动物组织总RNA提取实验操作
动物组织中总RNA的提取
动物组织中总RNA的提取
1、取20--40mg的组织，转移至预冷的研钵中，加液氮研磨至粉末；
2、向研钵中加入400μl Buffer-R-I，用装有21-25号针头的注射器反复抽吸8-10次，并转入1.5ml离心管（试剂盒内提供）；
3、加入150μl Buffer-R-II，漩涡振荡15-30s，12000×g离心5min；
4、取上述上清液至另一1.5ml 离心管，加入250μl异丙醇，混合均匀；
5、将制备管置于2ml离心管（试剂盒内提供），转移步骤4中的混合液到制备管中，6000×g离心1min
6、弃掉滤液，将制备管重新置于2ml离心管中，加入500μl Buffer -W1A，12000×g离心1min
7、弃掉滤液，将制备管重新置于2ml离心管中，加入700μl Buffer -W2，12000×g离心1min
8、重复操作7
9、弃掉滤液，将制备管重新置于2ml离心管中，12000×g离心1min
10、将制备管放入干净的 1.5ml的离心管中，在制备管膜中央加70-100μl Buffer-TE（DNase and RNase-free）或RNase-free水
11、室温静置1min，12000×g离心1min，洗脱得到RNA。
总RNA的提取及相关实验方法
总RNA的提取（Trizol法提取）在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA制备工作。
若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。
在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。
1.提取组织RNA时，每50～100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5分钟；3.在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后，12000g（2℃～8℃）离心15分钟；4.取上层水相置于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15℃～30℃）放置10分钟,12000g（2℃～8℃）离心10分钟；5.弃上清，按照每1ml TRIZOL加1ml 75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（2℃～8℃）离心5分钟，弃上清；6.让沉淀的RNA在室温下自然干燥；7.用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。
PCR实验室常用DNA聚合酶有三种：TaKaRa Taq TM，TaKaRa E X Taq TM和Pyrobest TM DNA Polymerase。
TaKaRa Taq TM是一般的DNA聚合酶，保真性较差，但价钱便宜，一般用于基因表达的检测等。
TaKaRa E X Taq TM是具有Proof reading 活性的耐热性DNA聚合酶，具有一定的保真性，而且其扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A”碱基，如果希望直接将产物克隆到T-vector可以用此酶。
Pyrobest TM DNA Polymerase也是具有Proof reading活性的耐热性DNA聚合酶，其特点是保真性极高，扩增得到的PCR产物为平滑末端。
磁珠法动物组织总rna提取试剂
磁珠法动物组织总rna提取试剂磁珠法动物组织总RNA提取试剂是一种常用于从动物组织中提取总RNA的试剂。
总RNA是指包括mRNA、tRNA、rRNA等各种类型的RNA，它们在细胞中起到重要的生物学功能。
动物组织总RNA的提取对于研究基因表达、生物学功能以及疾病研究等领域具有重要意义。
下面将详细介绍磁珠法动物组织总RNA提取试剂的原理、操作流程以及优缺点。
一、原理：磁珠法动物组织总RNA提取试剂的原理是利用磁珠在磁场中的作用来实现RNA的分离和纯化。
磁性珠子（磁珠）是一种微米级别的颗粒，表面含有特异性结合分子（如寡聚核苷酸、抗体等），可以与RNA特异性结合。
通过结合物的磁场作用，可以将RNA与其他杂质分离开，并进行纯化。
二、操作流程：磁珠法动物组织总RNA提取试剂的操作流程通常可以分为样品处理、细胞破碎、RNA结合、磁珠分离、洗涤和洗脱等步骤。
（一）样品处理：首先要将收集到的动物组织样品进行样品处理，如清洗、离心等，以去除表面的杂质并提取细胞。
（二）细胞破碎：将经过样品处理的细胞进行破碎，以释放细胞内的RNA。
目前常用的破碎方法包括机械破碎、酶解和超声破碎等。
选择不同的破碎方法需要根据所研究的组织类型、细胞数量以及目标RNA 的适应性来确定。
（三）RNA结合：将破碎后的细胞溶液与磁珠结合试剂加入，并进行混匀。
通过磁性珠子表面的特异性结合分子与RNA结合，使得RNA能够与磁珠结合。
（四）磁珠分离：通过磁力，将含有磁性珠子的RNA溶液与其他不具有磁性的杂质分离。
可以利用磁力器将磁性珠子收集到一侧，将无磁性的溶液倒掉，从而分离纯化RNA。
（五）洗涤：为了去除残留的污染物，可以进行洗涤步骤。
将洗涤缓冲液加入含有磁珠的管中，再次使用磁力使磁性珠子沉淀，倒掉上清液，然后重复该步骤多次以保证洗涤的彻底性。
（六）洗脱：最后，用洗脱缓冲液将RNA从磁珠上洗脱下来。
将洗脱缓冲液加入磁性珠子所在的管中，轻轻摇晃管子，使RNA溶解在洗脱缓冲液中，从而得到纯化的RNA溶液。
动物组织中总RNA的提取
通过对动物疾病模型的总RNA进行分析，有助于 揭示疾病发生、发展的分子机制，为药物研发和 疾病治疗提供依据。
物种进化研究
通过对不同物种的总RNA进行比较分析，可以研 究物种之间的进化关系，深入了解生物多样性。
02
总RNA提取的基本原理
RNA的基本结构与性质
总结词
了解RNA的基本结构和性质对于提取总RNA至关重要，因为 它们决定了提取过程中的许多因素，如使用的试剂、方法以 及RNA的稳定性。
疾病研究
RNA在各种动物疾病的发生和发 展过程中发挥重要作用，对其进 行分析有助于深入了解疾病的机 制和寻找治疗策略。
生物进化
通过对不同物种的RNA进行比较 分析，可以揭示物种之间的进化 关系和生物多样性。
总RNA提取的目的和意义
1 2 3
开展基因表达研究
提取高质量的总RNA是进行基因表达分析的前提， 如实时定量PCR、微阵列技术和RNA-seq等。
02
03
新鲜组织
确保组织新鲜，避免长时 间暴露在空气中，以免 RNA降解。
组织匀浆
将组织剪碎后放入匀浆器 中，加入适量的缓冲液， 充分匀浆。
组织清洗
匀浆后，用离心机将组织 碎片和杂质去除，得到澄 清的匀浆液。
细胞分离与破碎
细胞分离
将匀浆液通过离心机进行离心， 使细胞下沉，上清液为胞质成分 。
细胞破碎
药物疗效评估
在药物治疗过程中，监测动物组织中RNA的表达变化可以评估药物的疗效，为药物研发和优化提供参 考。
ห้องสมุดไป่ตู้
在药物研发中的应用
药物靶点筛选
利用总RNA提取技术，可以研究药物作 用机制，发现潜在的药物靶点，为新药 研发提供方向。
Trizol提取总RNA-碧云天改进
Trizol 法提取RNA实验步骤1.细胞裂解或组织匀浆。
a. 贴壁细胞吸尽培养液，每10平方厘米细胞加入1ml Trizol。
一般六孔板每孔加1ml Trizol，12孔板每孔加0.5ml Trizol。
晃动3-5下，再用枪吹打2-3下，确保全部裂解，然后吸至离心管中。
b. 悬浮细胞离心收集细胞，吸尽液体，每五百万至一千万动植物或酵母细胞，或一千万细菌，加入1ml Trizol。
用枪吹打或适当vortex，确保全部裂解。
某些酵母和细菌如裂解不充分，可用匀浆器匀浆，确保全部裂解。
c. 组织先将组织剪切成小块，放入普通玻璃匀浆器内。
每50mg-80mg组织加入1ml Trizol，匀浆。
对于RNA完整性要求比较高的情况，推荐先液氮冷冻组织块，然后在低温下用研钵研碎组织，随后再加入Trizol进行总RNA抽提。
2. 对于某些蛋白，多糖或脂含量很高的细胞或组织，Trizol裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物。
需12,000g 4℃离心10分钟，然后吸取澄清的Trizol裂解产物至一新的离心管中。
3. 室温放置5分钟，使样品充分裂解。
4. 每毫升Trizol加入0.2ml氯仿，vortex混匀或猛烈晃动15秒，室温放置2-3分钟。
5. 12,000g 4℃离心15分钟，然后吸取含总RNA的上层无色水相至一新的离心管中，每毫升Trizol约可吸取0.5-0.55ml。
6. 按每毫升最初的Trizol加入0.5ml异丙醇，颠倒数次混匀，室温沉淀10分钟。
如果希望提取microRNA等小RNA，推荐-70℃沉淀过夜。
7. 12,000g 4℃离心10分钟，在管底可见RNA沉淀，弃上清。
8. 每毫升最初的Trizol加入1ml 75%乙醇(DEPC水配制)，vortex或颠倒混匀，9. 7,500g 4℃离心5分钟，弃上清。
再用快速离心机甩一下，小心吸尽液体。
10. 待5-10分钟RNA略干后，加入20μlDEPC水溶解，-70℃冻存。
TRIzol法提取真核细胞和动物组织总RNA
TRIzol法提取真核细胞和动物组织总RNA简介TRIzol是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提总RNA试剂，可以从动物组织，真核细胞等中提取总RNA。
它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，裂解细胞并释放出RNA。
加入氯仿离心后，溶液会形成上清层，中间层和有机层，RNA 分布在上清层中，收集上清层经异丙醇沉淀后便可以回收得到总RNA。
材料（1）试剂：RIzol、氯仿、异丙醇、75%乙醇、DEPC水、PBS 缓冲液等。
（2）器材：RNase Free EP管、冷冻离心机、组织匀浆器等。
实验步骤1、样品处理（1）细胞：收集细胞沉淀，加入1ml TRIzol吹打混匀。
（2）组织样品：取一小块样品于1.5ml离心管中，剪碎，加入TRIzol后匀浆器匀浆。
2、抽提RNA（1）室温孵育5min，加入200ul氯仿/1ml TRIzol，震荡混匀，室温静置3min。
（2）（提前预冷离心机）4°C ，12000×g离心15 min，离心后液体分为三层，小心吸取上层水相至新的EP管。
RNA在上层水相，中间层为DNA，下层为蛋白质。
吸上清时，不可吸到中间层，宁可少吸也不能多吸。
（3）加入500ul异丙醇/1ml TRIzol，上下颠倒混匀，冰上孵育10min。
（4）4°C ，12000×g离心10 min，弃上清。
（5）加入1ml 75%乙醇轻柔洗涤沉淀，短暂涡旋使沉淀漂起。
（6）4°C ，7500×g离心5 min，吸弃上清，静置干燥沉淀。
沉淀不能过干或过湿，待沉淀会变为半透明色即可。
（7）视沉淀量加入适量DEPC水溶解，轻轻吹打，-80°C长期保存。
3、总RNA 纯度、浓度和完整性检测（1）One Drop检测RNA纯度和浓度：纯净RNA的A260/A280的比值为2.0，小于1.9说明存在有机物污染，大于2.1则说明RNA发生了降解。
磁珠法动物组织总rna提取试剂
磁珠法动物组织总rna提取试剂动物组织总RNA提取是一项重要的实验步骤，其中磁珠法被广泛应用。
本文将介绍磁珠法动物组织总RNA提取试剂的原理、操作步骤和优势，以及其在科研工作中的应用。
一、磁珠法动物组织总RNA提取试剂的原理磁珠法动物组织总RNA提取试剂是一种基于磁性珠子的提取方法。
其原理是利用磁性珠子表面的羧基与RNA中的氨基结合，形成稳定的结合，从而实现RNA的高效提取。
该试剂具有高选择性和高纯度的特点，可有效去除DNA、蛋白质和其他杂质。
二、磁珠法动物组织总RNA提取试剂的操作步骤1. 准备工作：将动物组织样品切割成小块，并加入适量的细胞裂解缓冲液。
2. 组织裂解：利用机械或化学方法将组织完全裂解，使细胞内的RNA充分释放。
3. 加入磁性珠子：将磁性珠子加入细胞裂解液中，并充分混匀，使珠子均匀分散。
4. 结合RNA：在一定的温度和时间下，RNA与磁性珠子表面的羧基发生结合，形成RNA-磁性珠子复合物。
5. 分离复合物：利用磁性装置将RNA-磁性珠子复合物迅速沉降，然后去除上清液，以实现复合物的分离。
6. 洗涤：用洗涤缓冲液洗涤复合物，去除杂质和残余试剂。
7. 释放RNA：将洗涤后的复合物加入洗脱缓冲液，使RNA从磁性珠子上释放出来。
8. 收集RNA：将释放的RNA收集下来，即可用于后续的实验操作。
三、磁珠法动物组织总RNA提取试剂的优势1. 高效性：磁珠法能够在较短的时间内提取高纯度的RNA，适用于大规模样品的处理。
2. 纯度高：该方法能够有效去除DNA、蛋白质和其他杂质，获得高纯度的RNA。
3. 灵敏度高：磁珠法能够提取低浓度的RNA，适用于少量样品和低表达基因的研究。
4. 操作简便：该方法操作简单，不需要复杂的仪器设备，适用于实验室内各种规模的科研工作。
5. 可靠性强：磁珠法提取的RNA具有较好的稳定性和可靠性，适合多种分子生物学实验的需求。
四、磁珠法动物组织总RNA提取试剂在科研工作中的应用磁珠法动物组织总RNA提取试剂在生物医学研究中广泛应用。
rna提取实验步骤
RNA提取实验步骤如下：
●匀浆处理：
●组织：将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆
仪进行匀浆处理。
●单层培养细胞：直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积（即
3.5cm直径的培养板）加1ml，用移液器吸打几次。
●细胞悬液：离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107
细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。
加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。
一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。
每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
2-8℃10000×g离心15分钟。
收集上清液。
使用酒精洗涤RNA，以去除离心管内残留的试剂和盐。
最后利用2-甲基硫氰酸盐（MECT）溶液进行脱水，使RNA干燥而不影响RNA的完整性。
此外，如果是从动物组织中提取RNA，还需要使用DNase I处理RNA，以去除残留的DNA。
如果是从细菌中提取RNA，需要先进行细菌的裂解和细胞壁的破碎。
同时需要注意，整个提取过程需要严格控制RNA酶的污染。
动植物总RNA提取-Trizol法
动植物总RNA提取-Trizol法Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌，样品量从几十毫克至几克。
用Trizol 法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染。
RNA可直接用于Northern斑点分析，斑点杂交，Poly(A)+分离，体外翻译，RNase封阻分析和分子克隆。
1、将组织在液N中磨成粉末后，再以50-100mg组织加入1ml Trizol液研磨，注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。
2、研磨液室温放置5分钟，然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒。
3、取上层水相于一新的离心管，按每mlTrizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇，室温放置10分钟，12000g离心10分钟。
4、弃去上清液，按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇，涡旋混匀，4℃下7500g离心5分钟。
5、小心弃去上清液，然后室温或真空干燥5-10分钟，注意不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度。
然后将RNA溶于水中，必要时可55℃-60℃水溶10分钟。
RNA可进行mRNA分离，或贮存于70%乙醇并保存于-70℃。
[注意] 1、整个操作要带口罩及一次性手套，并尽可能在低温下操作。
2、加氯仿前的匀浆液可在-70℃保存一个月以上，RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周，-20℃保存一年。
Trizol 是一种新型总RNA 抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。
TRIzol的主要成分是酚。
主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。
酚虽可有效的变性蛋白质，但是它不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase。
x0.1%的8－羟基喹啉的，与氯仿联合使用可增强对RNase的抑制x异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，并使蛋白质二级结构消失，细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。
小鼠心肌组织rna提取
小鼠心肌组织rna提取
提取小鼠心肌组织的RNA可以采用多种方法，以下是一种常用的方法：
1.准备所需试剂和器材：TRIzol试剂、离心管、枪头、镊子、剪刀
等。
2.剪取小鼠心肌组织：将小鼠处死后，用镊子轻轻取出心肌组织，
并称重。
3.加入TRIzol试剂：将适量的TRIzol试剂加入离心管中，然后加
入剪碎的心肌组织，用剪刀搅拌均匀。
4.彻底破碎细胞：将混匀的TRIzol和心肌组织转移到研钵中，用
研磨棒研磨至匀浆。
5.离心：将匀浆液转移到离心管中，进行离心，以分离细胞碎片
和组织残渣。
6.移除沉淀物：将上清液转移到新的离心管中，并加入等体积的
氯仿，剧烈震荡后静置15分钟。
7.再次离心：将上清液再次转移到新的离心管中，进行离心，以
进一步分离RNA和其他杂质。
8.洗涤RNA：将上清液转移到干净的离心管中，用等体积的异丙
醇洗涤RNA沉淀。
9.晾干RNA：将离心后的RNA晾干，然后溶解在适量的DEPC水
中。
10.测定RNA浓度和质量：使用紫外分光光度计测定RNA浓度和
质量。
提取RNA的过程需要注意无菌操作，避免污染。
另外，为了保证提取的RNA质量和数量符合后续实验的要求，需要控制好提取过程中的一些关键因素，如剪碎组织的程度、加入TRIzol试剂的比例、研磨力度和时间等。
Trizol法提取动植物细胞组织总RNA
Trizol 法提取细胞/组织样本总RNA1. 所需试剂：名称来源储存条件有效期RNA Isolater Total RNA Extraction Reagent（R401）仓库4℃1年DEPC水配制间室温1周75%乙醇（DEPC水配）自备室温7天氯仿外购室温1年异丙醇外购室温1年2%琼脂糖凝胶自制室温1天Marker DL5000 仓库室温1年PBS缓冲液自备室温1年2. 所需耗材及仪器：序号名称序号名称1 冷冻离心机 4 制冰机、冰盒和冰2 通风橱 5 电泳仪及电泳槽3 RNase free枪头和EP管 6 OneDrop3. 操作步骤：3.1 细胞样本预处理1）小心倒掉细胞培养液，用移液器吸取5ml 1×PBS缓冲液小心加至培养皿中，轻轻晃动，将残留的培养液洗掉，用枪吸净PBS缓冲液，向每个培养皿中加入2 ml Trizol用枪吹打，使细胞完全悬浮和裂解。
（一般一次提取的1 mg RNA需要10盘HeLa Cell。
）2）将裂解的细胞转移至50 ml RNase Free离心管中，在超净台中分装至1.5 ml RNase Free EP管，每管分装1 ml。
3.2 动物组织样本预处理1）取动物组织样本50-100 mg于1.5 ml EP管中，向其中加入1 ml Trizol，用匀浆机高速匀浆，直至无明显颗粒状物质；或将动物组织剪成碎块，迅速转移至已用液氮预冷的灭菌研钵内，将组织碎块研磨成粉末，再称取50-100 mg于1.5 ml EP管中，并加入1 ml Trizol 中，用移液器吹打至无明显颗粒状物质。
3.3 植物组织样本预处理1）取新鲜植物组织样本15-30 mg于1.5 ml EP管中，向其中加入1 ml Trizol，用匀浆机高速匀浆，直至无明显颗粒状物质；或将动物组织剪成碎块，迅速转移至已用液氮预冷的灭菌研钵内，将组织碎块研磨成粉末，再称取15-30 mg于1.5 ml EP管中，并加入1 ml Trizol中，用移液器吹打至无明显颗粒状物质。
RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南
RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅⼄醇，⽆RNase的⽔或0.5℅SDS（溶液均需⽤DEPC处理过的⽔配制）。
操作步骤：1. 匀浆处理a. 植物组织:以叶⽚RNA提取为例.取新鲜叶⽚在液氮中充分研磨或将叶⽚剪碎后直接在Trizol中研磨,研磨要迅速,最好不要超过1min.，⼤约100mg 叶⽚使⽤1 ml Trizol.b. 动物组织:以⿏肝脏RNA提取为例.取新鲜或-70℃冻存组织,每50-100mg组织加1ml Trizol,⽤匀浆仪进⾏匀浆处理.样品体积⼀般不要超过Trizol体积的10%.c. 单层培养细胞.直接在培养板中加⼊Trizol裂解细胞,每10cm2⾯积加1ml Trizol.⽤取样器吹打⼏次.注意:Trizol加量根据培养板⾯积决定,不是由细胞数决定.如果Trizol加量不⾜,可能导致提取的RNA中有DNA污染.d.细胞悬液:离⼼取细胞，每5-10×106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml Trizol。
加Trizol 前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。
⼀些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪处理。
e.⾎液处理:直接取新鲜的⾎液,加⼊3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10min，10 000rpm 离⼼1min。
弃上清，收集⽩细胞沉淀。
每1ml⾎液收集的⽩细胞沉淀中加⼊1ml Trizol。
2. 将匀浆样品在15-30℃放置5mim，使得核酸蛋⽩复合物完全分离。
3. 可选步骤:4 ℃10 000rpm离⼼10min，取上清。
如果样品中含有较多蛋⽩、脂肪、多糖或肌⾁、植物结节部分等，可离⼼去除。
离⼼得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、⾼分⼦量DNA，上清中含有RNA。
处理脂肪组织样品时，上层是⼤量油脂，应除去。
取澄清的匀浆溶液进⾏下⼀步操作。
4. 每使⽤1ml Trizol加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈震荡15s，室温放置3min。
rna提取 步骤
rna提取步骤RNA提取是分子生物学实验中常用的一项技术，它可以从细胞或组织中提取RNA分子，为后续的RNA分析和研究提供基础。
RNA 提取的步骤包括样品收集、细胞破碎、RNA溶解、纯化和质量检测等。
下面将详细介绍RNA提取的步骤。
1. 样品收集在进行RNA提取之前，首先需要收集合适的样品。
样品可以是细胞培养物、动物组织或植物组织等。
在收集样品时，要注意避免RNA的降解。
可以将样品存储在RNA保护液中，或者迅速冷冻保存。
2. 细胞破碎将样品中的细胞破碎是RNA提取的关键步骤之一。
常用的方法有机械破碎、化学破碎和酶解等。
机械破碎可以通过离心或超声波处理来实现，化学破碎则是通过加入蛋白酶K等蛋白酶来破坏细胞膜，而酶解则是利用特定的酶来降解细胞壁和细胞膜。
3. RNA溶解破碎后的细胞中存在着大量的RNA酶，这些酶会降解RNA分子。
因此，在提取RNA之前，需要添加RNase抑制剂来阻止RNA的降解。
同时，还需要加入蛋白酶来破坏蛋白质，使RNA与蛋白质分离。
4. 纯化为了从混合物中分离出RNA分子，需要进行纯化步骤。
常用的纯化方法有酚/氯仿法、硅胶柱法和磁珠法等。
酚/氯仿法主要是通过酚和氯仿的密度差异来分离RNA和其他杂质。
硅胶柱法则是利用硅胶膜上的亲水性来吸附RNA分子。
磁珠法则是通过磁珠上的特定配体与RNA的结合来实现分离。
5. 质量检测提取到的RNA需要进行质量检测，以确保其完整性和纯度。
常用的检测方法有琼脂糖凝胶电泳、比色法和荧光测定等。
琼脂糖凝胶电泳可以根据RNA的大小和形态进行分析。
比色法和荧光测定则可以用来测定RNA的浓度和纯度。
RNA提取是一项复杂的实验技术，需要经过样品收集、细胞破碎、RNA溶解、纯化和质量检测等步骤。
每一步都需要仔细操作，以确保提取到高质量的RNA样品。
RNA提取的成功与否直接影响到后续的RNA分析和研究结果，因此在实验中应尽可能遵循标准操作规程，以获得准确可靠的实验结果。
总RNA的提取和检测 实验报告
实验二总RNA的提取和检测实验目的1.掌握从动物组织细胞中提取总RNA的方法；2.熟悉紫外吸收法检测RNA浓度与纯度的原理及测定方法；3.掌握RNA琼脂糖凝胶电泳方法并分析总RNA的电泳图谱；实验原理（一）概述1. 10-5 µg RNA/细胞含有rRNA 80-85%：28S 18S 5StRNA, snRNA 10-15%mRNA 1-5%2. mRNA 3’端存在20-250个多聚腺苷酸(polyA) 结构，可用oligo(dT)亲和层析柱分离mRNA。
3.RNA分离的方法：异硫氰酸胍氯化铯超速离心法，盐酸胍-有机溶剂法，氯化锂-尿素法，蛋白酶K-细胞质RNA提取法、异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法等。
4.目前常用的是Trizol法。
（二）Trizol的主要成分1.Trizol 是一种新型总RNA 抽提试剂，主要成分是异硫氰酸胍和苯酚。
异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，其主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白/核酸物质解聚得到释放。
2.酚虽可有效的变性蛋白质，但是它不能完全抑制RNA酶活性，因此Trizol中还加入了8-羟基喹啉、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase。
3.溶解组织细胞的混合物在氯仿作用下溶液分为水相和有机相，RNA在上层水相中。
4.取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中间层可回收DNA。
(三)总RNA的纯度检测原理：不同波长的单色光通过溶液时其光的能量就会被不同程度的吸收，光能量被吸收的程度和物质的浓度有一定的比例关系。
RNA在260nm紫外光波长处有最大的吸收峰。
因此，可以用260nm波长分光测定RNA浓度，OD值为1相当于大约40μg/mL 的单链RNA。
用PH=7.6 的TE（tris HCl缓冲液）稀释RNA样品n倍并以TE为空白对照，根据此时读出的OD 260 值即可计算出样品稀释前的浓度:RNA (mg/mL) = 40×OD 260 读数×稀释倍数(n)/1000实验步骤（一）样品处理与Trizol用量1.提取组织RNA时，每50～100mg组织（即0.5×0.5×0.5cm,约合0.1cm3）用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；2.悬浮细胞先离心沉淀，每5-10×106个细胞加1mL Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞。
动物组织细胞总RNA的抽提及检测(TRIzol法)
动物组织/细胞总RNA的抽提及检测（TRIzol法）背景知识：细胞质总RNA中，有rRNA、tRNA、mRNA等。
绝大多数mRNA分子（除血红蛋白、干扰素和有些组蛋白mRNA外）的3’端存在20~250个多聚腺苷酸PolyA。
利用此特性，可很方便得从总RNA中，用寡聚（dT）亲和层析柱分离出mRNA。
RNA分离的关键因素是尽量减少RNA酶的污染。
RNA酶是一类生物活性非常稳定的酶，除细胞内RNase以外，环境中的灰尘、各种实验器皿和试剂、人体的汗液以及唾液中均存在RNase。
这类酶耐热、耐酸、耐碱，蛋白质变性可使之暂时失活，但在变性剂去除后，又可恢复活性。
所以在实验的操作过程中，应尽量减少RNAse污染的机会。
在整个操作过程中，在一个洁净的环境中，戴手套和口罩，所用的器皿、水和试剂需用焦炭酸二乙酯（DEPC 很强的RNAse抑制剂）处理过。
玻璃器皿的处理。
在常规洗净后，应用0.1% DEPC浸泡2h以上，再用双蒸水漂洗几次，高压消毒去除DEPC，然后250℃烘烤4h以上。
塑料器材应用一次性的、新的，在使用前高压消毒，严格一些可以用0.1%DEPC浸泡过夜，高压灭菌。
所用试剂应加DEPC至0.05%~0.1%，室温过夜，然后高压处理。
但是，Tris与DEPC反应，所以在配制Tris时，应用DEPC处理过的水配制，最好再高压消毒。
方法一：1.取新鲜动物组织0.1~0.2g置于研钵中，用剪刀剪碎组织，研钵中加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨成粉末状，每100mg组织加入1ml TRIzol，在水浴中迅速匀浆15~30秒，以充分研碎组织。
然后，将细胞悬浮液吸入另一1.5ml微量离心管中，室温下静置5min。
2.若为贴壁细胞，培养预定时间后，弃掉沉淀培养液。
将TRIzol试剂直接加到贴壁细胞上，室温放置10min；若为悬浮细胞，则直接离心收集细胞后用TRIzol重悬、裂解，每1ml TRIzol可裂解5*106个动物、植物或酵母细胞，或1*107个细菌菌体。
动物组织细胞总RNA的提取实验原理及步骤
实验十一动物组织细胞总RNA的提取一、实验原理RNA是基因表达的中间产物，存在于细胞质与核中。
对RNA进行操作在分子生物学中占有重要地位。
获得高纯度和完整的RNA 是很多分子生物学实验所必需的，如Northern杂交、cDNA合成及体外翻译等实验的成败，在很大程度上取决于RNA的质量。
由于细胞内的大部分RNA是以核蛋白复合体的形式存在，所以在提取RNA时要利用高浓度的蛋白质变性剂，迅速破坏细胞结构，使核蛋白与RNA分离，释放出RNA。
再通过酚、氯仿等有机溶剂处理、离心，使RNA与其他细胞组分分离，得到纯化的总RNA。
在提取的过程中要抑制内源和外源的RNase 活性，保护RNA分子不被降解。
因此提取必须在无RNase的环境中进行。
可使用RNase抑制剂，如DEPC是RNase的强抑制剂，常用来抑制外源RNase活性。
提取缓冲液中一般含SDS、酚、氯仿、胍盐等蛋白质变性剂，也能抑制RNase活性。
并有助于除去非核酸成分。
本实验介绍异硫氰酸胍法和TRIzol法提取动物组织总RNA并通过电泳进行鉴定。
二、仪器和试剂1.仪器：超净工作台、高速冷冻离心机、电泳仪、紫外分光光度计、凝胶成像系统、振荡器、移液器、吸头、Ep管、玻璃匀浆器、试管、玻璃器皿洗净后置180℃烘烤8h；不耐高温的器皿（如塑料制品）应用0.1% DEPC浸泡2h,70～80℃烘烤干燥，120℃高压20min，再70～80℃烘烤干燥方可使用。
2.试剂：(1)细胞裂解液：异硫氰酸胍 4mol/L柠檬酸钠（pH7.0） 25mmol/L十二烷基肌氨酸钠 0.5%β-巯基乙醇 0.1mol/L称取柠檬酸钠0.64g，十二烷基肌氨酸钠0.415g，吸取β-巯基乙醇0.7ml，用无Rnase的蒸馏水溶解，定容至50ml。
然后取以上配制的溶液(CBS液)33ml，异硫氰酸胍 25g,混合，完全溶解后4℃保存备用。
(2)10×凝胶缓冲液：吗啉代丙璜酸（MOPS）（pH7.0） 200mmol/LNaAc 100mmol/LEDTA(pH 8.0) 10mmol/L过滤除菌后避光保存。
sds法提取组织rna步骤
sds法提取组织rna步骤SDS法是一种用于提取组织中RNA的常用方法，它可以有效地去除蛋白质和其他杂质，并保持RNA的完整性。
下面是使用SDS法提取组织RNA的一般步骤：1.组织采样：首先，从您感兴趣的组织中采集样品。
可以选择常规的研究动物组织，如小鼠或大鼠的脑、肝脏等，也可以选择与您的研究相关的特定组织。
2. 样品处理：将采集的组织样品立即放入含有RNA保护剂（如RNAlater）的离心管中，并迅速冷冻保存在液氮中，以避免RNA的降解。
您还可以直接将组织样品置于离心管中，然后立即冷冻。
3.组织破碎：将冷冻的组织样品快速研磨成细粉末，并在冰上迅速加入SDS试剂，即一种非离子表面活性剂。
SDS有助于去除蛋白质，并释放RNA。
4.RNA溶解：将组织破碎后的样品在高温条件下（通常在60-70°C）孵育一段时间，以使SDS充分溶解，蛋白质释放并RNA保持完整。
5.脱脂：加入等体积的酚/氯仿/异丙醇混合物，并轻轻混合，以去除脂质、蛋白质和其他杂质。
混合物将产生两个相，上层为水相（含RNA），下层为有机相（含脂质和蛋白质）。
用玻璃针或移液管将上层水相转移至新离心管中。
6.沉淀RNA：向新的离心管中加入等体积的异丙醇，再次混合。
异丙醇可将RNA沉淀出来。
离心管以最高速度离心（通常在4°C下）10-15分钟。
7.去除异丙醇：将离心管倾斜，轻轻倾倒异丙醇。
使用70％乙醇重悬RNA沉淀，通过洗涤去除残留的异丙醇。
8. 干燥RNA：通过将离心管在室温下挥发乙醇的方法进行干燥。
干燥后的RNA易溶于RNase‐free水中。
9. RNA质量评估：使用紫外吸收光谱（如NanoDrop）或凝胶电泳等方法来评估提取的RNA的浓度和完整性。
确保提取的RNA是高质量和完整的，以便后续分析。
使用SDS法提取组织RNA时，需要注意以下几点：-在样品处理和样品破碎过程中，要尽量避免RNA的降解。
保持样品的低温和快速操作对于RNA的完整性至关重要。
提取RNA步骤
实验目的：提取动物组织RNA，备后续实验使用。
实验试剂：研钵、镊子、刮勺、冰盒、试管架、微量移液器、RNA无酶管、低温离心机、酒精、液氮、Takara RNA提取试剂盒、去除DNA试剂盒冰袋实验步骤：1、实验准备:研钵中加入少量酒精，点燃，灭菌后，超净台灭菌30min（包括研钵、镊子、刮勺、试管架、微量移液器、RNA无酶管）。
2、取液氮、冰袋备、冰盒备用3、将研钵预冷，其中大研钵的可以放在冰袋上，然后再倒入液氮，小研钵直接倒入少量液氮预冷。
4、将超低温冻结的RNA 提取样品，剪取绿豆到黄豆大小组织(不能太大,不要大于黄豆大小），迅速转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状(无明显的可见颗粒，如果没有研磨彻底会影响RNA 的收率和质量)。
可用刮勺将其刮到一团。
5、可以向4的研钵中加入适量的含有裂解液的Buffer RL,(大约700ul)，确保研磨成粉末状的样品完全覆盖，然后室温静置（研钵倾斜放置），直至样品完全融化后用枪头吹打混匀,只至液体中无明显沉淀。
这期间可以研磨下一组织.6、将步骤5中的匀浆液转移至1。
5mlRNA无酶管中，12,000 rpm，4℃离心5 分钟。
期间配置70％乙醇(7份无水乙醇+3份水（为试剂盒中的RNA无酶水)）7、小心吸取6步骤上清液（吸取400ul即可），移入1。
5ml的RNase Free collection（切勿吸取沉淀，否则会阻塞后面的膜）。
然后向其中加入等体积的70％乙醇，此时可见沉淀，立即摇匀。
8、将7中的混合液，取600ul（要小于600ul)到RNA spin column （含2ml collection Tube）中，12，000 rpm，4℃离心 1 分钟,弃滤液。
将RNA spin column 放到2ml collection Tube 管中。
9、将500ul buffer RWA加入至RNA spin column 12，000 rpm，4℃离心30s，弃滤液。
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常规动物组织总RNA提取
(Trizol法)
实验操作流程
1摘要
本标准操作规程适用于一般动物组织的总RNA提取，一般情况下能得到高质量的总RNA。
2提取步骤
a)用液氮预冷研钵，组织样品放入加有液氮的研钵中，在液氮下把组织样品充分研磨成
粉末。
b)把样品粉末转入到装有TRIzol裂解液的2.0mL EP管中，（每mL裂解液可加50mg组
织样品）剧烈震荡，充分混匀，平放室温静置5-10min。
c)10000rpm，4℃离心5min。
d)吸取上清液至新的2.0mL EP管中，每毫升裂解液加入200μL氯仿/异戊醇，剧烈颠倒
混匀。
e)10000rpm，4℃离心10min。
f)吸取上清液至新的1.5mL离心管，注意不要吸到中间蛋白层，加入等上清液体积的异
丙醇，轻轻颠倒混匀。
g)放入-20℃冰箱沉淀1h。
h)13600rpm，4℃离心20min。
i) 吸弃上清，加入1mL 75%乙醇，用移液器吹洗沉淀。
j) 10000rpm，4℃离心3min，吸弃上清，短暂离心，吸去残留液体，晾干3-5min。
k)用30-100μL DEPC水或者RNase-free水溶解沉淀。
3设备与试剂
3.1设备
3.2试剂。