入 250 mL容量瓶中，于沸水浴中加热 15 min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。

4.2提取液净化
在振荡上述提取液时加入5 mL 亚铁氰化钾溶液, 摇匀, 再加入 5mL 乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。

加水至刻度, 摇匀, 放置30 min, 除去上层脂肪, 上清液用滤纸过滤, 弃去初滤液15 mL,滤液备用。

4.3 亚硝酸盐的测定
吸取40.00 mL上述滤液于50 mL 容量瓶中，另吸取0.00 mL、0.20 mL、0.40、0.60、0.80、1.00 mL、1.50 mL、2.00mL、2.50mL亚硝酸钠标准使用液，分别置于50mL容量瓶中。

于标准液容量瓶中
与试样容量瓶中分别加入2 mL 对氨基苯磺酸溶液、混匀，静置3 min ～5 min 后各加入1 mL 盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15 min ，用1 cm 比色皿，以空白调节零点，于波长 538 nm 处测吸光度，绘制标准曲线比较。

5 数据记录及结果计算
5.1 数据记录
5.2 数据处理
5.2.1 以吸光度A 为纵坐标，总含亚硝酸盐量（μg ／ml ）为横坐标，求得回归方程为： A=*****C+*** R=***
5.2.2 通过回归方程求得容量瓶的未知样亚硝酸盐的含量： 将Ax= 代入回归方程A= 得到Cx= 5.2.3 计算样品中亚硝酸盐的含量：
3
31000.40100.25000.50--⨯⨯⨯⨯⨯=
O X m C w （mg/kg ）
式中： w … 样品中亚硝酸盐的含量，（mg/kg ）
C x … 容量瓶中未知样亚硝酸盐的含量，（μg ／ml ）
6. 注意事项
6.1处理样品时一定要在碱性条件下进行，pH约为9.18，因为锌盐沉淀蛋白质时，要求在碱性。

二是碱性下处理肉制品，脂肪被皂化，减少样品被脂肪包裹，使亚硝基根更易提取到水溶液中，三是溶液在碱性下亚硝基根以离子存在，易溶且稳定。

6.2为了使亚硝酸提取完全，应该进行热处理，加热时间应控制好时间，约为15分钟。

因为在加热下样品容易挥发，也易分解，造成损失。

6.3盐酸萘乙二胺有致癌的作用，使用时注意安全。