GIP受体抑制剂对诱导的糖尿病小鼠糖脂代谢的研究

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GLP_1受体激动剂及DPP_抑制剂的研究进展

学报
Journal of China Pharm aceutical U n iversity 2008, 39( 5): 385- 391
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药学前沿
GLP 1受体激动剂及 DPP 抑制剂的研究进展
周映红, 黄文龙* , 张惠斌, 对糖尿病治疗药胰高血糖素样肽 1( G LP 1)受体激动剂和二肽基肽酶 ( DPP ) 抑制剂的研究进展进行了综述。介绍了 G LP 1的血糖调控机制, 还对 GLP 1受体激动剂 ( 如 Ex endin 4, Exentide LAR, L irag lutide, C JC 1131, 非肽类 GL P 1受体激动剂 ) 和 DPP 抑制剂 ( 如 Sitag liptin, V ildag liptin, Saxag liptin, A log liptin) 进行了详细的介绍, 为 2型糖尿病治疗药物的研发提供参考。
Buse等 [ 11] 进行了一项长达两年的临床跟踪调查, 研究对象为 974名患者, 观察的指标包括糖化血红蛋白 ( H bA1c )、空腹血浆葡萄糖水平 ( FPG )、体重、血压、胰岛细胞的分泌功能 ( HO MA B) 、胰岛素敏感性 ( HOMA S) 以及对肝脏功能 ( 丙氨酸转氨酶, ALT ) 的影响。统计结果显示 H bA1c下降 ( 1 1 ! 0 1) % , FPG 下降 ( 25 2 ! 2 8) m g /dL, 这两个指标在第 12 周观察到的数据分别是下降 ( 1 1 ! 0 1) % 和 ( 25 1 ! 2 4) m g / dL。表明 Exendin 4可将 H bA 1c维持在一个正常或相对较低的水平。体重下降 ( 4 7 ! 0 3) % , 其中 81% 的患者伴有体重下降的症状。HOMA B 和 HOMA S与治疗前相比都有明显改善, 表明其对胰岛细胞具有保护功能。对于原来 ALT 水平正常的患者 ALT 值没有明显变化, 而 ALT 较高的患者则明显的下降, 幅度为 ( 11 ! 1) IU /L ( P < 0 05) , 说明对肝功能有所改善。血压平均下降 4 4 mmH g ( 舒张压和收缩压都下降 ) , 高密度脂蛋白胆固醇 ( HDL C ) 平均上升 7 3 m g / dL; 甘油三酯 ( TG) 平均下降 9 3 m g /dL。血压、HDL C和 TG是 2型糖尿病治疗中的 3个心血管危险因子, 一般的药物治疗会引起血压上升, HDL C下降和 TG水平上升, 增加了心血管危险性, 相比之下, Exendin 4不存在这种问题。 [ 11]

基于leptin-AMPK-ACC通路探究西格列汀对2型糖尿病大鼠糖脂代谢的改善作用

乔鹏等基于leytii-AMPK-ACC通路探究西格列汀对2型糖尿病大鼠糖脂代谢的改善作用第7期•30•基于leiUv-AMPK-ACC通路探究西格列汀对0型糖尿病大鼠糖脂代谢的改善作用乔鹏朱亮张华马妍菁王晓晖（苏州大学附属第二医院药剂科，江苏苏州215004）〔摘要〕目的探究西格列汀对2型糖尿病（T2DM）大鼠糖脂代谢的改善作用及对瘦素（lexUh--腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）-乙酰辅酶A羧化酶（ACC）通路的影响。

方法选取44只SD雄性大鼠，分12只为正常对照组，在18~26t下，湿度45%-55%的干净笼子里用新鲜干燥的饲料进行随时采食。

剩余34只大鼠建立T2DM大鼠模型，通过喂养高糖高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素（STZ）进行建模。

建模成功的26只大鼠随机分为T2DM模型组（8只）、西格列汀组（9只）、二甲双胍对照组（9只1。

西格列汀组进行34mg/kg灌胃，连续给药4w；二甲双胍对照组给药二甲双胍腹腔注射104mg/kg。

正常对照组与糖尿病模型组均给予等量生理盐水。

采用放射免疫法测量血清中空腹胰岛素（FIAS），采用酶法测定空腹血糖（FBG）,采用糖化血红蛋白分析仪测定血浆中糖化血红蛋白（H b A5）,采用酶比色法测定三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-P）和高密度脂蛋白胆固醇（HDLT）、内脂素（Visfad/）、抵抗素（ReWsti/）、脂联素（APN）水平。

采用Western 印迹法检测LepU/、AMPK、ACC,使用苏木素-伊红（HE）染色法对大鼠肝脏细胞进行观察分析。

结果与正常对照组比较,T2DM 模型组FINS、HDLN、AMPK均显著下降,FBG、HbA-c、TG、TC、LDLN、Lepti/、ACC均显著上升（P<4.45）；与T2DM模型组比较,西格列汀组FINS、HDL-C、AMPK、ACC均显著上升,FBGIHbAlc、TGITC、LDLN、Leptih显著下降（P<4.45）；与西格列汀组比较,二甲双胍对照组TC、TG、LDLN、Visfad/、LepUv显著上升,FINS、AMPK、FBG、HbA-c、ACC、HDLN显著下降（P<045）。

荔枝核多糖提取物对四氧嘧啶致糖尿病小鼠降糖作用

荔枝核多糖提取物对四氧嘧啶致糖尿病小鼠降糖作用袁红【摘要】目的研究荔枝核多糖提取物对四氧嘧啶致糖尿病小鼠的降糖作用.方法采用四氧嘧啶腹腔注射建立糖尿病小鼠模型,给予荔枝核多糖(400 mg/kg bw)灌胃治疗,连续灌胃30 d后,采血测定空腹血糖和餐后1 h血糖、丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、总胆固醇、甘油三酯、肌酐、尿素等生化指标.结果荔枝核多糖提取物能显著降低糖尿病小鼠空腹和餐后1 h血糖(P＜0.05),能显著控制餐后1 h血清丙氨酸氨基转移酶、总胆固醇、甘油三酯、尿素水平(P＜0.05或P＜0.01),但对天门冬氨酸氨基转移酶、肌酐水平影响不明显.结论荔枝核多糖提取物对糖尿病模型小鼠具有降血糖、调血脂和保护肝脏、肾脏的作用,具有开发应用前景.【期刊名称】《健康研究》【年(卷),期】2010(030)004【总页数】5页(P252-255,261)【关键词】荔枝核;多糖;糖尿病;血糖【作者】袁红【作者单位】杭州师范大学,医学实验中心,浙江,杭州,310036【正文语种】中文【中图分类】R282糖尿病已成为继肿瘤、心血管病变之后第三大严重威胁人类健康的慢性疾病，在我国已成为多发病和常见病，其发病率高达3.4%，尤其40岁以上人群中糖尿病的标化患病率为5.89%，呈明显的上升趋势［1］，严重威胁着国人的身心健康和生活质量，迫切需要安全、无毒副作用，能防治高血糖的纯天然保健食品。

荔枝核系无患子科植物荔枝Litchi chinensis Sonn.的种子，主产于两广，性味甘、温、涩，无毒。

入肝、肾经，具有温中、理气、止痛的功效。

研究表明荔枝核有降血糖、调血脂、抗氧化作用，临床上常用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病［2－3］。

植物多糖素有降血糖的作用［4－5］。

本文用荔枝核为原料，提取多糖，探讨其对正常小鼠和四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的影响，旨在为荔枝核降糖药物的开发利用提供参考。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 试剂和仪器荔枝核购于杭州中药饮片厂，格列齐特（太原世乐药业有限公司，国药准字H14020012），血糖仪及血糖试纸（美国Life Scan）、全自动生化分析仪（日本HITACHI 7020）。

《FGF21---小鼠引起的糖脂代谢异常与毛囊生长状态相关性研究》范文

《FGF21---小鼠引起的糖脂代谢异常与毛囊生长状态相关性研究》篇一FGF21---小鼠引起的糖脂代谢异常与毛囊生长状态相关性研究一、引言近年来，随着对生物医学研究的深入，基因敲除小鼠模型在研究人类疾病机制及药物开发中发挥着越来越重要的作用。

FGF21基因作为成纤维细胞生长因子家族的一员，其功能与糖脂代谢密切相关。

本研究旨在探讨FGF21-/-小鼠糖脂代谢异常与毛囊生长状态之间的相关性，以期为相关疾病的预防和治疗提供新的思路和依据。

二、方法本研究采用基因敲除技术制备FGF21-/-小鼠模型，并对其进行糖脂代谢及毛囊生长状态的观察和检测。

具体方法如下：1. 制备FGF21-/-小鼠模型，并设立野生型小鼠作为对照组。

2. 对小鼠进行糖脂代谢相关指标的检测，包括血糖、血脂等。

3. 观察并记录小鼠毛囊生长状态，包括毛囊密度、毛发长度和颜色等。

4. 结合病理学手段，对毛囊组织进行显微镜观察和病理学分析。

三、结果1. 糖脂代谢异常表现FGF21-/-小鼠表现出明显的糖脂代谢异常，其血糖、血脂水平显著高于野生型小鼠。

其中，空腹血糖和总胆固醇水平的升高尤为明显。

2. 毛囊生长状态变化FGF21-/-小鼠毛囊生长状态出现异常，表现为毛囊密度降低、毛发长度变短、颜色变浅。

显微镜下观察可见毛囊结构异常，部分毛囊出现萎缩现象。

3. 相关性分析通过对FGF21-/-小鼠糖脂代谢异常与毛囊生长状态的相关性分析，发现两者之间存在显著的正相关关系。

即糖脂代谢异常越严重，毛囊生长状态越差。

四、讨论本研究结果表明，FGF21-/-小鼠糖脂代谢异常与毛囊生长状态之间存在显著的相关性。

这可能与FGF21基因在糖脂代谢和毛囊生长中的重要作用有关。

FGF21基因的缺失可能导致糖脂代谢紊乱，进而影响毛囊的生长和发育。

此外，糖脂代谢异常还可能通过其他途径影响毛囊生长，如影响毛囊细胞的能量代谢、炎症反应等。

针对这一现象，未来可进一步研究FGF21基因在糖脂代谢和毛囊生长中的具体作用机制，以及通过药物或其他手段调节FGF21基因表达来改善糖脂代谢和毛囊生长状态的可能性。

电针对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗大鼠下丘脑β淀粉样蛋白、Tau蛋白磷酸化水平与糖原合成酶激酶-3的影响

ʌ实验研究ɔ电针对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗大鼠下丘脑β淀粉样蛋白㊁Tau 蛋白磷酸化水平与糖原合成酶激酶-3的影响❋王静芝1,杜艳军1ә,陈㊀丽1,黄浏娇2,瞿㊀涛1,周焕娇1,陈㊀茜1(1.湖北中医药大学针灸骨伤学院/针灸治未病湖北省协同创新中心,武汉㊀430061;2.湖北中医药大学中医临床学院,武汉㊀430061)㊀㊀摘要:目的:观察电针对IR 大鼠下丘脑β淀粉样蛋白(Aβ42)㊁Tau 蛋白磷酸化(p-Tau )水平表达与糖原合成酶激酶-3(GSK-3)蛋白表达的影响㊂方法:70只Wistar 大鼠随机分为正常组㊁模型组㊁预防组㊁电针组㊁预防+阻滞剂组㊁电针+阻滞剂组和脑脊液组各10只,电针治疗后ELISA 法检测各组空腹血糖(FPG )㊁胰岛素(FINS )与胰岛素抵抗指数(IRI )水平变化,免疫组织化学检测下丘脑Aβ42㊁p-Tau 阳性表达,Western blot 检测GSK-3α和GSK-3β蛋白表达㊂结果:(1)较模型组大鼠,预防组和电针组大鼠FPG ㊁FIN ㊁IRI 降低(P <0.01),下丘脑Aβ42和p-Tau 阳性表达减少(P <0.05或P <0.01),下丘脑GSK-3α和GSK-3β蛋白表达降低(P <0.05或P <0.01);(2)较电针组大鼠,预防组大鼠FPG ㊁FIN ㊁IRI 降低(P <0.05),下丘脑GSK-3α和GSK-3β蛋白表达降低(P <0.05);(3)较电针+阻滞剂组,预防+阻滞剂组大鼠FPG ㊁FINS 与IRI 均降低(P <0.01),GSK-3β蛋白表达增加(P <0.05)㊂结论:电针改善IR 大鼠FPG ㊁FINS 及IRI 水平,其作用机制可能与电针抑制GSK-3α和GSK-3β蛋白表达㊁降低Aβ42和p-Tau 阳性表达相关㊂㊀㊀关键词:电针治疗;胰岛素抵抗;Aβ42;p-Tau ;GSK-3α;GSK-3β㊀㊀中图分类号:R245.9+7㊀㊀文献标识码:B㊀㊀文章编号:1006-3250(2021)05-0760-05❋基金项目:国家自然科学基金面上项目(81473786)-基于针灸抗炎作用防治阿尔茨海默病星形胶质细胞介导的β-淀粉样蛋白代谢机制研究;国家自然科学基金青年基金项目(81804170)-电针通过SIRT1/ATG7介导的自噬途径调节肝脏脂质代谢改善胰岛素抵抗的机制研究;国家自然科学基金青年基金项目(81904276)-电针通过mTORC1/S6K1自噬途径改善胰岛素抵抗大鼠认知功能损害的机制研究作者简介:王静芝(1983-),女,讲师,博士研究生,从事腧穴配伍及其效应机制研究㊂ә通讯作者:杜艳军(1975-),女,江苏连云港人,教授,博士研究生,博士研究生导师,从事针灸防治神经系统疾病的临床与实验研究,Tel :136****4878,E-mail :1051700031@ ㊂Effects of Electro-acupuncture on The Amyloid Protein βand Phosphorylation Levelsof Tau Protein and GSK-3in Hypothalamus of Insulin ResistanceRats Induced by High-fat DietWANG Jing-zhi 1,DU Yan-jun 1ә,CHEN li 1,HUANG Liu-jiao 2,QU Tao 1,ZHOU Huan-jiao 1,CHEN Qian 1(1.College of Acupuncture Moxibustion and Orthopaedics,Hubei University of Chinese Medicine /Hubei Provincial Collaborative Innovation Center of Preventive Treatment by Acupuncture and Moxibustion,Wuhan 430061,China,2.Clinical College of Chinese Medicine,Hubei University of Chinese Medicine,Wuhan 430061,China)㊀㊀Abstract :Objective :To observe the electro-acupuncture effect on the hypothalamic expression levels of Aβ42,phosphorylated Tau protein ,GSK-3αand GSK-3βin insulin resistance model rats.Method :70Wistar rats were divided into 7groups ,10rats in each group.Fasting plasma glucose and FINs will detect after the treatment by Elisa method ,expression levels of hypothalamic Aβ42,phosphorylated Tau protein will detected via immunohistochemistry method ;expression levels of hypothalamic GSK-3αand GSK-3βwill detected via western-blotting.Result :(1)Compared with model group ,FPG ,FINS ,ISI reduced (P <0.01),expression levels of hypothalamic Aβ42,phosphorylated Tau protein decreased (P <0.05or P <0.01),expression levels of hypothalamic GSK-3αand GSK-3βdecreased (P <0.05or P <0.01)in pre-EA group and EA group ;(2)Compared with EA group ,FPG ,FINS ,ISI reduced (P <0.05),expression levels of hypothalamic GSK-3αand GSK-3βdecreased (P <0.05)in pre-EA group ;(3)Compared with electro-acupuncture plus blocker LY294002group ,FPG ,FINS ,ISI reduced (P <0.05),expression levels of hypothalamic GSK-3βincreased (P <0.05)in pre-EA plus blocker LY294002group ;Conclusion :The mechanism of electro-acupuncture improvement on peripheral blood levels of FPG ,FINS and IRI in insulin resistance model rats ,is pertaining to the regulation of inhibiting the expression of GSK-3αand GSK-3β,and reduces the positive expression of Aβ42and p-Tau.㊀㊀Key words :Electro-Acupuncture ;Insulin Resistance ;Aβ42;p-Tau ;GSK-3α;GSK-3β㊀㊀随着人口老龄化日益严重,老年期痴呆的发病率呈上升趋势㊂轻度认知功能损害(mild cognitive impairment,MCI)是介于正常老化和痴呆之间的一种不稳定的认知损伤状态,每3~4年有20%~66%的MCI患者认知功能持续恶化,最终导致痴呆的发生,其中大部分为阿尔茨海默型痴呆(alzheimer disease,AD),MCI是AD的重要危险因素[1-2]㊂胰岛素对中枢神经系统的影响包括摄食行为㊁能量储存㊁记忆认知功能[3],中枢胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)可以引起轻度认知功能损害,轻㊁中度认知功能下降[4]㊂Aβ是由淀粉样前体蛋白(APP)经β-和γ-分泌酶的蛋白水解作用产生,Aβ的増加与沉积可通过生成具有神经毒性的老年斑诱发神经元变性与死亡㊂神经元微管相关蛋白(Tau蛋白)过度磷酸化则是认知功能损害的又一发病机制[5-6]㊂胰岛素信号转导通路PKB/Akt的生理底物糖原合成酶激酶-3 (glucogen synthase kinase-3,GSK3),具有GSK-3α和GSK-3β2种形式的异构体,其活性与Aβ沉积㊁tau 蛋白过度磷酸化密切相关[7]㊂本研究在造模同时给予受试动物电针预防性治疗,与造模成功后的电针治疗组作为对照,旨在观察电针预防性治疗对胰岛素抵抗大鼠认知功能的保护作用㊂并通过观察各组大鼠下丘脑Aβ42㊁p-tau㊁GSK-3α与GSK-3β表达变化与差异,探讨电针治疗在防治胰岛素抵抗大鼠轻度认知功能损害的效应机制㊂1　材料与方法1.1㊀实验动物选用清洁级雄性Wistar大鼠70只,8周龄,体质量(180ʃ20)g,购自湖北省实验动物研究中心,实验动物许可证号SCXK(鄂)2015-0018㊂饲养于湖北中医药大学实验动物中心,饲养环境温度18~ 25ħ,湿度45%~55%㊂1.2㊀主要试剂与仪器高脂饲料(上海斯莱克实验动物有限责任公司),Aβ42㊁p-Tau(美国abcam,b10148㊁ab109390), Dako REAL EnVision Detection System(安捷伦(Dako),K5007)㊂小鼠单抗β-actin(42KD)(武汉博士德生物工程有限公司,BM0627),兔多抗GSK3α(51KD)㊁兔多抗GSK3β(48KD)(武汉三鹰生物技术有限公司,13419-1-AP㊁22104-1-AP), HRP标记羊抗小鼠二抗㊁HRP标记羊抗兔二抗(武汉博士德生物工程有限公司,BA1051㊁BA1054),磷酸酶抑制剂㊁PMSF㊁RIPA裂解液㊁BCA蛋白浓度测定试剂盒(碧云天,S1873㊁ST506㊁P0013B㊁P0010), TEMED㊁Trise-Base(Amresco,Amresc00761㊁Exp2017/12),HCl(信阳市化学试剂厂,GB622-89),Tris-base(西格玛奥的(上海)贸易有限公司,v900483)㊂RM2016轮转式病理切片机(德国Leica公司);JK-6生物组织摊烤片机(武汉俊杰电子有限公司);SKG抗原修复用电陶炉;电泳仪(Bio-Rad);转膜仪(Bio-Rad);凝胶扫描成像系统(Bio-Rad); BX53型显微镜(奥林巴斯生物显微镜),LP115pH 计(德国Metter-Toledo GmbH公司);酶标仪(Thermo,mμLISKANMK3);HI650离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司);华佗牌毫针(苏州医疗用品厂有限公司)㊂1.3㊀分组与造模适应性喂养3d后按随机数字表法分为正常组(normal,N)㊁模型组(model,M)㊁预防组(preventing electro-acupuncture,p-EA)㊁电针组(electro-acupuncture,EA)㊁预防+阻滞剂组(p-EA+ blocker LY294002,p-EA+b)㊁电针+阻滞剂组(EA+ blocker LY294002,EA+b)㊁脑脊液组(cerebrospinal fluid,CSF)各10只㊂正常组(N)给予标准饮食(3.8kcal/g,含70%碳水化合物,20%蛋白质,10%脂肪),其余各组采用高脂饲料(5.4kcal/g,含38.5%碳水化合物,15%蛋白质,46.5%脂肪)㊂喂养8周后大鼠尾静脉采血检测FPG㊁FINS,IRI=[FPG (mmol/L)ˑFINS(mIU/L)]/22.5,模型大鼠IRI与正常大鼠比较明显升高时(P<0.001)为造模成功[8]㊂1.4㊀电针干预1.4.1㊀EA组㊀大鼠于造模成功后,使用0.30ˑ25mm不锈钢毫针,参照李忠仁主编‘实验针灸学“[9],以标本配穴电针方法选择关元㊁足三里(后三里)㊁丰隆和百会进行毫针针刺㊂足三里和丰隆穴直刺5~10mm,关元穴向剑突方向斜刺5~7mm,百会向后方平刺5mm㊂采用电针治疗仪(HANS-100 A型)连续波㊁频率(2Hz)㊁强度(1mA)㊁通电(10 min),同侧足三里穴和丰隆穴连接同一输出的2个电极,刺激强度根据局部肌肉收缩情况决定㊂每日电针10min,每周5次治疗,总疗程为8周㊂以上采取的刺激频率和电针时间㊁疗程综合文献报道决定[10]㊂1.4.2㊀p-EA组㊀从造模开始进行电针治疗,电针方法同EA组,持续16周㊂1.4.3㊀p-EA+b组㊀大鼠称重后以10%水合氯醛(30mg/kg)腹腔麻醉㊂将大鼠固定于脑立体定位仪,头顶局部常规备皮㊁消毒,依照立体定位图谱进行定位,于前囟后0.8mm在中位颅盖骨处用牙科钻钻一直径2mm的孔[11-12],以不锈钢导管插入(长18.0mm,外径0.64mm,内径0.39mm)留置(如图1);用带帽的不锈钢制导丝插入导管内封闭导管㊂手术后预防感染,将大鼠置于空笼内待6~8 h可清醒㊂术后2d起取LY294002(10μm, 10μL;1μL/min)缓慢注射,留针8~10min,以防药物沿针道返流颅外㊂电针治疗同p-EA 组,共计16周㊂1.4.4㊀EA +b 组㊀造模成功后,每日电针干预前1h ,大鼠称重后进行脑室灌注LY294002㊂脑室灌注同p-EA +b 组㊂电针治疗同EA 组,持续8周㊂1.4.5㊀CSF 组㊀大鼠称重后脑室留管同EA +b 组㊂脑脊液:Na +145.5ml /L ,K +2.8mol /L ,Ca2+2.3mol /L ,Mg2+2.2mol ,Cl -128.5mol /L ,HCO3-23.1mol /L ,H2Po4-l.lmol /L ,葡萄糖0.6lg /L ,渗透压289.omosM /L ,PH 值7.3配置完成等量灌注,操作方法同EA +b 组㊂电针治疗同EA 组㊂图1㊀大鼠脑立体定位及置管示意图1.5㊀指标收集与检测1.5.1㊀ELISA 法检测㊀大鼠空腹FPG ㊁FIN 实验16th 周治疗结束后,各组大鼠禁食12h 以尾静脉采血静置,离心取上清㊂ELISA 法按试剂盒操作要求检测各组大鼠空腹FPG ㊁FIN 并计算各组大鼠IRI ㊂1.5.2㊀免疫组化㊀各组大鼠禁食12h 颈椎脱臼法处死,冰上剥取下丘脑,右侧下丘脑组织-80ħ保存备用㊂左侧下丘脑组织用多聚甲醛(4%)固定后,酒精脱水并进行浸蜡及包埋㊂切片厚度4μm ,经脱蜡㊁抗原修复,滴加一抗(Aβ421ʒ100,p-tau ㊀㊀㊀1ʒ100)㊁二抗,镜下观察并完成镜检拍照㊂使用IPP6.0软件对免疫组化照片进行光密度分析,每张切片选取3张400倍照片做光密度分析,area 为面积,IOD 为积分光密度,density (mean )为平均光密度㊂1.5.3㊀Western blot 检测㊀从-80ħ冰箱中取出下丘脑组织,加入400μL 裂解液(含PMSF )碾磨㊁裂解离心取上清,使蛋白变性㊂BSA 标准品稀释为1㊁0.8㊁0.6㊁0.4㊁0.2标准蛋白,采用DG-3022A 酶标仪测定OD568并计算蛋白浓度㊂蛋白样品(40μg )和Marker 加入上样孔,电泳1.5h ㊂凝胶根据Marker 切下目的条带,PVDF 膜甲醇浸泡后同滤纸浸泡于电转缓冲液㊂PVDF 膜浸泡于含5%脱脂奶粉TBST ,室温摇床封闭2h ;浸泡一抗(β-actin 1ʒ200,GSK3-α1ʒ500,GSK3-β1ʒ1000),封闭液稀释相应的HRP 标记二抗(1ʒ50000),采用BandScan 分析胶片灰度值㊂1.6㊀统计学方法采用SPSS 统计软件Version 24.0进行统计分析,所有数据以均数ʃ标准差(x ʃs)表示,采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD 检验,P <0.05为差异有统计学意义㊂2㊀结果2.1㊀各组大鼠FPG ㊁FINS 与IRI 水平变化比较表1示,治疗结束与N 组比较,其他各组大鼠FPG ㊁FINS 与IRI 明显升高(P <0.05或P <0.01);与M 组比较,p-EA 组㊁EA 组㊁p-EA +b 组与CSF 组大鼠FPG ㊁FINS 和IRI 均有不同程度降低(P <0.05或P <0.01);与EA 组比较,p-EA 组大鼠的FINS 与IRI 降低(P <0.05),EA +b 组FPG ㊁FINS 与IRI 升高(P <0.05),p-EA +b 组大鼠的FPG 与IRI 升高(P <0.05);与EA +b 组比较,p-EA 与CSF 组大鼠的FPG ㊁FINS 和IRI 降低(P <0.05),p-EA +b 组大鼠的FINS 与IRI 升高(P <0.05);与CSF 组比较,p-EA +b 组大鼠的FPG ㊁FINS 与IRI 升高(P <0.05)㊂表1㊀各组大鼠FPG ㊁FINS ㊁IRI 水平比较(x ʃs )组别鼠数FPG (mmol /L )FINS (mU /L )IRIN 组10 6.02ʃ0.5513.89ʃ0.323.71ʃ0.37M 组1012.42ʃ1.16∗∗29.73ʃ9.32∗∗16.41ʃ5.47∗∗p-EA 组107.98ʃ0.60∗##һ26.07ʃ0.48∗∗#ʏһ9.24ʃ0.68∗#ʏһEA 组108.81ʃ1.62∗#һ28.76ʃ0.92∗∗#11.26ʃ2.12∗∗#EA +b 组1011.86ʃ1.39∗ʏ33.02ʃ0.75∗∗ʏ17.41ʃ7.49∗∗ʏp-EA +b 组1011.11ʃ1.71∗#ʏӘ28.96ʃ4.79∗∗һӘ14.29ʃ3.49∗∗ʏһӘCSF 组107.48ʃ0.66∗#һ29.86ʃ0.77∗∗#һ9.93ʃ4.27∗#һ㊀㊀注:与N 组比较:∗∗P <0.01,∗P <0.05;与M 组比较:##P <0.01,#P <0.05;与EA 组比较:ʏP <0.05;与EA +b 组比较:һP <0.05;与CSF 组比较:ӘP <0.05㊀㊀2.2㊀各组大鼠下丘脑Aβ42与p-Tau 表达比较图2示,第16周电针治疗结束时,黑色箭头所示棕黄色或棕褐色细胞膜是各组大鼠下丘脑Aβ42㊁p-Tau 的阳性表达㊂N 组与p-EA 组大鼠下丘脑见极少量棕黄色或棕褐色淡染的阳性细胞;EA 组㊁p-EA +b 组与CSF 组大鼠下丘脑偶见棕黄色或棕褐色淡染的阳性细胞;M 组㊁EA +b 组棕黄色或棕褐色阳性表达聚集数量多,着色深㊂图2㊀各组大鼠下丘脑Aβ42与p-Tau 免疫组织化学(ˑ400)㊀㊀表2示,M 组㊁p-EA 组㊁EA 组㊁EA +b 组㊁p-EA +b 组㊁CSF 组大鼠Aβ42㊁p-Tau 的阳性表达明显高于N 组(P <0.05或P <0.01);p-EA 组㊁EA 组大鼠Aβ42㊁p-Tau 的阳性表达低于M 组㊁EA +b 组㊁CSF 组(P <0.05或P <0.01);EA 组与p-EA 组大鼠之间Aβ42㊁p-Tau 的阳性表达差异无统计学意义;p-EA +b 组与CSF 组大鼠Aβ42阳性表达差异无统计学意义㊂表2㊀各组大鼠下丘脑Aβ42㊁p-Tau 平均光密度比值及下丘脑GSK-3α㊁GSK-3β蛋白表达比较(/β-actin ,x ʃs )组别鼠数density (mean )Aβ42p-TauGSK-3αGSK-3βN 组100.0047ʃ0.001㊀㊀㊀0.0007ʃ0.003㊀㊀㊀0.284ʃ0.02㊀㊀㊀0.349ʃ0.01㊀㊀㊀M 组100.0142ʃ0.002∗∗0.0117ʃ0.001∗∗0.598ʃ0.02∗∗0.770ʃ0.01∗∗p-EA 组100.0061ʃ0.008∗∗##һһӘ0.0012ʃ0.001∗##һһ0.329ʃ0.01∗##ʏһ0.404ʃ0.02∗##ʏһEA 组100.0092ʃ0.008∗#ʏӘ0.0013ʃ0.002∗##0.401ʃ0.02∗#0.436ʃ0.03∗##EA +b 组100.0136ʃ0.003∗∗ʏ0.0062ʃ0.001∗∗##ʏ0.442ʃ0.03∗∗#ʏӘ0.497ʃ0.03∗##ʏӘp-EA +b 组100.0110ʃ0.002∗∗ʏʏ0.0047ʃ0.002∗∗##ʏһӘӘ0.475ʃ0.02∗∗#ʏӘ0.587ʃ0.03∗∗#ʏʏһӘCSF 组100.0107ʃ0.008∗∗#ʏһ0.0017ʃ0.002∗##һ0.539ʃ0.01∗∗ʏ0.641ʃ0.04∗∗#ʏʏһһ㊀㊀注:与N 组比较:∗∗P <0.01,∗P <0.05;与M 组比较:##P <0.01,#P <0.05;与EA 组比较:ʏʏP <0.01,ʏP <0.05;与EA +b 组比较:һһP <0.01,һP <0.05;与CSF 组比较:ӘӘP <0.01,ӘP <0.05㊀㊀2.3㊀各组大鼠下丘脑GSK-3α和GSK-3β蛋白表达比较表2图3示,与N 组比较,其他各组大鼠下丘脑GSK-3α㊁GSK-3β蛋白表达增加(P <0.05或P <0.01);与M 组比较,p-EA ㊁EA 组和p-EA +b 组大鼠下丘脑GSK-3α㊁GSK-3β蛋白表达减少(P <0.05或P <0.01),CSF 组大鼠GSK-3α差异无统计学意义,GSK-3β蛋白表达减少(P <0.05);与EA 组比较,p-EA 组大鼠下丘脑GSK-3α㊁GSK-3β蛋白表达减少(P <0.05),EA +b 组㊁p-EA +b 组CSF 组大鼠下丘脑GSK-3α㊁GSK-3β蛋白表达增加(P <0.05);与EA +b 组比较,p-EA 组大鼠下丘脑GSK-3α(P <0.05),p-EA +b 组㊁CSF 组大鼠下丘脑GSK-3β蛋白表达减少(P <0.05);与CSF 组比较,EA +b 组和p-EA +b 组大鼠下丘脑GSK-3α㊁GSK-3β蛋白表达减少(P <0.05)㊂图3㊀各组大鼠下丘脑GSK-3α和GSK-3β蛋白表达电泳图㊀㊀3㊀讨论胰岛素与大脑的生物活性㊁神经结构和生理功能密切相关,对中枢神经系统认知功能有着重要影响,胰岛素相关信号分子传导异常是IR 发生的关键[13]㊂IR 时,由胰岛素介导的神经能量代谢出现异常引起神经元糖代谢紊乱,从而导致神经元功能障碍及中枢神经系统疾病的发生[14]㊂本研究依据中医针灸治未病理论,以足三里㊁关元㊁丰隆与百会四穴配伍,旨在培补先天之本㊁后天气血生化之源的同时,祛痰消脂㊁疏通脑络㊂研究中预防组受试动物在造模的同时给予电针治疗,以期通过电针干预激发受试动物机体内在的抗病能力,预防IR 与IR 相关的认知功能损害,强调电针早期干预的预防效应㊂GSK3是PI3K /Akt 信号通路的生理底物,通过负反馈调节该通路的效应蛋白对IR 的发生发展有重要影响㊂GSK-3α和GSK-3β是GSK3两种形式的异构体㊂活化的GSK-3a 可以激活APPγ分泌酶使得Aβ沉积增加[15-16],GSK-3β会造成tau 蛋白过度磷酸化并导致神经纤维缠结;此外,GSK-3β通过提高胰岛素受体底物的丝∕苏氨酸磷酸化水平来抑制胰岛素受体对胰岛素受体底物的酪氨酸磷酸化,通过抑制胰岛素信号传导加重IR[17-18]㊂因此,GSK-3α与GSK-3β的活化是IR与认知功能损害共同的病理改变㊂本研究中,M组㊁EA+b组和p-EA+b组大鼠下丘脑GSK-3α与GSK-3β蛋白表达增加,这与其下丘脑中Aβ42与p-Tau阳性表达聚集数量多㊁着色深的结果一致㊂同时,这3组受试动物外周血FPG㊁FINS及IRI水平升高㊂电针治疗后,p-EA组㊁EA组外周胰岛素抵抗程度显著降低,下丘脑Aβ42与p-Tau阳性表达减少,GSK-3α与GSK-3β蛋白表达降低,且p-EA组治疗效果优于EA组,p-EA组与EA 组p-Tau阳性表达结果无明显差异㊂在中枢微量注入PI3K抑制剂LY294002的条件下,电针防治效应被阻断,EA+b组㊁p-EA+b组大鼠的FPG㊁FINS与IRI升高,Aβ42与p-Tau阳性表达聚集数量多㊁着色深,且GSK-3α与GSK-3β蛋白表达增加,说明电针对IR大鼠认知功能损伤的防治效应或可通过PI3K/Akt信号通路实现㊂这与我们前期研究中发现,电针调节PI3K/Akt信号通路相关分子活性,从而促进改善IR大鼠学习记忆能力的实验结果相一致㊂然而CSF组大鼠在经过电针治疗后,下丘脑GSK-3α与GSK-3β蛋白表达增加的同时,Aβ42与p-Tau阳性表达聚集数量减少㊁着色浅,且外周血FPG㊁FINS及IRI水平降低㊂考虑PI3K/Akt信号通路不是参与针灸防治IR认知功能损害的唯一途径,因此电针防治胰岛素抵抗相关认知功能损伤的作用机制值得更进一步的研究㊂参考文献:[1]㊀BIESSELS GJ,REAGAN LP.Hippocampal insulin resistanceand cognitive dysfunction[J].Nat Rev Neurosci,2015,16:660-671.[2]㊀杨莘,乔雨晨,吴晓光,等.不同护理干预方法在轻度认知功能障碍患者中的应用效果[J].中华护理杂志,2012,47(1):77-79.[3]㊀GRAY SM,MEIJER RI,BARRETT EJ.Insulin regulates brainfunction,but how does it get there?[J].Diabetes,2014,63(12):3992–3997.[4]㊀莫巍,钱国锋.二甲双胍对高脂诱导胰岛素抵抗大鼠空间认知㊁学习记忆及脑能量代谢的影响[J].中国老年学杂志,2014,34(10):2813-2816.㊀㊀㊀[5]㊀李娜,康建华,杨立顺.阿尔茨海默病(AD)患者外周血Aβ42及Aβ40的变化研究[J].中国实验诊断学,2016,20(10):1664-1664.[6]㊀姜美驰,梁静,张玉杰,等.针刺四关穴对阿尔茨海默病大鼠学习记忆及海马区β淀粉样蛋白42㊁白介素-1β和白介素-2的影响[J].针刺研究,2016,41(2):113-119.[7]㊀黄晓巍,王艳玲,李哲,等.鹿茸多肽对冈田酸致大鼠海马神经元损伤时Tau㊁Bcl-2和Caspase-3表达的影响[J].吉林大学学报(医学版),2017,43(1):26-33.[8]㊀HALLSCHMID M,HATKE A,et al.Intranasal insulin improvesmemory in humans[J].Psychoneuroendocrinology,2004,29(10):1326-1334.[9]㊀李忠仁.实验针灸学[M].北京:中国中医药出版社,2003:334-336.[10]㊀MANNERAS L,JONSDOTTIR IH,HOLMANG A,et al.Low-frequency electro-acupuncture and physicalexercise improvemetabolic disturbances and modulate gene expression in adiposetissue in rats with dihydrotestosterone-induced polycystic ovarysyndrome[J].Endocrinology,2008,149(7):3559-3568. 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《2024年DPP-Ⅳ抑制肽的制备鉴定及其对糖尿病小鼠肠道微生态影响的研究》范文

《DPP-Ⅳ抑制肽的制备鉴定及其对糖尿病小鼠肠道微生态影响的研究》篇一一、引言糖尿病作为一种全球性的健康问题，其发病率逐年上升，严重威胁着人们的健康。

近年来，肠道微生态与糖尿病之间的关系逐渐受到关注。

DPP-Ⅳ抑制肽作为一种具有降血糖潜力的生物活性肽，其制备鉴定及其对糖尿病小鼠肠道微生态的影响研究具有重要的理论和实践意义。

本文旨在探讨DPP-Ⅳ抑制肽的制备与鉴定方法，并深入分析其对糖尿病小鼠肠道微生态的影响。

二、DPP-Ⅳ抑制肽的制备与鉴定2.1 肽的提取与分离DPP-Ⅳ抑制肽的提取主要依赖于生物技术手段，如酶解法、化学合成法等。

本实验采用酶解法，通过特定的酶将蛋白质或肽类物质进行水解，得到DPP-Ⅳ抑制肽。

随后，利用高效液相色谱法进行分离纯化，得到纯度较高的DPP-Ⅳ抑制肽。

2.2 肽的结构鉴定对纯化后的DPP-Ⅳ抑制肽进行结构鉴定，主要包括质谱分析和氨基酸序列分析。

质谱分析可确定肽的分子量，为后续研究提供基础数据。

氨基酸序列分析则可明确肽的氨基酸组成及排列顺序，为进一步了解其生物活性提供依据。

三、DPP-Ⅳ抑制肽对糖尿病小鼠肠道微生态的影响3.1 实验动物与分组选取一定数量的糖尿病小鼠作为实验对象，按照不同处理条件进行分组。

对照组为正常饮食的糖尿病小鼠，实验组则为接受DPP-Ⅳ抑制肽处理的小鼠。

3.2 肠道微生态检测方法采用高通量测序技术对各组小鼠的肠道微生态进行检测，分析DPP-Ⅳ抑制肽对肠道菌群结构、丰度及多样性的影响。

同时，结合实时荧光定量PCR技术，对特定菌群进行定量分析。

3.3 实验结果与分析通过对比各组小鼠的肠道微生态数据，发现DPP-Ⅳ抑制肽处理后，糖尿病小鼠的肠道菌群结构发生明显变化。

具体表现为有益菌群丰度增加，有害菌群丰度降低。

此外，DPP-Ⅳ抑制肽还能提高肠道微生物多样性，有助于维持肠道微生态平衡。

四、讨论DPP-Ⅳ抑制肽对糖尿病小鼠肠道微生态具有显著的调节作用。

通过增加有益菌群丰度、降低有害菌群丰度，有助于改善肠道环境，进而可能对糖尿病的发病机制产生积极影响。

在实验动物水平通过恢复和改善胰岛β细胞功能的糖尿病治疗新进展

在实验动物水平通过恢复和改善胰岛β细胞功能的糖尿病治疗新进展李睿莹　乐　婧　李　雪　靳会丽　孟庆雄△（昆明理工大学生命科学与技术学院，昆明６５０５００）摘要　糖尿病是一个世界性问题，在中国就有超过１．３亿人患有糖尿病。

糖尿病主要分为１型糖尿病和２型糖尿病。

遗憾的是，糖尿病至今尚未达成有效的预防和治愈手段。

但是，近年来的一系列突破性的研究成果，让我们看到了治愈糖尿病的希望。

在这里我们回顾了目前关于１型糖尿病和２型糖尿病可能的治愈途径的研究进展。

这些途径包括胰岛移植和１型糖尿病的干细胞治疗，以及抗体诱导的α细胞向β细胞分化，以及１型糖尿病中某些类型的β细胞能逃逸免疫攻击；糖尿病早期胰岛素长期注射治疗、ＧＡＢＡ以及青蒿素长期诱导促进α细胞转化为β细胞从而恢复胰岛的结构和功能；研究还表明，长期增加维生素Ｄ受体的活性有利于减少炎症反应从而保护β细胞。

但是在青蒿素诱导治愈２型糖尿病方面仍然存在争议。

关键词　１型糖尿病；２型糖尿病；胰岛素；ＧＡＢＡ；青蒿素中图分类号　Ｒ５８７ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｏｎＴｒｅａｔｉｎｇＤｉａｂｅｔｅｓｂｙＲｅｓｔｏｒｉｎｇａｎｄＩｍｐｒｏｖｉｎｇＩｓｌｅｔβ ＣｅｌｌＦｕｎｃｔｉｏｎｉｎＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＡｎｉｍａｌｓ　ＬＩＲｕｉＹｉｎｇ，ＬＥＪｉｎｇ，ＬＩＸｕｅ，ＪＩＮＨｕｉＬｉ，ＭＥＮＧＱｉｎｇＸｉｏｎｇ△（ＦａｃｕｌｔｙｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＫｕｎｍｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５０５００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ（ＤＭ）ｉｓｂｅｃｏｍｉｎｇａｗｏｒｌｄｗｉｄｅｐｒｏｂｌｅｍ．ＩｎＣｈｉｎａ，ｍｏｒｅｔｈａｎ１３０ｍｉｌｌｉｏｎｏｆｐｅｏｐｌｅａｒｅｓｕｆｆｅｒｉｎｇｆｒｏｍＤＭ．ＤＭｉｓｍａｉｎｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｙｐｅ１ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ（Ｔ１ＤＭ）ａｎｄｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ（Ｔ２ＤＭ）．Ｕｎｆｏｒｔｕｎａｔｅｌｙ，ｔｉｌｌｎｏｗｔｈｅｒｅｉｓｎｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｗａｙｔｏｐｒｅｖｅｎｔａｎｄｃｕｒｅＤＭ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ａｓｅｒｉｅｓｏｆｂｒｅａｋｔｈｒｏｕｇｈｓｉｎｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｄｉａｂｅｔｅｓｔｒｅａｔｍｅｎｔｈａｖｅｂｅｅｎｍａｄｅａｎｄａｒｅｓｈｉｎｉｎｇｌｉｇｈｔｓｏｎｃｕｒｉｎｇＤＭ．ＨｅｒｅｗｅｒｅｖｉｅｗｅｄｔｈｅｃｕｒｒｅｎｔｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｅｓｉｎｔｈｅｐｏｓｓｉｂｌｅｃｕｒｅｐａｔｈｗａｙｓｆｏｒＴ１ＤＭａｎｄＴ２ＤＭ．Ｔｈｅｓｅｐａｔｈｗａｙｓｉｎｃｌｕｄｅｉｓｌｅｔｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ｓｔｅｍｃｅｌｌｔｈｅｒａｐｙｆｏｒＴ１ＤＭ，ｔｈｅｄｉｓｃｏｖｅｒｙｔｈａｔａｎｔｉｂｏｄｙｉｎｄｕｃｅｄαｃｅｌｌｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｔｏβｃｅｌｌｓ，ａｎｄｃｅｒｔａｉｎｔｙｐｅｏｆβｃｅｌｌｓｃａｎｅｓｃａｐｅｆｒｏｍｉｍｍｕｎｅａｔｔａｃｋｉｎＴ１ＤＭ．Ｗｈｉｌｅｌｏｎｇｔｅｒｍｉｎｊｅｃｔｉｏｎｏｆｉｎｓｕｌｉｎ，ｌｏｎｇｔｅｒｍＧＡＢＡａｎｄａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｔｏｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｏｆαｃｅｌｌｓｉｎｔｏβｃｅｌｌｓａｎｄｃｏｎｓｅｑｕｅｎｔｌｙｒｅｃｏｖｅｒｙｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｉｓｌｅｔ；ｓｔｕｄｉｅｓａｌｓｏｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｌｏｎｇｔｅｒｍｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｏｆｖｉｔａｍｉｎＤｒｅｃｅｐｔｏｒａｃｔｉｖｉｔｙｗｉｌｌｒｅｄｕｃｅｔｈｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅａｎｄｐｒｏｔｅｃｔｔｈｅｉｓｌｅｔβｃｅｌｌｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｒｅａｒｅｓｔｉｌｌｑｕｅｓｔｉｏｎｓａｂｏｕｔｔｈｅｈｅａｌｉｎｇｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｏｎＴ２ＤＭ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　ｔｙｐｅ１ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ；ｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ；ｉｎｓｕｌｉｎ；ＧＡＢＡ；ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ一、糖尿病发病机制及其现状近年来，随着社会的发展和人们的生活方式的改变，糖尿病的发病率逐年提高，已成为严重的社会问题。

GLP-1对血糖稳态调控作用特点及其机制

GLP-1对血糖稳态调控作用特点及其机制马虹宇1 隋宇玢2（1黑龙江省医院检验科黑龙江哈尔滨 150001; 2哈尔滨医科大学附属第一医院心内科黑龙江哈尔滨 150001）【中图分类号】R458+.5【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）33-0157-02胰高血糖素样肽-1（Glucagon-like peptide,GLP-1）是30个氨基酸构成的多肽。

GLP-1与胰高血糖素的氨基酸序列有50%同源性，故而得名。

它是由含有160个氨基酸残基的胰高血糖素原，在胰岛α细胞内被酶解为29氨基酸的胰高血糖素，而在肠粘膜L细胞（它主要分布于回肠和结肠粘膜）内被酶解为30氨基酸的GLP-1。

GLP-1是参与血糖稳态调控的重要的消化道激素。

对GLP-1生物学作用的基础研究与临床应用已取得突破性进展，对2型糖尿病的治疗开辟了崭新的途径。

现仅就GLP-1对血糖调控作用的特点与机制，简要综述如下。

一.GLP-1对血糖调控作用的特点[1-6]1.GLP-1降糖作用呈高度的葡萄糖浓度依赖性GLP-1具有明显降糖作用，主要通过促进胰岛β细胞分泌胰岛素，和抑制α细胞分泌胰高血糖素。

GLP-1的降低血糖作用严格依赖于血糖浓度，即在血糖水平升高的情况下，GLP-1才能发挥其降糖作用，血糖浓度越高，GLP-1的降糖作用越强，而血糖浓度降至正常或偏低，则基本上不再发挥作用。

当血糖降至4mmol/L时，外源GLP-1已无降糖作用。

GLP-1的这一特性，能保障将高血糖降至正常水平并保持相对稳定而不发生低血糖。

2.GLP-1的降糖作用在餐后最强进餐引起GLP-1的大量分泌。

在餐后30-60分钟，GLP-1分泌量最多，进而发挥有效的降糖作用。

食物在肠内的消化产物中，葡萄糖是GLP-1分泌的最强刺激物。

GLP-1的基础水平约为（0.4-1.4）x10-12mol/L,餐后GLP-1水平迅速上升，在30-60分钟，可达峰值，约为（10-12）×10-12mol/L。

汉防己甲素通过抑制Mincle

汉防己甲素通过抑制Mincle/Syk 信号介导的巨噬细胞炎性活化减轻小鼠缺血再灌注诱导的急性肾损伤*彭泽1，2，王洪连2，粟宏伟3，王丽2△（1成都市双流区九江社区卫生服务中心，四川成都 610000；2西南医科大学附属中医医院中西医结合研究中心，四川泸州 646000；3西南医科大学附属中医医院泌尿外科，四川泸州 646000）［摘要］目的：探讨汉防己甲素（Tet ）对小鼠缺血再灌注诱导的急性肾损伤（IRI -AKI ）的作用及其机制。

方法：8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、IRI -AKI 组、低剂量（20 mg/kg ）Tet 组、高剂量（40 mg/kg ）Tet 组和槲皮素（50 mg/kg ）阳性对照组，每组6只。

采用双侧肾动静脉夹闭45 min 后恢复血供的方法建立IRI -AKI 模型，Tet 和槲皮素组的IRI -AKI 小鼠于术前1 h 及术后连续3 d 给予相应剂量药物腹腔注射，假手术和IRI -AKI 组小鼠给予同等体积溶剂注射。

实验终点处死动物，收集血清及肾脏组织样本，进行肾功能、病理、mRNA 及蛋白等指标检测。

在体外，采用脂多糖（LPS ； 300 μg/L ）刺激的原代小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM ）进行Tet （1、2和4 mg/L ）的抗炎活性研究。

结果：（1）与IRI -AKI 组相比，低和高剂量Tet 干预均能显著降低血清肌酐和血尿素氮水平（P <0.05），并减轻肾小管病理损伤（P <0.05）。

（2）Tet 干预可以显著抑制IRI -AKI 小鼠肾组织中白细胞介素1β（IL -1β）和IL -6的mRNA 和蛋白表达及NF -κB 信号的活化，减少肾组织巨噬细胞浸润（P <0.05）。

（3）在LPS 刺激的BMDM 中，Tet 同样抑制IL -1β和IL -6的mRNA 和蛋白表达及NF -κB 信号的活化（P <0.05）。

食物血糖生成指数与慢性代谢性疾病发生的新进展

ｇｉｔｔｅ［１
还能抑制胰岛ａ细胞分泌胰高血糖素，减少肝源性葡萄糖的生成；并在外周增加肝脏、脂肪组织和肌肉组织对葡萄糖的摄取。抑制胃的排空，减慢碳水化合物的消化吸收ｕ
４
０｜。
ＧＩ与肥胖
肥胖是能量摄入超过能量消耗而导致体内脂肪积聚过多，达到危害程度的一种慢性代谢性疾病。研究证实ｎ］，仅仅降低饮食中的脂肪含量并不能降低肥胖的发病率，但低ＧＩ饮食却可以改善肥胖者的体重。低ＧＩ饮食的摄入可以减少餐后肠道激素．避免快速的胰岛素升高及胰岛素过高峰值的出现。延长糖类吸收时间，持续抑制血液游离脂肪酸水平和拮抗激素的反应，同时达到稳定降低血糖的效果。一整天或前一晚选择低ＧＩ食物或全谷类食物会使葡萄糖耐量显著提高，并可改善第二餐糖耐量和餐后血糖，降低游离脂肪酸浓度，从而降低肥胖者的体重ＬＪｊ。功能性高胰岛素血症与高ＧＩ的联系可能使营养物质不在肌肉中氧化而优先直接储积于脂肪组织促进体重增加。摄入高Ｇ１饮食的餐后中段。循环中代谢物质的减少可能增加饥饿感和食物摄入，从而维持机体的能量稳态。无论是自然的还是胰岛素诱导的血糖适度降低都与饥饿及摄食反应有关，这在人、鼠实验均已被证明［１１’１２］。Ｒｏｓｅｌｙ等［１刀对巴西妇女采用低ＧＩ饮食１８个月的追踪研究发现，低ＧＩ饮食相对于高Ｇ１饮食总胆固醇、甘油三酯和极低密度脂蛋白均有明显降低。但妇女的体重变化在两组间没有明显差异。可见，尽管有研究显示低ＧＩ、ＧＩ。饮食对肥胖的治疗有显著作用，但对于正常体重指数的人采用低ＧＩ饮食．则对体重没有影响。
实质上ＧＬ是将摄人糖类的质量和数量结合起来以估价膳食总的血糖效应，是食物中碳水化合物的性质和摄入量的综合反映。２摄入高ＧＩ饮食后的机体代谢变化血糖由稳定的内环境调节系统紧密、有序地进行调节。低血糖促进胰高血糖素、肾上腺素、皮质醇、生长激素等相关激素的分泌，拮抗胰岛素的作用，维持正常的血糖水平。食物吸收后，在上述相应激素对抗胰岛素的作用下。机体肝糖原分解、脂解作用、糖异生作用释放储存的新陈代谢燃料以维持血糖的稳定。高ＧＩ膳食挑战这些调节机制。Ｄａｖｉｄ［４］指出：高ＧＩ饮食与低ＧＩ相比，激素的改变会促进肌肉、肝脏及脂肪组织对糖的摄入，抑制肝糖原的释放及肝的脂解作用．结果使两个新陈代谢的主要原料在吸收后迅速减少，造成反应性低血糖和

龙虎人丹对链脲佐菌素诱导糖尿病小鼠降糖作用研究

７０
பைடு நூலகம்
广东药科大学学报
第３４卷
糖尿病( ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓꎬＤＭ) 是由于多种因素作用ꎬ如遗传因素和环境因素作用ꎬ导致体内胰岛素分泌绝对或相对不足ꎬ从而引起糖代谢紊乱为主的全身慢性进行性疾病ꎬ分为１型糖尿病、２型糖尿病、妊娠糖尿病以及其他特殊类型糖尿病[１] ꎬ其中２型糖尿病在所有糖尿病患者中占９０％ ~ ９５％ꎮ 目前全世界约有１.５亿糖尿病患者ꎬ预计到２０２５年将突破３亿[２] ꎮ 糖尿病已经成为继肿瘤、心血管疾病之后严重威胁人类生命的第３位杀手[３] ꎮ
ＨｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆＬｏｎｇＨｕＲｅｎＤａｎｏｎＳＴＺ￣ｉｎｄｕｃｅｄｄｉａｂｅｔｉｃｍｉｃｅ
ＬＩＮｉｎｇ１ＹＡＮＧＺｈｉｃｈｅｎｇ１ＪＩＮＪｉａｈｕａ２ＤＩＮＧＬｉｑｉｎ２ＺＨＵＸｉａｏｐｉｎｇ２ＹＥＷｅｉｑｉ２ＣＡＯＷｕｊｉｅ２ＬＡＮＴｉａｎ１ＬＩＵＢｉｎｇ１∗
摘要: 目的观察龙虎人丹( ＬＨＲＤ) 对链脲佐菌素( ＳＴＺ) 诱导的糖尿病小鼠血糖的影响ꎮ 方法将正常小鼠随机分为空白对照组、龙虎人丹给药组(１００ｍｇ / ｋｇ) 和盐酸二甲双胍组( Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎꎬ２００ｍｇ / ｋｇ) ꎬ每组８只ꎬ连续灌药２周ꎬ观察血糖和糖耐量的变化ꎬ建立ＳＴＺ诱导的糖尿病模型ꎬ随机分为正常对照组、ＳＴＺ组、龙虎人丹给药组(１００ｍｇ / ｋｇ) 和盐酸二甲双胍组(２００ｍｇ / ｋｇ) ꎬ每组６只ꎬ另选６只正常小鼠做空白对照组ꎬ连续给药５周后ꎬ观察各组小鼠糖耐量、体质量和血糖的变化情况ꎮ 结果龙虎人丹能显著增强正常小鼠糖耐量( Ｐ<０.０５) ꎬ且能显著降低糖尿病小鼠的血糖( Ｐ<０.０１) ꎬ改善糖耐量ꎮ 结论龙虎人丹对ＳＴＺ诱导的糖尿病小鼠有显著的降糖作用ꎮ 关键词: 龙虎人丹ꎻ 链脲佐菌素ꎻ 糖尿病ꎻ 糖耐量中图分类号: Ｒ２８５.５文献标志码:Ａ文章编号:２０９６￣３６５３(２０１８)０１￣００６９￣０４ＤＯＩ: １０.１６８０９ / ｊ.ｃｎｋｉ.２０９６－３６５３.２０１７１０２４０３

非诺贝特降胆固醇机制的研究进展

非诺贝特降胆固醇机制的研究进展翟婷;李世云;黄华安【摘要】非诺贝特是第三代苯氧芳酸衍生物调脂药,是目前市场上常见的甘油三酯(TG)调节剂之一,临床常与他汀联合用于调节血脂和降低心血管剩余风险.临床试验证明其除了具有确切的降低TG、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和载脂蛋白B(apo B)的作用外,还具有降低胆固醇(CHO)的作用,但针对其降低CHO的机制报道较为少见.该文从非诺贝特对CHO的合成、吸收、转运及其影响胰岛素敏感性等方面的作用调节机制进行综述.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2018(029)024【总页数】4页(P3526-3529)【关键词】非诺贝特;胆固醇;机制【作者】翟婷;李世云;黄华安【作者单位】遵义医学院,贵州遵义 563003;遵义医学院,贵州遵义 563003;成都大学附属医院,四川成都 610081;成都大学附属医院,四川成都 610081【正文语种】中文【中图分类】R972+.6在战胜动脉硬化所导致的心血管风险征程中，他汀类通过降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)降低动脉粥样硬化实现降低心血管风险已经成为共识[1]。

随着他汀类药物降低心血管主要风险达到一个较好状态后，心血管剩余风险越来越被重视[2-3]。

在心血管剩余风险认识的过程中，以非诺贝特为代表的贝特类药物逐步被更多地在研究和临床实践中被关注[1，4]，但其具体机制尚不明了，本文拟对非诺贝特对胆固醇代谢的调节作用进行综述。

1 非诺贝特抑制胆固醇的合成乙酰辅酶A从头合成内源性胆固醇是体内胆固醇的主要来源之一，HMG-CoA还原酶(3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶，HMGR)为合成过程中的限速酶。

Schneider等[5]对纳入使用非诺贝特治疗8周以上的4例Ⅱa型和6例Ⅱb型高脂血症患者进行研究。

正式进入实验阶段时开始停用非诺贝特治疗，时间为8周；8周后再次恢复非诺贝特治疗，分别测定第0周、8周、22周、33周时患者胆固醇及单核细胞HMGR水平。

上海交大医学院宁光团队发现肥胖治疗新靶标

上海交大医学院宁光团队发现肥胖治疗新靶标肥胖的基因治疗研究上海交大医学院宁光团队发现肥胖治疗新靶标—LGR4基因研究显示，LGR4基因的缺失可促进白色脂肪转化为棕色脂肪，增加机体能量消耗，减轻体重。

上海交通大学医学院附属瑞金医院宁光教授领衔的研究团队发现，通过调控LGR4基因可以影响肥胖的发生；这一基因好比神奇的开关，可调节白色脂肪和棕色脂肪之间的转化，因此，阻断LGR4 信号极可能成为肥胖干预的新靶点。

人体有两种脂肪组织，白色脂肪和棕色脂肪，白色脂肪将能量以甘油三酯形式储存起来，主要分布于皮下和内脏器官周围，白色脂肪过多就是肥胖；棕色脂肪将能量以热的形式散失掉，成年人体内只有很少量的棕色脂肪。

通俗来讲，白色脂肪是导致肥胖的“坏脂肪”，而棕色脂肪各项代谢指标，包括血糖、血脂、血压等均明显好转。

欧洲一个著名人类遗传学研究小组近期发表了一项研究成果，发现极少数欧洲后裔携带LGR4 失活突变，这一人群的体重明显低于正常对照人群。

这一成果进一步支持上海瑞金医院肥胖研究团队的研究结果，LGR4 极有可能是一个全新的肥胖致病基因。

上海瑞金医院肥胖研究团队的相关研究已经在《自然-细胞生物学》发表；接下来，研究人员将努力发现LGR4 的配体和阻断剂，以推动LGR4 作为肥胖靶点的干预研究，造福肥胖患者。

上海交大科研团队发现黄连素或可治疗肥胖上海交通大学医学院附属瑞金医院副院长宁光教授领衔的团队新近研究发现，中药黄连素可激活白色脂肪和棕色脂肪组织的生热作用，能够调控机体的能量平衡，在肥胖治疗中可能具有潜在的应用前景。

该研究论文日前发表在《自然·通讯》杂志上。

专家介绍，脂肪组织主要分为两种类型：白色脂肪组织和棕色脂肪组织。

白色脂肪广泛分布于皮下组织和内脏周围，主要以甘油三酯的形式储存能量并分泌一些影响能量平衡的激素和细胞因子。

棕色脂肪则主要存在于人类新生儿和幼小的哺乳动物体内，它们作为机体的“加热器”通过线粒体的脂质氧化解耦联产热从而消耗能量，同时也可分泌少量的脂肪因子。

细胞自噬：糖尿病发生发展中的积极参与者

细胞自噬：糖尿病发生发展中的积极参与者张琼;黄晓飞;翟文海;杨德远【摘要】The pathogenesis of diabetes is complicated by several factors including autoimmunity, environment, heredi⁃ty, and etc. Autophagy is a kind of intracellular biodegradation processes, which plays an important role in intracellular ho⁃meostasis of islet cells. In diabetes, autophagy is involved in the endoplasmic reticulum stress, mitochondrial dysfunction and inflammatory, and it affects the development of the disease. In this paper, we reviewed the interactions of autophagy with endoplasmic reticulum stress and mitochondrial dysfunction with inflammation in diabetes in order to investigate the patho⁃genesis of diabetes, to find new strategies for prevention or treatment of diabetes.%糖尿病病因复杂，涉及自身免疫、环境及遗传等多种因素。

细胞自噬是一种细胞内分解代谢过程，在维持胰岛细胞内环境稳态中发挥重要作用。

自噬通过参与内质网应激、线粒体功能障碍以及炎症反应等过程，影响糖尿病的发生发展。

调节性T细胞在糖尿病中的免疫保护作用及治疗进展

巴细胞亚群，因能够有效抑制自体免疫活性、预防人类的自体免
疫性疾病而受到广泛关注。Ｔｅｓ过对其他免疫细胞的负调ｒｇ通节发挥维持免疫稳态的作用。已知Ｔｅｓ主要分为两类，ｒｇ天然的Ｔｅｓｎｒｇ）ｒｇ（Ｔｅｓ以及外周抗原诱导的Ｔｅｓｉｒｓ。ｎｒｇｒｇ（Ｔｅ）Ｔｅ是源自ｇ
动糖尿病的进程 ” 。ＣＬ－ＴＡ４的这一作用仅出现在糖尿病早期胰岛炎出现之前，发生于引流淋巴结。用特异性抗体阻断尚且未出现胰岛浸润的ＢＣ１／ＯＤ２５ＮＤ鼠的ＣＬ．，ＴＡ４导致其８细胞的损害加速。在胰岛出现明显浸润之后给予ＣＬ－ＴＡ４抗体则不出现这种效应 …Ｊ。作为ＣＬ－ＴＡ４和Ｃ２Ｄ８的触发配体，Ｄ０与Ｃ８Ｃ８Ｄ６也在免疫过程中发挥作用，转染Ｃ８Ｄ０能够通过与ＣＬ－ＴＡ４的相互作用抑制人外周血Ｔ细胞活性，ＣＬ－一Ｄ６反应促而ＴＡ４Ｃ８进Ｔ细胞增殖。另有研究显示，７周雌性ＮＤ鼠静脉注射向Ｏ
１型糖尿病（１Ｍ）ＴＤ主要特征为淋巴细胞自身免疫引起的
胰岛１细胞损伤。由于自身免疫系统调节紊乱，３丧失免疫耐受，
与效应Ｔ细胞表面的Ｂ７分子相互作用传递抑制信号。在Ｔ细胞受体转基因形成的自身免疫性糖尿病鼠，ＴＡ４发挥抑制胰ＣＬ－岛反应性Ｔ细胞的作用。相反使用抗体阻断ＣＬ－迅速推ＴＡ４将
ｎｒｇ的免疫调控作用主要发生在胰腺组织。ｎｒｇ抑制ＴｅｓＴｅｓ自身侵蚀性胰岛特异性Ｃ８ＤＴ细胞的过程通过其表达ＴＦＢＧ —

EGCG改善高果糖饮食小鼠代谢紊乱的作用与机制研究

茶叶科学 2023，43（3）：399~410Journal of Tea Science EGCG改善高果糖饮食小鼠代谢紊乱的作用与机制研究周继红，陈蔚，丁乐佳，王岳飞*浙江大学茶叶研究所，浙江杭州 310058摘要：为探究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对高果糖饮食诱导代谢紊乱的作用功效及机制，将15只雄性SPF级C57BL/6小鼠随机分为3组：正常饮食组（NCD）、高果糖饮食组（HFD）和高果糖补充1% EGCG 饮食组（HFE）。

饲喂8周后测定小鼠的体质量、能量利用率、ALT和AST含量及组织形态学染色等参数。

ELISA检测肝脏TNF-α、IL-1β、IL-6和肠道IL-6炎症因子水平，实时荧光定量PCR检测肝脏Srebp-1c、Tlr4、Myd88及肠道Zo-1、Tlr4、Myd88基因表达水平，免疫组化检测ZO-1、Occludin蛋白表达水平。

试验表明，膳食补充EGCG能够有效抑制高果糖饮食诱导的小鼠体重增加、脂肪积累、肝脏及肠道炎症因子释放，并可上调肠壁完整性相关的Zo-1基因表达水平和ZO-1、Occludin蛋白表达水平，下调肝脏中脂质代谢相关的Srebp-1c基因表达水平，下调肠道和肝脏中炎症相关的Tlr4、Myd88基因表达水平。

以上结果表明，膳食补充EGCG对高果糖饮食诱导的代谢障碍和炎症反应有一定的预防作用，其机理可能与TLR4/MyD88信号通路介导的肠-肝轴调控机制有关。

关键词：茶多酚；食源性肥胖；炎症反应；脂质代谢；肠-肝轴中图分类号：S571.1，R151.3 文献标识码：A 文章编号：1000-369X(2023)03-399-12Regulatory Effect and Mechanism of EGCG on Metabolic Disorders in High-fructose Diet MiceZHOU Jihong, CHEN Wei, DING Lejia, WANG Yuefei*Tea Research Institute, Zhejiang University, Hangzhou 310058, ChinaAbstract: This study investigated the effects and mechanisms of epigallocatechin gallate (EGCG) on high-fructose diet-induced metabolic disorders. Fifteen male SPF C57BL/6 mice were randomly divided into three groups: normal diet group (NCD), high-fructose diet group (HFD), and high-fructose diet supplemented with 1% EGCG group (HFE), with 5 mice in each group. After 8 weeks of feeding, the body weight, energy utilization rate, ALT and AST levels, as well as tissue morphology staining of the mice were measured. Furthermore, hepatic TNF-α, IL-1β, IL-6 and intestinal IL-6 inflammatory cytokine levels were detected by ELISA. The expressions of Srebp-1c, Tlr4, Myd88 in liver and Zo-1, Occludin, Tlr4 and Myd88 in intestine were measured by quantitative real-time PCR. Protein expressions of ZO-1 and Occludin were detected by IHC. The results show that dietary supplementation of EGCG could effectively reduce high-fructose diet-induced body weight gain, fat accumulation, hepatic and intestinal inflammatory responses, and could improve the intestinal barrier function by upregulating the expression of Zo-1 and the protein expressions of ZO-1 and Occludin. It also modulated lipid metabolism by reducing the expression level of Srebp-1c in liver, and downregulated the expression levels of inflammatory-related genes (Tlr4 and Myd88) in colon and liver. The results above suggest that dietary supplementation of EGCG has a preventive effect on high-fructose收稿日期：2022-12-12 修订日期：2023-04-27基金项目：国家自然科学基金区域创新联合基金（U19A2034）作者简介：周继红，女，特聘副研究员，主要从事茶叶生物化学与人体健康研究，******************.cn。

青稞多糖对糖尿病模型小鼠的降血糖作用及机制研究

青稞多糖对糖尿病模型小鼠的降血糖作用及机制研究作者：王生亚薛洁徐乃玉张真庆吕栋来源：《中国药房》2021年第07期摘要目的：研究青稞多糖（HVP）对糖尿病模型小鼠的降血糖作用及机制。

方法：对小鼠腹腔注射链脲佐菌素（120 mg/kg）以复制糖尿病模型。

将造模成功的小鼠随机分为模型组、二甲双胍组（阳性对照，200 mg/kg）和HVP高、中、低剂量组（300、150、75mg/kg），另设空白对照组，每组10只。

各给药组灌胃相应药物，空白对照组和模型组小鼠灌胃等量水，每天1次，连续30 天。

给药10、20、30 天时测定小鼠的空腹血糖（FBG）;末次FBG测定后，小鼠腹腔注射10%葡萄糖溶液（2 g/kg），于注射后30、120 min时测定糖耐受量（GTT）曲线下面积;测定小鼠血清中胰岛素水平和肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）的含量;采用苏木精-伊红染色法观察小鼠胰腺组织病理学变化。

结果：与空白对照组比较，模型组小鼠FBG、GTT曲线下面积和肝组织中MDA含量均显著升高或增加（P关键词青稞多糖;糖尿病;抗氧化;小鼠中图分类号 R285.5 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2021）07-0807-05ABSTRACT OBJECTIVE： To study the hypoglycemic effect of Hordeum vulgare polysaccharide （HVP） on diabetes mellitus model mice and its mechanism. METHODS： Themice were given intraperitoneal injection of streptozotocin （120 mg/kg） to induce diabetes mellitus model. After modeling， the mice were randomly divided into model group， metformin group （positive control， 200 mg/kg）， HVP high-dose， medium-dose and low-dose groups （300，150 and 75 mg/kg）， with 10 mice in each group. Blank control group was established additionally. Administration groups were given relevant medicine intragastrically; blank control group and model group were given constant volume of water intragastrically， once a day， for consecutive 30 days. The levels of fasting blood glucose （FBG） were determined after 10， 20， 30 days of administration. After last FBG test， mice were intraperitoneally injected with 10% glucose solution （2 g/kg）， then the area under the glucose tolerance （GTT） curve was measured at 30 and 120 min after injection. The serum levels of insulin， the content of superoxide dismutase （SOD），glutathione peroxidase （GSH-Px）， malondialdehyde （MDA） in liver tissue were detected. Pancreatic morphology of mice were detected by HE staining. RESULTS： Compared with blank control group， the FBG， area under GTT curve and MDA contnet in liver tissue were increased significantly in model group （PKEYWORDS Hordeum vulgare polysaccharide; Diabetes mellitus; Antioixidation; Mice糖尿病是由于体内胰岛素绝对缺乏或相对不足引起的慢性疾病，以血糖持续升高为特征，从而诱发各种器官、组织损害与功能障碍，严重威胁着人类健康[1-3]。

脂质代谢和糖代谢在PRRSV感染宿主细胞中作用研究进展

中国畜牧兽医 2024,51(4):1686-1695C h i n aA n i m a lH u s b a n d r y &V e t e r i n a r y Me d i c i n e 脂质代谢和糖代谢在P R R S V 感染宿主细胞中作用研究进展罗琴1,2,刘宝玲1,乔常宏1,2,陈翔宇1,2,刘丁语1,王晓虎1,王刚1,刘昊2,蔡汝健1(1.广东省农业科学院动物卫生研究所,广东省畜禽疫病防治研究重点实验室,农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站,广州510640;2.佛山科学技术学院生命科学与工程学院,佛山528225)摘要:猪繁殖与呼吸综合征病毒(P o r c i n e r e p r o d u c t i v ea n dr e s p i r a t o r y s y n d r o m ev i r u s ,P R R S V )感染可引起母猪繁殖障碍㊁仔猪呼吸道疾病及公猪精液质量下降,给世界养猪业造成了巨大的经济损失㊂P R R S V 不能自主复制,其生命周期的各个阶段均依赖于宿主的代谢系统㊂宿主细胞也可调节其代谢过程,以防止P R R S V 复制和维持其正常生理功能㊂脂质代谢和糖代谢在P R R S V 感染中均扮演了重要角色,P R R S V 作为一种囊膜病毒对脂质代谢系统的依赖性较其他代谢系统更强㊂脂质参与了P R R S V 生命周期的各个阶段,包括吸附㊁进入㊁复制㊁组装和释放,此外还与细胞炎症㊁免疫和凋亡有关㊂糖代谢也可干扰P R R S V 的生命活动,从而促进或抑制P R R S V 复制㊂文章综述了脂质代谢中脂肪酸㊁胆固醇㊁磷脂㊁脂滴和脂筏以及糖代谢中糖酵解和三羧酸循环在P R R S V 感染宿主细胞中的作用,以期为阐明P R R S V 的致病机制以及疫苗和抗P R R S V 药物的研发提供基本理论依据㊂关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒(P R R S V );宿主细胞;脂质代谢;糖代谢中图分类号:S 852.65+9.6文献标识码:AD o i :10.16431/j .c n k i .1671-7236.2024.04.036 开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):收稿日期:2023-10-16基金项目:广东省省级科技计划项目(2023B 020*******);广州市农村科技特派员项目(20212100015);2021年英德市科技计划项目;云浮市云安区生猪产业园科技支撑和技术示范(动卫合经2022k 06-005);生猪智能化动物疫病防疫与诊疗系统(动卫合经2022k 11-006)联系方式:罗琴,E -m a i l :l u o q i n 121104@163.c o m ㊂通信作者刘昊,E -m a i l :l i u h a o _l h @h o t m a i l .c o m ;蔡汝健,E -m a i l :466866569@q q.c o m R e s e a r c hP r o g r e s s o n t h eR o l e o fL i p i dM e t a b o l i s ma n d G l u c o s eM e t a b o l i s mi nP R R S V -i n f e c t e dH o s t C e l l sL U O Q i n 1,2,L I U B a o l i n g 1,Q I A OC h a n g h o n g 1,2,C H E N X i a n g y u 1,2,L I U D i n g yu 1,WA N G X i a o h u 1,WA N G G a n g 1,L I U H a o 2,C A IR u ji a n 1(1.S c i e n t i f i c O b s e r v a t i o na n dE x p e r i m e n t a lS t a t i o no f V e t e r i n a r y D r u g s a n dD i a g n o s t i c T e c h n i q u e s o f G u a n g d o n g P r o v i n c e o f M i n i s t r y o f A g r i c u l t u r e a n dR u r a lA f f a i r s ,K e yL a b o r a t o r y o f L i v e s t o c ka n dP o u l t r y D i s e a s eP r e v e n t i o no f G u a n g d o n g Pr o v i n c e ,I n s t i t u t e o f A n i m a lH e a l t h ,G u a n g d o n g A c a d e m y o f A g r i c u l t u r a lS c i e n c e s ,G u a n gz h o u 510640,C h i n a ;2.S c h o o l o f L i f eS c i e n c e a n dE n g i n e e r i n g ,F o s h a nU n i v e r s i t y ,F o s h a n 528225,C h i n a )A b s t r a c t :P o r c i n e r e p r o d u c t i v ea n dr e s p i r a t o r y s yn d r o m ev i r u s (P R R S V )i n f e c t i o ni sk n o w nt o c a u s e r e p r o d u c t i v ed i s o r d e r s i ns o w s ,r e s p i r a t o r y d i s e a s e i n p i g l e t s ,a n dr e d u c es e m e n q u a l i t y in b o a r s ,r e s u l t i n g i ns i g n i f i c a n te c o n o m i cl o s s e st ot h e g l o b a l p i g i n d u s t r y.P R R S Vi su n a b l et o r e p l i c a t e o n i t s o w na n dr e l i e so nt h eh o s tm e t a b o l i c s y s t e mf o r a l l s t a g e so f i t s l i f ec yc l e .H o s t c e l l s ,i n t u r n ,r e g u l a t e t h e i rm e t a b o l i c p r o c e s s e s t oh i nde rP R R S Vr e pl i c a t i o na n d m a i n t a i nt h e i r4期罗琴等:脂质代谢和糖代谢在P R R S V感染宿主细胞中作用研究进展n o r m a l p h y s i o l o g i c a l f u n c t i o n s.B o t h l i p i dm e t a b o l i s ma n d g l u c o s em e t a b o l i s m p l a y c r u c i a l r o l e s i n P R R S Vi n f e c t i o n.A sa n e n v e l o p e d v i r u s,P R R S V i s p a r t i c u l a r l y r e l i a n to nl i p i d m e t a b o l i s m s y s t e m s.L i p i d sa r ei n v o l v e di nv a r i o u ss t a g e so ft h eP R R S Vl i f ec y c l e,i n c l u d i n g a d s o r p t i o n, e n t r y,r e p l i c a t i o n,a s s e m b l y a n d r e l e a s e,i t i s a l s oa s s o c i a t e dw i t hc e l l u l a r i n f l a m m a t i o n,i m m u n i t y a n d a p o p t o s i s.G l u c o s e m e t a b o l i s m c a n a l s o i n t e r f e r e w i t h P R R S V l i f e a c t i v i t i e s,t h e r e b y p r o m o t i n g o r i n h i b i t i n g P R R S Vr e p l i c a t i o n.T h er o l e so f f a t t y a c i d s,c h o l e s t e r o l,p h o s p h o l i p i d s, l i p i dd r o p l e t sa n dl i p i dr a f t si nl i p i d m e t a b o l i s m a r er e v i e w e d,a l o n g w i t ht h ei n v o l v e m e n to f g l y c o l y s i s a n d t h e t r i c a r b o x y l i c a c i d c y c l e i n g l u c o s em e t a b o l i s mi nP R R S V-i n f e c t e dh o s t c e l l s,s o t o p r o v i d e a t h e o r e t i c a l b a s i s f o r e l u c i d a t i n g t h e p a t h o g e n i cm e c h a n i s mo fP R R S Va n dc o n t r i b u t e t o t h e d e v e l o p m e n t o f v a c c i n e s a n d a n t i-P R R S Vd r u g s.K e y w o r d s:P o r c i n er e p r o d u c t i v ea n dr e s p i r a t o r y s y n d r o m ev i r u s(P R R S V);h o s tc e l l s;l i p i d m e t a b o l i s m;g l u c o s em e t a b o l i s m猪繁殖与呼吸综合征(p o r c i n e r e p r o d u c t i v e a n d r e s p i r a t o r y s y n d r o m e,P R R S)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(P o r c i n er e p r o d u c t i v e a n d r e s p i r a t o r y s y n d r o m e v i r u s,P R R S V)引起猪的一种高度传染性疾病㊂P R R S V主要导致妊娠母猪流产㊁产死胎㊁木乃伊胎,仔猪严重呼吸道疾病及公猪精液质量下降[1-2]㊂P R R S于1987年在美国首次报道,随后在北美和欧洲流行并逐渐蔓延至亚洲[3]㊂中国于1996年首次发现P R R S,此后全国各地均有该病报道[4]㊂2006年,高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(H i g h l y p a t h o g e n i c p o r c i n e r e p r o d u c t i v e a n d r e s p i r a t o r y s y n d r o m ev i r u s,H P-P R R S V)在中国暴发,导致感染猪的病变更严重,死亡率更高[5]㊂P R R S对世界养猪业造成了巨大的经济损失,然而目前一直没有针对P R R S V的有效药物,商业疫苗提供的保护也有限,不断重组与变异的P R R S V使得P R R S防控形势更加严峻㊂因此,对P R R S V感染机制及防治方法的研究仍是世界范围内一项极为紧迫的任务㊂病毒作为细胞寄生物,不能自主复制,依赖宿主代谢提供能量和各类代谢产物完成复制等生命活动㊂脂质广泛分布于生物体中,不仅是细胞的重要组成成分,而且还参与了许多重要生理活动㊂作为细胞内寄生的病毒,脂质及其代谢在病毒生命周期中扮演着十分重要的角色㊂脂质几乎参与了甲型流感病毒(I n f l u e n z aAv i r u s,I A V)生命周期的所有阶段,包括I A V与宿主细胞的初始相互作用㊁膜融合㊁核的输入和输出以及协调病毒颗粒的组装和出芽[6]㊂病毒感染宿主细胞之后,脂质代谢也会发生相应的改变,如巨细胞病毒(C y t o m e g a l o v i r u s, C MV)感染细胞后脂质代谢中脂肪酸代谢的生物合成增加;反之,抑制脂肪酸的生物合成也可抑制C MV感染[7-8]㊂脂质代谢的改变在病毒感染中也发挥了重要作用,如在登革热病毒(D e n g u ev i r u s, D E N V)㊁寨卡病毒(Z i k av i r u s,Z I K V)㊁黄热病病毒(Y e l l o w f e v e rv i r u s,Y F V)和西尼罗病毒(W e s t N i l e v i r u s,WN V)感染期间,宿主胆固醇水平的调节促进了病毒的进入㊁复制复合物的形成㊁组装㊁释放及对Ⅰ型干扰素(i n t e r f e r o n-Ⅰ,I F N-Ⅰ)反应的控制[9]㊂同样,P R R S V作为一种囊膜病毒,其生命周期各阶段均与脂质代谢相关(图1),脂质代谢在P R R S V感染中也起着调控作用㊂病毒除了引起宿主细胞脂质代谢变化外,还可特异性干扰糖代谢途径㊂病毒可操纵宿主细胞内的糖代谢水平,从而为细胞生化反应提供能量,如Z I K V感染可增加三羧酸循环中的葡萄糖使用量,重编程宿主细胞中的葡萄糖代谢[10]㊂新型冠状病毒(S e v e r ea c u t er e s p i r a t o r y s y n d r o m ec o r o n a v i r u s 2,S A R S-C o V-2)在宿主细胞中的复制依赖于葡萄糖代谢的改变[11]㊂糖代谢在肠道病毒(E n t e r o v i r u s 71,E V71)复制中起着正向作用,抑制葡萄糖代谢E V71的复制也会受到抑制[12]㊂目前有关糖代谢在P R R S V感染中的研究还相对较少,大多针对P R R S V复制具有重要作用㊂作者就脂质代谢中脂肪酸㊁胆固醇㊁磷脂㊁脂滴和脂筏以及糖代谢中糖酵解和三羧酸循环在P R R S V感染宿主细胞中的作用进行综述,以阐明P R R S V的致病机制,对疫苗和药物研发具有重要意义㊂7861中国畜牧兽医51卷F A ,脂肪酸(黄色);C h o l ,胆固醇(绿色);P L ,磷脂(浅紫);L D ,脂滴(棕色)F A ,F a t t y a c i d (y e l l o w );C h o l ,C h o l e s t e r o l (g r e e n );P L ,P h o s p h o l i p i d (l a v e n d e r );L D ,L i p i dd r o p l e t s (b r o w n )图1 脂质代谢在P R R S V 感染中的作用F i g .1 T h e r o l e o f l i pi dm e t a b o l i s mi nP R R S Vi n f e c t i o n 1 脂质代谢在P R R S V 感染中的作用1.1 脂肪酸在P R R S V 感染中的作用脂肪酸在多种病毒感染中都起到了重要作用㊂研究表明,干扰脂肪酸生物合成途径的药物对多种囊膜病毒具有抗病毒作用,包括人类巨细胞病毒(H u m a n c y t o m e g a l o v i r u s ,H C MV )[13]㊁乙型肝炎病毒(H e pa t i t i s B v i r u s ,H B V )[14]㊁丙型肝炎病毒(H e p a t i t i sCv i r u s ,H C V )[15]㊁人类免疫缺陷病毒(H u m a n i m m u n o d e f i c i e n c y vi r u s ,H I V )[16]和裂谷热病毒(R i f tV a l l e y f e v e r v i r u s ,R V F V )[17]等,证实了脂肪酸在囊膜病毒复制中的重要性㊂脂肪酸参与了P R R S V 的复制㊁组装和释放,并且与炎症和免疫反应有关㊂研究表明,G P 5和M 蛋白的棕榈酰化是病毒组装和出芽所必需的,脂肪酸能影响G P 5和M 蛋白的棕榈酰化,从而影响P R R S V 的组装与释放,表明脂肪酸对于P R R S V 的增殖至关重要[18]㊂5'-磷酸腺苷酸活化的蛋白激酶(5'-a d e n o s i n e m o n o p h o s ph a t e -a c t i v a t e d p r o t e i n k i n a s e ,AM P K )是一个调控能量代谢的关键分子,能够抑制脂肪酸合成限速酶乙酰辅酶A 羧化酶(a c e t y l -C o Ac a r b o x y l a s e1,A C C 1)的活性,从而抑制细胞内脂肪酸的合成代谢[19]㊂L o n g 等[20]研究证实,在P R R S V 感染过程中病毒通过AM P K 使A C C 1活性降低,从而抑制脂肪酸合成,且脂肪酸合成抑制剂C 75能够显著抑制P R R S V 增殖㊂熊玉剑[21]研究表明,P R R S V 及P R R S V N S P 4均能通过过氧化物氧化还原蛋白5(pe r o x i r e d o x i n 5,P R D X 5)调控AM P K -A C C 1信号通路,进而抑制脂肪酸合成,P R D X 5抑制P R R S V 增殖,并主要抑制P R R S V 的释放㊂此外,有研究发现中链脂肪酸(m e d i u m -c h a i n f a t t y ac id s ,M C F A s )能够抑制P R R S V 感染㊂Y a n g 等[22]检测了4种M C F A s 的细胞毒性及其对P R R S V 的抑制率,结果显示,在4种M C F A s 中,辛酸单甘酯(c a p r yl i c m o n o g l yc e r ide ,C MG )对细胞的毒性最小,而对P R R S V 的抑制率最高㊂经C MG 治疗后仔猪促炎细胞因子(白细胞介素6(i n t e r l e u k i n ,I L -6)㊁I L -8㊁I L -1β㊁I F N -γ㊁肿瘤坏死因子-α(t u m o r n e c r o s i s f a c t o r -α,T N F -α))水平显著下调,抗炎细胞因子(I L -10)水平显著上调㊂蓝俊虹[23]研究发现,α-单月88614期罗琴等:脂质代谢和糖代谢在P R R S V感染宿主细胞中作用研究进展桂酸甘油酯(α-g l y c e r o lm o n o l a u r a t e,α-GM L)具有显著抑制P R R S V的作用,作用机制主要是降低P R R S V的活力,减少P R R S V G P5与M蛋白及细胞受体C D163的表达,同时抑制N F-κB通路,并减少T N F-α的分泌㊂前列腺素E2(p r o s t a g l a n d i nE2,P G E2)来源于花生四烯酸,通过激活限速酶环氧化酶1/2型(c y c l o o x y g e n a s e t y p e1/2,C O X-1/2)在发热中起重要作用㊂H P-P R R S V可通过E R K1/2-p-C/E B P-β信号通路诱导C O X-1的表达,导致P G E2的增加[24]㊂H P-P R R S V N S P2还能够通过激活M E K1-E R K1/2-C/E B P-β信号通路诱导C O X-2上调,从而增加小胶质细胞中P G E2的产生[25]㊂1.2胆固醇在P R R S V感染中的作用胆固醇是真核细胞生物膜中的一种丰富的脂质,对需要生物膜来建立感染的病毒增殖中起着重要作用㊂S u n等[26]研究表明,用甲基-β-环糊精(m e t h y l-β-c y c l o d e x t r i n,MβC D)(一种用于去除细胞膜胆固醇的药物)预处理非洲绿猴肾上皮细胞(M a r c-145)可显著抑制P R R S V感染,并呈剂量依赖性,而补充外源性胆固醇后可部分恢复P R R S V 的感染性,表明P R R S V感染能力的下降是细胞膜胆固醇的去除而导致的;进一步研究发现,细胞膜胆固醇的减少显著抑制了病毒的进入,尤其是病毒的吸附和释放㊂H u a n g等[27]研究也证实了细胞膜胆固醇对P R R S V的进入至关重要,表明细胞膜中的胆固醇是P R R S V感染的关键成分㊂胆固醇-25-羟化酶(c h o l e s t e r o l-25-h y d r o x y l a s e, C H25H)是一种重要的干扰素刺激基因(i n t e r f e r o n-s t i m u l a t e d g e n e,I S G)编码的多面体膜蛋白,可以催化胆固醇氧化生成25-羟基胆固醇(25-h y d r o x y c h o l e s t e r o l,25H C)[28]㊂C H25H和25H C 在调节胆固醇代谢㊁炎症㊁免疫和抗病毒感染中发挥了重要作用[29]㊂研究发现,P R R S V N S P1β和N S P11在H E K293F T中通过溶酶体途径介导C H25H的降解,但在M a r c-145细胞中N S P1β和N S P11可以颉颃C H25H的抗P R R S V活性[28];C H25H通过阻止病毒进入而显著抑制P R R S V感染,表现出降低催化活性的C H25H具有针对P R R S V的抗病毒作用[30]㊂在另一项研究中, P R R S V E蛋白通过泛素-蛋白酶体途径降解猪C H25H(p o r c i n e C H25H,p C H25H),敲低p C H25H能降低E蛋白诱导的炎症细胞因子表达,而过表达p C H25H则具有相反的效果,表明p C H25H的表达与E蛋白诱导的炎症反应相关[31]㊂25H C在体外具有抗P R R S V感染的作用,能削弱P R R S V的吸附和进入,但不影响病毒基因组的合成和病毒体的释放[32]㊂S o n g等[30]证明了25H C可以在相对较低的剂量下显著抑制P R R S V感染猪肺泡巨噬细胞(p o r c i n e a l v e o l a rm a c r o p h a g e s,P AM s)和M a r c-145细胞,且25H C可以抑制P R R S V的复制并促进P AM s中I L-1β和I L-8的产生[33]㊂3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶还原酶(3-h y d r o x y-3-m e t h y l g l u t a r y l-c o e n z y m eAr e d u c t a s e,HMG C R)是参与胆固醇合成的限速酶,HMG C R磷酸化水平下调是其激活形式㊂HMG C R的活性受AM P K和蛋白磷酸酶2(p r o t e i n p h o s p h a t a s e2,P P2A)2种激酶的调控,活化的P P2A激活HMG C R,而活化的AM P K抑制HMG C R的活性[19]㊂许多病毒可以通过HMG C R调节胆固醇合成,如H B V[34]㊁H C V[35]㊁H C MV[36]㊁D E N V[37]及卡波西肉瘤相关疱疹病毒(K a p o s i s s a r c o m a-a s s o c i a t e d h e r p e s v i r u s, K S H V)[38]等㊂最近研究表明,P R R S V感染通过降低P P2A磷酸化水平以激活HMG C R,导致细胞胆固醇增加,而N S P4在这一过程中发挥了重要作用㊂此外,P R R S V N S P4还可通过调节细胞胆固醇代谢抑制I F N-Ⅰ的产生[39]㊂研究表明,膜蛋白-前蛋白转化酶枯草溶菌素9(p r o p r o t e i n c o n v e r t a s e s u b t i l i s i nk e x i n9,P C S K9)在胆固醇运输过程中具有重要作用,P C S K9可与胆固醇代谢相关的受体L D L R互作,并能抑制P R R S V复制[40-41]㊂综上,胆固醇对于P R R S V的吸附㊁进入㊁复制和释放等阶段至关重要㊂此外,胆固醇还参与了炎症反应以及对I F N-Ⅰ的调控㊂1.3磷脂在P R R S V感染中的作用磷脂主要包括甘油磷脂(g l y c e r o l p h o s p h o l i p i d,G P)和鞘磷脂(s p h i n g o m y e l i n,S M)㊂G P可分为磷脂酰甘油(p h o s p h a t i d y l g l y c e r o l,P G)㊁磷脂酰丝氨酸(p h o s p h a t i d y l s e r i n e,P S)㊁磷脂酰肌醇(p h o s p h a t i d y l i n o s i t o l,P I)㊁磷脂酰胆碱(p h o s p h a t i d y l c h o l i n e,P C)㊁磷脂酰乙醇胺(p h o s p h a t i d y l e t h a n o l a m i n e,P E)和心磷脂(c a r d i o l i p i n,C L)㊂研究表明,多种病毒感染都可引起磷脂的代谢变化,如I A V感染引起P S㊁P I和S M 的代谢变化,在I A V感染中发挥了重要作用[6]㊂猪伪狂犬病病毒(P s e u d o r a b i e sv i r u s,P R V)感染猪肺泡巨噬细胞系(i P AM)可引起P E㊁P S㊁P C㊁P G㊁P I 及神经酰胺(c e r a m i d e,C e r)的代谢变化[42]㊂D E N V9861中国畜牧兽医51卷可以通过重塑循环重新配置磷脂,以改变内膜并促进复制复合物的形成[43]㊂磷脂与P R R S V感染引起的凋亡㊁炎症及病毒复制相关㊂研究表明,P S暴露在细胞表面是P R R S V感染细胞中显示的凋亡证据,可以作为一种重要的吞噬信号[44-45]㊂W a n g等[46]研究发现,抑制磷脂酰肌醇-3-激酶(p h o s p h a t i d y l i n o s i t o l-3-k i n a s e,P I3K)减少了病毒基因转录,使病毒蛋白合成显著减少,表明P I3K可影响病毒复制㊂最新研究发现,鞘磷脂磷酸二酯酶酸性样蛋白3B (s p h i n g o m y e l i n p h o s p h o d i e s t e r a s e a c i d-l i k e3B, S M P D L3B)抑制了P R R S V的吸附㊁进入㊁复制和释放,且其缺失显著抑制了P R R S V的增殖,表明S M P D L3B在P R R S V复制中起积极作用[47]㊂N-乙酰鞘氨醇脱乙酰基酶(N-a c y l s p h i n g o s i n e a m i d o h y d r o l a s e1,A S A H1)的自然底物C e r是S M途径信号系统的中心分子,A S A H1可以通过水解C e r激活N F-κB信号通路,A S A H1的上调表达在P R R S V感染引起的细胞凋亡和炎症反应中扮演着重要角色[48]㊂1.4脂滴在P R R S V感染中的作用脂滴是一种高度动态的细胞器,主要负责中性脂质的储存㊂脂滴来源于内质网,具有独特的结构,由中性脂质的疏水性核心组成㊂研究表明,病毒感染宿主细胞后可以诱导脂滴积累,宿主脂滴也可以调节病毒的生命周期,如轮状病毒(R o t a v i r u s,R V)利用脂滴进行复制,阻断脂滴积累可以显著减少R V增殖产生的子代病毒数量[49];D E N V感染增加了细胞内脂滴的数量,C75减少了D E N V感染和未感染细胞中脂滴的量,也抑制了D E N V的复制[50];H C V的核心蛋白与二酰基甘油酰基转移酶(d i a c y l g l y c e r o l a c y l t r a n s f e r a s e1,D G A T1)相互作用,使核周区脂滴增加并聚集,而抑制D G A T1活性可减少感染性病毒粒子的产生[51]㊂此外,脂滴还可作为一个平台,招募病毒蛋白,加速病毒组装,增加病毒复制[52]㊂P R R S V感染可以诱导脂滴积累,脂滴参与了P R R S V的复制和组装,且与细胞炎症相关㊂研究表明,P R R S V感染下调N-M y c下游调控基因1(N-M y cd o w n s t r e a m-r e g u l a t e d g e n e1,N D R G1)的表达,激活脂噬以促进子代病毒的复制和组装[53]㊂Y u等[54]研究表明,P R R S V感染会增加M a r c-145和P AM s细胞中的脂滴数量,而表没食子儿茶素没食子酸酯(e p i g a l l o c a t e c h i n g a l l a t e,E G C G)可以抑制P R R S V诱导的脂滴形成和脂质含量的增加㊂韩莹倩[55]选择了参与脂质合成和分解并调控脂滴趋向性的主要基因R a b18进行研究,利用R a b18基因敲低和显著负突变体证实R a b18参与P R R S V复制;进一步检测敲低R a b18基因对P R R S V生命周期的影响发现,R a b18基因参与P R R S V子代病毒的组装㊂最新研究表明,P R R S V感染可诱导脂滴积累,减少脂滴积累可显著降低P R R S V复制和抑制N F-κB 信号通路,同时下调I L-1β和I L-8的转录[56]㊂1.5脂筏在P R R S V感染中的作用脂筏是富含胆固醇和鞘脂的质膜微域(图2),参与了各种重要的细胞过程,包括胞吞作用㊁胞吐作用和细胞信号传导,基本上在病毒生命周期的每个阶段都依赖脂筏进行感染[57-59]㊂脂筏在许多病毒的生命周期中起着重要的作用,如宿主脂筏在I A V的组装和出芽中起着关键作用,且I A V可以利用脂筏依赖的内吞作用进行宿主内化[60]㊂一些病毒如S A R S-C o V-2[61]㊁黄病毒[62]及埃博拉病毒(E b o l a v i r u s,E B O V)[63]等都利用脂筏进入宿主细胞,表明病毒在进入阶段与细胞膜上的脂筏有密切关系㊂图2脂筏结构示意图F i g.2S c h e m a t i c o f l i p i d r a f t s t r u c t u r e09614期罗琴等:脂质代谢和糖代谢在P R R S V感染宿主细胞中作用研究进展一些证据表明,P R R S V进入细胞依赖脂筏㊂Y a n g等[64]证明了P R R S VG P3和G P4蛋白在病毒进入过程中与脂筏相关,细胞脂筏的破坏抑制了P R R S V的进入,且细胞膜上的脂筏在P R R S V的复制和释放中起着重要的作用㊂D u等[65]证明P R R S V G P4蛋白是一种糖基磷脂酰肌醇(g l y c o s y l-p h o s p h a t i d y l i n o s i t o l,G P I)修饰的膜相关蛋白,G P4与C D163在细胞膜脂筏上的共定位暗示了该复合物对于P R R S V进入和感染的重要作用㊂孙颖[66]用针对性抑制脂筏介导的胞吞途径的药物处理细胞以研究脂筏在P R R S V侵入M a r c-145细胞过程中的作用,结果表明,当脂筏介导的胞吞途径被抑制时,病毒增殖能力下降;进一步用针对性抑制网格蛋白介导的胞吞途径的药物处理细胞后P R R S V的感染受到明显的抑制,表明P R R S V侵入M a r c-145细胞的胞吞途径是依赖脂筏和网格蛋白的㊂然而,H u a n g等[27]研究证明,胆固醇缺乏并不改变M a r c-145细胞中P R R S V受体C D163的表达水平,对网格蛋白介导的胞吞作用没有影响,但干扰了脂筏依赖的胞吞作用㊂2糖代谢在P R R S V感染中的作用2.1糖酵解增强对P R R S V的作用一些病毒感染可以影响宿主细胞内的糖代谢水平,如H C MV感染促进糖酵解水平显著增加,导致葡萄糖消耗增加,从而抑制病毒复制[7]㊂D E N V和I A V感染能够诱导糖酵解途径,从而促进病毒复制[67-68]㊂H C V重编程宿主细胞代谢,以利于有氧糖酵解水平的提高[69]㊂腺病毒(A d e n o v i r u s)的基因产物E4O R F1诱导宿主细胞葡萄糖代谢上调,通过激活MY C来促进上皮细胞中糖酵解的增强[70]㊂P R R S V可以通过糖酵解途径来促进病毒复制㊂L i u等[71]发现P R R S V G P5在细胞质中与甘油醛-3-磷酸脱氢酶(g l y c e r a l d e h y d e-3-p h o s p h a t e d e h y d r o g e n a s e,G A P D H)相互作用,抑制G A P D H 进入细胞核,并通过其糖酵解活性促进P R R S V复制㊂Z h a n g等[72]研究发现,P R R S V感染促进糖酵解产生乳酸,乳酸靶向MA V S抑制R L R信号,从而促进病毒复制㊂毛健等[73]研究表明,P R R S V感染M a r c-145细胞可明显提高糖酵解的关键激酶乳酸脱氢酶A(l a c t a t e d e h y d r o g e n a s eA,L D H A)表达,并呈现病毒感染剂量依赖性㊂抑制L D H A和糖酵解可以显著抑制P R R S V N蛋白表达并降低病毒滴度,表明L D HA可显著影响P R R S V复制,糖酵解在P R R S V感染中发挥重要作用㊂2.2三羧酸循环代谢产物对P R R S V的作用三羧酸循环是有氧生物获得生命活动所需能量的主要途径㊂三羧酸循环的整个过程需要多种酶的协同作用,并产生多种中间代谢产物,以此来维持细胞稳定的生存环境㊂衣康酸是免疫反应基因1 (i m m u n o r e s p o n s i v e g e n e1,I R G1)通过催化顺乌头酸产生的三羧酸循环的代谢产物,在代谢和免疫中起重要作用㊂P a n g等[74]研究发现,衣康酸4-辛酯(4-o c t y l i t a c o n a t e,4-O I)可通过干扰病毒的吸附㊁复制和释放,剂量依赖性地抑制P R R S V增殖;还可通过增强核因子红细胞2相关因子2(n u c l e a r f a c t o r e r y t h r o i d2-r e l a t e df a c t o r2,N r f2)信号传导抑制P R R S V诱导的炎症反应,表明4-O I是一种很有前景的抗P R R S V候选药物㊂3小结与展望脂质代谢中脂肪酸㊁胆固醇㊁磷脂㊁脂滴和脂筏在P R R S V感染中发挥了重要作用㊂其中,脂肪酸对于P R R S V的增殖至关重要,参与了P R R S V的复制㊁组装及释放等阶段,且与炎症和免疫有关;胆固醇参与了P R R S V感染的多个阶段,包括P R R S V 的吸附㊁进入㊁复制和释放,同时也参与了炎症反应及对I F N-Ⅰ的调控;磷脂在P R R S V复制中起促进作用并与P R R S V感染引起的细胞凋亡有关;脂滴参与了P R R S V的复制和组装,同时与细胞炎症相关;细胞膜上的脂筏是P R R S V进入宿主细胞所必需的,并参与了P R R S V的复制和释放㊂同样,糖代谢中的糖酵解途径在P R R S V感染中具有重要作用,P R R S V通过增强糖酵解以促进病毒复制㊂此外,三羧酸代谢产物4-O I能够抑制P R R S V的复制和P R R S V诱导的炎症反应㊂总而言之,脂质代谢和糖代谢在P R R S V感染中都扮演了十分重要的角色㊂目前,P R R S V的商业疫苗仍难以提供令人满意的效果,且无有效的药物进行治疗㊂因此,对P R R S V感染机制的研究仍然是一项极为紧迫的任务㊂脂质代谢是病毒与宿主细胞的抗衡过程中重要的一部分,脂质代谢参与了P R R S V感染的多个阶段,探索脂质代谢和P R R S V之间的相互作用,有利于增加对病毒复制机理的认知,可为未来抗P R R S V药物的研发提供一些新思路,如对于一些依赖胆固醇进行复制且缺乏治疗方法的病毒而言,胆固醇可作为治疗靶点[75]㊂P R R S V通过增强糖酵1961中国畜牧兽医51卷解以促进病毒复制,三羧酸循环代谢产物又可抑制病毒复制,了解糖代谢与P R R S V感染之间的关系,有助于阐明P R R S V的复制机制㊂随着代谢组学的发展和完善,脂质代谢和糖代谢影响P R R S V感染机制的研究将会变得更为简单和快速,这也为今后抗P R R S V药物研发提供了更大的可能性㊂参考文献(R e f e r e n c e s):[1] L IP,S H E N Y,WA N G T,e ta l.E p i d e m i o l o g i c a ls u r v e y o fP R R Sa n d g e n e t i cv a r i a t i o na n a l y s i so f t h eO R F5g e n ei n S h a n d o n g p r o v i n c e,2020-2021[J].F r o n t i e r s i nV e t e r i n a r y S c i e n c e,2022,9:987667.[2] HA N J,Z H O U L,G E X,e ta l.P a t h o g e n e s i sa n dc o n t r o l o f t h e C h i n e s e h i g h l y p a t h o g e n i c P o r c i n er e p r o d u c t i v e a n d r e s p i r a t o r y s y n d r o m e v i r u s[J].V e t e r i n a r y M i c r o b i o l o g y,2017,209:30-47. 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糖尿病齐鲁医院内分泌科陈丽

糖尿病治疗进展
2010年中国糖尿病防治指南最新推荐 2 型糖尿病治疗路径图
DM治疗新理念

更加强调β 细胞功能在控制血糖上的地位

降低高糖毒性， β 细胞休息理论调整β 细胞分泌模式控制血糖保存β 细胞，持久控制血糖

DM治疗药物与方法

口服降糖药物选择多样化
促胰岛素分泌剂：磺脲类、格列奈类、DPP-VI抑制剂非促胰岛素分泌剂：双胍类、噻唑烷二酮类、α -糖苷酶抑制剂
预示光明未来:彻底消除糖尿病之痛
糖耐量减低（IGT）*
糖尿病（DM）
<7.0
≥7.0
7.8-<11.1
≥11.1
IFG或IGT统称为糖调节受损（IGR，即糖尿病前期）
妊娠糖尿病诊断

最新2011ADA指南更新 ADA更新诊断标准目的是进一步优化妊娠妇女及其子女
的预后

ADA指出，依据更新的诊断标准，GDM患病率将上升
糖尿病综合控制目标
脂毒性与糖毒性作用环节
1.基因 2.糖毒性
B细胞功能损伤胰岛素分泌功能不全肝糖输出↑ FFA ↑ 脂毒性胰岛素分泌 ↓ 和周边组织利用糖能力↓
高血糖血症
糖毒性
组织对胰岛素反应 ↓
1.肥胖 2.家族史 3.不良生活习惯
胰岛素抵抗作用
高胰岛素血症
糖脂病(diabetes mellipitus)
糖尿病诊疗进展
山东大学齐鲁医院陈丽
糖尿病诊疗进展

中国糖尿病流行病学特点糖尿病病因学进展糖尿病诊断糖尿病控制目标糖尿病治疗进展
中国糖尿病患病率持续攀升
• 最新中国糖尿病流行病学调查显示中国20岁以上的成人2型糖尿病的患病率为9.7%，患者人数高达9240万，1.482亿成人处于糖尿病前期，该结果发表于《新英格兰杂志》糖尿病患者人数(百万)

CDS隔空对话关于糖尿病的发病机制，一文了解国内外权威见解

CDS隔空对话关于糖尿病的发病机制，一文了解国内外权威见解编者按：多年来，人们一直未停止对糖尿病发病机制的深入探索。

在中华医学会糖尿病学分会第二十二次全国学术会议（CDS2018）上，罗马医科大学医院Paolo Pozzilli教授从临床视角探讨了2型糖尿病（T2DM）的发病机制，复旦大学附属中山医院李小英教授报告了糖脂代谢的表观遗传调控、泛素化调控与胰岛素抵抗。

在会议现场，《国际糖尿病》邀请两位专家分别就相关问题发表了专业见解。

Pozzilli教授和李小英教授专访来自idiabetes 00:0016:32Paolo Pozzilli教授从临床角度看T2DM病理生理机制Paolo Pozzilli教授：过去几年，我们在肝脏、肌肉和β细胞方面对T2DM病理生理学加深了认识，并关注导致糖尿病的其他因素，特别是肠道菌群。

脂肪可通过促进炎症因子释放，破坏β细胞。

胰高糖素也是引起糖尿病发病的重要原因。

从临床角度来说，目前有很多药物可用于T2DM治疗。

若要更好地治疗糖尿病，首先需确定患者为何会发病，根据其表型和基因型选择最佳治疗，而不仅仅考虑对血糖的控制。

所以，本届CDS年会的“全球糖尿病教育”专题传达的主要信息是我们需要对患者进行评估，识别病因，了解饮食等生活方式在其中所起的重要作用。

在确定这些因素后，可根据指南推荐实施最佳治疗，但要以患者为中心，而不是唯指南推荐是从。

肠道菌群在T2DM发病中的作用Paolo Pozzilli教授：最近几年，我们了解到体内数十亿的肠道微生物是如何影响人体代谢的。

人体对摄入的不同食物有不同反应，进食方式会改变肠道菌群，我们可通过调节饮食更好地促进胰岛素分泌，使GIP和GLP-1适时分泌，以促进胰岛素分泌。

肠道菌群依赖于人体进食，会影响进食所需激素的反应，可改变糖尿病治疗方式，进而减少肥胖发生。

因为肥胖与“有害”肠道菌群有关，而正常体重与“有益”肠道菌群有关。

LADA患者的治疗现状和最新进展Paolo Pozzilli教授：诊断成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA）时，应检测GAD抗体和残留β细胞功能，后者可通过评估C肽分泌来实现。

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ｗｉｔｈ．ＤｉａｂｅｔｅｓＩｎｄｕｃｅｄｂｙＰｅｐｔｉｄｅＲｅｃｅｐｔｏｒＡｎｔａｇｏｎｉｓｔＰｒｏ３（ＧＩＰ）
ＤＡＮＧＳｈａｎ，ＹＡＮＧＦｅｉ，ＬＵＨｏｎｇ — ｊｕｎ。，ＷＵＹｏｕ — ｗｅｉ，ＺＨＡＮＧＪｉａｎ，ＹＩＭｏ，
ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＸｉａｎＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｘｔａｎ７１００６１，Ｃｈｉｎａ）
ｄｏｉ：１Ｏ．３９６９／Ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－７４１４．２０１７．Ｏ５．Ｏ１１
ＳｔｕｄｙｏｎＧｌｙｃｏｌｉｐｉｄＭｅｔａｂｌｉｓｍ０ｆＭｉｃｅ
（１．陕西省人民医院消化内二科，西安
摘要：目的
７１００６８；７１００６１）
２．西安交通大学第一附属医院内分泌科，西安
糖、血脂、瘦素、脂联素以及脂肪组织炎症的影响。方法
研究糖依赖性胰岛素释放肽（ＧＩＰ）受体抑制剂ｐｒｏ３（ＧＩＰ）对高脂饲料和链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠的血２７只小鼠随机分正常组和模型组，模型组喂食高脂饲料并注射
现代检验医学杂志
第３２卷
第５期
２０１７年９月ＪＭｏｄＬａｂＭｅｄ，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．５，Ｓｅｐｔｅ．２０１７
４１
ＧＩＰ受体抑制剂对诱导的糖尿病小鼠糖脂代谢的研究
党珊，杨飞，吕宏军。，吴友பைடு நூலகம்伟，张健，易默，史丽萍，施秉银
０．０５）。病理ＨＥ染色观察，ｐｒｏ３（ＧＩＰ）组脂肪组织的炎症浸润较糖尿病组明显减轻，此外ｐｒｏ３（ＧＩＰ）组血清瘦素水平显著
低于糖尿病组（ｔ一５．Ｏ４，Ｐ＜０．０１），但两组的血清三酰甘油、胆固醇及脂联素水平均无明显差异（Ｐ＞０．０５）。结论
ＳＨＩＬｉ — ｐｉｎｇ，ＳＨＩＢｉｎｇ — ｙｉｎ（１．ｔｈｅＳｅｃｏｎｄＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，ＳｈａａｎｘｉＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＰｅｏｐｌｅ ’ ｓＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｘｉａｎ７１００６８，Ｃｈｉｎａ；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＥ｛ｌｄｏｃｒｉｎｏ｝ｏｇｙ，
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｃｅｆｆｅｃｔｓｏｆｇｌｕｃｏｓｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃｐｅｐｔｉｄｅｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｔａｇｏｎｉｓｔｐｒｏ３
ｐｒｏ３
（ＧＩＰ）能显著地降低糖尿病小鼠的血糖、胰岛素、瘦素水平，并减轻脂肪的炎症浸润，进而调节糖尿病小鼠的代谢水平。
关键词：糖依赖性胰岛素释放肽；ｐｒｏ３（ＧＩＰ）；链脲佐菌素；糖尿病小鼠；代谢中图分类号：Ｒ一３３２文献标志码：Ａ文章编号：１６７１ — ７４１４（２０１７）０５ — ０４１一Ｏ４
观察脂肪组织炎症的变化。结果药物干预６周后，ｐｒｏ３（ＧＩＰ）组的血糖较糖尿病组的血糖明显减低，差异有统计学显著
性意义（ｔ一８．４３，Ｐ＜０．０１），０，３０，６０和１２０ｍｉｎ的胰岛素水平也均明显低于糖尿病组（ｔ一３．９Ｏ，２．６Ｏ，６．８８和３．３３，Ｐ＜
链尿佐菌素，血糖≥１６．９ｍｍｏｌ／Ｌ者共１７只，为糖尿病模型组。将模型组分为糖尿病对照组和ｐｒｏ３（ＧＩＰ）组，后者给予
ｐｒｏ３（ＧＩＰ）进行干预。每周追踪血糖，并进行糖耐量的测定。取小鼠血清测血脂、瘦素、脂联素，其脂肪组织进行ＨＥ染色，