植物组织培养实验报告

植物组织培养实验报告

学院：生命科学技术学院

班级：11生物技术(制品)

学号： 2011192017

姓名：李鹏

植物组织培养实验报告

实验一植物组织培养母液的配制

一、实验目的

1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。

2.学习掌握植物组织培养MS培养基的配制方法。

二、实验原理

培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物（碳源、维生素、肌醇、氨基酸等）、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。

无机盐类由大量元素和微量元素组成。大量元素中，氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在，但在培养基中多用硝酸类，也可以将硝酸类和铵类混合使用；磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供；钾是培养基中主要的阳离子；钙、钠、镁的需要量较少。微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。培养基中的铁离子，大多数以螯合物的形式存在，即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。

有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱，因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。一般包括VB1、B6、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、VC。肌醇在糖类的

相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。

常用的植物生长调节物质包括以下三类：①生长素类：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、二氯苯氧乙酸（2,4-D）②细胞分裂素：玉米素（ZT）6-苄基嘌呤（6-BA）和激动素（KT）。③赤霉素：组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（GA3）。

培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。其中最为常见的为酵母提取物。琼脂作为培养基的支持物，也是最常用的邮寄附加物，他可以是培养基呈固体状态，以利于组织和细胞的培养。

植物组织培养是否成功，在很大的程度上取决于培养基的选择之上。目前普遍使用的是MS培养基。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，或用于胚胎、茎段、茎尖及花药的培养等。MS培养基的硝酸盐、钾和铵的含量略高于其他的培养基，也是它被普遍使用的原因之一。

三、实验材料、试剂、配方和仪器设备

1．试剂

NH4NO3,KNO3,KH2PO4,CaCl2·2H2O ,MgSO4·7H2O,FeSO4·7H2O Na2-EDTA,MnSO4·4H2O,ZnSO4·7H2O,H3BO3,KI,Na2MoO4·2H2O

CuSO4·5H2O,CoCl2·6H2O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水。

2.仪器设备

电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药匙，称量纸等。

3、培养基配方

各种母液的吸取量

MS培养基大量元素母液配制

化合物名称培养基浓度(mg/L) 称取质量(g) NH4NO31650 41.25

KNO31900 47.50

KH2PO4170 4.25

MS培养基微量元素母液配制

化合物名称培养基浓度(mg/L) 称取质量(g) MnSO4·4H2O 22.3 55.7

ZnSO4·7H2O 8.6 21.5

H3BO3 6.2 11.5

KI 0.83 20.75

Na2MoO4·2H2O 0.25 6.25

CuSO4·5H2O 0.0025 0.625

CoCl2·6H2O 0.0025 0.625

MS培养基铁盐母液配制

化合物名称培养基浓度(mg/L) 称取质量(g) FeSO4·7H2O 27.8 6.95

Na2-EDTA 37.3 9.32

MS培养基有机物质母液的配制

化合物名称培养基浓度(mg/L)称取质量(g)肌醇100 2

甘氨酸 2 0.2

烟酸硫胺素0.4 8

盐酸吡哆醇0.5 10

烟酸0.5 10

MS培养基钙盐和镁盐母液的配制

四、实验步骤

1 、计算：计算各化学成分所需要的量。大量、微量和盐类按扩大50倍，定容500ml的配制计算。有机和肌醇按扩大100倍，定容200ml的配制计算。计算后制成配方表。

2、制定标签：裁取适当大小的牛皮纸，用铅笔写上MS，种类，并标明此类母液所含物质，质量，定容体积，扩大倍数吸取量，制备人，制备日期以大量为例如图：

3、大量元素母液的配制：先用量筒量取300ml蒸馏水放入 500ml 烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取： NH4NO3 ,KNO3, KH2PO4, 待第一种化合物完全溶解后再加入第二种化合物，溶解过程用玻璃棒搅拌，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至 500ml 容量瓶中，并用蒸馏水将烧杯和玻璃棒洗涤3次，每次约50ml，而后用蒸馏水定容至 500ml，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，并置于冰箱中低温保存备用。

4、微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平依次称取 MnSO4·4H2O, ZnSO4·7H2O， H3BO3, KI, Na2MoO4·2H2O。CuSO4·5H2O和 CoCl2·6H2O先稀释后用移液管吸取,按制备母液 I 的方法逐个溶解，转移至容量瓶中，洗涤烧杯，然后

定容至 500ml，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。

5、铁盐母液的制备把FeSO4·7H2O 和 Na2-EDTA 分别置于适量蒸馏水中，加热搅拌使之完全溶解，保持加热，把 FeSO4 倒入 Na2-EDTA 溶液中并搅拌，接近沸腾时停止加热，冷却后调 PH 到 5.5，将溶液转移至 500ml 容量瓶中，洗涤后用蒸馏水定容至 500ml，转入细口试剂瓶中，用力振荡 1～2min，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。

6、有机化合物母液的制备按配方表中用量依次称取：盐酸硫胺素,盐酸吡哆醇，烟酸, 甘氨酸，用蒸馏水溶解后，定容200ml转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。

7、植物生长物质母液制备 NAA 母液:准确称取 10mg,用少量 1mol/L NaOH 溶解后加蒸馏水定容至 100ml,即配制成 0.1mg/ml 的 NAA 母液，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。 6–BA 母液配制方法相似，浓度为 2mg/ml

五、试验结果分析及注意事项

1、配制母液时注意药品只能出不能进。

2、制作标签时只能能用铅笔写，防止油性笔字迹在高压灭菌后模糊不清。

实验二、培养基的制备与灭菌

一、实验目的

1、学习母液法配制培养基。

2、学习用牛皮纸包三角瓶口的防污染方法。

3、学习并熟悉自动化灭菌锅的操作和保护。