用RAPD技术检测野生鲫鱼的四个金鱼代表品种的基因组DNA多态性 Detection of the Genomic DNA Poly

道利用 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ技术对一些动植物的遗传多样性进行研究，在动物方面如对原生动物Ｃ 、鼠〔 滇金丝 ８ ） ９ ） 猴〔） １ 、蛇〔） ０ ‘ 均有报道，但用Ｒ Ｐ ’ Ａ Ｄ方法对鱼类进行研究报道较少ｃ １ 。本文在前人研究的基础上，利用 ２ ）
Ｒ Ｐ 技术 ，并 辅 以适 当的统 计分析 ，对 卿鱼 和金鱼 主要代 表 品种 的基 因组 Ｄ Ａ Ｄ ＮＡ 进行多态 性分析 ，在 ＤＮ Ａ 分子水平上 为金鱼 的起源提供 新的佐 证， 同时进 一步深 人探讨 了金鱼主要 品种 的系统演化关 系。
Ｕ ｉ Ｒ Ｐ Ｔ ｃｎ ｕ ｓ ｇ Ｄ ｈｉ ｅ ｎ Ａ ｅ ｑ
ＷＡ ＮＧ ｉ ｍｅ Ｓ ＮＧ ｅｑｎ Ｉ ｌ Ｃ Ｎ ｕ ａ ｇ Ｘ ａ ｉ ｏ Ｏ Ｗ ｎ ｉ Ｌ Ｘｉａ ｕ ｎ ＨＥ Ｒ ｉ ｎ ｙ
（ｅａｔｅｔ ｉｏｙＮ ｎａＵ ｉ ｒｔ Ｔ ｎｎ ０７） Ｄ ｐｒ ｎｏＢｏ ｇ， ｋｉ ｖ ｓｙ ｉ ｊ ３ ０１ ｍ ｆ ｌ ａ ｎ ｅ ｉ， ｉ ０ ａ Ａ ｓ ａｔ ｅ ｏ ｃ ｂｔ ｃ Ｇ ｎ ｍｉＤ ｒ ＮＡ ｌ ｒｈｓ ｉ ｔ ｗｌ ｃｕｉ ｆ ｍ ｏ ｆ ｅ ｔ ａ ａｄ ｆｕ ｒ ｒ ｐ ｙ ｐ ｉ ｎ ｉ ｒｃ ｎ ｔ ｄｆ ｒｎ ａｅｓ ｉ ｏ ｒ ｅ ｏ ｍｏ ｍｓ ｈ ｅ ｄ ａ ｒ ｗ ｉｅ ｏ ｒ ｎ ｎ ｅ － ｐ
合酶（ 北京高登沃德生物制品有限公司） 。反应混合物用石蜡油覆盖。Ｄ ＮＡ扩增采用Ｐｏｅｅ Ｒ循环仪（ ｒｇｎ Ｐ Ｃ 英国
Ｔ ｃｎ 公 Fra Baidu bibliotek） 每 个反应 为 ４ 个循 环， 前 ８个循环 ９ ℃变 性 １ ， ℃退火 １ ， ℃延 伸 ２ ｎ ｅｈ ｅ 。 ０ ４ ｍｎ ３ ｉ ６ ｍｎ ７ ｉ ２ ｍｉ ；后 ３ 个 ２

ｇｌｉ ａｄ ｌ ｆｈ ｏ ｆｈ ｏａｇｌ ｉ ． ｄ ｓ ｎ ｖ ｏｄｓ
Ｋ ｙ ｒｓ ｌ ｃｕｉ ， ｌｆｈ Ｒ Ｐ Ｓｓ ｍａ ｃ ｌｔ ｎ ｅ ｗ ｄ Ｗｉ ｒｃ ｎ Ｇｏｄｉ ， Ｄ， ｔ ｔ ｅｏｕｉ ｏ ｄ ａ ｓ Ａ ｙｅ ｉ ｖ ｏ 金鱼是世界 著名 的观 赏鱼类之 一，它 以其绚丽 的色彩、优美 的体 态以及典雅 的游 姿深受人们 的喜爱。体态奇
拍照。

１ ． ５数据分析 任意两个品种间的遗传距离（） Ｐ根据两个品 共享度（） 种的 Ｆ来计算〔， ’： 。
Ｐ＝１ Ｆ Ｆ ２ Ｑ （ ＋ ｈ － ； Ｎ ６ Ｎ Ｎ ） ＝ ／

５ 期

王晓梅等： Ｒ Ｐ 技术检测野生螂鱼和 四个金鱼代 表品种 的基 因组 Ｄ 用 ＡＤ ＮＡ多态性

９

风 和 戈 分别为ａｂ品种拥有的Ｒ Ｄ标记数，戈。 ， ， ＡＰ 为ａｂ两个品种共同拥有的Ｒ Ｐ Ａ Ｄ标记数。根据遗传
化而来，聚类结果表明， 草金鱼形成后，首先演化为文种鱼，然后由文种再形成龙种和蛋种两个品系。 关键词 螂鱼，金鱼，Ｒ Ｄ，系统演化 ＡＰ
分 类号 Ｑ ４ ， ３ ３９ Ｑ ５ ９

Ｄ ｔ ｔ ｎ ｈ Ｇ ｎｍｃ Ａ ｌｍ ｒｈ ｍ ｉｔｅ ｌ ｅ ｃｏ ｏ ｔｅ ｏ ｉＤ Ｐ ｙ ｏｐｉ ｓ ｈ Ｗｉ ｅ ｉ ｆ ｅ Ｎ ｏ ｓ ｎ ｄ Ｃ ｕｉ ａｄ ｕＲ ｐｅｅｔｔｅ ｒ ｔｓ ｏ ｆｈ ｒｃ ｎ Ｆ ｒ ｒ ｎａｉ Ｖ ｉｉ ｏＧ ｌ ｉ ａ ｎ ｏ ｅ ｓ ｖ ａ ｅｅ ｆ ｄ ｓ

距离Ｐ值，再用类平均法〔〕 １ 求出类间 ４ 距离后再聚类。

２结

果

２ ＲＰ ． Ａ Ｄ扩增结果 １
我们采 用了 ５ ０个随机 引物进 行扩增，选取其 中 ２ 个引物扩增产物电泳带型清晰的用于数据统计，实验 中这 ６ ２ ６个引物 在各品种实验鱼 中平均获得约 １４ 带（ ３ 条 标记） 个引物平均提供约 ５ 个标记 ，单 个的引物扩增出的 ，每 ． ２ Ｒ Ｐ 标记在 １ １ ＡＤ － ６个之间（ ２。图 １ 表 ） 列举 了几个引物扩增产物 的电泳带数。 表 ２ 随机 引物序 列及 扩增结果
的 酚、 氯仿 （ ：１ 提 数次 ， 取上 清 液加 人 两倍 体 积 的无水 乙醇 沉淀 ＤＮ １ ） 抽 Ａ，干 燥后 用 适量 的 Ｔ Ｅ缓 冲液 （ １ ０

ｍ ｏ／ ｒ－ Ｃ， ． １ ｏ／ Ｄ Ａ溶解，再经Ｒ ａ 及蛋白 ｍ ｌ ＴｉＨ Ｉ Ｈ ０ ｍ ｌ Ｅ Ｔ ） Ｌ ｓ ｐ ８ ， ｍ Ｌ Ｎｓ ｅ 酶Ｋ处理后置冰箱 备用。 １ Ｐ Ｒ扩增 ． Ｃ ３

１材

料

和

方

法

１１材料 ．
１． ． １实验 鱼 １ 野 生螂鱼 分别 采 自天津 市蓟县 于桥水库 和天津市 西青 区南河镇境 内的独流碱河 ，金鱼来 自天津

市北辰区多助养殖场，按新的五类分类法〔〕金鱼选取草金种、文种、龙 ’， ３ 种和蛋种４ 大类的代表品 种。实验鱼
经鉴定后取 出肝脏， 置于一 ０ ２ ℃备 用（ 见表 １ ） ． １． ．２随机引物 由美国哥 伦比亚大学合成 ，香港大学动物系孙梅博 士惠赠。 １ 表 １ 野生螂鱼和 ４ 个金 鱼代 表品种
①天津农学院水产系教师，在职研究生。 ②通讯联系人。

８

遗

传 ＨＥ Ｅ Ｔ Ｓ ｅｉ ） ８ Ｒ ＤＩＡ （ ｉ ｇ １９ Ｂｊ ｎ ９

２卷 ０

白电泳的 基本谱带相似〔 。这些实验结果均科学地证实了金鱼起源于卿鱼，二者属于同一物 ７ ） 种。但前人对金 鱼
品种 内的系统演化 关系至今 尚未取得 一致意见． 自 Ｗｉｉ ｓ Ｗｅ ｈ ９０ ｌｍ 和 ｌ ａ ｌ （ ）创 立 Ｒ Ｄ 技术 以来 ，已广 泛用于基 因组研 究的各个方 面，ＲＡ Ｄ技 术尤对 ｓ １９ ＡＰ Ｐ 未知基 因序列的物种 的品种 鉴定及物种 的亲缘 关系和进 化方面的研究有着 独到之处。近年 来，国 内外已有许多报

ｓｎａｉ ｖｒｔｓ ｏ ｆｈ ｒ ｄｔ ｔ ｂ ｕｉ ｒｎｏ ａ ｌｅ ｐｌ ｏｐｉＤＮＡ Ａ Ｄ） － ｅｔｔｅ ｉｉ ｏ ｇｌ ｉ ｗ ｅ ｅ ｅ ｙ ｎ ａｄｍ ｉ ｄ ｙ ｒｈｃ （ Ｐ ｔ ｈ ｖ ａ ｅｅ ｆ ｄ ｓ ｅ ｅ ｃ ｄ ｓ ｇ ｍｐｆ ｏ ｍ ｉ Ｒ ｅ ｃ ｎｑｅＴ ｅ ｏ ｃ ｏ ｅｃ ｖｒｔ ｏ ｆｈ ｓ ｌｉ ｗｔ ２ ｐｉ ｒ Ｏｎ ｒｇ， ｕ １４ ｉ ． ｇｎｍｉＤＮＡ ａｈ ｉｙ ｉ ｗ ａ ｉｅ ｉ ６ ｍｅ ． ａｅ ｅａｏｔ ｕ ｈ ｅ ｆ ａｅ ｆ ａ ｍｐｆｄ ｈ ｒ ｓ ｓ ｖａ ｂ ３
Ｒ Ｐ Ａ Ｄ扩增的基本条件是：Ｐ Ｒ反应体系为 ２ｐ，其中含有 １ ｍ ｏ／ ｒ－ Ｃ， ． ５ ｍ ｏ／ Ｃ ５ｌ ０ ｌ Ｔｉ Ｈ Ｉｐ ８ ， ｍ ｌ ｍ Ｌ ｓ Ｈ ３ ０ Ｌ

Ｋ Ｉ ． ｍ ｌ Ｃ， ｏ／ ０， ３ ｕ Ｌ引物，２０ｍ ｌ Ｌ Ｔ， ｍ ｏ／ Ｃｒ ２－ ０ 组Ｄ Ａ １Ｕ ｑ Ａ聚 ０， ｏ／ Ｎ Ｐ ２ ｍ ｌ Ｌ ｌ ０－ ｎ 基因 Ｎ ， Ｔ Ｄ ｕ ｄ ． ０ Ｍｇ ， ４ ｇ ． ａ Ｎ ５
Ｒ Ｄ ａｋｒ ｗ ｒ ｏ ｓｒｅ ｂ ｅｃ ｖｒ ｔ． ｍ ｒｅｓ ａｎｄ ａ ｇ ｐｉｅ ｖｒ ｄ ｍ ｔ ＡＰ ｍ ｒｅｓ ｅ ｅｖｄ ａｈ ｉ ｙ Ｔ ｅ ｋｒｏ ｔｉ ｂ ｓ ｌ ｒ ｒ ｉ ｆ １ ｅ ｂ ｙ ａｅ ｈ ａ ｂ ｅ ｙ ｉ ｅ ｍ ａ ｅ ｒ ｎ ｏ ｏ １． ｓ ｔｔａ ａ ａ ｓ ｏ ｔ ｅｐｒ ｅ ｔ ｒｓｌ ｉｄ ａｅ ｔａ ｒｎ ｏ ａ ｌｉ ｐ ｌ ｏｐ ｉＤ ６ Ｔ ｅ ｉｉ ｌ ｌ ｉ ｆ ｘｅｉ ｎａ ｅｕ ｓ ｉ ｔ ｈｔ ｄ ｍ ｉｅ ｏ ｍ ｒｈ ＮＡ ｈ ｔ ｓｃ ｎ ｙ ｓ ｈ ａ ｅ ｍ ｌ ｔ ｎ ｃ ｄ ａ ｍｐｆ ｄ ｙ ｃ ｏ ｔ ｇ ｌｆｈ ｄ ｌ ｃｕｉ ｈｖ ａ ｈ ｐ ｒｏ ｏ ｒｎｏ ａ ｌｉ ｐ ｌ ｏｐ ｉＤＮ ｆ ｇ ｅ ｔ ｆ ｏｄ ｓ ａ ｗ ｄ ｃ ｎ ｅ ｉ ｐｏ ｏｔ ｎ ａ ｄ ｍ ｉｅ ｏｙ ｒｈ ｈ ｅ ｉ ｎ ｉ ｒ ａ ａ ｈｇ ｒ ｉ ｆ ｍｐ ｆｄ ｍ ｃ Ａ ｍ ｎ ｒ ａ ｓａ ｄ Ｔ ｉｆｒ ｅ ｖｒ ｉ ｔａ ｇ ｌｆｈ ｅｏｖｄ ｍ ｉ ｃｕｉ ． ｃ ｓ ｒ ｌ ｉｓｇｅｔ ｔａ ｈｒ ． ｓ ｔ ｒ ｉｅ ｈ ｔ ｄｉ ｉ ｖ ｌ ｆ ｗｌ ｒｃ ｎ Ｔ ｅ ｔ ａ ａ ｓ ｕｇｓ ｄ ｔ ｅ ｈ ｕ ｈ ｅ ｆｄ ｏ ｓ ｓ ｅ ｒ ｏ ｄ ａ ｈ ｌ ｅ ｎ ｙ ｓ ｕ ｅ ｈ ａｔ ｅ ｅｇ ｇ ｇａｓ ｌ ｉ ｉｅ ｏ ｅ ｔ ｗ ｎ ｌｆｈ ｔｅ ｔｒｕｈ ｎ ｌｆｈ ｌ ｄ ｄａｏ ｅｅ ｆ ｒ ｒｉ ， ｓ ｇ ｄ ｓ ｓ ｌ ｄ ｅ ｇ ｄｉ ， ｎ ｏ ｇ ｗ ｇ ｄｉ ｅｏｖ ｔ ｒｇｎｙ ｅ ｍ ｎ ｒ ｏ ｆｈ ｖ ｖ ｏ ｏ ｓ ｈ ｈ ｅ ｏ ｓ ｖ ｅ ｏ

１ ． ２基因组 ＤＮ Ａ的提取
将实验鱼肝脏 ０ －０ ｍ ． － ｇ在液氮中研成粉末转至 ５ Ｅ ｐｎｏｆ ２ ． ５ ｍ］ ｅｄｒ管中，加 ２ ｌ ｐ ｍＤ ＮＡ提取缓冲液（ （ １ ０

ｍ ｏ／ ｒ－ Ｃ， ．７ ｍ ｏ／ ａｌ ． Ｓ Ｓ５ ｏ／ Ｄ Ａ，于６℃ ｍ ｌ Ｌ ｓＨ Ｉ Ｈ ０ ５ ｌ Ｌ Ｃ， Ｄ ， ｌ Ｌ Ｔ ） Ｔｉ ｐ ８ ， ｍ Ｎ ０ ％ ５ ｍ ｍ Ｅ ５ 保温 １分钟、加等体积・ ０

鱼 （ ａａｓ ｓ ａｕ Ｖ ｒ 代表品种的基因组ＤＮＡ的多态性。用 ２ Ｃ ｒｓｕ ａｒｔｓ ． ｉ ｕ ａ） ６个随机引物对各品种实验鱼的基
因组 Ｄ ＮＡ进 行扩增 ，平均 每个 品种 观察 到约 １４个标记 ，单 个引物获得 的标记 在 １ １ 个之 间。实验 ３ 一 ６

结果经统计学分析表明，金鱼和螂鱼的随机扩增多态Ｄ Ａ共享度高，进一步证实了 Ｎ 金鱼由野生螂鱼演

循环 ９℃变性 ３ｓ ３℃退火 Ｉ ， ℃延伸 ２ ｎ ４ ０， ６ ｍｉ ７ ｎ ２ ｍｉ；首次循环前 ９℃变性 ５ ，最后循环后 ７℃再延伸 ７ ｍｉ ｎ ２
８ ｎ 每次反应均设 不含模板 Ｄ ｍｉ 。 ＮＡ 的空 白对 照。 １ ． ４电泳

Ｒ Ｐ Ａ Ｄ产物用 １ ％琼脂糖凝胶电泳分离（．ｘ Ｅ ３ ｃ ． ８ （５ Ｂ ， ｍ恒压） ０ Ｔ Ｖ／ ，澳化乙咙染色后，紫外透射仪上观察和
遗传 ＨＥ Ｅ Ｔ Ｓ ｅｉｇ ２（）７ １ ９ Ｒ ＤＩＡ （ ｉｎ） ５ 一１ １ ８ Ｂｊ ０ ： ９

用Ｒ Ｐ Ａ Ｄ技术检测野生螂鱼和四个金鱼 代表品种的基因组 Ｄ Ａ多态性 Ｎ
王晓梅① 宋文芹 李秀兰 陈瑞阳②
（ 南开 大学生 物系， 天津 ３０ ７） ０ ０１

摘

要

利用 随机扩增多态 ＤＮ 技术检 测了两个不 同地 区的野生细鱼 （ ａａｓ ｓ ａｕ Ｌ） ４ Ａ Ｃ ｒｓｕ ａ ｒｔｓ 和 个金 ｉ ｕ ．
品 种 野生螂鱼

一于 水 桥库
１ ０ １ ７２ ２．

独流碱河
１ ０ ７５７ ． １ ０ ２． ３４ １ ０ ９４ ． １ ０ １． ６５ １ ０ １． ４４

红草金鱼

红 文鱼

红龙睛鱼

红泡眼鱼

个体数 平均体重 （ ｇ ） 年 龄

１ ＋

１ ＋

１ ＋

１ 十

ｌ ＋

ｌ ＋

注： 为叙 述方便， 螂鱼也称 为一个品种 ； 品种 的金鱼 英文名称 来 自罗莉 中（９２、傅仪远（９７和梁前 进（ ９） 将 各 １８） １８） １ ４． ９

异的金鱼与江河湖泊中的野生鱼类有着极大的不同，在自然水域找不到它的踪影，它是人工饲养的产物。但据史
料记载，金鱼起源于 中国的野生卿鱼 ，根据这一历史记 载，前人 已从 多方面进行研究 ，发现螂鱼可和任何 品种 的

金鱼进行杂交〔 ；金鱼和卿鱼的各期胚胎发育不仅形态相似，且同温下胚胎发育速度相同（ ；染色体数目 ’ 〕 ２ ） 相 同、 形态相似（ ；金鱼和螂鱼同组织中的酷酶及乳酸脱氢酶同工酶谱带基本相同〔 ６；金鱼和卿鱼的肌肉 ３ ） ４） － 蛋