动物组织总RNA提取实验操作

常规动物组织总RNA提取

(Trizol法)

实验操作流程

1摘要

本标准操作规程适用于一般动物组织的总RNA提取，一般情况下能得到高质量的总RNA。2提取步骤

a)用液氮预冷研钵，组织样品放入加有液氮的研钵中，在液氮下把组织样品充分研磨成

粉末。

b)把样品粉末转入到装有TRIzol裂解液的2.0mL EP管中，（每mL裂解液可加50mg组

织样品）剧烈震荡，充分混匀，平放室温静置5-10min。

c)10000rpm，4℃离心5min。

d)吸取上清液至新的2.0mL EP管中，每毫升裂解液加入200μL氯仿/异戊醇，剧烈颠倒

混匀。

e)10000rpm，4℃离心10min。

f)吸取上清液至新的1.5mL离心管，注意不要吸到中间蛋白层，加入等上清液体积的异

丙醇，轻轻颠倒混匀。

g)放入-20℃冰箱沉淀1h。

h)13600rpm，4℃离心20min。

i) 吸弃上清，加入1mL 75%乙醇，用移液器吹洗沉淀。

j) 10000rpm，4℃离心3min，吸弃上清，短暂离心，吸去残留液体，晾干3-5min。

k)用30-100μL DEPC水或者RNase-free水溶解沉淀。

3设备与试剂

3.1设备

3.2试剂