自来水中细菌总数的测定

自来水中细菌总数的测定
【摘要】由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌种数仅是一种近似值[1]。

目前一般采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。

本实验应用平板菌落技术测定水中细菌总数。

通过实验得到：乳白色菌落不规则的分布在培养皿上，经计数，取其平均值得到，菌落数为 53，经计算得1 mL自来水中细菌总数为65 ，符合我国饮用水的标准。

【关键字】自来水，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，平板菌落计数技术，乳白色菌落
前言
水是人类赖以生存和发展的物质基础，饮水安全则是影响人体健康和国计民生的重大问题。

饮用水水质标准是评价饮用水质量优劣程度和供水企业供水水质好坏程度的尺度，也是卫生、水利、城建等部门和相关行业、单位进行水质与卫生管理、监督执法的基础依据[2]。

近年来，由于国际上一些地区和国家频繁发生恶性事件，饮水安全和卫生问题引起了全球的关注，饮水安全已成为全球性的重大战略性问题。

世界卫生组织的调查表明：在发展中国家，各类疾病有80％是因为饮用了不安全、不卫生的水而传播的，每年大约有2000万人死于饮用不卫生的水，饮水安全问题严重地威胁着人类生命[3]。

水中细菌的数目也是判断水质的一个重要标准，我国饮用水标准为[2]：1 mL自来水中细菌总数不得超过100个。

本实验通过计算出水中的细菌总数，从而判断我们在生活中自来水是否符合国家标准，是否受到污染。

水中细菌菌落总数的测定[2]，细菌菌落总数是指水检样经处理, 在肉汁营养琼脂培养基中, 于37℃经24 h培养后, l mL检样中所生长的嗜中温需氧性细菌菌落总数。

一般都采用平板菌落计数法进行测定。

它主要作为判定水被污染程度的标志,。

也可应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态, 以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。

1.仪器和材料
1.1仪器
灭菌三角瓶、灭菌的带玻璃塞瓶、灭菌培养皿、灭菌吸管、灭菌试管等。

1.2材料
牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、蒸馏水、自来水、琼脂、氢氧化钠、盐酸
2.方法
2.1水样的采取
先将自来水龙头用火焰烧灼3 min灭菌，再放开水龙头使水流5 min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。

2.2 制作固体培养基
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下[1]：
牛肉膏 3.0 g
蛋白胨 10.0 g
NaCl 5.0 g
水 1000 mL
PH 7.4～7.6
将培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后到入烧杯。

也可放在称量杯中，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。

在上述烧杯中先假如少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，加入琼脂，再在石棉上加热使其溶解。

将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积。

在未调PH前，先用精密PH试纸测量培养基的原始PH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用PH试纸测其PH，直至PH达7.6。

反之，用1mol/L HCl 进行调节。

2.3 细菌总数测定[4]
2.3.1 采样
用灭菌吸管吸取l ml水样，注入灭菌培养皿中，并快速盖上培养皿盖。

共做两个平皿。

2.3.2 水样接种
分别倾注约15 mL己溶化并冷却到45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基到培养皿中，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。

另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15 mL作空自对照。

2.3.3 培养
待培养基凝固后，倒置于37℃ 温箱中，培养24 h。

2.3.4 记数
两个平板的平均菌落数即为lml水样的细菌总数。

2.3.5 菌落计数方法
先计算相同条件两个平板的平均菌落数。

若其中一个平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的平板作为该平板的菌落数。

以菌落生长均匀为好，选两平板菌落数求其平均值。

上述求得的平均值减去空白对照的菌落数，即为1 mL水样中的细菌总数[5]。

3.结果与分析
3.1结果
表1 平板培养菌落生长记数
平板编号菌落数/个 1ml自来水中细菌总数/个
1 21 53
2 32 86
对照组 4 ——
根据表1中所得数据，我们可以计算出1 ml自来水中细菌的总数：两个平板菌落之和的平均数-对照组的菌落数，即（ 53 + 86 ）/ 2 – 4 = 65.5。

因细菌是一个整体生物不存在小数，所以1 mL自来水中的细菌总数是65。

3.2 分析
在实验中我们得到1 mL自来水中的细菌总数为65个，没有超过我国的饮用标准：即1 mL 自来水中的细菌总数不得超过100个。

水中细菌总数可反映出水体被有机物污染的程度，细菌数越多，说明水中有机物的含量就越高[6]。

而通过实验可以看到，我们现在饮用的水合乎卫生标准，饮用后就不会对人体产生危害。

3.3讨论
通过本实验，我们可以知道平板菌落技术法是测定水样中细菌个数比较方便的方法，但它也存在不准确的因素，比如在数菌落时，菌落太小且又处于培养基内部，这样就不能观察到菌落，从而影响结果；又如在培养过程中由于细菌之间的相互抑制也会使计数菌落减少。

因此，我们只有在不需要精确的情况下才可以使用此方法。

4.结语
细菌是微生物界的一个大类群，它与人类的生活密切相关，其中有的有益，有的有害，为了我们更好的生活，我们必须研究细菌，并掌握一些方法，来使细菌向人类有用的方面发展[7]。

The total number of bacteria in tap water Determination Abstract:This experiment tablet colony Determination of the total number of bacteria technology. Because many types of bacteria in water, their nutrition and other growth conditions of the required vary greatly, it is impossible to find a medium in a condition so that the water can all bacterial growth and reproduction, therefore, a certain level of growth medium plate by the colony and the calculated number of species of bacteria in the water is an approximation only. At present the general ordinary beef extract peptone agar medium. Through experiments: milky white colonies in the irregular distribution plate, with the count, choose received average, 53 colonies, with 1 mL of water in the total number of bacteria in 65, in line with China's drinking water standards.
Keyword: W ater, Beef extract peptone agar medium,Flat colony counting technology, Milky white colonies.
【参考文献】
[1] 沈萍、范秀容等.微生物学实验（第三版）.北京：高等教育出版社.1999 .182～183
[2]百度.食品卫生的微生物学检测.
/shipinfenxi/shishifanganer5.htm
[3] 刘红霞、王祥峰等.细菌测定方法研究.福建：福建分析测试.2006.15（4）：41～42
[4] 钱存柔、黄仪秀.微生物学实验教程.北京：北京大学出版社.1999
[5] 赵斌、何绍江.微生物学实验.北京：科学出版社.2002
[6] 黄秀梨.微生物学实验指导.北京：高等教育出版社.1999
[7] 沈萍、陈向东.微生物学（第二版）.北京：高等教育出版社.2006。