玉米转基因完整流程

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PCR扩增检测转基因大豆、玉米

【实验步骤】基因组DNA浓度和纯度的鉴定
取5μL样品溶于95μL三重蒸馏水中，用 Biophotometer分析DNA的浓度，通过它对提取大豆DNA测OD值。并记录数据。由OD260nm/OD280nm判定基因组DNA的浓度，其比值在1.7~2.0之间较好，符合PCR检测要求。
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)是一种选择性体外扩增DNA的方法，其基本原理类似于 DNA 的天然复制过程。它包括 : 变性 (Denature) 、退火(Anneal)和延伸(Extension)三个基
外源基因( EPSPS)特异性扩增 12 3 4567M 12
外源终止子(NOS) 特异性扩增
外源启动子(CaMV35S)特异性扩增
1 未加模板对照 2 转基因大豆、玉米 3~7 非转基因大豆、玉米
PCR假阳性结果 1．引物设计不当，应调换引物 2．循环参数不合适，导致非特异性扩增 3．靶序列的交叉污染
大豆凝集素(Lectin)基因、玉米特异性内源基
因IVR为内参？
西医学是最近三四百年来建立在解剖学、生物学及现代科学技术基础上、发展起来的一门以“解剖人、肉体人 ”为概念的、新兴的现代医学科学理论体系。主要采用科学实验方法，从宏观到微观，直至目前的分子基因层次水平，发展极为迅速，超过其它任何一门医学科学，成为世界医学史上的主流。医学、比较医学、后现代医学、行为医学等所谓“ 医学” ，都称不上一门独立的医学科学，关于这一点在灵魂医学有关章节中将有相关点评。
【实验步骤】
大豆、玉米DNA 提取--改良的CTAB法

玉米转基因方法资料

这些方法是采用简单的外力冲击或某些物理学原理，将携带外源DNA片段的质粒载体直接导入植物细胞，然后随机地整
合进受体基因组。例如采用电激法、PEG法等转化玉米的原生
质体，采用超声波材料、脂质体包裹法和花粉管介导法和子房注射法将外源基因导入受体细胞等。但是转化技术大多需要经
过原生质体或组织培养阶段，转化周期长，转化受体受到基因
实现了基因在物种之间的交流，其技术体系朝着整个
生物界共用同一个基因库的方向发展；精确性是指他
直接以目的基因为操作对象，使育种目标同育种素材
精确配对，能有效地打破遗传连锁的累赘，提高育种
效率。
二、玉米转基因育种技术概述
（一）、直接的遗传转化方式
农杆菌介导的遗传转化方法出现较早，并很快成
为双子叶植物遗传转化的常规方法。以后发明了一系列直接的遗传转化方法打开了单子叶植物特别是玉米等作物转基因研究的大门。
型的较大限制，同时也不适于大规模转基因育种的要求。
基因枪轰击法的发明对直接遗传转化方法
做出了杰出贡献，它解决了进行大量遗传转化
的技术难题，目前已成为玉米转基因育种中遗
传转化的主要方法。
基因枪法是指用基因枪击发引发火药爆炸、高
压气体释放或高压发电所产生的推力使携带了外源基
因的金属微弹穿透植物的组织、细胞壁和膜结构，将
转基因送入细胞核，整合进植物基因组中，实现遗传
转化，这也是目前玉米遗传转化的最主要的方法。
基因枪转化方法的受体类型非常广泛，只要是能
被基因枪微弹穿透的组织或细胞都可以作为转化的受
体，目前首选的受体组织一般是玉米的胚性愈伤组织，
外源基因导入后再由愈伤组织分化培养再生出转基因
植株。
基因枪转化方法的建立使玉米遗传转化趋向于系

运用PCR技术鉴定转基因玉米

３张希博．子振动模拟演示器．理教师，０６５分物２０（）
仪器与实验。０６１）２０（０
８韩独石．废耳光灯管制作物理演示仪器两则、中国教师与用
教学，０７３２期）２０（卷
４韩独石．想化多控式单摆的组装方法．物理教学探讨，０７理２０
增成功，即是否转基因植物。
２设计思路（）料和设备保障１材
实验样本ＤＡ的分别提取Ｎ
Ｉ
，
实验样本ＤＡ的ＰＲ扩增ＮＣ
／＼
扩增产物的电泳分析
扩增产物的
导流杂交分析
参考文献
１韩独石．宽现有教学仪器使用范围的探索．教学仪器与实拓
维普资讯
技术鉴定转基因玉米
口陈淑仪
广东省广以玉米为实验材料，其ＤＡ提取后，将Ｎ以特异性引物对常用于控制转基因表达的椰菜花病毒３Ｓ启动子进行５
米）对照组（、非转基因玉米）空白组（）、水。
（）３实验线路
取得更好的教学效果，笔者围绕落实ＰＲ原理和Ｃ技术的学习目标，取转基因技术应用广泛的日选常生活食品—— 玉米作为鉴定材料，插电泳及穿导流杂交分析技术，形成以下综合实验设计。
・

玉米幼芽外植体遗传转化技术-石云鹭

转化过程-8：转化过程：移苗
当幼苗长到约5 当幼苗长到约 cm以上以上并有3条以上较完整的根并有条以上较完整的根系可移栽。系可移栽。移栽到体积约200ml一移栽到体积约一次性纸杯（底部有孔），次性纸杯（底部有孔），水浇透。水浇透。纸怀内填物为草碳土:垤纸怀内填物为草碳土垤石=1:1。。当有一片新叶长出后移到温室陆地。温室陆地。移苗后要保证充足的光照，移苗后要保证充足的光照，最好放在光照条件好的玻璃温室或室外。照条件好的玻璃温室或室外。
希望各位专家能提供解决花期不遇问题的好办法！希望各位专家能提供解决花期不遇问题的好办法！
培养基：培养基：
M1：1/2 MS无机盐：无机盐+20 g/L葡萄糖葡萄糖+100 µm AS，pH=5.2 无机盐葡萄糖， M2：1/2 MS无机盐无机盐+20 g/L葡萄糖葡萄糖+100 µm AS+8 g/L琼脂：无机盐葡萄糖琼脂，pH=5.2 M3：MS+2.4-D 5 mg/L+肌醇肌醇100 mg/L+蔗糖 g/L+8 g/L 蔗糖30 ：肌醇蔗糖琼脂+CEF 250 mg/l+CB 250 mg/l+HYG 50 mg/L，pH=5.8 琼脂， M4：MS+蔗糖 g/L+8 g/L琼脂肌醇蔗糖30 琼脂+肌醇：蔗糖琼脂肌醇100 mg/L+10 mg/L 6-BA+100 mg/L GLY+KT 1mg/L+125 mg/L CB+125 mg/L CEF+HYG 50mg/L，pH=5.8 ， M5 ： MS+0.1 mg/L IBA+Cb 250 mg/L+蔗糖 g/ L +8 蔗糖30 蔗糖 g/L琼脂，pH=5.8 琼脂，琼脂

玉米转化步骤

玉米转化步骤1..转化所需线性DNA制备方法。

（1）PCR扩增法。

设计引物，扩增所需DNA片段，注意设计引物时要包括目的基因片段和确保此基因表达的各种元件（启动子等）还有标记基因。

通过试验，发现用东洋纺(TOYOBO)的KOD-Plus-Neo酶效果最好。

当然用别的酶别的条件能扩增出来也行。

（塔克拉的LA-Taq）。

体系（50μl）KOD-Bufffer 5μl2mM dNTPs 5μl25mM MgSO4 3μl上下游引物（f-r）各1.5μl模板1μl2.25M甜菜碱32μl酶1μl条件：1. 94℃2min2. 98℃10s3. 68℃1~2kb/min4. back to step 2 for 35 cycles5. 68℃7min6. 4℃- -/- -扩增完之后取样进行电泳，如果只有一条目的条带，就可以用PCR产物回收试剂盒（全式金PCR产物回收试剂盒）对所需DNA片段进行回收，如果有杂带，建议从新设计引物。

对回收了的DNA溶液测量浓度。

之后稀释到60ng/μl。

无菌水配制穿膜肽（生工合成的一段短肽）60ng/μl。

在转化之前把DNA溶液和穿膜肽溶液1:1混合。

注意混合的时候要小心，边加边混匀，避免沉淀的出现。

2.转化。

授粉后20小时左右（注意：2416要控制在20个小时之内；郑58要控制在18个小时左右）就可以做转化了。

先用手摸雌穗感觉到穗轴的位置，在穗轴上方2-4厘米处横向剪开穗的包叶，然后把切面的花丝剪出一个窝口，然后把DNA 溶液加到这个小窝口里面就行了。

然后套袋，做标记。

注意事项：剪花丝的时候要小心不要把包叶剪烂，否则溶液会流失。

要确保DNA溶液会停留在所剪的窝口里。

剪花丝的速度和加溶液的速度一定要快，否则花丝切面氧化，降低效率。

玉米转基因检测工作总结

玉米转基因检测工作总结近年来，随着转基因技术的不断发展，转基因作物在农业生产中的应用也越来越广泛。

其中，转基因玉米作为重要的农作物之一，其安全性和品质问题备受关注。

为了确保转基因玉米产品的质量和安全，转基因检测工作显得尤为重要。

转基因玉米检测工作主要包括样品采集、DNA提取、PCR扩增、基因分析和结果判读等环节。

首先，进行样品采集时需要注意采样点的选择和采样方法的规范，以确保样品的代表性和可靠性。

接着，对样品中的DNA进行提取和纯化，以获取高质量的DNA模板。

随后，利用PCR技术对目标基因进行扩增和检测，通过比对转基因和非转基因玉米的特定基因序列，来判断样品中是否存在转基因成分。

最后，根据PCR结果进行基因分析和结果判读，以确定样品中的转基因含量和种类。

在实际工作中，玉米转基因检测工作面临着许多挑战和困难。

首先，样品来源的多样性和复杂性使得样品采集和处理工作较为繁琐和耗时。

其次，PCR扩增和基因分析过程中，需要严格控制实验条件和操作流程，以避免外源污染和假阳性结果的产生。

此外，不同转基因玉米品种的基因序列差异和检测方法的局限性也给检测工作带来了一定的难度。

然而，通过不懈努力和技术创新，玉米转基因检测工作取得了一系列成果和进展。

现在，已经建立了一套完善的转基因玉米检测体系和方法，可以对不同来源和类型的玉米样品进行准确和快速的检测。

同时，一些先进的检测技术和设备的引入，也为玉米转基因检测工作提供了更多的技术支持和保障。

总的来说，玉米转基因检测工作是一项重要且复杂的工作，需要多方合作和共同努力。

随着转基因技术的不断发展和应用，玉米转基因检测工作也将继续深化和完善，为转基因玉米产品的质量和安全保驾护航。

玉米转基因方法(精编课件).ppt

玉米育种学
扬州大学农学院作物遗传育种暨应用生物技术系
邓德祥
精品课件
（一）、分子育种的概念
精品课件
分子育种是指在DNA水平上实施作物改良计划的理论和方法。与以往其它常规育种技术相比，其实质性的进步在于使作物育种真正实现了对基因的操作；其鲜明的特点可以概括为通用性和精确性的完美结合。
精品课件
通用性是指它突破了物种之间生殖隔离的障碍，实现了基因在物种之间的交流，其技术体系朝着整个生物界共用同一个基因库的方向发展；精确性是指他直接以目的基因为操作对象，使育种目标同育种素材精确配对，能有效地打破遗传连锁的累赘，提高育种效率。
精品课件
二、玉米转基因育种技术概述
精品课件
（一）、直接的遗传转化方式
农杆菌介导的遗传转化方法出现较早，并很快成为双子叶植物遗传转化的常规方法。以后发明了一系列直接的遗传转化方法打开了单子叶植物特别是玉米等作物转基因研究的大门。
精品课件
这些方法是采用简单的外力冲击或某些物理学原理，将携带外源DNA片段的质粒载体直接导入植物细胞，然后随机地整合进受体基因组。例如采用电激法、PEG法等转化玉米的原生质体，采用超声波材料、脂质体包裹法和花粉管介导法和子房注射法将外源基因导入受体细胞等。但是转化技术大多需要经过原生质体或组织培养阶段，转化周期长，转化受体受到基因型的较大限制，同时也不适于大规模转基因育种的要求。
精品课件
子房注射法是转基因育种工作中经常使用的方法之一。子房注射法是一种微量注射法，使用一种特制的微量注射器将含有目的基因载体的DNA溶液直接注射入玉米处于减数分裂时期的子房中，以便使外源基因能整合进玉米的基因组。丁群星等（1993）用此法获得了正常的转化体。由射法的最突出优点有两个：一是不需要复杂的仪器设备，操作简便；二是转化受体不受基因型的限制，这对于优良

玉米转基因方法

实现了基因在物种之间的交流，其技术体系朝着整个
生物界共用同一个基因库的方向发展；精确性是指他
直接以目的基因为操作对象，使育种目标同育种素材
精确配对，能有效地打破遗传连锁的累赘，提高育种
效率。
二、玉米转基因育种技术概述
（一）、直接的遗传转化方式
农杆菌介导的遗传转化方法出现较早，并很快成
为双子叶植物遗传转化的常规方法。以后发明了一系列直接的遗传转化方法打开了单子叶植物特别是玉米等作物转基因研究的大门。

这些方法是采用简单的外力冲击或某些物理学原理，将携带外源DNA片段的质粒载体直接导入植物细胞，然后随机地整
合进受体基因组。例如采用电激法、PEG法等转化玉米的原生
质体，采用超声波材料、脂质体包裹法和花粉管介导法和子房注射法将外源基因导入受体细胞等。但是转化技术大多需要经
过原生质体或组织培养阶段，转化周期长，转化受体受到基因
等（1993）用此法获得了正常的转化体。由谢友菊等发明的
玉米微量注射器已获得了国家专利。
子房注射法的最突出优点有两个：
一是不需要复杂的仪器设备，操作简便；
二是转化受体不受基因型的限制，这对于优良
自交系转化和优良转基因杂交种的培育极其有利。
（二）、农杆菌介导的遗传转化方法
农杆菌是一种天然的植物基因转化系统，其含有的Ti或 Ri质粒具有携带外源具有的功能。经过用遗传工程的方法对农杆菌及其质粒加以改造，并装入外源基因，借助农杆菌对植物的侵染将外源基因带入植物细胞内，从而完成转化过程。迄今已发现农杆菌能侵染20多种单子叶植物，对玉米的转化效率相
玉米育种学
扬州大学农学院作物遗传育种暨应用生物技术系
邓德祥
（一）、分子育种的概念

DNA实验设计方案-玉米基因组DNA的提取与转基因成分分析

《生化实验技术》实验设计方案一、实验目的：1、掌握提取植物组织基因组DNA的基本方法。

2、掌握二苯胺法和紫外分光光度法测定DNA含量的原理和方法。

3、学会转基因植物转基因成分的分析4、学习DNA的水平式琼脂糖凝胶电泳并学会操作。

5、掌握高速冷冻离心机、微量移液枪、水平电泳仪等仪器设备的使用。

二、实验原理：核酸是生物有机物体重的重要组成成分，在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起。

核酸分为DNA和RNA两大类，前者主要存在于细胞核内，后者主要存在于细胞质及核仁里。

在制备核酸时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。

苯酚可使蛋白质变性，蛋白质溶于酚相，DNA则溶于上层水相。

将氯仿与苯酚混合使用，可减少酚相中因水的存在而造成DNA的少量溶解。

95%乙醇可使核酸从水相中沉淀出来，用70%的乙醇洗涤可以除一些盐分，经Rnase降解RNA，可得较纯的DNA。

DNA含量与纯度测定，目前常用紫外吸收法，利用核酸在260nm有吸收峰，根据公式[DNA(μg/mL)=A260*50*稀释倍数]可计算出核酸DNA的浓度。

由于蛋白质在280nm有吸收峰，可根据比值判断DNA纯度：A260／A280＜1.8时，表明蛋白质含量偏高；1.8＜A260／A280＜1.9时，表明样品较纯；A260／A280＞2.0时，表明RNA或DNA碎片较多。

二苯胺法定量测定DNA的原理为：在强酸、加热条件下，可以使DNA中的嘌呤碱基与脱氧核糖间的糖苷键断裂，产生嘌呤碱基、脱氧核糖与嘧啶核苷酸。

其中，2’-脱氧核糖在酸性环境中成为w-羟基-r-酮基戊醛，此物与二苯胺反应生成蓝色化合物，在595nm处有最大吸收。

DNA在40-400ug范围内光吸收值与DNA含量成正比。

在转基因技术中，外源基因导入到植物体中时，通常使用花椰菜花叶病毒CaMV35S启动子启动下游编码基因的转录。

在染色体中，一个转录单位由启动子序列，编码序列和终止序列组成，常用终止序列是胭脂碱合酶（NOS）的编码序列的终止序列。

转基因玉米技术流程

转基因玉米技术流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. l hope that after you downloadthem,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified afterdownloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!转基因玉米技术流程：①基因选择与克隆：确定改良玉米所需的外源基因，如抗虫、耐除草剂基因，通过实验室技术克隆这些目标基因。

②载体构建：使用酶和DNA连接酶将目的基因与载体（如质粒）结合，构建重组DNA分子。

载体需具备易于识别和筛选的标记基因。

③转化受体细胞：通过农杆菌介导、基因枪或花粉管通道等方法，将重组DNA分子转入玉米细胞内。

④细胞筛选与培养：将转化后的细胞置于特定培养基上，筛选出成功携带并表达外源基因的细胞，诱导其脱分化形成愈伤组织。

⑤再生植株：愈伤组织进一步分化为胚状体，再发展成完整的转基因玉米试管苗。

⑥鉴定与验证：运用分子生物学技术（如PCR、Southern杂交）验证外源基因是否整合到玉米基因组中，及表达情况。

⑦田间试验：将验证合格的转基因玉米苗移栽至温室或田间，观察其生长表现、环境适应性及目标性状是否稳定遗传。

⑧安全性评估：进行全面的食品安全、环境影响评估，确保转基因玉米的安全性。

⑨商业化审批：通过国家相关部门的安全性审查与批准后，方可进行商业化种植与推广。

2023年国家转基因玉米品种试验实施方案

2023年国家转基因玉米品种试验实施方案一、背景分析在全球快速发展的生物技术领域下，转基因技术被广泛应用于农作物育种中。

转基因作物具有抗病虫害、耐逆性和产量提高等优势，能够为国家粮食安全和农业可持续发展做出重要贡献。

为了充分利用转基因技术在玉米育种中的潜力，制定2023年国家转基因玉米品种试验实施方案至关重要。

二、目标和任务1.目标：通过转基因技术育种，研发适应我国各地气候和土壤条件的高产、抗病虫害的玉米品种，提高农业生产效益。

2.任务：a.选取优质转基因玉米品种的种质资源，包括具有抗病虫害、耐逆性和高产的基因。

b.利用现代生物技术手段，通过基因工程方法引入相关基因，改良已选取的种质资源。

c.对获得的转基因品种进行全面评估和安全性评价，确保转基因玉米的质量和安全。

d.进行试验示范，推广优良的转基因玉米品种，培育种植人员对转基因作物的认识和能力。

e.建立转基因玉米品种试验示范基地，提供资源和技术支持，推动转基因玉米的应用和发展。

三、实施方案1.种质资源选择和筛选a.联合农业科学研究院和相关高校共同筛选不同地区适应性好的玉米种质资源。

b.选择抗病虫害、耐逆性和高产的玉米种质资源作为转基因育种的候选材料。

2.基因工程方法引入a.对选取的种质资源进行DNA序列分析，确定相关基因序列。

b.利用基因编辑技术或基因转导等方法引入相关基因，构建转基因玉米品种。

c.对获得的转基因玉米品种进行鉴定和筛选。

3.安全性评价a.进行转基因玉米品种的全面检测，包括转基因基因的稳定性、遗传背景、活性和表达模式。

b.进行转基因玉米品种的毒理学试验和生态学试验，评估其对人类和环境的影响。

c.每一转基因玉米品种必须通过国家相关部门的安全评价后，方可推广种植。

4.试验示范和推广a.在全国多个地区设立转基因玉米品种试验示范基地，展示不同转基因玉米品种的生长情况和产量表现。

b.开展转基因玉米品种试验示范的技术培训和学术交流活动，提高种植人员对转基因作物的认识和技术水平。

转基因玉米实施方案最新

转基因玉米实施方案最新
随着人口的不断增长和农业生产的现代化，转基因作物在全球范围内得到了广泛的应用和推广。

转基因玉米作为其中的一种，因其高产、耐逆、抗病等优势逐渐成为了农业生产中的重要作物。

为了更好地推动转基因玉米的生产和应用，我们制定了最新的实施方案，以期能够更好地发挥其潜在的生产效益和经济效益。

首先，针对转基因玉米的种植环境和条件，我们将根据当地的土壤、气候和水资源等情况，制定种植技术指导方案。

通过科学合理的种植技术，可以最大限度地发挥转基因玉米的生长潜力，提高产量和质量。

其次，针对转基因玉米的管理和保护，我们将加强对种植过程中的病虫害防治和草害防治工作。

采用生物防治、化学防治等综合措施，保障转基因玉米的生长环境，减少病虫害对作物的危害，确保产量和品质。

另外，对于转基因玉米的收获和加工，我们将制定相应的收获技术和加工工艺，以确保作物的安全、卫生和品质。

同时，我们还将加强对转基因玉米的质量监管和溯源管理，保障产品的质量和安
全。

最后，针对转基因玉米的市场营销和推广，我们将加强对产品的宣传推广工作，拓展销售渠道，提高产品的知名度和美誉度。

同时，我们还将加强对消费者的宣传教育，增强消费者对转基因玉米的认知和接受度。

总的来说，转基因玉米实施方案的制定旨在全面提高转基因玉米的生产效益和经济效益，推动转基因玉米在农业生产中的广泛应用和推广。

通过科学合理的种植技术、严格规范的管理保护、安全卫生的收获加工和有效的市场营销推广，我们相信转基因玉米将会为农业生产和社会经济发展带来更多的利益和贡献。

转基因玉米种植技术

转基因玉米种植技术嘿，咱来唠唠转基因玉米种植技术，这玩意儿听起来挺高科技的，其实也没那么神秘。

我有个亲戚是种玉米的，有一年他弄来了转基因玉米种子，可把他折腾坏了，不过也让我见识到了这其中的门道。

种转基因玉米，第一步得选好种子。

这可不像咱平常选普通玉米种子那么简单。

这些转基因种子都是经过特殊处理的，就像有特殊技能一样。

亲戚拿到种子的时候，那可小心了，就像捧着宝贝。

他跟我说，这种子可贵着呢，而且每颗都有编号，得把它们保管好。

他专门找了个干燥又凉快的地方放种子，就怕种子出啥问题，要是种子坏了，那这一年的收成就没指望了。

选好种子后就是整地啦。

地得整得松松软软的，就像给玉米宝宝准备一张舒服的床。

亲戚开着拖拉机在地里来来回回，把土翻了一遍又一遍。

那土块大的，他就用锄头敲碎，边敲边念叨：“这地得整细点儿，玉米才能长得好。

”他还把地里的杂草和石头都清理得干干净净，那些杂草就像调皮的小坏蛋，会和玉米抢养分，可不能留着。

播种的时候也有讲究。

不能像撒普通种子那样随意，得按照规定的间距和深度来。

亲戚拿着个小铲子，在地上挖一个一个的小坑，然后把转基因玉米种子放进去，每个坑放一颗，再轻轻地盖上土。

他那专注的样子，就像在埋宝藏。

我在旁边帮忙，一开始还弄不好，不是坑挖得太深，就是种子放歪了。

亲戚就笑着说：“你这可不行，种子放不好，它们可不好发芽。

”发芽这一关可重要啦。

转基因玉米种子发芽需要合适的温度和湿度。

亲戚每天都要去地里看看，就像照顾刚出生的孩子一样。

有几天天气有点干，他就着急了，赶紧拉着水管去浇水。

水不能浇太多，也不能太少，多了种子会被泡烂，少了又不够发芽的。

那几天他忙得饭都顾不上吃，就守在地里，盯着那些小土堆，盼着玉米苗能早点冒出来。

等玉米苗长出来了，施肥又是个技术活。

这转基因玉米需要的肥料和普通玉米还不太一样。

亲戚专门买了适合转基因玉米的肥料，那肥料的配方就像个神秘的药方。

他把肥料撒在地里，还得注意不能撒到玉米苗的叶子上，不然会把叶子烧坏。

PCR检测转基因大豆玉米

扩增片段长度
118 bp
基因性质
内源基因
玉米 IVR
226 bp
内源基因
CaMV 35S
195 bp
外源基因
NOS
p7：5’-gaa tcc tgt tgc cgg tct tg-3’ p8：5’-tta tcc tag ttt gcg cgg ta-3’ (54 ℃)
p9：5’-ctt ctg tgc tgt agc cac tga tgc-3’ p10：5’-cca cta tcc ttc gca aga ccc ttc c-3’ (56 ℃)
编辑程序进行扩增
PCR反应包括三个基本步骤变性、退火和延伸。
2. 按下述程序进行PCR扩增:

1） 2） 3） 4） 5） 6） 7）
94℃ 预变性 3 min； 94℃ 变性 1 min； 54℃ ( 或者56℃ )退火 45 sec； 72℃ 延伸 1 min；重复步骤2~4, 29次； 72℃ 延伸 10 min； End.
检测基因
大豆 Lectin
引物序列
p1：5’-gcc ctc tac tcc acc ccc atc c3’ p2：5’-gcc cat ctg caa gcc ttt ttg tg3’(54 ℃) p3：5’-ccgctgtatcacaagggctggtacc3’ p4：5’-ggagcccgtgtagagcatgacgatc3’ (56℃) p5：5’-gat agt ggg att gtg cgt ca-3’ p6：5’-gct cct aca aat gcc atc a-3’ (54 ℃)
180 bp
外源基因
CP4 EPSPS
320 bp

玉米转基因完整流程

农杆菌菌株的培养及感受态细胞的制备挑取根癌农杆菌LBA4404单菌落于3ml的YEB液体培养基（链霉素100mg/ml），28℃振荡培养过夜取过夜培养菌液500μl接种于50mlYEB（链霉素100mg/ml）液体培养基中，28℃振荡培养至OD600为0.5 左右。

5000rpm离心5min，集菌。

加10ml0.15MNaCl悬浮细胞，5000rpm离心5min，加10ml预冷的20mMCaCl2悬浮细胞，冰浴，24小时内使用，或分装成每管200μl，液氮中速冻1min，置于-70℃保存备用。

植物表达载体向农杆菌感受态细胞的转化取200ml 感受态细胞，加入1μg构建好的质粒DNA加入到，混匀后，冰浴30min。

液氮中速冻2-3min，37℃水浴5min，接着冰浴3min。

加入1mlYEB培养基，28摄氏度慢速震荡培养4h。

5000rpm离心5min，弃上清，集菌。

加入0.1mlYEB培养基重新悬浮细胞，涂布于含有100mg/ml Kan和125mg/ml Sm的YEB 平板上，28℃培养阳性克隆的鉴定挑取平板上长出的单菌落，接种于含有100mg/ml Kan和125mg/ml Sm的YEB液体培养基中，28℃振荡培养过夜，小量提取质粒DNA，以质粒DNA为模板进行PCR扩增鉴定。

农杆菌菌液的制备挑取继代2d后的农杆菌单菌落，在加有相应抗生素的液体YEB培养基中，在28℃黑暗条件下震荡培养16-20h（OD600为0.6-0.8）将菌液置于离心管中，18-20℃，5000rpm离心5min收集菌体。

将收集到的菌体用2mlD-inf液体培养基悬浮进行洗涤，以去除残余的YEB培养基18-20℃，5000rpm离心10min收集菌体，将菌体用2mlD-inf液体培养基，加入1‰AS，备用（放1h）农杆菌感染玉米幼胚初生愈伤及共培养将加入到D-inf（含AS）的菌液稀释到OD600为0.3-0.5放置1h以上，将幼胚或愈伤用D-inf（不含AS）洗一次，再浸入菌液中，用手上下颠倒30s，并放置5min，观察幼胚无明显伤口时，取出，用无菌滤纸吸干，放到D-AS固体培养基上，25℃黑暗条件下共培养3d，同时设对照。