【CN110031627A】一种呕吐毒素DON直接竞争化学发光定性定量免疫分析方法【专利】
粮谷中呕吐毒素管式化学发光免疫分析法的研究与应用
Ｖｏ １ ． ３８ Ｎ ｏ． ０３． ２０１ ７
便品， 址 投
粮 谷 中呕 吐 毒 素 管 பைடு நூலகம்
化学发 光免疫分析法的研究与应用
王 毅谦 ， 陈君义 ， 龙 云凤 ， 陆慧媛 ， 方 云涛 ， 于 洋。
（ １ ． 江苏 出入 境检 验检 疫局 ， 江 苏南京 ２ １ ０ ０ ０ ０；
方法 ： 本 研 究基 于抗 原 抗 体 的特 异 性 反 应 ， 选 择 磁 性 微 粒 为 固相 载 体 ， 通 过优化磁微 粒 的稀释度 、 反 应 时 间 等 工 作 条 件， 建 立 了 高 准确 度 、 重 复性 良好 的 Ｄ Ｏ Ｎ — Ｃ Ｌ Ｉ Ａ。结 果 ： 本 研 究建 立 的 Ｄ Ｏ Ｎ — Ｃ Ｌ Ｉ Ａ 的检 测 范 围 为 ５ － １ ８ ５ ｉ ｒ ｇ ／ ｍ Ｌ ； 最低检 测限为 ３ ． ８ ２ ｎ ｍ Ｌ （ 样本检测限为 ０ ． ０ ７ ６ ｇ ／ ｇ ） ； 准确度 相对偏 差为 ６ ． ６ ４ ％， 重 复 性 变异 系数 为 ２ ． ３ ２ ％， 均 小于 １ ０ ％； Ｄ Ｏ Ｎ的添加回收率在 ９ ０ ％～ １ １ ０ ％之 间 。 结 论 ： 本研 究建 立的 Ｄ Ｏ Ｎ— Ｃ Ｌ Ｉ Ａ 的检 测 范 围 、 检 测 限、 准确 度 、 重复性 、 回收 率， 均符 合 实 际 工作 的要 求 ， 是 一种 快 速 、 高效 、 准确 的 化 学发 光 免 疫 分析 法 ， 适 用 于 大 量样 本 的 Ｄ Ｏ Ｎ含 量 的测 定 。
ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｉ ｍｅ ， ｗ ｅ ｒ ｅ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍ ｉ ｚ ｅ ｄ ． Ａ ｈ ｉ ｇ ｈ ａ ｃ ｃ ｕ ｒ ａ ｔ ｅ ｔ ｕ ｂ ｕ ｌ ａ ｒ Ｃ Ｌ Ｉ Ａ ｆ ｏ ｒ ｑ ｕ ａ ｎ ｔ ｉ ｆ ｙ ｉ ｎ ｇ ｏ ｆ Ｄ Ｏ Ｎ（ Ｄ Ｏ Ｎ － Ｃ Ｌ Ｉ Ａ） ｉ ｎ ｃ ｅ ｒ ｅ ａ ｌ ｓ ｗ ａ ｓ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｅ ｄ ．
三甲医院三基考试《检验》模拟题 (8)
检验模拟题681、碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析仪常用的发光底物为1分A.AMPPDB.TPAC.吖啶酯类D.三联吡啶钌E.鲁米诺考生答案：正确答案：A试题分数：1分考生得分：0答案解析：化学发光免疫分析中，碱性磷酸酶作用于其发光底物AMPPD，其分子中发光基团为芳香基团和酶作用的基团。
2、辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析仪常用的发光底物为1分A.AMPPDB.TPAC.吖啶酯类D.三联吡啶钌E.鲁米诺考生答案：正确答案：E试题分数：1分考生得分：0答案解析：化学发光免疫分析中，在碱性环境时，辣根过氧化物酶对鲁米诺和过氧化氢的反应起催化作用，鲁米诺发光。
3、主要参与体液免疫应答的是1分A.Th1细胞B.Th2细胞C.Tc细胞D.Ts细胞E.NK细胞考生答案：正确答案：B试题分数：1分考生得分：0答案解析：Th2细胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等细胞因子，参与体液免疫应答。
4、主要参与细胞免疫应答的是1分A.Th1细胞B.Th2细胞C.Tc细胞D.Ts细胞E.NK细胞考生答案：正确答案：A试题分数：1分考生得分：0答案解析：Th1细胞主要分泌IL-2、IFN-γ、IFN-β等，参与细胞免疫应答。
5、具有特异性杀伤功能的是1分A.Th1细胞B.Th2细胞C.Tc细胞D.Ts细胞E.NK细胞考生答案：正确答案：C试题分数：1分考生得分：0答案解析：Tc细胞由特异性抗原刺激而形成，具有特异性杀伤功能。
6、具有直接杀伤靶细胞效应的是1分A.Th1细胞B.Th2细胞C.Tc细胞D.Ts细胞E.NK细胞考生答案：正确答案：E试题分数：1分考生得分：0答案解析：NK细胞即自然杀伤细胞，是具有直接杀伤靶细胞效应的一个特殊淋巴细胞系。
7、能分化为浆细胞产生抗体的细胞是1分A.NK细胞B.T细胞C.B细胞D.中性粒细胞E.嗜碱性粒细胞考生答案：正确答案：C试题分数：1分考生得分：0答案解析：B细胞能分化为浆细胞并分泌抗体。
化学发光免疫分析技术题库1-0-8
化学发光免疫分析技术题库1-0-8问题：[单选,A2型题,A1A2型题]下列有关化学发光的叙述错误的是（）A.化学发光是指伴随化学反应过程产生的光的发射现象B.电子跃迁的能量来源于化学反应中产生的化学能C.化学发光反应的发光效率、光辐射的能量大小以及光谱范围，完全由发光物质的性质所决定D.每一个发光反应都具有相同的化学发光光谱和不同的化学发光效率E.化学发光效率决定于生成激发态产物分子的化学激发效率（ψCE.和激发态分子的发射效率（ψEM）化学发光是指伴随化学反应过程所产生的光的发射现象。
某些物质（发光剂）在化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能，使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃迁到激发态，当电子从激发态回复到基态时，以发射光子的形式释放出能量，这一现象称为化学发光。
化学发光效率决定于生成激发态产物分子的化学激发效率（ψCE）和激发态分子的发射效率（ψEM）。
化学发光反应的发光效率、光辐射的能量大小以及光谱范围，完全由发光物质的性质所决定，每一个发光反应都具有其特征性的化学发光光谱和不同的化学发光效率。
问题：[单选,A2型题,A1A2型题]化学发光剂必须符合以下条件，但不包括（）A.发光的量子产率高B.其物理、化学特性与被标记或测定的物质可以不匹配C.能与抗原或抗体形成稳定的耦联结合物D.其化学发光常是氧化反应的结果E.在所使用的浓度范围内对生物体没有毒性能作为化学发光剂的条件，必须满足：①发光的量子产率高；②它的物理-化学特性要与被标记或测定的物质相匹配；③能与抗原或抗体形成稳定的耦联结合物；④其化学发光常是氧化反应的结果；⑤在所使用的浓度范围内对生物体没有毒性。
问题：[单选,A2型题,A1A2型题]有关常用的化学发光剂说法正确的是（）A.吖啶酯是一种酶促反应发光剂B.在酸性条件下，吖啶酯可以发出470nm的波长C.三联吡啶钌可以自发光D.鲁米诺及其衍生物是常用的酶促反应发光剂E.吖啶酯的电子供体是三丙胺吖啶酯是一种直接化学发光剂，在发光免疫分析过程中不需酶的催化作用，直接参与发光反应，在化学结构上有产生发光的特有基团，可直接标记抗原或抗体。
呕吐毒素DON检测操作规程
呕吐毒素DON检测操作规程1 原理AgraQuant® 呕吐毒素检测试剂盒应用固相直接竞争酶联免疫吸附原理，用去离子水从研磨样品中提取呕吐毒素。
样品提取液或呕吐毒素标准品与酶-呕吐毒素偶合物混匀后加入到抗体包被的微孔中，样品中的呕吐毒素或呕吐毒素标准品与酶-呕吐毒素偶合物中的呕吐毒素竞争结合微孔中的特异抗体。
经过洗板去除未参加抗原-抗体反应的的呕吐毒素，当酶的底物被加入到微孔中，颜色变为蓝色，且颜色深浅与样品中或标准品中呕吐毒素含量成反比。
加入反应终止液终止反应后，反应液颜色应由蓝色转为黄色。
在450nm(OD450)滤镜及630nm示差滤镜下使用酶标仪对微孔板进行吸光度值测量。
利用标准品的吸光度值对标准品浓度制作标准曲线，将样品的吸光度值与标准品的吸光度值进行比较以进行结果的判读。
2 试剂与仪器2.1 单道移液枪（量程：0~200μL、0~1000μL）2.2 八道移液枪（量程：0~300μL）2.3 定时器2.4 吸水纸2.5 试剂槽3个2.6 仪器：酶标仪3 操作步骤3.1 清洗液的准备将浓缩洗液瓶（wash solution concentrate）中全部液体转移至500mL的塑料瓶中，加入475mL的去离子水，混合均匀。
3.2 样品的准备/萃取3.2.1 获取具有代表性的样品，使用研磨机研磨，使至少95%的研磨样品能够通过20目筛网，彻底混合并对样品进行二次取样。
3.2.2 称取20g 研磨样品于干净并可密封的广口瓶中。
3.2.3 加入100mL去离子水萃取溶液并密封广口瓶。
注意：样品与萃取溶液比例应为1：5（w:v）。
3.2.4 摇床上振荡混合10分钟。
3.2.5 静置样品，用双层滤纸过滤萃取上清液，收集待检滤液（滤液必须澄清）。
3.2.6 用去离子水对滤液进行1:4稀释。
例如：将1mL萃取液加入3mL去离子水中，混匀准备进行随后实验。
3.3检测步骤3.3.1 将绿色的稀释孔条放入微孔板架上，稀释条孔的数目需使每个标准品（0, 0.25, 1.0,2.0 & 5.0ppm）或样品能够对应一个稀释孔。
酶联免疫法检测粮论文：浅谈酶联免疫法检测粮食中的呕吐毒素
酶联免疫法检测粮论文：浅谈酶联免疫法检测粮食中的呕吐毒素摘要：粮食中的呕吐毒素don属于剧毒或中等毒物，研究表明，don在体内可能有一定的蓄积，但无特殊的靶器官，具有很强的细胞毒性。
因此，对于粮食中呕吐毒素含量的检测是相当重要的。
检测方法主要包括气相色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法、红外光谱分析、金标试纸法、荧光极荧光极性免疫分析性免疫分析以及酶联免疫法等。
基于此，本文对酶联免疫法检测粮食中的呕吐毒素进行了较为系统的分析。
关键字：呕吐毒素；粮食；酶联免疫法1. 前言呕吐毒素(vomitoxin)是近年来逐步引起人们重视的一种真菌毒素，其分布广，危害普遍，特别是伴随着谷物的生长过程而产生，不易预防。
呕吐毒素化学名称为脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deox)nivalenol，don)，属于单端孢霉烯族化合物，主要由某些镰刀菌产生(如fgraminearum，fculmorum 等)，因其能引起动物呕吐，故又称呕吐毒素(vomitoxin)[1]。
don广泛存在于全球，主要污染小麦、大麦、玉米等谷类作物，也污染粮食制品，人和动物在误食被该毒素污染的粮谷类后可以产生广泛的毒性效应。
另外，它还常与其它的霉卤毒素如黄曲霉毒素共同污染农作物，进入人体后可以相互影响。
don属于剧毒或中等毒物，研究表明，don在体内可能有一定的蓄积，但无特殊的靶器官，具有很强的细胞毒性。
人畜摄入了被don污染的食物/饲料后，会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡。
研究表明，don可能对免疫系统有影响，有明显胚胎毒性和一定致畸作用，可能有遗传毒性，但无致癌、致突变作用。
由于don的危害严重，引起了各国的普遍重视。
谷物及饲料中don的含量有严格的限量标准。
我国谷物中don 的限量标准为1.0 mg/kg [2]。
所以对食品当中呕吐毒素含量的检测是相当重要的。
目前用于检测呕吐毒素的方法有很多，主要是要根据实验室的实际情况来选择测定方法。
呕吐毒素DON的检测ELISA法
呕吐毒素(DON)的检测ELISA法测试前请仔细阅读本说明在2—8℃冷藏—不要冻结1.简介 DON毒素脱氧瓜萎镰菌醇（DON，）是单端孢菌素烯烃中的一种，它通常是由生长在谷类物品（如小麦、玉米、大麦和秣草）霉菌镰红菌素生成的。
脱氧瓜萎镰菌醇的毒性效应包括：呕吐、不想进食、胃肠炎、腹泻、免疫抑制和血液病。
研究表明猪对脱氧瓜萎镰菌醇很敏感。
当脱氧瓜萎镰菌醇含量≥1ppm时，它们就拒绝进食。
其毒性也会对其他物种产生毒性效应，各种物种对脱氧瓜萎镰菌醇的敏感性各不相同。
研究表明脱氧瓜萎镰菌醇会使已加工食物发生问题，包括使可吃的谷类制品产生臭味、对生面团质量产生负面影响。
因此，精确测定可能含有脱氧瓜萎镰菌醇的食物和食品就现得十分重要。
FDA（美国食品和药品管理局）已经制定了脱氧瓜萎镰菌醇含量的强制标准。
2.方法原理本测试盒的测试原理是一种竞争性的直接酶联免疫吸附剂测试方法（ELISA），可准确检测出样品中ppm级的DON毒素。
样品和标准控制液中游离的DON毒素与轭合物中的DON 毒素竞争抗体结合位置。
清洗后，加入底物，底物与轭合物反应出现兰色，兰色越深表明DON毒素越少。
将其置于微型孔阅读器中可读出透光度，以控制标准液的透光度作标准曲线，将样品的透光度与标准曲线比较计算出样品中DON毒素的准确浓度。
3.贮存要求本试剂盒存放在2～8℃时，可以一直使用到标签上注明的到期日期。
4.试剂与仪器4.1已提供的材料48个包被了抗体的孔；48个红色标记的混合孔；5瓶2ml 浓度为0、0.25、0.5、1、3 ppmDON毒素控制标准液(黄色标签)；1瓶DON毒素-HRP轭合物溶液(兰色标签)；1瓶24ml 底物溶液(绿色标签)；1瓶32ml红色终止液（红色标签）4.2需要但未提供的材料提取材料；蒸馏水或去离子水；100ml量筒；150ml的具塞三角瓶；滤纸；样品收集具塞试管；漏斗；粉碎机；称量为5～25克的秤；带450nm滤光片的酶标仪；200μl移液器；200μl吸咀；纸巾或等效的吸水材料；计时器；防水记号笔；洗瓶；移液器用的试剂槽；蒸馏水或去离子水；计时器等5.注意事项本测试盒不使用时应在2～8℃下存放。
呕吐毒素酶联免疫定量检测试剂盒说明书
ELISA kit for quantitative detection of deoxynivalenol一、概要呕吐毒素(V omitoxin)，是一种单端孢霉烯族毒素，主要由禾谷镰刀菌和粉红镰刀菌产生，化学名称为脱氧腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)，容易存在于各种谷物类粮食及加工产品中，污染水平一般为mg/kg（ppm）级。
DON具有很强的细胞毒性。
人误食DON含量高的食物后，容易导致急性中毒头昏、腹胀、恶心、呕吐，以及白细胞缺乏症。
目前通常应用酶联免疫吸附测定法（ELISA）对谷物（小米、玉米、大麦等）及其制品（蛋糕、饼干、面包等）中的DON含量进行快速、定量检测。
二、原理本试剂盒是利用间接酶联免疫吸附微孔模式进行检测，灵敏度可达12.5 µg/kg（ppb）。
样品或标准品中游离的呕吐毒素与包被在微孔中的抗原竞争结合游离单克隆抗体上的结合位点，形成抗原抗体结合物，经洗板洗去多余的抗体与呕吐毒素后，加入酶标记的二抗与单克隆抗体结合，经再次洗板后加入显色剂与反应底物，其与酶标物作用而成蓝色，加入反应停止液后颜色由蓝色转变为黄色，黄色越深则表明呕吐毒素越少，用酶标仪在450 nm处测定光吸收值可准确定量检测样品中的呕吐毒素污染水平。
三、试剂盒构成1、反应板支架…………………………………………………………………………1块2、呕吐毒素抗原包被反应板………………………………………………………….36孔3、呕吐毒素标准品溶液（0 ppb，12.5 ppb，25 ppb，50 ppb，100 ppb，200 ppb）…1套4、呕吐毒素单克隆抗体………………………………………………………1瓶5、稀释液……………………………………………………………………1瓶6、酶标二抗溶液………………………………………………………………1瓶7、显色剂溶液………………………………………………………………………1瓶8、反应底物溶液………………………………………………………………1瓶9、终止液………………………………………………………………………………1瓶10、浓缩洗涤液（20 X）………………………………………………………1瓶四、注意事项1、试剂盒请置放于2-8℃条件下保存，使用过程中不要让微孔干燥，使用后立即将试剂放回至2-8℃条件下冷藏。
荧光定量检测试纸检测饲料中呕吐毒素
动物生产荧光定量检测试纸检测饲料中呕吐毒素原小燕1，王 虎2，刘映雪2（1.洛阳莱普生信息科技有限公司，河南 洛阳 471000 ；2.辽宁省农业发展服务中心，辽宁 沈阳 110000）摘要：本研究建立了饲料中呕吐毒素荧光定量检测方法。
饲料样品经70%甲醇溶液提取，过滤后，用0.01M p H7.4P B S复溶,结果表明，呕吐毒素在0.5～8毫克/公斤浓度范围内线性关系良好，r2=0.999。
以配合饲料、浓缩饲料、预混料为添加基质，其回收率在80%～120%，检出限为500p p b。
结论显示,本方法灵敏度高，操作简单，结果准确，可满足饲料中呕吐毒素的分析检测。
关键词：呕吐毒素；饲料；荧光定量检测试纸1 材料与方法1.1 仪器与试剂荧光免疫分析仪(苏州和迈精密仪器有限公司)，XH-C涡旋混合器（新宝仪器有限公司），称量天平（DIGITAL SCALE）。
呕吐毒素单克隆抗体和呕吐毒素半抗原—牛血清白蛋白偶联物，购自武汉优博生物技术有限公司；M E S，购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；E D C，购自国药集团；试剂牛血清白蛋白，购自上海生工生物工程有限公司；时间分辨荧光微球，购自上海辉质生物科技有限公司；呕吐毒素及其他真菌毒素的标准品，购自S i g m a公司；硝酸纤维素膜，购自MDI。
1.2 试验方法1.2.1 样本处理方法 称取2.0±0.05克研碎的样本至50毫升离心管中，加入10毫升样本提取液，用振荡器充分振荡5分钟，将振荡后的样本用定量分析滤纸过滤，用样本稀释液将滤液按1∶79比例稀释（例，10微升滤液+790微升样本稀释液），取稀释后液体进行检测(稀释系数400)。
1.2.2 操作步骤 打开荧光免疫分析仪，同时撕开检测试纸铝箔袋，取出检测试纸，放于平整、洁净的台面上。
用配套吸管吸取待检样本，垂直而缓慢的滴加2～3滴（约60微升）到加样孔内。
静置10分钟，上机检测，超过20分钟的结果无效。
临床免疫学检验题库(3)
临床免疫学检验题库（3）一、单选题1、直接化学发光免疫分析中，最常使用的标记物为（D）。
A、三联吡啶钌B、三丙胺C、鲁米诺类D、吖啶酯类2、在通常情况下，支持浆细胞增殖分化的关键因子是（A）。
A、IL-6B、IL-7C、IL-8D、IL-93、生物素亲合素系统（BAS）放大作用的机制主要是（C）。
A、二者之间极高的亲合力B、生物素、亲合素可分别与酶、放射性核素等结合形成标记物C、亲合素的四个生物素部位可同时结合多价性的生物素化衍生物D、经化学修饰后，生物素成为活化生物素4、不能反映中性粒细胞免疫功能的检测项目是（D）。
A、趋化功能检测B、黏附功能检测C、吞噬与杀菌功能检测D、TBNK百分率检测5、下面哪项是所有T细胞的特有标志（A）。
A、CD3B、CD4C、CD8D、CD166、在已有HBV感染的基础上再感染什么的患者被称为重叠感染（C）。
A、HAVB、HCVC、HDVD、HEV7、时间分辨荧光免疫测定常用标记物是（B）。
A、三联吡啶钌B、镧系元素化合物C、碱性磷酸酶D、吖啶酯类化合物8、“TORCH”中“O”是指什么（D）。
A、弓形虫B、巨细胞病毒C、风疹病毒D、其他相关病毒9、腮腺炎病毒有几个血清型（A）。
A、1B、2C、3D、410、胶乳凝集法只能检测哪种类风湿因子抗体（D）。
A、IgAB、IgDC、IgGD、IgM11、自身免疫性甲状腺疾病优选检测项目是（B）。
A、FT3B、TPO-AbC、TSHD、抗Sm12、抗GBM抗体的最主要靶抗原是（D）。
A、蛋白聚糖B、板层素C、层粘蛋白D、Ⅳ型胶原13、竞争法检测抗原时，使用酶标记的是（A）。
A、酶标抗原B、酶标抗体C、酶标抗抗体D、酶标抗原+抗体14、检测IgM抗体最常用的酶联免疫吸附试验类型是（B）。
A、间接法B、捕获法C、竞争法D、双抗原夹心法15、属于迟发性超敏反应的试验是（D）。
A、皮肤发疱试验B、抗毒素血清皮试C、普鲁卡因皮试D、OT试验16、单向扩散试验平板法，Fahey曲线适用于（A）。
粮食中呕吐毒素含量的免疫亲和柱净化超高效液相色谱法快速测定
粮食中呕吐毒素含量的免疫亲和柱净化超高效液相色谱法快速测定谢刚;王松雪;张艳【摘要】建立了免疫亲和柱净化/超高效液相色谱法快速测定粮食中呕吐毒素(DON)的检测方法.样品经纯水提取后,用免疫亲和柱净化、浓缩,Waters Acquity UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7 μm)色谱柱分离,以甲醇-水(10:90)为流动相,流速为0.1 mL/min,进样量1μL,用Acquity紫外检测器在220 nm处进行检测,保留体积不足0.5 mL,整个分析过程用时不足45 min.呕吐毒素在0.5～ 10.0 mg/L 范围内线性关系良好,相关系数(r2)为0.999 96;检出限(S/N=3)为0.15 ng,定量下限(S/N=10)为0.5 ng,加标回收率为84％～ 98％,相对标准偏差为2.9％～5.9％.该方法简便快速、灵敏度高、重现性好、溶剂用量少且环保,适用于原粮中呕吐毒素的快速测定.%A rapid and environmental-friendly analytic method was established for the determination of deoxynivalenol( DON) in grain samples. The samples were extracted with water, cleaned up with immunoaffinity column ( IAC ) . The separation of targeted compound was performed on a Waters Ac-quity UPLC BEH C18(2. 1 mm x50 mm, 1. 7 pun) using methanol - water( 10 : 90) as mobile phase with a flow rate of 0. 1 mL/min at 25 ℃. The injection volume was 1 μL for UV detection at 220 nm and the retention volume was less than 0. 5 mL. The whole process from sample pretreatment to analysis took less than 45 min. The linear range of deoxynivalenol was in the range of 0. 5 - 10. 0 mg/L with a correlation coefficient of 0. 999 96. The limit of detection (LOD) was 0. 15 ng and the limit of quantitation(LOQ) was 0. 5 ng. The average recoveries werebetween 84% and 98% with RSDs of 2. 9% - 5. 9% . The method was suitable for the determination of DON in the raw grain, with advantages of simplicity, rapidness, sensitivity, good reproducibility and environment friendly.【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2011(030)012【总页数】5页(P1362-1366)【关键词】粮食;呕吐毒素;超高效液相色谱;免疫亲和柱【作者】谢刚;王松雪;张艳【作者单位】国家粮食局科学研究院粮油安全室,北京100037;国家粮食局科学研究院粮油安全室,北京100037;国家粮食局科学研究院粮油安全室,北京100037【正文语种】中文【中图分类】O657.72脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)，又名呕吐毒素，是镰刀菌属(Fusarium)的禾谷镰刀菌、黄色镰刀菌、头孢菌属、漆班菌属、木霉属等菌株的代谢产物，主要污染小麦、玉米、大麦等，具有很强的毒性［1］。
直接竞争化学发光酶免疫法检测呋喃妥因代谢物
直接竞争化学发光酶免疫法检测呋喃妥因代谢物李亚楠;王瑞;李涛;王云贵;黄登宇【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2016(037)008【摘要】建立检测动物组织中呋喃妥因代谢物的直接竞争化学发光酶免疫法.采用棋盘法确定抗体和酶标抗原的最佳稀释度,通过单因素试验优化包被条件、封闭液种类和竞争反应时间,建立直接竞争抑制曲线,并对方法的灵敏度、特异性、准确度和精密度进行方法学评价.结果表明,经优化,最佳反应条件为抗体稀释度1:4 000,酶标抗原稀释度1∶80,包被条件为37℃2h后4℃过夜,封闭液为1％牛血清白蛋白,竞争反应1h.该方法的线性检测范围为0.030～10.595 ng/mL,IC50为0.559ng/mL;加标回收率为84.9％～103.4％,批内变异系数为3.4％～7.8％,批间变异系数为4.7％～11.8％;除与呋喃妥因原药交叉反应率为36.2％,与其他结构类似物及衍生化试剂交叉反应率均小于0.1％.该方法灵敏、准确,可用于动物组织中呋喃妥因代谢物的快速筛查.【总页数】5页(P231-235)【作者】李亚楠;王瑞;李涛;王云贵;黄登宇【作者单位】山西大学生命科学学院,食品药品快速检测中心,山西太原 030006;山西大学生命科学学院,食品药品快速检测中心,山西太原 030006;山西先锋科技开发有限公司,山西太原 030006;深圳易瑞生物技术有限公司,广东深圳 518101;山西大学生命科学学院,食品药品快速检测中心,山西太原 030006【正文语种】中文【中图分类】TS207.3【相关文献】1.直接竞争化学发光酶免疫法检测谷物中的伏马菌素B1 [J], 何庆华;许杨;刘师文2.直接竞争化学发光酶免疫法检测猪肉中磺胺嘧啶 [J], 楚金申;许杨;何庆华;王刘花;卢江3.呋喃妥因代谢物化学发光酶联免疫检测方法的研究 [J], 王瑞;吕月霞;黄登宇;王云贵;李涛4.呋喃唑酮代谢物直接竞争化学发光检测方法的建立 [J], 安静;古丽斯坦;宋斌;姜娜;富昕纯;周晓龙5.直接竞争化学发光酶免疫法检测氟喹诺酮类药物方法的建立 [J], 曹敬政;安静;蒋蔚;辛思培;宋斌;李思;王权;孙卫东因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
呕吐毒素化学发光酶联免疫分析方法的建立及应用
呕吐毒素化学发光酶联免疫分析方法的建立及应用陈永忠;何磊良;王纳纳;吴拥军;屈凌波【摘要】建立增强化学发光酶联免疫分析定量检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的方法,并对实际样品进行检测.采用鲁米诺-双氧水-辣根过氧化物酶-对羟基联苯体系,在优化的条件下,用间接竞争法对DON进行测定,并与ELISA法、HPLC法(GB/T 23503-2009)进行比较.该方法在0.01～1 000 μg/mL范围内,所得DON线性回归方程为:y=-1 059.1X+40 892,相关系数为0.994 2,检测限为0.19 ng/mL,板内RSD为1.8％～4.5％(n=3),批内RSD为2.4％～7.4％(n=3),批间RSD为7.8％～11.0％(n=3);在小麦样品高、中、低3个浓度的回收率范围在90.0％～126.8％,在玉米样品高、中、低3个浓度的回收率范围在97.7％～ 110.0％.用此方法测定同属镰刀菌毒素的玉米赤霉烯酮交叉反应率小于10％,测定其他类菌种的真菌毒素几乎无交叉反应.所建立的增强化学发光酶联免疫分析法操作简单、灵敏度高、特异性强,可以用于实际样品中DON的快速测定.【期刊名称】《河南工业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2018(039)004【总页数】6页(P79-84)【关键词】增强化学发光酶联免疫分析;脱氧雪腐镰刀菌烯醇;分析【作者】陈永忠;何磊良;王纳纳;吴拥军;屈凌波【作者单位】豫章师范学院继续教育中心,江西南昌330103;郑州大学公共卫生学院,河南郑州450001;郑州大学公共卫生学院,河南郑州450001;郑州大学公共卫生学院,河南郑州450001;郑州大学化学与分子工程学院,河南郑州450001【正文语种】中文【中图分类】TS207.30 引言呕吐毒素又名脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON），是霉菌禾谷镰刀菌产生的一种有害代谢产物，由于它能够引起动物产生呕吐症状[1-2]，因此称其为呕吐毒素。
2024年检验类之临床医学检验技术(师)通关试题库(有答案)
2024年检验类之临床医学检验技术（师）通关试题库(有答案)单选题（共45题）1、关于蝰蛇毒，下列哪项是正确的A.是一种强烈的因子Ⅻ激活剂B.是一种强烈的因子Ⅴ激活剂C.与CaD.是一种强烈的因子X激活剂E.是一种强烈的因子Ⅶ激活剂【答案】 D2、AML-M6细胞化学染色可见A.AS-DAE染色呈阳性，且被NaF抑制B.PAS染色幼红细胞呈强阳性反应C.AS-DCE染色呈阳性D.ACP染色呈阳性，且不被L酒石酸抑制E.POX多呈阴性反应，PAS反应产物为红色粗颗粒状或块状，底色不红【答案】 B3、严重联合免疫缺陷病是指A.固有性免疫缺陷和适应性免疫缺陷B.体液免疫缺陷和补体系统缺陷C.细胞免疫缺陷和吞噬细胞功能缺陷D.T细胞缺陷和B细胞缺陷E.细胞免疫缺陷和补体系统缺陷【答案】 D4、疯牛病能够通过下列哪一途径传染给人（）A.粪-口B.气溶胶C.食物链D.动物分泌物E.动物血液【答案】 C5、直径8～15μm，胞核偏位，核染色质常排列成车轮状，胞浆丰富、染蓝色或红蓝相混的蓝紫色、有泡沫感A.早幼粒细胞B.原始粒细胞C.浆细胞D.原始红细胞E.原始淋巴细胞【答案】 C6、作为荧光抗体标记的荧光素必须具备的条件中，哪项与提高观察效果有关A.必须具有化学上的活性基团能与蛋白稳定结合B.性质稳定不会影响抗体活性C.荧光效率高，荧光与背景组织色泽对比鲜明D.与蛋白质结合的方法简便迅速E.与蛋白质的结合物稳定【答案】 C7、甲醛常作为尿液的防腐剂，一般每升尿中加入A.10％甲醛溶液5～10mlB.20％甲醛溶液10～15mlC.30％甲醛溶液5～10mlD.40％甲醛溶液5～10mlE.50％甲醛溶液5～10ml【答案】 D8、过碘酸-雪夫反应染色时，幼红细胞为阴性反应，有时仅个别幼红细胞呈阳性反应的疾病是A.红血病B.红白血病C.骨髓增生异常综合征D.巨幼细胞性贫血E.缺铁性贫血【答案】 D9、血管内溶血可发生于A.PNHB.红细胞G6PD缺乏症C.红细胞PK缺乏症D.HbE.HbH【答案】 A10、作为血清诊断酶描述错误的是A.组织中和血清中酶活性差异大B.组织损伤后，酶能较陕地释放到血液中C.生物半寿期较长D.生物半寿期较短E.酶组织分布特异性强【答案】 D11、慢性粒细胞白血病急性变和急性粒细胞白血病的主要区别是A.嗜碱性粒细胞增高B.NAP染色积分减低C.骨髓原始细胞>20%D.外周血原始细胞>20%E.白血病裂孔现象【答案】 A12、关于白细胞形态描述正确的是A.中性分叶核粒细胞胞浆颗粒粗大，橘红色颗粒充满胞浆B.淋巴细胞胞核椭圆形，核染色质排列紧密，胞质较多，内充满大小不等的嗜天青颗粒C.单核细胞胞核为圆形，核染色质较细致，核仁隐匿，胞质较多染灰蓝色D.嗜酸性分叶核粒细胞胞核多分两叶，胞质充满着粗大呈橘红色嗜酸性颗粒E.嗜碱性分叶核粒细胞胞核常融合呈堆集状，胞质紫蓝色嗜碱性颗粒大小均一，分布均一，常掩盖在核上【答案】 D13、性病淋巴肉芽肿的病原体是A.沙眼衣原体沙眼生物型B.沙眼衣原体LGV生物型C.鼠亚种衣原体D.肺炎衣原体E.鹦鹉热衣原体【答案】 B14、变形杆菌XA.PB.XC.都是D.都不是E.P的部分成分【答案】 B15、为了鉴别巨幼细胞贫血与红白血病，最好的染色方法是A.ACP染色B.PAS染色C.α-NAE染色D.NAP染色E.POX染色【答案】 B16、受精蛔虫卵的特点是A.表面凹凸不平B.呈红色C.含多个卵细胞D.呈橄榄形E.卵壳较薄【答案】 A17、下列说法正确的是（）A.百日咳由病毒引起B.百日咳由细菌引起C.百日咳由真菌引起D.百日咳由支原体引起E.百日咳由衣原体引起【答案】 B18、内生肌酐清除率下降多少时，血浆尿素和肌酐才开始升高A.10%B.20%C.30%D.50%E.70%【答案】 D19、MicroScan Walk/Away微生物自动鉴定及药敏分析系统是A.采用光电比色法，测定微生物分解底物导致pH值改变而产生的不同颜色，来判断反应的结果B.采用传统呈色反应法，同时采用敏感度极高的快速荧光测定技术来检测细菌胞外酶C.采用荧光增强技术与传统酶、底物生化呈色反应相结合D.底物中加入酶基质，不同的细菌作用于不同的底物，激发出不同强度的荧光E.利用微生物对不同碳源代谢率的差异【答案】 B20、能形成沉淀反应的抗原不包括A.溶血性链球菌B.细菌培养液C.细胞裂解液D.血清蛋白E.组织液【答案】 A21、不需要进行血药浓度监测的是A.苯妥英钠B.地高辛C.奎尼丁D.胰岛素E.环孢素A【答案】 D22、精子计数采用ler窥盘B.血细胞计数板C.尿沉渣计数板D.载玻片E.血细胞分析仪【答案】 B23、副溶血性弧菌定群根据A.O抗原和H抗原B.K抗原C.H抗原D.O抗原E.O抗原和K抗原副溶血性弧菌是一种嗜盐性弧菌，根据抗原分型以及致病因子回答以下问题【答案】 D24、女，23岁。
呕吐毒素时间分辨荧光免疫层析法的建立与评价
呕吐毒素时间分辨荧光免疫层析法的建立与评价张东升;严艺琳;熊晓辉;董曼佳;游京晶;张一平【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2018(039)020【摘要】构建并评价了呕吐毒素(Deoxynivalenol,DON)时间分辨荧光免疫层析法(TRFIA).以Eu3+螯合物的纳米微球为荧光探针标记抗DON单抗,采用竞争抑制建立免疫层析定量方法,优化了微球与抗体标记量,检测的环境温度、反应时间、加样体积及缓冲体系;研究了方法的灵敏度、精密度及准确度.结果表明,每100 μL荧光微球结合纯单抗50μg,最佳划膜浓度为1.0 mg/mL,最佳测定条件为室温(25±2)℃,10 min,加样体积100 μL,PBS (0.01 mol/L,pH7.2)的缓冲体系,方法的灵敏度为0.25 ng/mL,线性范围为0.5～25.0 ng/mL,玉米、小麦阴性样本(加标浓度200、500、1000、2000 μg/kg)平均加标回收率为91.4％～109.3％,6种典型样本经TRFIA与免疫亲和净化-高效液相色谱法(IAC-HPLC)同时测定DON含量,相关系数r达0.9754.TRFIA具有灵敏度高、速度快、定量准等技术特点,适用于谷物及制品中DON的快速定量.【总页数】7页(P233-239)【作者】张东升;严艺琳;熊晓辉;董曼佳;游京晶;张一平【作者单位】江苏省苏微微生物研究有限公司,江苏无锡214063;江苏省苏微微生物研究有限公司,江苏无锡214063;南京工业大学食品与轻工学院,江苏南京211800;江苏省苏微微生物研究有限公司,江苏无锡214063;南京工业大学食品与轻工学院,江苏南京211800;江苏省苏微微生物研究有限公司,江苏无锡214063【正文语种】中文【中图分类】TS210.7【相关文献】1.时间分辨荧光免疫层析法检测小麦中呕吐毒素的研究 [J], 谢婷婷2.时间分辨荧光免疫层析法定量检测谷物中黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮残留[J], 王序;卢迪莎;曾道平;黄建欣;吴颖;许小炫;谭庶;杨金易3.时间分辨荧光免疫层析法定量检测稻谷中的镉 [J], 张海涛;祁苏娴;董曼佳;陆廷瑾;杨婷婷4.呕吐毒素/玉米赤霉烯酮一体式时间分辨荧光免疫层析定量卡的制备及应用 [J], 张海涛;张居清;祁苏娴;朱亚俊;于婷;杨婷婷5.胶体金免疫层析法快速定量检测饲料中呕吐毒素 [J], 王雄;程宗佳;王彦斐;王丽;王江因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
免疫亲和柱-高效液相法测定牛奶中呕吐毒素
免疫亲和柱-高效液相法测定牛奶中呕吐毒素
邵珍美
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2016(037)019
【摘要】建立一种快速、高效测定牛奶中的呕吐毒素的免疫亲和柱-高效液相方法。
样品前处理采用乙腈溶剂沉淀蛋白，用PBS缓冲液淋洗，乙腈洗脱后，洗脱液在40℃下氮吹干后，流动相复溶后检测。
采用Waters RP C18色谱柱（4.6
mm×250 mm，5μm）分离，以乙腈-水（90∶10）作为流动相，用二极管阵列
检测器检测，外标法峰面积定量。
结果表明，呕吐毒素在0.2μg/mL~2.0μg/mL
浓度范围内线性良好，相关系数r2为0.9998，检出限为0.12 mg/kg，定量限为0.40 mg/kg，加标回收率达到82.2%~98.5%。
【总页数】4页(P172-175)
【作者】邵珍美
【作者单位】山东商务职业学院，山东烟台264670
【正文语种】中文
【相关文献】
1.免疫亲和柱-高效液相色谱法测定牛奶中氯霉素和玉米赤霉醇及其类似物 [J], 姚佳;王昕;张建新;李贤良;郗存显;王国民;王雄;里南;果旗
2.免疫亲和柱-高效液相色谱法测定生霉玉米中的呕吐毒素 [J], 邱庆丰;张桂艳;张博;李建平
3.霉菌发酵食品中桔霉素的免疫亲和柱结合高效液相荧光法检测 [J], 李楠;陈俊霖;
顾双;王向阳;练志峰;付蕾;程周周
4.免疫亲和柱分离技术-高效液相色谱法测定牛奶、猪肉及猪肝中的盐酸克伦特罗[J], 李媛;邓安平
5.免疫亲和柱分离技术-高效液相色谱法测定牛奶、猪肉及猪肝中的盐酸克伦特罗[J], 李媛;邓安平
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910343144.X
(22)申请日 2019.04.26
(71)申请人 烟台大学
地址 264005 山东省烟台市莱山区清泉路
30号
(72)发明人 李彦伸 袁智鹏 毛馨 尤艳莉
(51)Int.Cl.
G01N 33/58(2006.01)
G01N 33/535(2006.01)
G01N 21/76(2006.01)
(54)发明名称一种呕吐毒素DON直接竞争化学发光定性定量免疫分析方法(57)摘要本发明涉及一种直接竞争化学发光免疫定性定量检测谷物中呕吐毒素DON的方法。
本发明的检测方法包括制备酶标呕吐毒素DON抗体、直接竞争化学发光免疫检测、建立工作曲线方程和待测谷物样品的呕吐毒素DON定量检测。
本发明中改良的高碘酸钠法采用饱和NaBH 4甲醇溶液进行还原反应，克服了NaBH 4水溶液极易被氧化、不能长期保存的缺点，从而避免了该溶液现用现配的限制；直接竞争化学发光免疫检测技术提高了检测效率和检测的灵敏度；采用高灵敏的鲁米诺化学发光底物替代传统的TMB底物，极大程度的提高了反应的灵敏度；通过建立工作曲线可以快速、准确的得到样品中呕吐毒素DON的浓度，降低了检测和计算的复杂程度，适用于广泛的基层检
测工作的应用。
权利要求书1页 说明书8页 附图1页CN 110031627 A 2019.07.19
C N 110031627
A
权 利 要 求 书1/1页CN 110031627 A
1.一种直接竞争化学发光免疫检测呕吐毒素DON的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)制备抗体标记物
辣根过氧化物酶HRP经高碘酸钠活化与呕吐毒素DON抗体进行偶联反应进一步加入NaBH4饱和甲醇溶液，充分进行还原反应后得到辣根过氧化物酶-呕吐毒素DON抗体标记物。
(2)直接竞争化学发光免疫检测
将预处理后的样品放置于呕吐毒素DON包被完成的酶标板各孔中，加入步骤(1)制备的抗体标记物，进行直接竞争反应；洗板后各孔加入化学发光底物，测定发光强度。
2.根据权利要求1所述的检测呕吐毒素DON的方法，其特征在于，步骤(1)使用高碘酸钠NaIO4对辣根过氧化物酶HRP进行活化。
3.根据权利要求1所述的检测呕吐毒素DON的方法，其特征在于，步骤(1)活化后的辣根过氧化物酶HRP与呕吐毒素DON抗体IgG进行偶联。
4.根据权利要求1所述的检测呕吐毒素DON的方法，其特征在于，步骤(1)使用NaBH4饱和甲醇溶液对偶联后的酶标呕吐毒素DON抗体进行还原反应。
5.根据权利要求1所述的检测呕吐毒素DON的方法，其特征在于，步骤(2)加样前预处理包括包被、洗涤、密封等步骤；加样后处理包括洗涤步骤，无需间接竞争反应步骤，即可进行发光强度测定。
6.根据权利要求1所述的检测呕吐毒素DON的方法，其特征在于，步骤(2)所述化学发光底物为高灵敏鲁米诺化学发光底物。
7.一种基于权利要求1所述的呕吐毒素DON定量分析方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：
a、建立工作曲线方程
对无污染的空白样品进行处理，制备空白基质溶液，以此对标准品进行稀释，得到系列梯度浓度呕吐毒素DON溶液，处理后得到供试溶液；依照权利要求1步骤(2)的方法，测定加标样品的发光强度值。
用所获得的每个浓度的标准品溶液的发光强度平均值(B)除以稀释溶液(0标准)的发光强度值(B0)再乘以100％，即百分发光值。
百分发光值(％)＝(B/B0)×100％
以标准品溶液的浓度(ng/mL)的半对数值为X轴，百分发光值为Y轴，绘制标准曲线图；
b、待测样品的呕吐毒素DON定量检测
称取若干份待测样品，经处理后得到待测溶液，采用权利要求1步骤(2)的方法测定发光强度值，将数值代入步骤a建立的工作曲线方程计算出待测样品中呕吐毒素DON的含量。
8.一种基于权利要求1所述方法的呕吐毒素DON定量分析方法，其特征在于所述方法包括以下样品前处理步骤：
然后准确称取2.0g谷物样品，分别置于50mL聚四氟乙烯管中。
然后将向每份样品中加入10mL PBS溶液，震荡、涡旋提取10min，4℃、9000g离心5min，取上清溶液过0.45μm水相滤膜，得到待测溶液。
2。