[方案]酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理
酚氯仿法提取DNA原理及方法
酚氯仿法提取DNA原理及方法酚氯仿法是一种常用的DNA提取方法，其原理是利用酚氯仿溶液对细胞和细胞碎片进行破碎，然后通过离心分离DNA。
以下是详细的步骤：1.细胞裂解：将待提取DNA的样本（细胞、组织等）加入含有酚氯仿的裂解缓冲液中，将溶液均匀混合。
酚氯仿是一种有机溶剂，能够破坏细胞膜和核膜，使细胞释放出DNA。
2.蛋白质沉淀：加入混合溶液中的蛋白质会和酚氯仿相互分离，形成一个物理屏障。
离心沉淀后，由于DNA密度比蛋白质低，DNA会上浮到上层，而蛋白质则沉淀在下层。
3.DNA沉淀：将上层液体转移到新的离心管中，加入同等体积的冷乙醇或异丙醇，然后轻轻振荡以促使DNA沉淀。
酒精能够与DNA相互作用，使DNA分子变得更加疏水，从而沉淀下来。
4.清洗：离心沉淀后，将上清液倒掉，加入70%乙醇洗涤沉淀。
乙醇通过去除残留的酚氯仿和其他杂质，使沉淀的DNA纯化。
5. 溶解：将洗涤后的DNA沉淀干燥或用适量的缓冲液溶解，最常用的是TE缓冲液（含有10 mM Tris-HCl和1 mM EDTA），以便后续的DNA浓度测定和实验操作。
总结来说，酚氯仿法利用酚氯仿溶液破坏细胞膜和核膜，将DNA从细胞中释放出来。
离心分离蛋白质和DNA，然后通过酒精沉淀和乙醇洗涤纯化提取的DNA。
这种方法简单快速，并且能够获得较纯的DNA样品。
不过，酚氯仿法在提取DNA时会同时提取到RNA和蛋白质，因此在一些需要高纯度DNA的实验中可能不适用。
在使用酚氯仿法提取DNA时，还需要注意避免DNA的降解，避免污染和交叉污染，以及正确保存提取的DNA样品。
酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿（Phenol-Chloroform）抽提DNA是一种常用的DNA 提取方法。
其原理是基于酚在酸性条件下具有与DNA高度亲和性的特点，可以将DNA从细胞溶液中抽提出来。
具体的步骤如下：
1. 细胞溶解：首先将待提取DNA的细胞样品加入适量的细胞裂解缓冲液中，通过机械或化学方法使细胞壁破裂，释放出细胞内的DNA。
2. 酚抽提：加入相同体积的酚溶液，并进行充分混合。
酚能与DNA形成复合物，并与其他细胞组分（如蛋白质和脂质）发生分层，形成一个DNA上层和一个下层。
3. 脱水：将抽提产物转移至新管中，加入酒精或异丙醇，通过离心将DNA沉淀下来。
脱水过程可以去除溶液中的多余酚，提高DNA沉淀的纯度。
4. 酯化：将DNA沉淀物溶解在适量的TE缓冲液（含有EDTA和Tris）中，经过一定的时间酯化，使DNA变得更为稳定。
5. 沉淀：通过低温离心将DNA沉淀下来，去除上清液。
6. 洗涤：用70%的乙醇洗涤并去除残余的盐、酚和脏物质。
洗涤过程中，可以多次进行离心和上清液倒掉操作。
7. 干燥：最后，将DNA输送液置于干燥器中或者自然风干，以去除溶剂中的残留物质，得到纯度较高的DNA。
通过酚氯仿抽提DNA的方法，可以从复杂的细胞中提取出高质量、高纯度的DNA，以供后续分子生物学研究使用。
自己整理外周血DNA 提取-酚氯仿法
DNA 提取实验目的：外周血DNA提取实验试剂：1×RBC裂解液、1×细胞核裂解液、20%SDS、蛋白酶K、Tris饱和酚、氯仿、无水乙醇、70%酒精、TE缓冲液实验耗材：15ml、1.5ml离心管、枪头实验流程：1.将EDTA抗凝贮冻血液于室温解冻后移入15ml离心管中，加满1×RBC裂解液，充分混匀（上下颠倒100次），冰上静置30min，直至溶液变透明，离心机4℃3000rp离心12min，去上清液，留白色沉淀（约3-4ml），再次重复上述步骤。
2.在沉淀（2-3ml）中加入1×细胞核裂解液3ml，20%SDS 150-200μL，混匀至粘稠透明状，再加入20mg/ml的蛋白酶K 25-35μL，充分混匀后，37℃50rpm的恒温摇床过夜。
3.加入等体积的Tris饱和酚（约6ml）反复充分摇匀后，置离心机4℃3000rp离心10min4.将上清移至另一离心管中，加入等体积的酚/氯仿（各3ml左右），混匀，室温下离心10min5.再次将上清液移至另一离心管中，加入2倍体积（约10ml）的无水乙醇，轻轻摇晃上下倒转混匀，可析出白色沉淀物（gDNA），离心20℃3000rp 5min 6.用1000μL移液器小心吸出gDNA置于1.5ml的灭菌Ep管中，用70%的酒精漂洗2次，离心4℃10000rp 5min7.用gDNA溶解于200μL TE缓冲液中8.用10μL移液器取2μL TE缓冲液滴入紫外线分光光度计，调零，然后再取2μL直接读数。
9.测量好DNA的浓度后，将gDNA稀释至50ng/μL，用200μL无菌EP管分装，每管分装50μL置-80℃冰箱保存10.DNA的浓度测定及纯度判定：取DNA溶液用TE液做适量稀释，以TE做空白对照，在紫外分光光度计上读取A260和A280的光密度值。
按下面公式计算浓度：DNA浓度(ug/ul)= A260*50*稀释倍数/1000 DNA纯度的判定：A260/A280 比值应介于1.7-2.0之间。
酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理
酚氯仿法提取DNA主要步骤：1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。
每个梯度脱水时间为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DN A裂解液（300μl），研磨后再加入300μl DNA裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。
4.加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。
5.离心：12000R，7min，4℃。
离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。
6.吸取上层液体加入新的离心管。
7.配制Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。
8.在含有上清液的离心管中加入Tri s饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10mi n。
9.离心：12000R，7min，4℃。
10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl（氯仿：异戊醇=24:1）。
11.离心：12000R，7min，4℃。
12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20℃冷冻的100%的酒精。
-20℃过夜。
13.将样品取出，12000R，7min，4℃离心。
14.弃上清，留白色沉淀（DNA），加400μl的75%的经过-20℃冷冻的酒精，反复吹打溶解。
15.重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。
16.提取DNA完成。
溴氯仿法提取DNA的原理：用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了D Nase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与D NA联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。
DNA提取方法和步骤
DNA提取方法和步骤一、常见的DNA提取方法：1. 酚/氯仿法（Phenol/Chloroform Extraction）：通过使用酚/氯仿等有机溶剂来分离DNA分子。
2. 盐水法（Salting out）：通过使用高盐浓度来析出DNA分子。
3. 硅胶柱法（Silica-based purification）：通过与硅胶矩阵相互作用，从混合溶液中纯化DNA。
4. 高盐法（High salt method）：通过使用高盐浓度来沉淀DNA。
5. CTAB法（Cetyltrimethylammonium bromide method）：通过使用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）来分离DNA。
二、通用的DNA提取步骤：1.样本收集：从所需生物体（如植物组织、动物组织、血液等）中收集样本。
样本的品质对提取后的DNA质量影响很大，因此需要保证样本的新鲜度和完整性。
2.细胞破碎：将收集到的样本进行细胞破碎，使DNA从细胞的内部释放出来。
这可以通过机械方法（搅拌、刮擦等）、溶解酶或离心等方法来实现。
3. 除去蛋白质和RNA：加入蛋白酶等酶解蛋白质，使其降解分解。
同时，也可以加入RNase酶降解RNA，以免在提取过程中受到污染。
4.DNA沉淀：加入盐溶液以增加DNA的溶解性，然后加入酒精来沉淀DNA分子。
酒精的加入可以调节盐溶液中Na+和DNA的酒精沉淀剂（如异丙醇或乙醇）的比例，从而沉淀出DNA。
5.洗涤：将沉淀下的DNA溶于适当的缓冲液中，以去除沉淀剂、盐等杂质。
6. 保存：最后，将DNA保存在适当的缓冲液中，如TE缓冲液（Tris-EDTA），并在低温下存储。
三、酚/氯仿法DNA提取步骤：1.细胞破碎：将细胞或组织加入到含有裂解缓冲液的试管中，使用机械方法（高速离心、搅拌等）或酶解来破碎细胞膜。
2.调整pH值：加入适量的酚/氯仿溶液，并快速倒转试管数次，使试管中的溶液充分混合。
酚会与细胞残渣中的蛋白质结合形成亲水性复合物，而氯仿可以帮助去除蛋白质。
dna分离纯化方法及原理
dna分离纯化方法及原理
1. 酚-氯仿抽提法：这是一种传统的 DNA 提取方法。
原理是利用酚和氯仿的混合物来溶解细胞膜和蛋白质，使 DNA 与其他细胞成分分离开来。
然后通过离心和有机溶剂的萃取，将 DNA 从混合物中提取出来。
2. 硅胶柱层析法：该方法基于 DNA 与硅胶柱子之间的吸附和解吸作用。
将待提取的样本加载到硅胶柱上，通过柱子的吸附作用，使 DNA 与其他杂质分离开来。
然后用适当的洗脱缓冲液将 DNA 从柱子上洗脱下来。
3. 磁珠法：这是一种利用磁性颗粒结合 DNA 的方法。
将磁珠与样本混合，使 DNA 与磁珠结合。
通过外部磁场的作用，可以将磁珠与结合的 DNA 分离开来，从而实现 DNA 的纯化。
4. 质粒抽提法：这种方法适用于提取质粒 DNA。
通过碱处理破坏细菌细胞壁和细胞膜，使质粒 DNA 从细菌细胞中释放出来。
然后通过离心和沉淀等步骤，将质粒 DNA 与其他杂质分离开来。
5. 超声波法：利用超声波的能量，将细胞破碎，使 DNA 释放到溶液中。
然后通过离心和沉淀等步骤，将 DNA 与其他杂质分离开来。
这些方法的原理基于不同的物理、化学或生物学原理，旨在从复杂的生物样本中选择性地分离和纯化 DNA。
选择合适的方法取决于样本类型、纯度要求和实验目的等因素。
在 DNA 分离纯化过程中，还需要注意操作规范、防止污染，并进行质量控制和检测，以确保获得高质量的 DNA 用于后续的分析和实验。
酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理
酚氯仿法提取DNA主要步骤：1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。
每个梯度脱水时间为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液（300μl），研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。
4.加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。
5.离心：12000R，7min，4℃。
离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。
6.吸取上层液体加入新的离心管。
7.配制Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。
8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10min。
9.离心：12000R，7min，4℃。
10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl（氯仿：异戊醇=24:1）。
11.离心：12000R，7min，4℃。
12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20℃冷冻的100%的酒精。
-20℃过夜。
13.将样品取出，12000R，7min，4℃离心。
14.弃上清，留白色沉淀（DNA），加400μl的75%的经过-20℃冷冻的酒精，反复吹打溶解。
15.重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。
16.提取DNA完成。
溴氯仿法提取DNA的原理：用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。
使用酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。
缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（A）RNA。
2. 不能完全抑制RNase 的活性。
酚-氯仿抽提DNA
DNA的提取是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作。
本实验通过植物样品在液氮下研磨以粉碎组织，通过裂解液裂解细胞，有机溶剂反复抽提，使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化DNA。
二、材料以方法1、材料：培养菌体2、仪器设备：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，高速冷冻离心机，台式离心机，移液枪一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪3、试剂：细胞裂解液100 mM Tris-HCl 5 mM EDTA 500 mM NaCl 1.25% SDS(PH 7.5) 饱和酚氯仿/异戊醇酚/氯仿/异戊醇无水乙醇70％乙醇异丙醇 3 M NaAc(pH5.2) RNase 50×TE缓冲液电泳载样缓冲液三、操作步骤（1）培养菌体（2）加入10 ml裂解液，1/10体积酚，于65℃下20－30 min，然后加入等体积的氯仿，轻摇（3）12000－15000rpm离心15 min（4）取上淸液，加入等体积氯仿，轻摇，12000－15000rpm离心15 min（5）取上淸液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20℃）或2倍体积冷无水乙醇（-20℃）（6）加入1/10体积的3 M NaAc(pH5.2)，置于室温下10 min（7）12000－15000rpm离心10 min（8）倒弃液体留下沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀（9）加入2倍体积无水乙醇（10）12000－15000rpm离心10 min（11）倒弃液体留下沉淀，真空干燥（12）复溶于2 ml TE（13）加入RNase，65℃或37℃处理10－30 min（14）加等体积酚，酚/氯仿，氯仿各一次，12000－15000rpm离心10 min（15）取上淸液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20℃）或2倍体积冷无水乙醇（-20℃）（16）加入1/10体积的3 M NaAc(PH5.2)，置于室温下10 min（17）12000－15000rpm离心10 min（18）倒弃液体留下沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀（19）真空干燥沉淀（20）复溶于0.5－1.0 ml的TE或水中，分装成小体积，4℃或-20℃保存。
苯酚氯仿提取法原理
苯酚/氯仿提取法原理
苯酚/氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性，SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，核蛋白变性降解，使DNA从核蛋白中游离出来。
DNA易溶于水，不溶于有机溶剂。
蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。
当有机溶液存在时，蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏，变性沉淀。
离心后有机溶剂在试管底层(有机相)，DNA存在于上层水相中，蛋白质则沉淀于两相之间。
酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白质。
氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去DNA溶液中的酚。
抽提后的DNA溶液用2倍体积的无水乙醇在NaCl存在下沉淀DNA，回收DNA用70%乙醇洗去DNA沉淀中的盐，真空干燥，用TE缓冲液溶解DNA备用。
酚氯仿法提取全血中DNA操作步骤
个人认为的酚氯仿法提取全血中DNA Protocol：：1、将3~5mL全血加入50ML离心管中，加入30~40ML的ddH2O，振荡20秒，静置10分钟后，4度，3800rpm,20min，小心去上清。
2、沉淀中加入5mlTES,颠倒混匀（涡旋振荡，破碎细胞膜）。
3、加入350μl、10%的SDS和70μl（10ng/μl)蛋白酶K，37℃过夜。
4、将离心管冷却至室温，先加入5ml的Tris-饱和酚，颠倒混匀后，（必做,否则将影响最后的分层,不利于上清液的抽提）再加入5ml 氯仿异戊醇（24：1），颠倒混匀，4度，2500rpm,离心15min。
6、取全部上清至另一离心管中，加入2.5倍体积的冰无水乙醇，反复颠倒，析出DNA团状物后直接用移液器挑入1.5ml的离心管中,用75%乙醇洗涤两次,晾干后加入200μl或300μl TB溶解，放4度数日后测OD。
测完OD后，原液放置-20℃或-80℃保存。
7、如若未析出DNA团状物或团状物太小不能挑出,则4度,3500rpm，离心15分钟，去上清，晾干后加入200μl或300μl TB 溶解，可放56度水浴10分钟助溶或（37度，110转）摇床过夜或放4度数日后测OD。
测完OD后，原液放置-20℃或-80℃保存。
相关试剂的作用:酚是强烈的蛋白质变性剂，能有效使蛋白质变性而除去，氯仿有强烈的脂溶性，去除脂类杂质，本身酚：氯仿：异戊醇=25：24：1的主要作用是抽提蛋白质。
酚（Phenol）对蛋白质的变性作用远大于氯仿，按道理应该用酚来最大程度将蛋白质抽提掉，但是水饱和酚的比重略比水重，碰到高浓度的盐溶液（比如4M的异硫氰酸胍），离心后酚相会跑到上层，不利于含DNA的水相的回收；但加入氯仿后可以增加比重，使得酚/氯仿始终在下层，方便水相的回收；还有一点，酚与水有很大的互溶性，如果单独用酚抽提后会有大量的酚溶解到水相中，而酚会抑制很多酶反应（比如限制性酶切反应），因此如果单独用酚抽提后一定要用氯仿抽提一次将水相中的酚去除，而用酚/氯仿的混合液进行抽提，跑到水相中的酚则少得多，微量的酚在乙醇沉淀时就会被除干净而不必担心酶切等反应不能正常进行。
提取dna的方法及步骤
提取dna的方法及步骤提取DNA的方法及步骤DNA（脱氧核糖核酸）是构成生物遗传信息的基本单位，因此，准确提取DNA样本是进行遗传研究、基因工程和犯罪侦查等领域的重要步骤。
以下将介绍几种常见的DNA提取方法及其步骤。
方法一：酚氯仿法酚氯仿法是一种常用的DNA提取方法，其步骤如下：1. 收集样本：可以是人体组织、血液、细胞培养物等。
确保样本新鲜，并避免受到污染。
2. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
3. 酚氯仿提取：将沉淀加入酚氯仿混合液中，轻轻混匀，并离心以分离DNA。
4. 沉淀DNA：将上清液转移到新的离心管中，加入冷乙醇沉淀DNA。
5. 洗涤：用70%乙醇洗涤沉淀的DNA，以去除杂质。
6. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。
方法二：盐析法盐析法是一种简单易行的DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
2. 盐析提取：加入高盐缓冲液使DNA与其他核酸和蛋白质分离。
3. 沉淀DNA：将上清液转移到新的离心管中，加入冷乙醇沉淀DNA。
4. 洗涤：用70%乙醇洗涤沉淀的DNA，以去除杂质。
5. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。
方法三：硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
2. 硅胶柱处理：将细胞沉淀加入硅胶柱中，经过洗涤和离心，将DNA吸附在硅胶柱上。
3. 洗涤：用洗涤缓冲液洗涤硅胶柱，以去除杂质。
4. DNA洗脱：加入低盐缓冲液，使DNA从硅胶柱上洗脱出来。
5. 洗涤：用70%乙醇洗涤洗脱后的DNA，以去除杂质。
6. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。
方法四：酶解法酶解法是一种特异性较高的DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿抽提DNA原理是一种常用的DNA提取方法，通过该
方法可以从复杂的生物样品中高效地提取纯度较高的DNA样本。
其原理主要包括以下几个步骤：
1. 细胞破碎：首先将待提取的生物样品经过离心等操作，去除无关细胞和组织，然后使用细胞裂解缓冲液将目标细胞破碎，使细胞内部的DNA释放出来。
2. 蛋白酶处理：在细胞裂解的过程中，蛋白酶会释放出来，为了去除其对DNA的影响，可以加入蛋白酶抑制剂来保护DNA。
此步骤的目的是降解蛋白质，同时保持DNA的完整性。
3. 混合酚氯仿：将细胞裂解液与等体积的氯仿混合，产生两相体系。
氯仿主要用来分离DNA和其他细胞成分，如脂质、蛋
白质等。
在混合过程中，DNA溶于水相，而其他成分溶于有
机相。
这样，通过离心使两相分离。
DNA会聚集在水相中。
4. DNA沉淀：将水相转移到新的离心管中，加入冷酒精或异
丙醇，使DNA沉淀出来。
酒精或异丙醇中的离子会中和
DNA上的电荷，从而使DNA不溶于水，形成可见的白色沉淀。
5. 洗涤与溶解：将DNA沉淀用无菌蒸馏水洗涤去除酒精或异
丙醇的残余，并用TE缓冲液溶解DNA，使其得以储存和进
一步应用。
通过酚氯仿抽提DNA，可以将DNA从细胞中高效地提取出
来，纯度较高，适用于许多分子生物学实验和技术的应用，如PCR、酶切、测序等。
基因组提取 (酚氯仿法)
定位克隆实验室2010-12-27 胡文波修订酚氯仿提基因组-大量高纯度DNA的制备原理：酚、氯仿是蛋白质变性剂，能有效去除核蛋白，使核酸从核蛋白中分离出来。
氯仿还能加速有机相与液相的分层，少许异戊醇能稳定界面，减少蛋白质变性过程中产生气泡。
操作步骤：1.将材料放入预冷的研钵中，加入液氮后迅速研磨成粉末状（刚加入液氮时不停上下锤击材料，液氮快挥发完时用研棒旋转搅拌挤压材料使之破碎）。
2.研磨完毕后，加入800ul抽提缓冲液，轻轻摇匀，形成匀浆状。
3.将匀浆液转移至1个2ml离心管中，加入Proteinase K至终浓度为100ug/ml（800ul加4ul蛋白酶K（20ug/ul））,55℃水浴保温过夜。
4.加入等体积平衡酚，室温温和振荡，摇匀，10-15min。
5.离心：12000rpm 4℃ 10min，将粘稠的水相移至洁净的离心管中。
6.再用酚:氯仿（v:v =1:1），氯仿各抽提1次（离心：12000rpm 4℃ 10min）。
7.将上层水相移至洁净的离心管中，加入2倍体积无水乙醇，转动离心管使溶液充分混合，DNA立即形成沉淀。
8.离心：7500g 4℃ 10min，使DNA沉于管底，将离心管倒置于滤纸上，晾干（或用玻璃棒/消毒牙签将DNA沉淀从乙醇沉淀中移出）。
9.用70%乙醇洗涤DNA沉淀2次（离心：7500g 4℃ 10min）。
10.加入200ul TE(pH8.0)使DNA完全溶解。
11.加入RNase至终浓度为50ug/ml，37℃保温1h。
12.紫外分光光度计检测DNA的浓度和纯度。
13.调节DNA终浓度为1000ng/ul。
14.将DNA做梯度稀释：1×102 ，1×101 ，1×100 ，1×10-1 ，1×10-2ng/ul，稀释体积为100ul。
15.取2ul DNA与2ul 2×上样缓冲液混匀，点样到琼脂糖凝胶（w/v = 2%）中，以2.5-5v/cm电泳。
酚氯仿法提取dna注意事项 -回复
酚氯仿法提取dna注意事项-回复酚氯仿法是一种常用的DNA提取方法，适用于从多种生物样本中提取高质量的DNA，具有操作简便、成本低廉、提取效果好的优点。
然而，在进行酚氯仿法提取DNA时，有一些注意事项需要遵守，以确保提取到的DNA质量和纯度满足实验要求。
本文将一步一步回答有关这一主题的问题。
第一步：准备实验材料在进行酚氯仿法提取DNA之前，需要准备好以下实验材料:- 酚氯仿：用于沉淀DNA，可以购买现成的酚氯仿溶液。
- 氯仿：用于去除蛋白质等杂质。
- 去离子水：用于配制实验缓冲液和洗涤试剂。
- 各种缓冲液：例如Tris-HCl缓冲液、TE缓冲液等，用于维持溶液的pH 值、维持DNA的稳定性等。
- 乙醇、异丙醇：用于洗涤、沉淀DNA等步骤。
- 高速离心管、离心机：用于离心沉淀DNA。
- 热板：用于DNA溶解步骤中的加热。
- 显微镜：用于观察DNA的溶解情况。
第二步：取样从待提取DNA的生物样本中取样时，需要注意以下几点:- 样本应选择新鲜的、含有丰富DNA的组织或细胞。
- 取样时应尽量避免污染，使用无菌工具，避免有外源DNA的干扰。
第三步：细胞破碎将取得的样本放入离心管中，加入破碎液并充分混匀。
常用的细胞破碎液包括含有洗涤剂（例如SDS或Triton X-100）和蛋白酶K的缓冲液。
注意事项如下：- 破碎液应加入足够量，以确保细胞完全破裂。
- 破碎液的温度和pH值应适宜，通常为室温和中性pH值。
第四步：离心将混合后的细胞溶液进行离心，去除细胞碎片和细胞核。
注意事项如下：- 离心条件应根据细胞大小和沉淀速度进行调整，通常为1,200-2,000 rpm，5-10分钟。
- 应尽量避免将上清液中的沉淀物和底物混合。
第五步：提取DNA将上清液转移到新的离心管中，加入酚氯仿并混合。
注意事项如下：- 酚氯仿的添加量应为样本体积的1/5-1/10，用于沉淀DNA。
- 混合时应充分摇匀，以便酚氯仿与上清液充分接触。
酚氯仿法提取DNA的原理
酚氯仿法提取DNA的原理酚氯仿法是一种用于提取DNA的常见方法，它基于DNA与酚氯仿在两相溶液中由于密度差异而发生分离的原理。
下面将详细介绍酚氯仿法提取DNA的原理及步骤。
DNA是一个带有负电荷的双链分子，其溶解度与其环境的离子力有关。
酚氯仿可以形成无水酚、蛋白质和DNA、RNA在其中既不溶于水又不溶于酚氯仿的界面。
当DNA溶液与酚氯仿混合时，DNA会从水相转移到有机相（酚氯仿相）中，实现分离。
1.细胞裂解：将待提取DNA的细胞加入缓冲液中，并通过机械、热力或化学方法使细胞裂解，释放DNA。
2.去除蛋白质：加入蛋白酶K等蛋白酶使蛋白质降解，形成胶冻样物质。
3.DNA溶解：加入盐酸溶解胶冻样物质，使DNA溶于溶液中。
4.全球胆碱设备实验室的志愿者在2024年完成了其中一个针对雌激素和其他抗生素的研究试验。
5.沉淀DNA：加入冰冷的异丙醇或乙醇，在DNA溶液中形成DNA沉淀。
6.制备DNA：将DNA沉淀转移到新的管中，并用乙醇洗涤去除杂质。
7.定量和存储：使用分光光度计测量DNA的浓度，然后将其保存在适当的条件下，以便后续实验中使用。
1.方法成本较低，步骤简单易行。
2.可以提取高纯度的DNA。
3.可以在较短时间内提取大量DNA。
1.操作要注意安全，避免酚氯仿的接触和吸入。
2.使用无菌技术和无菌材料，以避免外源性DNA的污染。
3.避免DNA溶液的过热和过长的暴露于空气中，以避免降解DNA。
总结：酚氯仿法提取DNA是一种常用的DNA提取方法，其原理是通过DNA与酚氯仿在两相溶液中的密度差异实现DNA的分离。
该方法简单易行，可以提取高纯度的DNA，适用于很多生物学实验和研究领域。
在进行实验时，需注意操作安全和避免DNA污染，以保证提取到高质量的DNA。
[方案]酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理
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[方案]酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理酚氯仿法提取DNA主要步骤:1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。
每个梯度脱水时间为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液(300μl)，研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床(56?,5h)。
4.加入等体积的Tris饱和酚(500μl)，摇匀(10min)。
5.离心:12000R，7min，4?。
离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。
6.吸取上层液体加入新的离心管。
7.配制Tris饱和酚:氯仿:异戊醇=25:24:1。
8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10min。
9.离心:12000R，7min，4?。
10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl(氯仿:异戊醇=24:1)。
11.离心:12000R，7min，4?。
12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20?冷冻的100%的酒精。
-20?过夜。
13.将样品取出，12000R，7min，4?离心。
14.弃上清，留白色沉淀(DNA)，加400μl的75%的经过-20?冷冻的酒精，反复吹打溶解。
15.重复第14步骤2次(用75%酒精洗三次)。
16.提取DNA完成。
溴氯仿法提取DNA的原理:用酚抽提细胞DNA时，有什么作用,使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。
使用酚的优点:1. 有效变性蛋白质;2. 抑制了DNase的降解作用。
缺点:1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly(A)RNA。
氯仿提取dna的原理
氯仿提取dna的原理氯仿提取DNA的方法是一种常用的DNA提取方法，其原理是通过氯仿的疏水特性和DNA的亲水特性，使DNA分子从细胞内脱离并溶于氯仿中，最后通过离心的方式分离DNA。
氯仿是一种有机溶剂，具有较高的疏水性，能与水相互分离。
而DNA 是一种带有负电荷的大分子，具有较强的亲水性。
在细胞内，DNA通常以螺旋结构存在于细胞核中，与蛋白质、脂类等其他细胞组分共同存在。
为了获取纯度较高的DNA样品，需要将DNA从细胞内分离出来。
氯仿提取DNA的步骤如下：1.细胞破碎：首先，将待提取的DNA样品中的细胞进行破碎。
可以使用机械破碎、超声波破碎或化学破碎等方法。
目的是将细胞膜和细胞核膜破坏，让细胞内的DNA暴露出来。
2.细胞溶解：然后，将破碎后的细胞悬浮液转移到一个离心管中，加入适量的洗涤缓冲液（如TE缓冲液），并增加含有蛋白酶的溶液。
蛋白酶的作用是降解蛋白质，使DNA从蛋白质中解离出来。
3.处理RNA：在细胞溶解步骤中，还需要添加核酸酶，以降解RNA分子，防止其被DNA污染。
4.加入酚-氯仿：接下来，在细胞溶解后的混合物中加入酚-氯仿混合溶液。
酚具有亲水性，而氯仿则具有疏水性。
它们的加入使混合液分为两相，上层为水相，下层为有机相，DNA主要分布于界面上。
5.离心分离：然后，将离心管放入离心机中，进行高速离心，以分离DNA。
高速离心会使DNA被迅速沉淀到两相的交界处。
此时，由于DNA的亲水性，能与水相结合，因而DNA以团块状或棉絮状存在于交界处。
6.沉淀清洗：将上层的水相小心转移至另一个干净的离心管中，并加入醇，如乙醇或异丙醇，沉淀DNA。
醇的存在能够破坏DNA与水相的亲和力，让其从水相中沉淀出来。
7.重悬：最后，将DNA的沉淀物用稳定的溶液（如TE缓冲液）重悬。
这样就得到了纯度较高的DNA溶液，可供进一步的实验使用。
总之，氯仿提取DNA的原理是通过氯仿的疏水特性和DNA的亲水特性，使DNA从细胞内脱离并溶于氯仿中，最后通过离心的方式分离DNA。
酚氯仿经典法 DNA抽提
DNA抽提
1 200ul的全血/新鲜组织加入1ml的灭菌水，颠倒混匀（新鲜组织需碾磨），10000转离心10分钟，弃上清。
管底应该有沉淀。
重复两次
2.加入200ul的DNA裂解液，5ul的蛋白酶K混匀。
3.55度过夜消化（细胞3小时即可）。
4.消化完成后加入等体积的酚氯仿混合液（1:1），剧烈震荡，使其变成奶咖色。
5.12000转离心10分钟。
6.取上清，注意不要洗到中间介质以及下层液体。
7.加入等体积的氯仿，颠倒混匀。
8.12000转离心10分钟。
9.取上清，注意不要洗到中间介质以及下层液体。
10.加入10分之一的醋酸钠以及2.5倍的无水乙醇，颠倒混匀。
11.12000转离心10分钟。
12.弃上清。
13.加入1ml 70%乙醇，使其白色沉淀悬浮，颠倒混匀数次。
14.12000转离心10分钟。
15.弃上清，然后室温开盖静置分钟使其乙醇挥发干净。
16.加入灭菌水溶解DNA，一般加入50ul灭菌水溶解。
酚氯仿法提取DNA实验报告
酚氯仿法提取DNA实验报告酚氯仿法和试剂盒法提取DNA实验报告一、实验目的实验原理：酚氯仿法：先从全血中分离白细胞，再通过蛋白酶K 消化，通过酚、氯仿的抽提,使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化DNA。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA乙二胺四乙酸二钠存在下保持很高的活性。
在匀浆后提取DNA的反应体系中晶SDS可破坏细胞膜、核膜晶并使组织蛋白与DNA分离晶EDTA则抑制细胞中Dnase的活性而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸晶使DNA分子完整地分离出来。
氯仿-异戊醇溶液可以使核蛋白变性沉淀晶将核酸物质萃取出来再向萃取液中加入适量乙醇晶可使DNA析出。
氯仿异戊醇抽提和乙醇沉淀方法在DNA纯化研究中非常常用晶氯仿-异戊醇抽提的原理是晶氯仿可使蛋白质变性并加速有机相与液相分层异戊醇有助于消除抽提过程中产生的气泡。
而DNA不溶于乙醇等有机溶剂晶因此可以通过乙醇沉淀来纯化和浓缩DNA二、实验用品试剂：1mol/L(M)Tris-Cl(pH8.0), 0.5M EDTA（pH8.0），5M NaCl TES（15mM Tris, 15mM EDTA，15mM NaCl）Tris饱和酚（PH8.0）氯仿/异戊醇（V/V=24/1）10％SDS5mg/ml Protease K70％乙醇、无水乙醇TE缓冲液（pH8.0）：10mM T ris-Cl（PH8.0）1mM E DTA(PH8.0)10mg/mL 溴化乙锭（EB）耗材：仪器：低温离心机、移液枪一套，低温冰箱，恒温水浴锅、紫外分光光度计（Eppendorf）。
三、实验步骤4.1取血样：实验人员相互取血样5ml.（用品：采血管、采血针、无水乙醇、棉签、橡皮管、废液缸）4.2血液样品的预处理：分取2ml 血样加入到离心管A中用于酚氯仿法提取DNA。
1) 破除RBC：用移液器将采血管中剩余的3ml血样中的血凝块取出转移到组织匀浆器中研磨粉碎，再移入50ml 离心管B中，再加入5倍体积无菌水，颠倒混匀，冰上静置十分钟，用于试剂盒法提取DNA。
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[方案]酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理酚氯仿法提取DNA主要步骤:1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。
每个梯度脱水时间为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液(300μl)，研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床(56?,5h)。
4.加入等体积的Tris饱和酚(500μl)，摇匀(10min)。
5.离心:12000R，7min，4?。
离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。
6.吸取上层液体加入新的离心管。
7.配制Tris饱和酚:氯仿:异戊醇=25:24:1。
8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10min。
9.离心:12000R，7min，4?。
10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl(氯仿:异戊醇=24:1)。
11.离心:12000R，7min，4?。
12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20?冷冻的100%的酒精。
-20?过夜。
13.将样品取出，12000R，7min，4?离心。
14.弃上清，留白色沉淀(DNA)，加400μl的75%的经过-20?冷冻的酒精，反复吹打溶解。
15.重复第14步骤2次(用75%酒精洗三次)。
16.提取DNA完成。
溴氯仿法提取DNA的原理:用酚抽提细胞DNA时，有什么作用,使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。
使用酚的优点:1. 有效变性蛋白质;2. 抑制了DNase的降解作用。
缺点:1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly(A)RNA。
2. 不能完全抑制RNase的活性。
氯仿的作用,氯仿:克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。
最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。
(酚易溶于氯仿中) 用酚,氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么, 异戊醇:减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。
异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。
另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子, 用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。
原理:动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白(DNP)可溶于水或浓盐溶液(如1mol/L 氯化钠)，但在0.14mol/L氯化钠盐溶液中溶解度最低，而核酸核蛋白(RNP)则在0.14mol/L氯化钠中溶解度最大，利用这一性质可将其分开。
将沉淀物溶解于生理盐水，加入去污剂十二烷基硫酸钠(SDS)溶液，使DNA与蛋白质分离开。
加入固体氯化钠使其浓度达到1mol/L，使DNA溶解。
加氯仿-异戊醇去除蛋白质，也可重复该步操作得较纯DNA。
最后用95%乙醇沉淀DNA。
溶解:将离心后除去RNA的沉淀，用30ml生理盐水溶解，充分搅拌后，匀浆一次。
加4毫升10,SDS溶液，使溶液的SDS浓度达到1,左右，边加边搅拌，放置60 ?水浴保温10分钟(不停搅拌)，冷却。
加固体氯化钠，使溶液氯化钠浓度达到1mol/L，充分搅拌10分钟;除杂质:加等体积氯仿-异戊醇混合液，充分震荡10分钟， 8000 r/min离心7分钟，取上层液量好体积，倒入烧杯中(离心管)，加同体积的氯仿-异戊醇混合液，重复上次操作。
直至界面不出现蛋白凝胶为止;沉淀:准确量取上清液体积，加2倍体积95,冷乙醇，搅拌后，置冰箱静止冷却，待有白色丝状物出现，约10-15分钟，离心8000 r/min离心7分钟，得白色沉淀;溶解:将沉淀物用0.1mol/L NaOH约10毫升溶解,得DNA溶液。
溶液I—溶菌液: 溶菌酶:它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。
当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖:增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA:(1)螯合Mg2，、Ca2，等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基);(2)EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
溶液II,NaOH,SDS液:NaOH:核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH,12或pH,3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
在溶液II中的NaOH 浓度为0.2mo1,L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS:SDS是离子型表面活性剂。
它主要功能有:(1)溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
(2)解聚细胞中的核蛋白。
(3)SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R，-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。
但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中(用RNase去除RNA时)受到干扰。
溶液III--3mol,L NaAc(pH4.8)溶液:NaAc的水溶液呈碱性，为了调节pH至4.8，必须加入大量的冰醋酸。
所以该溶液实际上是NaAc-HAc的缓冲液。
用pH4.8的NaAc溶液是为了把pH12.6的抽提液，调回pH至中性，使变性的质粒DNA能够复性，并能稳定存在。
而高盐的3mol,L NaAc有利于变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。
前者是因为中和核酸上的电荷，减少相斥力而互相聚合，后者是因为钠盐与SDS,蛋白复合物作用后，能形成较小的钠盐形式复合物，使沉淀更完全。
为什么用无水乙醇沉淀DNA, 用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。
乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。
DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。
一般实验中，是加2倍体积的无水,左右。
因而也可改用95,乙醇来替代无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的最终含量占67乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95,乙醇昂贵)。
但是加95,的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。
折中的做法是初次沉淀DNA时可用95,乙醇代替无水乙酵，最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。
也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。
一般在室温下放置15,30分钟即可。
在用乙醇沉淀DNA时，为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0.1,0.25mol/L, 在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc或NaCl，使Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时，只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合，这样就造成DNA沉淀不完全，当加入的盐溶液浓度太高时，其效果也不好。
在沉淀的DNA中，由于过多的盐杂质存在，影响DNA的酶切等反应，必须要进行洗涤或重沉淀。
加核糖核酸酶降解核糖核酸后，为什么再要用SDS与KAc来处理, 加进去的RNase本身是一种蛋白质，为了纯化DNA，又必须去除之，加SDS可使它们成为SDS-蛋白复合物沉淀，再加KAc使这些复合物转变为溶解度更小的钾盐形式的SDS-蛋白质复合物，使沉淀更加完全。
也可用饱和酚、氯仿抽提再沉淀，去除RNase。
在溶液中，有人以KAc代替NaAc，也可以收到较好效果。
7(为什么在保存或抽提DNA过程中，一般采用TE缓冲液, 在基因操作实验中，选择缓冲液的主要原则是考虑DNA的稳定性及缓冲液成分不产生干扰作用。
磷酸盐缓冲系统(pKa,7.2)和硼酸系统(pKa=9.24)等虽然也都符合细胞内环境的生理范围(pH)，可作DNA的保存液，但在转化实验时，磷酸根离子的种类及数量将与Ca2，产生Ca3(PO4)2沉淀;在DNA反应时，不同的酶对辅助因子的种类及数量要求不同，有的要求高离子浓度，有的则要求低盐浓度，采用Tris-HCl(pKa=8.0)的缓冲系统，由于缓冲液是TrisH+/Tris，不存在金属离子的干扰作用，故在提取或保存DNA时，大都采用Tris-HCl系统，而TE缓冲液中的EDTA更能稳苯酚、氯仿、异戊醇在DNA提取时的作用抽提DNA去除蛋白质时，怎样使用酚与氯仿较好, 酚与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去，使蛋白失去水合状态而变性。
经过离心，变性蛋白质的密度比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA分开。
而酚与氯仿有机溶剂比重更大，保留在最下层。
作为表面变性的酚与氯仿，在去除蛋白质的作用中，各有利弊，酚的变性作用大，但酚与水相有一定程度的互溶，大约10,,15,的水溶解在酚相中，因而损失了这部分水相中的DNA，而氯仿的变性作用不如酚效果好，但氯仿与水不相混溶，不会带走DNA。
所以在抽提过程中，混合使用酚与氯仿效果最好。
经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚，由于酚与氯仿是互溶的，可用氯仿第二次变性蛋白质，此时一起将酚带走。
也可以在第二次抽提时，将酚与氯仿混合(1:1)使用。
为什么用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戊酵, 在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。
加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。
一般采用氯仿与异戊酵为24:1之比。
也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25:24:1(不必先配制，可在临用前把一份酚加一份24:1的氯仿与异戊醇即成)，同时异戊醇有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定。
苯酚:氯仿:异戊醇为什么要25:24:1,抽提DNA去除蛋白质时，怎样使用酚与氯仿较好,酚与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去，使蛋白失去水合状态而变性。
经过离心，变性蛋白质的密度比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA分开。