不同细胞培养皿对激光共聚焦显微镜成像效果的影响
激光共聚焦显微镜使用中的常见问题及维护分析
激光共聚焦显微镜使用中的常见问题及维护分析作者：宋华芝来源：《现代商贸工业》2011年第15期摘要：激光扫描共聚焦显微镜从上世纪八十年代起，被广泛地应用于分子细胞生物学、生物医学、遗传学等研究领域。
但复合软件及多功能操作界面的使用对于初学者来说比较复杂，总结了操作过程中的常见问题，并提出了解决办法。
对激光扫描共聚焦显微镜这项技术的使用具有现实的参考价值。
关键词：激光扫描共聚焦显微镜；荧光；图像中图分类号：TB文献标识码：A文章编号：1672-3198（2011）15-0293-01激光扫描共聚焦显微镜与普通显微镜相比，激光共聚焦采用了能到达最高分辨率及重复性的无色差扫描技术，能产生真正具有三维清晰度的图像，而且还可以处理活的标本并不对标本造成物理化学特性的破坏。
我室引进的Leica TCS SP2型激光共聚焦配有全自动DMIRBE2新型光学显微镜系统；Leica TCS SP2 AOBS扫描头；四通道荧光共焦检测器及一个投射光DIC检测器；八通道AOTF调节器；电脑主机及双屏显示器。
可进行组织和细胞的微分干涉及荧光的断层扫描；多重荧光的断层扫描及重叠；实时动态扫描及其动态构建；组织与细胞的三维动态结构构建；荧光共振能量转移的分析（FRET）；图像漂白后的荧光修复（FRAP）等。
功能强大，性能优良。
但复合软件及多功能操作界面的使用对于初学者来说有些复杂，操作过程中多会出现以下问题。
1 扫描最终图像清晰度不高造成此类问题的原因主要有两个：（1）物镜和ZOOM值选用不正确。
初学使用者大多喜欢选用10X物镜后，再将ZOOM 值调到所需要的最大值。
通过ZOOM值的增大确实可以将图像放大，有助于看清图像的细节，但是ZOOM的增大是有限定的，这取决于物镜的倍率。
例如在10X物镜下，ZOOM值超过10就没有意义了，而且ZOOM值的增大属于电子放大，放大倍数越高，清晰度越差。
所以在所观察的样本形态体积较小的情况下，多采用高倍物镜（例如63X水镜或油镜），再适当调整ZOOM值，ZOOM值以不超过2为佳。
激光共聚焦扫描显微镜成像的基本原理
激光共聚焦扫描显微镜成像的基本原理激光共聚焦显微镜（LCM）是近年来发展起来的一种高分辨率荧光显微成像技术。
它通过将样品置于激光束的焦点处，利用高灵敏度的探测器记录样品发出荧光信号，从而实现对样品内部结构的高分辨率成像。
本文将详细介绍LCM的基本原理、成像途径、成像原理及优缺点等方面的内容。
一、激光共聚焦显微镜的基本原理激光共聚焦显微镜基于利用激光束在三维空间内聚焦成极小的点状光斑，对样品进行扫描成像的技术原理。
在聚焦点位置，通过聚焦光斑的极高光密度，激活样品中的荧光染料，荧光染料则针对特定的结构在荧光信号波长处发出荧光信号，被高灵敏度荧光探测器探测并记录下来，然后通过计算机处理、分析和重建，生成高质量的高分辨率图像。
与普通显微镜最大的区别在于，普通显微镜由于透过整个样品并以相位差效应成像，而激光共聚焦显微镜由于仅仅聚焦于样品表面的非常窄的一点，信号只能从聚焦点的附近探测到，而且该点在扫描过程中会不断变换位置。
换言之，成像并不是透过整个样品实现，而是在样品上面扫描得到，并聚焦于单个点上。
对于毫米量级的样品，其层面精度可以达到25nm。
二、激光共聚焦显微镜成像途径激光共聚焦显微镜的成像途径目前有两种，分别为单光子激发型和双光子激发型。
1、单光子激发型单光子成像模式是利用激光束在荧光染料上发生的单光子激发效应进行成像的一种方式。
在单光子激发光下，荧光染料的各自精细结构会发生辐射跃迁产生能量并发射荧光，同时发射时间对荧光能量的传递产生影响，可以通过荧光转移速率反映。
荧光束在被激活后，将以光子流的形式反射回来，被共聚焦显微镜探测并捕捉。
2、双光子激发型双光子成像模式使用了两次光子激发效应，产生高到对比度的图像，并最小化了样品在激发时所受的损伤输出功率。
双光子成像所需条件包括至少两个光子激发、空间和时间上的集中在样品特定区域。
在这种情况下，激光光束相互作用，将样品中转运载分子激发成放射的谐振态发生荧光发射。
激光共聚焦显微镜的用途
激光共聚焦显微镜的用途激光共聚焦显微镜（Laser Scanning Confocal Microscope，简称LSCM）是一种高分辨率、高对比度的显微镜技术。
通过激光光源的激发和扫描，LSCM可以快速获取高质量的荧光图像，具有出色的三维成像能力。
下面将详细介绍LSCM的用途。
1.生物医学研究LSCM广泛应用于生物医学研究领域。
它可以对活体组织、细胞、蛋白质等进行实时观察和成像。
利用荧光探针标记的细胞、分子等在LSCM 下，可以观察到细胞器的结构和功能，探索细胞的生物学、病理学等方面的问题。
此外，LSCM还可以用于研究神经科学、免疫学和细菌学等领域，为相关疾病的诊断和治疗提供依据。
2.材料科学LSCM在材料科学研究中具有重要的应用价值。
它可以观察材料的微观结构、表面形貌和内部构造。
通过荧光染料标记或利用材料本身的荧光特性，可以研究材料的纳米结构、晶格缺陷、材料界面等特性。
LSCM还可以配合其他技术如拉曼光谱、傅里叶变换红外光谱等，进一步对材料进行分析和表征。
3.植物生物学LSCM在植物生物学研究中也起到关键作用。
通过激光共聚焦显微镜，可以观察到植物细胞的结构和功能，如叶片、根部、维管束等。
利用荧光标记技术，可以观察到植物的细胞器的分布和数量、蛋白质的表达和转运等。
此外，LSCM还可以用于研究植物的光合作用、生长发育等机制。
4.纳米科学LSCM在纳米科学领域也具有广泛应用。
它可以观察纳米材料的形貌、表面结构、聚集状态等。
利用纳米材料的特殊荧光性质，可以研究纳米颗粒的生长、聚集与分散、表面修饰等过程。
此外，LSCM还可以利用近场光学技术对纳米结构进行高分辨率成像，为纳米材料的设计与合成提供支持。
总之，激光共聚焦显微镜是一种用于观察微观结构和功能的强大工具。
在生物医学研究、材料科学、植物生物学和纳米科学等领域，LSCM发挥着重要的作用，为科学研究和技术应用提供了强有力的支持。
随着技术的不断进步，LSCM在未来的应用前景将更加广阔。
细胞激光共聚焦实验报告
一、实验目的1. 了解激光共聚焦显微镜的基本原理和操作方法。
2. 掌握细胞激光共聚焦实验的步骤和注意事项。
3. 通过实验观察细胞内部结构，加深对细胞生物学知识的理解。
二、实验原理激光共聚焦显微镜（Confocal Laser Scanning Microscopy，CLSM）是一种利用激光束扫描样品，并通过共聚焦成像原理获得高分辨率、高对比度图像的显微镜。
其基本原理是利用激光束经照明针孔形成点光源，对样品进行逐点扫描，然后通过探测针孔收集反射光，最终形成共聚焦图像。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：细胞爬片、荧光染料（如DAPI、FITC等）、激光共聚焦显微镜、细胞培养箱、超净工作台等。
2. 实验仪器：激光共聚焦显微镜、荧光显微镜、图像采集系统、计算机等。
四、实验步骤1. 细胞爬片制备：将细胞培养于载玻片上，待细胞生长至一定密度后，用无菌PBS缓冲液洗涤细胞，并固定封片。
2. 染色：将固定封片置于荧光显微镜下，用荧光染料对细胞进行染色。
本实验采用DAPI染色细胞核，FITC染色细胞质。
3. 共聚焦显微镜操作：将染色后的细胞爬片置于共聚焦显微镜载物台上，调整物镜焦距，使样品聚焦。
4. 图像采集：设置合适的激光波长和光圈，调整曝光时间，进行图像采集。
5. 图像分析：利用图像采集系统对采集到的图像进行处理和分析，观察细胞内部结构。
五、实验结果与分析1. 细胞核与细胞质的荧光分布：通过共聚焦显微镜观察到，DAPI染色的细胞核呈蓝色荧光，FITC染色的细胞质呈绿色荧光。
结果显示细胞核位于细胞中央，细胞质分布在细胞核周围。
2. 细胞内部结构：通过共聚焦显微镜观察，发现细胞内部存在线粒体、内质网、高尔基体等细胞器，这些细胞器在荧光图像中呈现不同的颜色。
3. 细胞形态：通过共聚焦显微镜观察，发现细胞形态规则，呈椭圆形。
六、实验结论本次实验成功利用激光共聚焦显微镜观察了细胞内部结构，获得了高分辨率、高对比度的图像。
不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性
不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性激光共聚焦显微镜（Confocal Laser Scanning Microscope，CLSM）是一种高分辨率的显微镜技术，可以用于观察细胞和组织的内部结构。
其优点包括高空间分辨率、三维成像能力和对活体样本的透射成像，因此在肿瘤研究领域具有重要的应用潜力。
本文旨在探讨不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性，并对其在肿瘤研究中的应用进行讨论。
不同接种部位的肿瘤对激光共聚焦显微镜观察的可行性会有所差异。
一般来说，表面浅层的肿瘤如皮肤肿瘤、子宫颈癌等较易进行激光共聚焦显微镜观察，因为可以直接通过显微镜对其进行三维成像，并且活体样本的高分辨率成像也十分便利。
而对于深部肿瘤如深部器官肿瘤、脑肿瘤等，由于激光共聚焦显微镜需要透射成像，其观察难度相对较大。
在进行不同接种部位肿瘤的激光共聚焦显微镜观察时，需要考虑样本的可观察性和成像难度，以及合适的成像深度和成像方式。
激光共聚焦显微镜在肿瘤研究中具有重要的应用价值。
通过激光共聚焦显微镜可以观察到肿瘤细胞的形态、结构和内部组织，探究肿瘤的生长、扩散和转移机制。
可以利用荧光染料对肿瘤细胞进行标记，观察细胞代谢、蛋白质表达和相互作用，进一步探究肿瘤的分子机制和病理生理过程。
激光共聚焦显微镜还可以对肿瘤微环境进行观察，如血管生成、免疫细胞浸润等，为肿瘤治疗和药物研发提供重要参考。
激光共聚焦显微镜在肿瘤研究中的应用具有广阔的前景和深远的意义。
不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性受到多种因素的影响，包括肿瘤的可观察性、技术设备的适用性和样本制备的实践性。
激光共聚焦显微镜在肿瘤研究中的应用具有广泛的前景和深远的意义，对于揭示肿瘤发生发展的机制、推动个性化治疗和药物研发具有重要价值。
可以通过技术创新和方法改进，克服不同接种部位肿瘤的成像难度，进一步拓展激光共聚焦显微镜在肿瘤研究中的应用。
不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性
不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性随着现代医学技术不断进步，激光共聚焦显微镜（Laser Scanning Confocal Microscope，LSM）已经成为了肿瘤研究和评价的重要工具之一。
然而，肿瘤的生长过程和形态特征与接种部位密切相关，因此，不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性值得进一步研究。
首先，肿瘤的生长环境对肿瘤细胞的形态和结构有着重要的影响。
例如，肿瘤细胞在皮下组织中生长时，会产生明显的浸润性生长，细胞密度高，细胞核比例大，细胞间质疏松等特征。
而在肝、肺等器官中，肿瘤生长的形态则更加多样化，如肝癌会形成肿块和浸润性生长，肺癌则可能形成实性肿块、肿块周边或者是小结节状病灶等。
这些不同生长环境下的生长差异，给激光共聚焦显微镜的观察带来了一定的挑战。
其次，不同器官之间的特异性也会对激光共聚焦显微镜的观察产生影响。
例如，肝内的肿瘤往往有着较为丰富的血管周围组织和特殊的血液供给情况，而肺内的肿瘤则有着相对较为复杂的血液循环系统和肺呼吸系统。
这些器官特异性的差异，也给通过激光共聚焦显微镜对不同接种部位的肿瘤进行观察带来了一定的复杂性。
尽管存在着一定的挑战和复杂性，但是通过合理的操作和参数设置，不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察是完全可行的。
首先，需要根据不同的肿瘤生长环境、器官特异性等因素，进行合理的样品制备与处理，以便于激光共聚焦显微镜的观察。
其次，需要根据观察需求，合理设置激光功率、激发波长、像素大小等参数，以提高观察分辨率和对肿瘤微环境等特征的观察能力。
最后，需要对观察到的肿瘤特征进行合理的数字图像处理与分析，以准确地评价不同接种部位肿瘤的生长特点和形态特征。
综上所述，通过合理的操作和参数设置，不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察是完全可行的。
相信在未来的肿瘤研究中，激光共聚焦显微镜将得到更加广泛的应用。
不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性
不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性引言肿瘤是一种常见的疾病，对人类健康造成了严重的威胁。
为了更好地理解肿瘤的生长和发展过程，人们进行了大量的研究工作。
激光共聚焦显微镜技术已成为研究肿瘤细胞结构和功能的重要方法之一。
本文旨在探讨不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性，并提出相关的研究思路。
一、激光共聚焦显微镜技术激光共聚焦显微镜是一种高分辨率的显微镜技术，其原理是利用光学共聚焦原理，将样品中的荧光信号与聚焦激光光束相交，从而获得具有优良分辨率和对比度的三维图像。
激光共聚焦显微镜技术在生物医学研究领域应用广泛，特别适用于观察细胞和亚细胞结构、蛋白质分布、细胞活动等方面的研究。
二、肿瘤在不同部位的生长特点肿瘤的生长特点在不同部位可能存在明显的差异。
乳腺癌、肺癌、胃癌等肿瘤在相应的器官中生长发展具有一定的特殊性。
对不同部位肿瘤的研究对于阐明肿瘤发病机制、制定个体化治疗方案具有重要的意义。
1.技术可行性激光共聚焦显微镜技术具有高分辨率、优良对比度等优势，可以对细胞和亚细胞结构进行精细化的观察分析。
对不同接种部位的肿瘤样本进行激光共聚焦显微镜观察是完全可行的。
2.研究意义通过激光共聚焦显微镜技术，可以观察不同部位肿瘤细胞的结构和功能变化，揭示其生长和扩散机制的差异，为肿瘤的预防和治疗提供重要参考。
3.研究方法在进行不同接种部位肿瘤的激光共聚焦显微镜观察时，需要选择合适的标记物标记细胞或细胞器，以便观察其在不同条件下的变化。
还需要准备好相应的肿瘤样本，进行适当的前处理工作，以保证观察的准确性和可靠性。
四、研究思路1.选择适当的肿瘤模型和接种部位，例如乳腺癌、肺癌等常见肿瘤。
2.选择合适的标记物，如细胞膜标记物、核染色素、蛋白质标记物等，标记细胞或细胞器。
3.进行激光共聚焦显微镜观察，获取不同接种部位肿瘤细胞的三维结构图像。
4.分析观察结果，对比不同接种部位肿瘤细胞的结构和功能特点，揭示生长和扩散机制的差异。
共聚焦小皿细胞不均匀的原因
共聚焦小皿细胞不均匀的原因简介共聚焦显微镜是一种强大的光学显微镜，可以提供高分辨率的三维显微影像。
然而，在使用共聚焦显微镜观察细胞时，我们有时会遇到细胞在小皿中不均匀分布的情况。
本文将探讨一些可能导致这种不均匀分布的原因。
1.培养条件不足1.1培养物浓度不一致细胞培养物的浓度对细胞分布有直接影响。
如果培养物浓度不均匀，一些区域的细胞可能会过于密集，而其他区域则相对较少。
这可能是由于在培养物制备过程中没有很好地混合，或者是在取样时没有均匀分布。
1.2培养条件不恰当细胞需要适宜的培养条件才能生长和分裂。
如果培养条件不良，例如培养基p H异常、温度过高或过低、营养物含量不足等，这些不良条件可能导致细胞生长不均匀。
2.细胞因素2.1细胞凋亡细胞凋亡是正常的生理现象，它起到调节细胞数量和维持组织稳态的作用。
在一个细胞群体中，如果存在细胞凋亡现象，那么相对于健康的细胞，凋亡细胞的密度就会更高。
这可能导致共聚焦显微镜观察到的细胞在小皿中分布不均匀。
2.2细胞迁移有些类型的细胞具有迁移能力，它们可以主动移动到特定位置。
这样，在共聚焦显微镜下观察时，这些会主动迁移的细胞被吸引到某些区域，导致细胞在小皿中的分布不均。
3.实验操作因素3.1取样位置不统一在使用共聚焦显微镜观察细胞时，我们通常会从不同的位置取样。
如果取样位置不统一或者没有很好地进行随机取样，那么观察到的细胞分布就可能出现不均匀的情况。
3.2取样过程中细胞损伤在取样过程中，不小心处理或接触过度可能会导致细胞损伤。
这种损伤可能导致一些细胞死亡或失去活力，进而影响到共聚焦显微镜观察时的细胞分布。
结论细胞在共聚焦显微镜下不均匀分布可能是由培养条件、细胞因素和实验操作等多种因素共同作用引起的。
为了获得更加准确和可靠的实验结果，我们应该对这些潜在因素进行仔细的控制和分析，确保细胞在小皿中的分布是均匀的。
不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性
不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性激光共聚焦显微镜（Laser Scanning Confocal Microscopy, LSCM）是一种高分辨率、高对比度的成像技术，能够在活体细胞水平观察细胞结构和功能，对疾病的发病机制和治疗效果进行深入研究。
在肿瘤研究领域，LSCM已经被广泛应用于肿瘤细胞的形态学和功能学研究。
本文旨在探讨不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性，以及其在肿瘤研究中的应用前景。
一、激光共聚焦显微镜在肿瘤研究中的应用现状激光共聚焦显微镜是一种高分辨率、高对比度的显微成像技术，其采用激光扫描的方式获取样品的三维结构信息，能够在活体细胞水平上观察细胞的形态、结构和功能。
激光共聚焦显微镜具有成像分辨率高、对比度强、深度大等优点，使其在肿瘤细胞形态学和功能学研究中得到了广泛应用。
在肿瘤细胞形态学研究中，激光共聚焦显微镜可以观察肿瘤细胞的形态、结构和动态过程，揭示肿瘤细胞的形态学特征和结构变化，为肿瘤的分子机制和发病机制研究提供重要依据。
鉴于激光共聚焦显微镜在肿瘤研究中的广泛应用，我们有理由相信，激光共聚焦显微镜可用于不同接种部位肿瘤进行观察，并为肿瘤研究提供新的视角和方法。
1. 不同接种部位肿瘤的异质性不同接种部位的肿瘤具有不同的发生机制、生长规律和临床表现，其组织学结构和细胞类型也存在明显差异。
同一种肿瘤在肝脏和肺部的生长形态和浸润方式可能完全不同，这种异质性对肿瘤的研究和治疗具有重要意义。
2. 激光共聚焦显微镜的高分辨率成像能力激光共聚焦显微镜具有高分辨率的成像能力，可以清晰地观察细胞和亚细胞结构，对肿瘤组织的微观结构进行高质量的成像。
这种成像能力使激光共聚焦显微镜成为观察不同接种部位肿瘤的理想工具。
激光共聚焦显微镜具有多通道成像功能，可以同时获取多个荧光探针标记的信息，实现多参数、多维度的成像分析。
这种多通道成像功能有利于对肿瘤细胞的形态和功能进行全面的、立体的观察。
不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性
不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性
激光共聚焦显微镜是一种高分辨率的显微镜，能够观察细胞和组织的三维结构。
在肿
瘤研究中，激光共聚焦显微镜可用于观察肿瘤细胞的形态和结构变化，研究肿瘤的生长、
发展和转移过程。
然而，不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性尚需进一
步研究。
在肿瘤实验动物模型中，常用的接种部位有皮下、肌肉、肝、脾等部位。
不同的接种
部位会导致肿瘤生长环境、细胞组成和血流动力学环境等差异，从而影响肿瘤的形态和结构。
皮下接种模型是肿瘤研究中最常用的模型之一，接种在小鼠背部。
此方法简单易行，
缺点是肿瘤生长缓慢，难以区分肿瘤组织与正常组织的分界线。
激光共聚焦显微镜观察时，可能需要用荧光染料标记肿瘤细胞，提高观察效果。
肝接种模型是将肿瘤接种在小鼠的肝脏中。
此模型在研究肝癌的生长、转移和治疗方
面具有重要意义。
激光共聚焦显微镜在观察肝癌细胞在肝脏内生长过程中的细胞形态和组
织结构变化方面具有优势，可以为肝癌的早期诊断和治疗提供理论基础。
综上所述，不同接种部位的肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察是可行的，不同的部位可
能需要特定的试验操作和染色方法，以提高观察效果。
激光共聚焦显微镜在肿瘤研究中具
有重要作用，能够为肿瘤治疗和预防提供重要理论和实验基础。
不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性
不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性肿瘤是一种恶性疾病，随着社会的发展和生活环境的改变，其发病率越来越高。
目前，治疗肿瘤的方法有很多，其中包括手术切除、放疗、化疗等。
然而，这些方法都存在着一定的风险和副作用，而且治疗效果也并不理想。
因此，科学家们一直在努力寻找新的肿瘤治疗方法。
激光共聚焦显微镜是一种新型的显微镜技术，它可以对生物样品进行高分辨率成像和三维成像。
它利用激光束和镜头的结合来聚焦样品，从而实现对样品进行成像和分析的目的。
激光共聚焦显微镜的成像分辨率高、清晰度好，可以对细胞和组织进行三维成像，有很大的应用前景。
因此，研究人员开始探索利用激光共聚焦显微镜技术来观察肿瘤，以期望开发出更好的肿瘤治疗方法。
在肿瘤治疗中，肿瘤的位置和大小是非常重要的。
不同的肿瘤位置和大小对治疗的效果有着很大的影响，因此，研究肿瘤在不同接种部位的行为对肿瘤治疗具有一定的实际意义。
为了探讨不同接种部位肿瘤的行为，我们可以通过使用激光共聚焦显微镜技术来观察不同接种部位肿瘤的成像。
在研究过程中，我们可以选择套管的形式来保护肿瘤，防止伤害或者被污染。
通过观察激光共聚焦显微镜成像，我们可以得出不同接种部位肿瘤的生长速度、形态以及细胞分裂状态等信息，并根据这些信息分析肿瘤的发展趋势以及治疗方法的选择。
此外，通过对肿瘤细胞的形态、颜色、形状等方面的分析，我们可以另辟蹊径地开发出新的治疗方法。
例如，我们可以研究肿瘤细胞或者肿瘤周围的细胞，寻找一些与正常细胞不同的生物学特征，针对这些特征开发治疗方法，以期望达到更好的治疗效果。
总的来说，使用激光共聚焦显微镜技术观察不同接种部位的肿瘤非常可行，可以为肿瘤治疗开发提供参考。
虽然该技术还处于发展初期，但已经得到了广泛的应用，并展现出了良好的前景。
未来，我们有充分的理由相信，激光共聚焦显微镜技术将会成为治疗肿瘤的一种新型手段。
共聚焦显微镜实验报告
共聚焦显微镜实验报告共聚焦显微镜实验报告引言：共聚焦显微镜（Confocal Microscope）是一种高分辨率的显微镜技术，通过光学原理和计算机图像处理技术，可以对样本进行三维成像和观察。
本实验旨在通过使用共聚焦显微镜，观察细胞结构、细胞器和细胞内分子的分布情况，以及探究共聚焦显微镜在生物学研究中的应用。
实验目的：1.了解共聚焦显微镜的原理和工作方式；2.观察和比较共聚焦显微镜与传统显微镜的成像效果；3.通过共聚焦显微镜观察不同类型的细胞结构和细胞器，并分析其功能和分布情况；4.探究共聚焦显微镜在生物学研究中的应用。
实验步骤：1.准备样本：选择合适的细胞或组织样本，并进行必要的固定和染色处理；2.调节显微镜参数：根据样本类型和染色情况，调节激光功率、放大倍数、扫描速度等参数；3.观察成像：通过共聚焦显微镜观察样本的三维成像，记录并保存图像；4.比较分析：将共聚焦显微镜观察到的图像与传统显微镜观察到的图像进行比较分析；5.进一步观察：通过调整焦距和扫描层面，观察不同细胞结构和细胞器的分布情况；6.讨论应用：探究共聚焦显微镜在生物学研究中的应用，并讨论其优势和局限性。
实验结果与分析：通过共聚焦显微镜观察到的图像，我们可以清晰地看到细胞的形态、细胞器的位置以及细胞内分子的分布情况。
与传统显微镜相比，共聚焦显微镜具有更高的分辨率和对比度，能够提供更清晰的图像信息。
在观察不同类型的细胞结构和细胞器时，共聚焦显微镜的优势更加明显。
例如，在观察细胞核时，共聚焦显微镜可以清晰地显示核膜、染色质和核仁的位置和形态，而传统显微镜则可能只能看到模糊的核团。
此外，共聚焦显微镜还可以进行三维成像，通过堆叠多个图像，我们可以还原出样本的三维结构，进一步研究细胞内各组分的相互关系。
在生物学研究中，共聚焦显微镜有着广泛的应用。
例如，在细胞生物学领域，共聚焦显微镜可以用于观察细胞分裂、细胞凋亡等过程，揭示细胞内部的动态变化。
激光共聚焦显微镜在细胞成像中的应用
激光共聚焦显微镜在细胞成像中的应用激光共聚焦显微镜（Laser Scanning Confocal Microscopy，简称LSCM）是一种先进的显微镜技术，广泛应用于细胞生物学、生物医学和生物化学等领域。
其应用于细胞成像的重要性和优势越来越受到科研工作者的关注。
细胞是生命的基本单位，对于理解生命活动的机理和疾病的发生机制具有重要意义。
然而，传统的显微镜技术很难直接观察到细胞的微观结构。
传统的荧光显微镜只能观察到细胞表面的荧光信号，而无法观察到细胞内部的信号。
而激光共聚焦显微镜则通过激光束的聚焦来扫描样品表面，从而可以获得更高分辨率的图像。
激光共聚焦显微镜的工作原理是基于激光束的聚焦和光学切片原理。
通过控制激光束的聚焦位置和方向，可以在细胞内部扫描成像。
这种扫描成像的方式，使得LSCM具有比传统的显微镜更强的分辨率和穿透深度。
通过LSCM，科研工作者可以观察到细胞内部的微细结构和生物分子的动态变化，进而研究细胞的功能和活动。
在细胞生物学中，LSCM广泛应用于细胞器的研究。
细胞器是细胞内部的功能区域和器官，对于细胞的生物学功能具有重要作用。
通过LSCM，科研工作者可以观察到细胞器的三维结构和分布情况，研究其在细胞内的位置、数量和功能。
例如，通过标记染色剂，LSCM可以观察到线粒体、高尔基体和内质网等细胞器的位置和形态，进而研究它们在细胞代谢、分泌和蛋白质合成中的功能。
除了细胞器的研究，LSCM还应用于细胞内信号转导通路的研究。
信号转导是细胞内部蛋白质相互作用和信号传递的过程，对于细胞的生长、分化和凋亡等生物学过程至关重要。
通过标记蛋白质或细胞内分子，科研工作者可以利用LSCM观察到信号分子的亚细胞定位和动态变化，研究信号转导通路中的关键分子和机制。
这种非侵入性的观察方式，使得LSCM成为研究细胞信号转导的重要工具。
此外，在生物医学领域，LSCM也应用于肿瘤细胞的成像和药物研发。
肿瘤是一种严重威胁人类健康的疾病，而肿瘤的形成和发展与细胞的异常活动密切相关。
共聚焦小皿规格
共聚焦小皿规格
共聚焦小皿规格是指在光学共聚焦显微镜中使用的小型培养皿的尺寸规格。
共聚焦显微镜是一种高分辨率显微镜，它利用激光束和探测器来获取样品的三维图像。
小皿规格对于共聚焦显微镜的性能和实验结果至关重要。
共聚焦小皿规格的选择与样品的性质和实验需求有关。
首先，小皿的尺寸应与样品的大小相匹配。
如果样品较小，选择较小的小皿可以减少样品和培养液的浪费。
相反，如果样品较大，选择较大的小皿可以容纳更多的样品，并提供更多的观察空间。
小皿的材料也是一个重要的考虑因素。
常见的小皿材料包括玻璃和塑料。
玻璃小皿具有优良的光学透明性和生物相容性，适用于多种共聚焦显微镜实验。
塑料小皿则更轻便且易于处理，适用于大批量实验和一次性使用。
小皿的底部形状也会影响共聚焦显微镜的成像效果。
常见的小皿底部形状有平底、底部有突起和底部有凹陷等。
平底小皿适用于大多数共聚焦显微镜实验，而底部有突起或凹陷的小皿则可用于特殊实验需求，如细胞迁移和细胞间相互作用的研究。
小皿的高度也需要考虑。
小皿的高度应足够容纳培养液和样品，并提供足够的观察空间。
一般来说，小皿的高度应略高于样品的厚度，以确保充分的培养液和样品接触。
共聚焦小皿规格的选择应根据样品的大小和性质、实验需求以及常见的底部形状和材料来进行。
选择合适的小皿规格可以提高共聚焦显微镜的成像效果，并获得准确可靠的实验结果。
在进行共聚焦显微镜实验时，科研人员应根据具体情况选择适合的小皿，并遵循操作规范，以确保实验顺利进行和结果准确可靠。
激光共聚焦培养皿使用方法
激光共聚焦培养皿使用方法玻底培养皿、激光共聚焦专用皿、共聚焦培养皿用于激光共聚焦显微实验、荧光显微实验和相差显微实验等细胞培养观察实验●可用于活细胞的观察●玻底细胞培养皿采用加厚底面设计,上盖与下底宽度差大大减小,避免取用时无意揭开或拿取不稳●采用进口盖玻片，厚度为0.19-0.22mm●圆形镶嵌式设计更加美观大方●采用医用级无影胶水粘接而成对细胞无毒性，便于共聚焦显微镜观察优点：1、使用进口优质玻片，特别适合激光共聚焦实验2、使用进口USP class VI无细胞毒性的胶水3、在无尘车间内生产处理和包装4、通过细胞生物学相关实验的质量检测5、无热原(<0.5EU/ml)6、γ射线辐照灭菌玻底培养皿主要用于要求放大倍数高、培养器皿底面透光性能好的显微实验，如激光共聚焦显微实验、荧光显微实验和相差显微实验等。
玻底培养皿底面薄，透光性能好，满足了上述实验的要求。
同时玻底培养皿底面的小孔也减少了实验过程中抗体等试剂的使用量。
该玻底皿底面玻璃使用进口的优质玻片，产品采用无细胞毒性的医用胶水粘合，适用于激光共聚焦等需要高分辨率的细胞显微实验，并且能够耐受长期的细胞培养。
塑料皿使用高透明度的USP class VI 聚苯乙烯为原料制成。
产品表面经过特殊处理，适合贴壁细胞的培养。
产品在无尘车间中生产，保证洁净度。
玻底培养皿和玻底培养板使用方法(以35mm皿，10mm孔为例)预平衡：在玻底培养皿加入3ml培养液，在培养箱中放置15分钟。
加细胞：吸去培养液，在底孔中加入500ul含细胞的培养液。
在培养箱中放置2小时，让细胞沉降贴壁。
加培养液：小心加入2-3ml不含细胞的培养液。
该步骤用于为细胞提供足够的培养液，同时减少由于水份挥发带来的渗透压的变化。
注意：*根据实验的要求，可以合并步骤2和3，在预平衡后直接加入2-3毫升含细胞的培养液。
玻片厚度的选择：共聚焦培养皿市场上有很多种，但大多数玻底厚度都是0.19-0.23mm，而实验表明，0.13-0.16mm是最佳的玻底厚度。
不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性
不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性激光共聚焦显微镜（Laser Scanning Confocal Microscopy，LSM）是一种高分辨率的显微镜技术，它可以通过激光聚焦来观察细胞和组织的细微结构和功能。
目前，激光共聚焦显微镜主要应用于生物医学研究领域，尤其是细胞和分子生物学。
随着技术的发展，LSM也被广泛应用于肿瘤学领域，用于观察和分析肿瘤的细胞和组织。
激光共聚焦显微镜对于观察不同接种部位的肿瘤具有可行性。
它可以通过高分辨率的成像和三维重建技术来观察肿瘤生长的细节和结构。
无论肿瘤是在体内还是在体外接种，LSM都可以清晰地显示细胞的形态和细胞间的相互作用。
激光共聚焦显微镜还可以通过荧光染色技术来观察肿瘤的特殊标记物，如细胞周期和凋亡标记物。
通过荧光染色，可以观察到肿瘤细胞的增殖情况和凋亡程度，从而评估肿瘤的活力和恶性程度。
激光共聚焦显微镜还可以应用于多种光学技术，如蛋白质相互作用、钙离子浓度和基因表达等方面的研究。
这些技术可以帮助研究人员更深入地了解肿瘤的发生和发展机制。
需要注意的是，激光共聚焦显微镜观察肿瘤的可行性也存在一些局限性。
由于它是一种高端显微镜技术，设备的价格较高，使用起来较为复杂，需要有专业的技术人员进行操作和分析。
激光共聚焦显微镜对于深层组织的观察仍存在一定的限制。
由于激光需穿过多层组织，深层组织的成像效果可能受到限制。
激光共聚焦显微镜是一种非常有潜力的技术，用于观察和研究肿瘤的细胞和分子特征。
虽然存在一些局限性，但随着技术的不断进步和成本的降低，激光共聚焦显微镜将能够更加广泛地应用于肿瘤学领域，为肿瘤研究提供更深入的认识和理解。
不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性
不同接种部位肿瘤进行激光共聚焦显微镜观察的可行性肿瘤的发生部位多种多样，且不同部位的肿瘤可能具有不同的结构和生物学特性。
对不同部位的肿瘤进行高分辨率的观察可以帮助我们更好地了解其发展过程和生物学行为，从而为肿瘤的治疗提供更有针对性的手段。
激光共聚焦显微镜通过采用激光扫描的方式，可以非常准确地获取肿瘤组织内不同细胞和结构的三维信息，也可以通过使用不同荧光探针进一步标记细胞核、细胞质和细胞蛋白，进而实现对肿瘤组织特定细胞类型和结构的无损成像。
激光共聚焦显微镜对于不同部位肿瘤的观察具有较强的可行性。
LSCM具有较高的光学分辨率，可以观察到微细结构、细胞核、细胞膜等细胞器的详细分布，有助于了解细胞的形态特征和亚细胞结构。
LSCM可以在非侵入性的情况下观察活体组织，避免了对组织的损伤和破坏。
通过使用特定的荧光探针，可以标记肿瘤细胞的特定分子表达水平，进一步研究肿瘤细胞的功能和代谢特点。
最重要的是，LSCM可以进行高速的连续扫描成像，可以观察到组织内不同时间点的动态变化，有助于了解肿瘤的发展和进展过程。
不同部位肿瘤的观察可能存在一些技术上的挑战，但LSCM可以通过一些改进来克服这些问题。
在观察深处组织时，由于光的衍射和吸收，可能会造成图像的模糊和降低分辨率。
为了解决这个问题，可以采用光学修正技术，如二光子共聚焦显微镜（Two-Photon Confocal Microscope）来实现深部组织的高分辨率成像。
对于观察较大范围的组织切片，可以使用全景扫描技术，通过多次扫描和拼接，实现全景图像的获取，进一步提高了观察范围和精度。
激光共聚焦显微镜在不同接种部位肿瘤的观察中具有较高的可行性。
通过其高分辨率的成像技术和无损标记的优势，可以对肿瘤组织的细胞结构和功能进行详细的观察，有助于深入了解肿瘤的发展和治疗过程。
在应用过程中还需要进一步优化技术细节，以满足不同部位肿瘤的观察需求。
共聚焦小皿尺寸
共聚焦小皿尺寸在日常生活中，共聚焦小皿尺寸是我们经常会遇到的一个问题。
共聚焦小皿尺寸是指在共聚焦显微镜中使用的容器尺寸，通常用于观察细胞、组织或其他生物样本。
共聚焦小皿的尺寸对于样本的固定和成像至关重要，它直接影响着观察结果的质量和准确性。
共聚焦显微镜是一种高级显微镜，可以通过聚焦技术来提高成像的清晰度和分辨率。
而共聚焦小皿作为这一技术的载体，起到了非常关键的作用。
共聚焦小皿的尺寸越小，可以容纳的样本量就越少，但它能够提供更高的空间分辨率和更好的成像效果。
共聚焦小皿的尺寸通常是以直径或边长来衡量的。
常见的尺寸有35mm、50mm、60mm等。
在选择共聚焦小皿尺寸时，需要根据样本的大小和形状来确定。
如果样本较小且需要高空间分辨率，可以选择较小的共聚焦小皿尺寸；而如果样本较大或需要观察多个样本，就需要选择较大的共聚焦小皿尺寸。
共聚焦小皿的尺寸还与使用的显微镜系统和目标镜头有关。
不同的显微镜系统和镜头对共聚焦小皿的尺寸有不同的要求。
一般来说，共聚焦小皿的尺寸应与显微镜系统和镜头配套，以确保成像的质量和准确性。
除了尺寸，共聚焦小皿的材质也非常重要。
常见的共聚焦小皿材质有玻璃和塑料。
玻璃共聚焦小皿具有优异的透明度和化学稳定性，适用于长时间观察和荧光染色实验；而塑料共聚焦小皿则更轻便、易于操作，适用于快速实验和移动式显微镜。
总结起来，共聚焦小皿尺寸对于共聚焦显微镜的成像效果至关重要。
在选择共聚焦小皿尺寸时，需要根据样本的大小和形状、显微镜系统和镜头等因素进行综合考虑。
合理选择共聚焦小皿尺寸，可以提高观察结果的质量和准确性，为生物科学研究提供有力支持。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
聚焦专用细胞培养皿（Ａ，Ｂ，ｃ）和常规细胞培养皿
（Ｄ）中。 １．２．２细胞荧光染色
倾去培养液，细胞用ＰＢＳ洗涤２次，加入ｌ
浓度为１５０ ｎｍｏｌ／Ｌ的线粒体染料，闭光孵育３０
ＩＩｌｌ
ｍｉｎ，
并用ＰＢＳ洗涤３次；倾去培养液，细胞用ＰＢＳ洗涤 ２次，用４％多聚甲醛固定１０ｍｉｎ，用ＰＢＳ洗涤２次； 加入ｌ ＩＩｌｌ质量浓度为５斗ｇ／ｍｌ的ＴＲＩＴＣ．鬼笔环肽
ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｃｏｖｅｒｓｌｉｐ ｃｈｏｉｃｅ ｆｏｒ ｃｏｎｆｏｃａｌ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｏｆ
ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ Ｏｎｅ，ｔｈｅ ｄｉｓｈ
ｗｉｔｈ Ｏ．１６加．１９ ｎ＇ｍｌ
ＷａＳ ｔｈｅ ｌａｓｔ ｏｎｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ
Ｔｈｅ ｄｉｓｈ
ｗｉｔｈ Ｏ．１３—Ｏ．１６ ｍｉｌｌ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｅｏｖｅｒｓｆｉｐ ｉｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ
成像的基础上加装激光扫描装置，使用紫外光或可 见光激光激发荧光探针，利用计算机对荧光物进行
皿底部的玻片厚度和材质对细胞贴壁率和成像效果 的影响尚未见相关报道，本研究以３种同一品牌不
物医学工程研究所 通信作者：朱敦皖，Ｅｍａｉｌ＇－Ｚｈｕｄｕｎｗａｎ＠１６３．ＣＯＩｌａ
同玻片厚度的激光共聚焦专用培养皿制备细胞样
０．１伽．１９ ｍｍ的皿次之，玻片厚度为Ｏ．０８５～０．１３ ｍｍ的皿较差。结论玻片厚度对激光共聚焦显微镜成像
效果有明显的影响，玻片厚度为０．１３－０．１６ ｍｉｌｌ的培养皿其细胞形态舒展，染色后细胞骨架清晰，荧光强度 最强。成像效果最佳。 【关键词】细胞培养皿；激光共聚焦显微镜；荧光染色 中图分类号：Ｒ３１８．６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３－４１８１（２０１２）０３－－０１７７－０４
国际生物医学工程杂志２０１２年６月第３５卷第３期ＩｎｔＪＢｉｏｍｅｄＥｎｇ，Ｊｕａｅ
２０１２。Ｖｄ．３５，Ｎ０３
・论著・
不同细胞培养皿对激光共聚焦显微镜 成像效果的影响
庞丽云王海刘焕来徐毓琪朱敦皖
【摘要ｌ
目的探讨３种不同玻片厚度的激光共聚焦专用细胞培养皿制备的细胞样品在激光共聚焦
显微镜（ｃＬｓＭ）下采集的荧光染色图像差异。方法通过活细胞及固定后细胞荧光染色实验，采用激光共 聚焦显微镜观察细胞形态及荧光亮度，检测不同条件下成像的平均荧光强度，考察３种厚度玻片（０．０８５一 Ｏ．１３、０．１３。０．１６、０．１６加．１９ ｍｍ）的激光共聚焦专用细胞培养皿之间显微成像的差异。结果在观察活细胞 线粒体和固定细胞骨架时，玻片厚度为０．１３—０．１６ ｔｏｎｉ的皿荧光成像清晰效果均表现为最好，玻片厚度为
１．２．４
样、染色条件相同的情况下对荧光图像成像效果的
影响。 １材料与方法 １．１主要材料与仪器
ＣＬＳＭ检测
在ｃＬＳＭ下观察细胞的荧光信号分布情况并采
集图像。图像采集物镜为Ｅｃ 镜，ｚｏｏｍ为ｌ，扫描针孔为１
Ｐｌａｎ＿Ｎｅｏｆｌｕａｒ４０ｘ／０．７５
Ｍ２７、Ｐｌａｎ—Ａｐｏｃｈｒｏｍａｔ ６３ｘ／１．４０ Ｏｉｌ ＤＩＣ
１．２方法 １．２．１细胞培养 人骨肉瘤细胞（Ｕ２．ｏｓ）置于含１０％胎牛血清、
１００
略微皱缩。
Ｕ／ｍｌ青霉素、１００ Ｏ．ｇＣ于３７℃、５％Ｃ０：细胞培养箱培养，每
１～２天换培养液一次。取对数生长期细胞，用０．２５％ 胰蛋白酶消化，以适当密度分别接种于３种激光共
ｏｆＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃｈｉｎｅｓｅ
ｏｆＭｅｄｉｃａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ＆愚＆岖Ｕｎｉｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｔｉａｎｊｉｎ
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ
Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ
３００１９２，Ｃｈｉｎａ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｄｉｓｈｅｓ
居中。
表２活细胞染线粒体平均荧光强度（ｉ±ｓ）
培养皿
Ａ Ｂ Ｃ
Ａ皿较差。表４为６３倍油浸物镜时３个皿的平均荧
光强度，结果与４０倍物镜时基本一致，Ｂ皿平均荧
光强度大于Ｃ皿，Ａ皿最差。
表４固定细胞染细胞骨架平均荧光强度（ｉ血）（ｘ６３）
３讨论
激光共聚焦显微镜（ＣＩＪｓＭ）作为一种新型高精
度显微镜，以其高分辨率、高清晰度得到广泛应用强。 ＣＬＳＭ用激光作扫描光源，在传统光学显微镜基础 上设置了相对于物镜焦平面共轭的照明针孔和探测
规细胞培养皿（Ｄ）（美国ＣＯＲＮＩＮＧ公司），ＨＥＲＡ．
ＣＥＬＬ
不变。通过图像清晰水平和平均荧光强度比较３个
细胞培养皿对荧光图像的影响。 ２结果 ２．１活细胞形态比较 图ｌ为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ ４个培养皿在倒置荧光显微 镜下，活细胞的明场采集图像。常规细胞培养皿（Ｄ） 是塑料材质，塑料表面由于经过组织培养化处理，光
万方数据
国际生物医学工程杂志２０１２年６月第３５卷第３期Ｉｎｔ Ｊ
Ｂｉｏｍｅｄ
Ｅｎｇ，Ｊｕｎｅ
２０１２，Ｖｏｌ ３５．Ｎｏ．３
品，分别进行活细胞荧光染色和固定细胞荧光染色， 以ＣＬＳＭ为检测工具来比较３种细胞培养皿在制
ＥＬＷＤ ４０ｘ／Ｏ．６ ｐｈ２ ＡＤＭ，扫描分辨率１２８０ｘ９６０像
素，曝光时间１２０ｍｓ。
图３为Ａ、Ｂ、Ｃ ３个激光共聚焦专用细胞培养 皿在ＣＬｓＭ下，固定细胞后ＴＲＩＴＣ．鬼笔环肽染细胞 骨架４０倍物镜的成像效果（蓝色：细胞核，红色：细
扫描限制在样品的一个平面内；调焦深度不一样时， 就可以获得样品不同深度层次的图像。４０倍物镜
和６３倍物镜为ＣＬＳＭ常用的观察和采集物镜，且 ６３倍物镜为高数值孔径的油浸物镜，物镜的数值
荧光强度（绿色）
１４８８９．９６±３２５４．０４ ４１１８４．８２±５９３５．１８ ３０４９９．０５±５２０９．２７
针孔，使焦平面上的点同时聚焦于照明针孔和探测
针孔，非焦平面上的点不会在探测针孔处成像，这样 得到的共聚焦图像是样品的某一光学横断面１７１。激 光光源逐点、逐行、逐面快速扫描成像，扫描的激光
ｉｓ ｕｎｆｏｌｄｉｎｇ ａｎｄ ｃｌｅａｒ ａｆｔｅｒ ｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｔｈｅ
ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｏｎ
ｔｈｉｓ ｔｙｐｅ ｏｆ ｄｉｓｈ，ｔｈｅ ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ
ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｓ ｔｈｅ ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ．ａｎｄ ｔｈｅ ｉｍａｇｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔ ｉｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ．
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－４１８１．２０１２．０３．０１２ 作者单位：３００１９２天津，中国医学科学院北京协和医学院生
激光扫描共聚焦显微镜（ｃｏｎｆｏｃａｌ
ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，ＣＬＳＭ）是近代最先进的细胞生物医学分 析仪器之一，是集激光、电子摄像和计算机图像处理 等高科技手段渗透、并与传统的光学显微镜结合产 生的细胞分子生物学分析仪器［１１。它在荧光显微镜
２４０ｉ细胞培养箱（美国Ｔｈｅｒｍｏ公司），ＬＳＭ Ｔｉ．Ｕ倒置荧光显微镜（日本Ｎｉｋｏｎ公司）。
表１
７１０激光共聚焦显微镜（ＣＬｓＭ德国ＣａｒｌＺｅｉｓｓ公司），
Ｅｃｌｉｐｓｅ
激光共聚焦专用细胞培养皿技术参数
镜下可观察到细胞贴壁数量较多，形态更为伸展。 激光共聚焦专用细胞培养皿（Ａ，Ｂ，Ｃ）是玻璃材质， 玻璃表面细胞贴壁数量较少，细胞形态较塑料表面
ｃｕｌｔｕｒｅ
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｃｅｌｌ
ｄｉｓｈ；Ｃｏｎｆｏｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ；ｌｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｅｅｎｃｅ
Ｏ
引
言
ｌａｓｅｒ ｓｃａｎｎｉｎｇ
检测、图像处理，既可观察活细胞、固定细胞的形态 和组织内部微细结构的荧光图像１９，还可提供定量 荧光测定，在分子细胞生物学领域得到广泛应用。目 前，ＣＬＳＭ在国内普及率越来越高。由于很多实验室 在准备实验样品期间，只注意染料的选择、孵育条 件；在观察荧光图像时，只注意细胞形态和染料的细 胞定位、成像效果，而忽略了ＣＬＳＭ对一些基本实验 条件的要求。细胞培养皿作为细胞和染料的承载体。 是进行ＣＬｓＭ成像的必不可少的实验耗材，镜检等 操作均需借助其进行。而激光共聚焦专用细胞培养
Ａｉｒｙ
Ｍ２７油浸物
Ｕｎｉｔｓ，扫描分辨率
人骨肉瘤细胞（ｕ２．ｏｓ）（中国科学院生命科学
研究所细胞资源中心），胎牛血清、胰蛋白酶（美国 Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ生命科技有限公司），ＭｃＣｏｙ’ｓ ５Ａ培养基 （德国ＰＡＮ．Ｂｉｏｔｅｅｈ Ｇｍｂｈ公司），ＴＲＩＴＣ．鬼笔环肽、 ＤＡＰＩ（美国Ｓｉｇｍａ公司）。激光共聚焦专用细胞培养
Ｏｉｌ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】
ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｉｍａｇｅ ｗｉｔｈ ｅｏｎｆｏｃａｌ ｌｕｔｅｄ ｃｅｌｌｓ ０．１３
ｗｅｌ＇ｅ
ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｔｈｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｏｆ ｌｉｖｅ ｃｅｉｌｓ ａｎｄ
ｕｓｅｄ
ｔｏ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ａｍｏｎｇ ｔｈｒｅｅ ｄｉｓｈｅｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｃｏｖｅｒｓｌｉｐｓ ｏｆ ０．０８５－
２．４固定细胞细胞骨架荧光成像比较 细胞骨架在细胞发育及其生物过程中起着相当
重要的作用口Ｉ，激光共聚焦显微镜是研究细胞骨架
与荧光收集共用一个物镜。物镜的焦点即扫描激光
的聚焦点，也是瞬时成像的物点。系统经一次调焦，
的有力工具［４１。从形态观察、定位、定量等方面对细 胞骨架进行研究成为现代生物医学中的重要课题≈。
Ｅｆｆｅｃｔｓ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｙｐｅｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｄｉｓｈｅｓ
Ｏｉｌ
ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ
ｉｍａｇｅ ｗｉｔｈ ｃｏｎｆｏｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ
ＰＡＮＧ Ｌｉ－ Ａｃａｄｅｍｙ
，Ⅲｋ ＷＡＮＧ Ｈａｉ，ＬＩＵ Ｈｕｍ一如‘ＸＵ Ｙｕ－ｇ‘ＺＨＵ